胸腺基质淋巴细胞生成素诱导重症肌无力患者胸腺CD4~+CD25~-T细胞向CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞分化

目的:探索胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对重症肌无力(MG)合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞诱导生成CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞的研究。方法:以磁珠分选的方法得到胸腺CD4+CD25-T细胞及树突状细胞(DC)细胞,通过不同浓度(0.1、1、10、20 ng/m L)的TSLP活化DC后诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,以流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比率;RT-PCR检测Foxp3 m RNA表达;Western blot法检测上调的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的Foxp3蛋白表达;ELSIA法检测培养上清IL-10的含量。结果:10 ng/m L TSLP组、20 ng/m L TSLP组经诱导后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比例均明显升高,Foxp3的表达水平也相应增加,IL-10水平升高,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:TSLP可以诱导MG合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,并促进Foxp3的表达。     

骨髓间充质干细胞上调再生障碍性贫血患者CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的临床研究

目的:初步探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达及临床意义;探讨临床使用异体骨髓间充质干细胞(MSC)治疗对CD4+CD25+Foxp3+Treg表达的影响。方法:(1)流式细胞仪检测13例重型再生障碍性贫血(SAA),17例慢性再生障碍性贫血(CAA)及10例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达;(2)检测7例AA患者MSC治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达。结果:(1)AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达明显低于健康对照者(P<0.01);(2)SAA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达较CAA者低(P<0.05);(3)MSC治疗后AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达升高(P<0.05)。结论:(1)AA患者存在外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达减低,其表达异常可能参与AA的发病;(2)CD4+CD25+Foxp3+Treg表达在SAA患者更低,提示其表达水平可能可以作为判断AA病情轻重的指标;(3)MSC治疗可上调AA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达,为MSC纠正AA患者的免疫异常提供了临床依据。     

自身免疫性溶血性贫血患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的检测及其临床意义

目的探讨自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平及临床意义。方法采用流式细胞仪对25例AIHA患者治疗前后和15例正常对照者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞的比例进行了检测。结果25例AIHA患者治疗前CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋细胞的比例与正常对照组比较明显降低,（4．47±2．11）％VS（9．82土2．98）％（P〈0．001）,治疗后CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的比例与治疗前比较显著升高,（7．60±2．50）％VS（4．47±2．11）％（P〈0．001）,但仍低于正常人,（7．60±2．50）％VS（9．82±2．98）％（P〈0．05）。治疗后完全缓解患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^-T细胞的比例与治疗无效组比较明显升高,（9．55±2．36）％VS（5．68±2．67）％（P〈0．05）,无效组患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^-T细胞的比例与正常时照组比较仍然降低,（5．68±2．67）％vs（9．82±2．98）％（P〈0．01）。结论AIHA患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的比例较正常对照明显降低,有效治疗后得到恢复,提示CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可能参与了疾病的发生。     

Allergen-responsive CD4+CD25+ regulatory T cells in children who have outgrown cow's milk allergy

Cow's milk allergy in children is often of short duration, which makes this disorder an interesting clinical model for studies of tolerance to dietary antigens. Here, we studied T cell responses in 21 initially allergic children who, after a milk-free period of >2 mo, had cow's milk reintroduced to their diet. Children who outgrew their allergy (tolerant children) had higher frequencies of circulating CD4(+)CD25(+) T cells and decreased in vitro proliferative responses to bovine beta-lactoglobulin in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) compared with children who maintained clinically active allergy. No significant difference in proliferative activity stimulated by the polyclonal mitogen phytohemagglutinin was observed between the two groups. Depletion of CD25(+) cells from PBMCs of tolerant children led to a fivefold increase in in vitro proliferation against beta-lactoglobulin. This suggests that tolerance is associated with the appearance of circulating CD4(+)CD25(+) regulatory T (Treg) cells that are capable of suppressing the effector T cells generated 1 wk after reintroduction of cow's milk. The suppressive function of the CD4(+)CD25(+) Treg cells was shown to be partly cell contact dependent. Collectively, our study provides human data to suggest that mucosal induction of tolerance against dietary antigens is associated with the development of CD4(+)CD25(+) Treg cells.     

异基因骨髓间充质干细胞移植对小鼠胶原性关节炎CD4＋CD25＋调节性T细胞表达的影响

目的：探讨异基因骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对小鼠胶原性关节炎 CD4＋、CD25＋调节性 T 细胞表达的影响。方法选取40只 C57BL/6（H-2b）小鼠,随机分为正常对照组、Ⅱ型胶原性关节炎（CIA）模型组、MSCs 移植治疗组、甲氨蝶呤治疗阳性对照组,每组10只小鼠。除正常对照组外,其余各组弗氏完全佐剂＋Ⅱ型胶原诱导小鼠建立 CIA 小鼠模型。分离骨髓单个核细胞后,进行 MSCs 细胞分选及鉴定。美国 BD 公司 FAcscal-iburTM 型流式细胞分析仪对小鼠骨髓 MSCs 进行分选和鉴定。 MSCs 移植采用尾静脉注射,所含细胞数为2×106。移植后第42天全部处死动物观察不同分组小鼠的关节症状及肿胀度,采用流式细胞术检测 CD4＋ CD25＋浓度,收集数据并做统计分析。结果 MSCs 移植治疗组小鼠关节的肿胀度,与正常对照组比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。 MSCs 移植组 CD4＋ CD25＋调节性 T 细胞的表达,与甲氨蝶呤治疗阳性对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．05）;与正常对照组比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 MSCs 移植治疗小鼠 CIA ,能显著改善关节的肿胀度,并明显上调 CD4＋ CD25＋表达,故 MSCs 可作为一种新的替代细胞来源用于类风湿性关节炎的移植治疗。     

CD4＋CD25＋调节性T细胞和Th17细胞在特发性血小板减少性紫癜中的表达和意义

目的验证并探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞及Th17细胞与特发性血小板减少性紫癜发病的关系及可能机制。方法入选自2009年12月至2010年11月在山东省医学科学院附属济宁市第一人民医院血液内科门诊就诊或住院治疗的41例ITP患者（其中初治19例,复发22例,符合难治标准17例）及同期41例健康查体者为研究对象。所有标本均抽取清晨空腹外周血,以肝素钠抗凝。应用流式细胞术（FCM）测定ITP患者和健康对照外周血的CD4＋CD25＋调节性细胞及Th17细胞百分率;应用酶联免疫吸附试验（ELISA技术）测定ITP患者和健康对照血浆的IL-17水平。结果 ITP病例组外周血CD4＋CD25＋调节T细胞的百分率明显低于对照组（P〈0.05）,而Th17细胞的比例显著高于正常对照组（P〈0.05）,血浆IL-17水平在两组间差异无统计学意义（P〉0.05）;病例组中初治患者与复发患者外周血CD4＋CD25＋调节T细胞的百分率比较差异无统计学意义（P〉0.05）;难治组患者外周血CD4＋CD25＋调节T细胞的百分率低于非难治组（P〈0.05）;初治患者治疗后外周血CD4＋CD25＋调节T细胞百分率显著升高,但仍低于正常对照组（P〈0.05）。ITP病例组的CD4＋CD25＋Treg/Th17较健康对照组明显下降,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞显著减少,Th17细胞明显增加,出现Treg/Th17细胞失衡,这可能是影响特发性血小板减少性紫癜发生发展的一个重要因素。ITP患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞减少程度在初治与复发ITP患者中差异无统计学意义;难治性ITP可能与CD4＋CD25＋调节性T细胞数量减少和Treg/Th17失衡尚未纠正有关。初治ITP患者经临床常规治疗后外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞比例回升。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞的定量及其功能分析

目的检测原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血CD4^＋CD25^＋免疫调节性T细胞（Tregs）数量及其对T效应细胞（Treps）增殖的抑制作用。方法流式细胞仪定量检测PBC患者及对照组外周血中Tregs细胞百分比。统计无症状期、症状期、肝硬化期3组患者Tregs细胞百分比。免疫磁珠分离Tregs，检测CD62L、T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体（GITR）的表达。体外细胞培养，^3H-胸腺嘧啶掺入法测定Tregs对Treps的免疫抑制功能。结果PBC患者外周血CD4^＋T细胞中的Tregs[3．63±0．92）％]明显低于健康对照组[（7．42±1．09）％，P〈0．01）]。无症状期、症状期、肝硬化期各组Tregs细胞分别为（3．93±0．71）％、（3．64±0．83）％、（3．52±0．95）％，均明显低于健康对照组，但3组之间差异无统计学意义。Tregs细胞高表达CD62L、CTLA-4、GITR分子。PBC患者Treps的体外增殖可以被自身Tregs所抑制，1：1、1：2、1：4、0：1的比例平均抑制率分别为（78．2±4．9）％、（51．6±7．1）％、（21．7±5．6）％、0，健康对照分别为（75．1±5．3）％、（54．5±6．4）％、（27．6±6．3）％、0，两组相比差异无统计学意义。结论PBC患者Tregs数量的降低可能是PBC的致病机制之一。     

CD4+CD25+调节性T细胞在脓毒症预后评价中的应用

目的 探讨脓毒症患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)对脓毒症患者预后预测的价值.方法 收集上海长征医院2013年12月至2014年4月入院的28例确诊脓毒症患者,根据出院结局分为存活组和死亡组,分别于入院的第1天及第7天采集外周血,流式细胞术检测CD4+ CD25+ Treg细胞比例,以及检测血常规、CRP、胆红素、PCT、凝血功能等,并统计APACHEⅡ、SOFA评分,分析各指标第1天及第7天值以及差值对脓毒症预后的预测准确性.结果 入组28例病例,年龄(60.36 ± 15.03)岁,APACHEⅡ评分(16.68 ±7.00),SOFA评分(7.18±3.78);伴有严重创伤患者12例(42.9％),感染性休克患者10例(35.7％),死亡9例(32.2％).存活组与死亡组第1天、第7天CD4+ CD25+ Treg细胞比例中位数(四分位数)分别为:2.10％ (0.80,3.10)％vs.1.80％ (1.15,3.65)％ (Z=-0.148,P=0.883); 0.90％(0.30,2.80)％vs.5.70％ (2.60,8.30)％(Z=-2.905,P=0.004).结论 动态监测CD4+CD25+ Treg细胞能够准确预测脓毒症患者预后,具有较好的临床应用前景.     

哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的测定及临床意义

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在哮喘患者外周血的变化及意义。方法采用流式细胞术检测60例哮喘患者和40例健康对照者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达量,同时测定20例急性发作期哮喘患者的肺功能。结果哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞的百分比明显低于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;急性发作期哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞明显低于非急性发作期患者,差异也有统计学意义（P〈0．01）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞参与了哮喘的发生。     

Effects of cryopreservation on CD4+ CD25+ T cells of HIV-1 infected individuals

The role of T regulatory cells (Tregs) in human immunodeficiency virus (HIV)-1 infection, although not entirely clear, has recently been highlighted. Despite their lack of specificity, fluorochrome-labeled CD4 and CD25 antibodies are common flow cytometric reagents used to identify these cells with immunosuppressive potential. Cryopreservation has previously been shown to alter the proportions of lymphocytes with certain phenotypes expressed in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). The aim of this study was to assess the effect of cryopreservation on CD4+ CD25+ T cells in PBMCs from HIV-1+ individuals to guide the design of future studies on Tregs. We recruited 30 HIV-1+ individuals and nine healthy controls. CD25 expression in CD4+ T cells was compared between fresh and frozen/thawed PBMC samples from the same time point. In this study, cryopreservation significantly decreased the proportion of CD4+ CD25+ T cells in PBMC samples from HIV-1 infected subjects. This finding suggests that studies of CD4+ CD25+ T cells should be carried out on fresh samples to avoid bias introduced by cryopreservation.     

CD4+CD25+调节性T细胞在恶性肿瘤患者中的应用价值研究

目的探讨恶性肿瘤患者外周血CD4 CD25 调节T细胞水平的特点及其临床意义。方法采用流式细胞术检测35例恶性肿瘤患者外周血CD4 CD25 调节T细胞水平及淋巴细胞亚群,并进行分层分析。结果恶性肿瘤患者CD4阳性细胞比例在(I II)期患者即低于对照组,但差异无显著性意义(P>0.05),CD4 /CD8 亦低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05),(IIIi、v期)CD4、CD4/CD8阳性细胞比例减低明显,差异有显著性意义(P<0.05);各期CD8、CD3阳性细胞与对照组接近(P>0.05);外周血CD4 CD25 调节T细胞比例在健康对照组为(14.49±4.69)%,恶性肿瘤比例为(19.61±8.17)%。差异有显著性意义(P<0.05);随疾病进展外周血CD4 CD25 T细胞水平升高,在肿瘤(Ⅳ期)尤其明显,统计学有极显著差异(P<0.01)。结论恶性肿瘤患者外周血CD4 CD25 调节T细胞水平的升高,与恶性肿瘤免疫功能低下及肿瘤的发生发展密切相关。     

不同树突状细胞对CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞体外扩增的影响

目的利用不同种类树突状细胞(dendritic cells,DC)体外扩增获得表型和功能稳定的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)。方法免疫磁珠法(MACS)分离Balb/c小鼠CD4+CD25+调节性T细胞,利用与调节性T细胞同基因或异基因成熟DC、未成熟DC和调节性DC刺激其扩增,流式细胞术测定其纯度和表型。以CD4+CD25-T细胞作为反应细胞,验证扩增前后Treg细胞的免疫抑制功能。结果MACS分离的CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(95.38±1.82)%,同基因和异基因DC都能有效刺激Treg细胞体外扩增,其中同基因成熟DC扩增效果最为明显。而且同基因成熟DC扩增后CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(94.16±1.88)%,而且高表达Foxp3分子。当CD4+CD25+调节性T细胞与效应T细胞比例为1∶1时,能够有效的抑制效应T细胞的增殖,而且,同基因成熟DC扩增的CD4+CD25+调节性T细胞的抑制效果比新分离的Treg效果更好。结论同基因成熟DC能够体外扩增表型和功能稳定的Treg细胞。     

CD4~+CD25~+FOXP3~+调节性T细胞在结核病发生中的作用研究

目的:探讨CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞在结核病发生中的作用。方法:采用回顾性分析的方法,分析我院收治的60例结核病患者(观察组)和60例健康体检者(对照组)的临床资料。结果:观察组治疗前CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例明显高于对照组,治疗2、6个月末观察组患者CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例明显降低,观察组CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例与CD4+T细胞、CD8+T细胞、IFN-γ和IL-4呈现明显的负相关(P<0.05)。结论:针对CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞在结核病发生机制中的作用,开展从免疫治疗和结核病疫苗设计提供新的作用靶点和诊疗依据,值得临床推广应用。     

糖尿病合并肺部感染外周血调节性T细胞的检测分析

目的 探讨糖尿病合并肺部感染与CD4+CD25+调节性T细胞的关系.方法 用流式细胞仪分别检测健康对照组32例,单纯糖尿病组20例,糖尿病合并肺部感染组23例的CD4+、CD8+、CD4+CD25+T细胞,计算出CD4+/CD8+、CD4+CD25+/CD4+的比值;用统计学方法比较各组T细胞亚群,用因子分析法分析糖尿病合并肺部感染者T细胞亚群等常见因素的内在联系.结果 糖尿病、糖尿病合并肺部感染组CD8+、CD4+CD25+、CD4+CD25+/CD4+比健康对照组高,CD4+、CD4+/CD8+比健康对照组低,且差异有统计学意义;糖尿病合并肺部感染者年龄、病程、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+ 、CD4+CD25+ 、CD4+CD25+/CD4+7个指标之间存在中等偏强的内在联系.结论 CD4+ CD25+T细胞升高可能是糖尿病合并肺部感染难治的原因之一,糖尿病合并肺部感染者常见的7项指标之间存在一定的内在联系.     

卵巢癌患者外周血CD4~+ CD25~+调节性T细胞的检测及其临床意义

目的探讨卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的比例变化及其可能的机制。方法利用流式细胞仪检测20例卵巢癌患者外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBLs)、肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs)及肿瘤相关淋巴细胞(tumor associated lymphocytes,TALs)中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tcells,Tregs)所占的比例。10例健康人外周血PBLs中Tregs所占的比例。同时检测卵巢癌患者CD4+外周血淋巴细胞中CD69+细胞的比例。健康人PBLs在含有卵巢癌细胞株SKOV3培养上清的RPMI1640培养液(有或没有血清植物血凝素)中培养72小时后,检测Tregs所占的比例。结果卵巢癌患者外周血淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞所占比例与健康人相比明显增加.卵巢癌患者外周血肿瘤浸润淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞所占比例高于在外周血淋巴细胞和肿瘤相关淋巴细胞中的比例,但是没有统计学意义。卵巢癌患者CD4+外周血淋巴细胞中无CD69表达。结论卵巢癌患者外周血淋巴细胞中、肿瘤浸润淋巴细胞及肿瘤相关淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞所占的比例增加,这可能与卵巢癌细胞分泌的可溶性分子上调有关。     

阿德福韦酯对慢性乙型肝炎患者CD4~+ CD25~+调节性T细胞表达水平的影响

目的:观察阿德福韦酯对慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者血清CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells,CD4+CD25+Treg)表达水平的影响,揭示CD4+CD25+Treg在慢乙肝患者免疫发病机制中的作用,及阿德福韦酯治疗对机体的免疫调节机制的临床价值。方法:采用流式细胞术对66例慢乙肝患者(HBeAg阳性慢乙肝患者36例,HBeAg阴性慢乙肝患者30例)阿德福韦酯治疗前和治疗12、24、36及48周外周血CD4+CD25+Treg进行检测。同时采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测相应时间点的血清HBVDNA。结果:外周血清CD4+CD25+Treg治疗前为(4.05±2.39)%,明显高于正常对照组的(2.26±1.42)%(P<0.01);治疗后CD4+CD25+Treg为(2.38±1.75)%,明显低于治疗前(P<0.01),与正常对照组相当(P>0.05)。CD4+CD25+Treg水平与病毒定量呈正相关。结论:阿德福韦酯抗病毒治疗后能使病毒载量下降,导致CD4+CD25+Treg下降,使免疫功能恢复。     

流式细胞术检测RA患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋ Treg细胞及其GITR表达

目的研究FOXP3和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)在类风湿关节炎(RA)患者外周血Treg细胞的表达并探讨其临床意义。方法用五色流式细胞术(FCM)检测40例健康体检者、61例RA患者外周血CD4 CD25 FOXP3 调节性T细胞(Treg)及其中GITR的表达情况。结果RA患者组FOXP3的平均荧光强度(MFI)低于健康对照组(P<0.05),CD4 CD25 FOXP3 Treg占CD4 T细胞的比例、CD4 CD25 FOXP3 Treg中GITR的表达率、GITR MFI和健康对照组相比无统计学差异(P>0.05);活动期RA患者的FOXP3 MFI和GITR MFI均显著低于非活动期组(P<0.01和P=0.032),CD4 CD25 FOXP3 Treg占CD4 T细胞中的比例、CD4 CD25 FOXP3 Treg中GITR的表达率与非活动期组相比无统计学差异(P>0.05)。结论RA患者的FOXP3表达低下,活动期组的FOXP3表达低于非活动期组,为其作为RA病情变化的判断指标提供进一步的证据。     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在CIK细胞诱导中的表达及其功能

目的探讨肿瘤患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)诱导过程中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化及其功能。方法应用血细胞分离机采集22例肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC),诱导培养CIK细胞,用流式细胞仪动态监测其CD4~+CD25~+Foxp3~+表型,并分析Tregs细胞负性调控分子转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)和IL-10的表达水平,采用细胞增殖抑制试验测定Tregs细胞免疫学功能。结果诱导的CIK细胞中存在CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs,其表达量分别为第1天(0.30±0.15)%、第3天(4.48±1.72)%、第5天(3.83±2.12)%、第9天(2.37±1.17)%、第11天(1.65±0.99)%、第14天(1.04±0.76)%。诱导第14天时的Tregs细胞免疫调控负性分子TGF-β1的表达水平为(97.2±2.1)%、CTLA-4为(96.2±3.5)%、IL-10为(4.2±2.3)%。细胞增殖抑制试验中空白对照组、条件对照组以及实验组的增殖细胞表达量分别为(8.55±2.38)%、(42.66±7.32)%、(57.04±7.49)%。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs细胞可作为潜在的CIK细胞质量评价指标。     

血必净注射液对脂多糖刺激大鼠调节性T细胞凋亡及其介导效应T细胞免疫功能的影响

目的 探讨中药血必净注射液对体外脂多糖(LPS)刺激CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)凋亡及其介导效应T细胞(Teff)增殖反应、分泌白细胞介素-2(IL-2)功能的影响.方法 40只雄性清洁级Wistar大鼠,实验前禁食12 h.免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4+CD25+Treg,分为对照组(n=8)、抗CD3/CD28组(n=8)、抗CXB/CD28+LPS组(/1,=8)、抗CD3/CD28+血必净组(n=8)和抗CD3/CD28+LPS+血必净组(n=8).培养3 d后流式细胞术检测CD4+CD25+Treg凋亡率、叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)表达,酶联免疫吸附试验检测IL-10分泌.同时,CD4+CD25+Treg与CD4+CD25-T细胞1:1培养,刀豆素A刺激68 h后分析Treg对Teff增殖的抑制效应,并检测上清中IL-2/可溶性IL-2受体水平.结果 抗CD3/CD28诱导Treg凋亡率为(33.70±3.06%),显著高于对照组(12.84±0.84)%;抗CD3/CD28+LPS+血必净组(45.13±2.70)%凋亡率明显高于抗CD3/CD28+LPS组[(29.41±1.63)%,P＜0.01].同时,CD4+CLY25+Treg roxp3和CTLA-4表达及IL-10分泌随凋亡增加而降低.抗CD3/CD28+血必净组(31.26%)Teff增殖反应平均抑制率显著低于对照组(54.48%,P＜0.05),抗CD3/CD28+LPS+血必净组抑制率与抗CD3/CD28+LPS组比较亦明显下降(P＜0.01).此外,抗CD3/CD28+血必净组和抗CD3/CD28+LPS+血必净组IL-2分泌水平均显著高于抗CD3/CD28+LPS组(P＜0.01).结论 LPS刺激可明显上调大鼠Treg对Teff的抑制功能,血必净注射液能通过促进Treg凋亡而有效改善其对Teff的抑制效应.