MMP-12在类风湿关节炎中和骨性关节炎中的研究

目的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)是分解细胞外基质的重要因子。人类金属弹性蛋白酶(human metallolastase，MMP-12)是MMPs的一种。现已证实由巨噬细胞分泌MMP-12的异常表达与许多疾病有关，如类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)、骨性关节炎(osteoarthritis，OA)等。试验的目的是研究RA和OA病变中MMP-12在滑膜组织中的表达。方法滑膜组织取自临床确诊的22例RA及29例OA患者(均为膝或髋关节置换手术患者)，用免疫组织化学方法进行分析。结果免疫组化染色显示，表达MMP-12的细胞主要为滑膜层细胞．且大部分为炎性巨噬细胞。结论来源于巨噬细胞的MMY-12在RA病变发展，如关节破坏过程中起重要作用，抑制MMP-12高活性可能会为治疗RA提供一种新的途径。     

老年性骨关节炎与类风湿关节炎滑膜细胞转化特性的比较研究

目的与骨关节炎比较,探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)胞外信号活化蛋白激酶(ERK)的活化状态和P53蛋白的异常表达。方法原代培养RA FLS和OA FLS,应用western blot检测二者ERK活化状态的差异;应用抗P53抗体(DO-1和PAb240)与抗PCNA抗体对RA和OA的滑膜组织和细胞进行免疫组织化学染色;并进一步应用western blots确定RA FLS P53的异常表达。结果与OA相比,RA滑膜衬里层P53蛋白表达增多,主要为与抗突变型P53抗体阳性反应细胞积聚,并进一步证实RA衬里层成纤维样滑膜细胞P53表达异常;而且RA FLS在低血清和非贴壁情况下ERK活化状态均明显高于骨关节炎。结论类风湿关节炎衬里层成纤维样滑膜细胞P53蛋白异常表达,而且ERK处于持续活化状态,这为RAFLS的转化特性提供了新的佐证。     

Effect of Yiqixue Buganshen Recipe on Meisl Expression in Endometrium of Mice During Peri-implantation Period

[目的]观察益气血补肝肾方对Meisl在围着床期小鼠子宫内膜中表达的影响.[方法]采用免疫组织化学法对Meisl蛋白进行定位及半定量检测;采用免疫印迹法在蛋白水平定量检测Meisl在围着床期小鼠子宫内膜中的表达.[结果]Meisl在围着床期小鼠子宫内膜中呈周期性的表达.免疫组织化学结果显示:妊娠第1天(D1)开始Meisl表达逐渐增强,D4、D5表达显著增强,着床后妊娠D6在蜕膜中的表达增强(均P＜0.05).中药组小鼠子宫内膜中Meisl在D4和D5表达增强,与正常对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05).免疫印迹检测结果与免疫组织化学结果相似,中药组小鼠子宫内膜Meisl表达增强,但与正常对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05).[结论]益气血补肝肾方改善子宫内膜容受性,促进胚胎着床的作用与其能增强MeisI在子宫内膜的表达有关.     

RNAi对基质金属蛋白酶13在兔骨性关节炎中表达的抑制作用

目的 观察RNA干扰技术(RNAi)是否能有效抑制兔OA模型膝关节软骨中基质金属蛋白酶13(MMP13)的表达.方法 体外化学合成MMP13序列特异性双链RNA与脂质体混合后转染OA模型中软骨细胞,实验分四组,特异性RNAi组:特异性RNAi+Lipofectamine2000,非特异RNAi组:非特异RNAi+Lipofectamine2000,脂质体组:Lipofectamine2000,对照组:无血清DMEM.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测软骨细胞中的MMP13的表达.噻唑蓝(MTT)比色法检测各组的软骨细胞生长情况.结果 RT-PCR显示RNAi组较对照组、非特异性组和脂质体组的MMP13基因的PCR扩增条带明显减弱,免疫组织化学法显示RNAi组中MMP13阳性细胞数比对照组明显减少.与对照组比较,非特异性组、RNAi组、脂质体组软骨细胞的存活率显著降低(P<0.05),但在3组间两两差异无统计学意义.结论 使用RNA干扰技术可有效抑制兔OA模型中膝关节软骨细胞MMP13的表达,RNA干扰技术为基因治疗OA提供了新策略.     

骨肉瘤与良性骨肿瘤差异蛋白质组学研究

[目的]比较骨肉瘤与良性骨肿瘤蛋白质组学差异,探寻骨肉瘤特异性标记物.[方法]分别提取5例骨肉瘤肿瘤标本和5例良性骨肿瘤总蛋白,进行双向电泳,重复3次;银染、扫描后进行ImageMaster 2DE软件分析以发现差异蛋白并对差异蛋白质点进行MS+ MS/MS质谱鉴定,获取肽质指纹图谱并在NCBI数据库中找到匹配蛋白质.[结果]所获得的双向电泳银染图谱重复性较好,骨肉瘤组织蛋白质点数约为1 296±179,骨良性肿瘤组织蛋白质点数约为1 098±152,明显差异的蛋白质点38个,其中12个被成功鉴定,7个蛋白质在骨肉瘤中表达上调,其中热休克蛋白60、应激诱导磷酸化蛋白1在骨良性肿瘤中表达缺失;5个蛋白质在骨肉瘤中表达下降,以锚定蛋白下降最明显.[结论]蛋白质组学的分析能成功的发现骨肉瘤与骨良性肿瘤的差异蛋白质,为寻找骨肉瘤特异标记物提供依据.     

人胃癌组织FAF1 mRNA和蛋白表达的相关性

FAF1(Fas-associated factor 1)是新近发现的一种能够增强Fas诱导凋亡作用的蛋白,且在胃癌组织中有特异性低表达~[1].我们采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)和免疫组织化学法联合检测人胃癌、癌旁及正常胃组织中FAFI mRNA和蛋白的表达,观察FAF1表达在人胃癌发生发展中的作用.     

Src家族酪氨酸激酶Fyn在人食管鳞状细胞癌中的表达

目的 探讨食管鳞状细胞癌组织中Fyn的表达水平及其意义.方法 收集13例食管鳞状细胞癌组织(ESCC)和10例食管正常黏膜上皮组织(UNR),采用免疫组织化学法和免疫印迹法分析食管鳞状细胞癌组织及食管正常黏膜组织Fyn蛋白表达水平的变化.结果 免疫组织化学染色显示食管鳞状细胞癌组织中Fyn蛋白表达水平(9.68±2.31)高于食管正常黏膜组织中染色指数(3.21±1.25),差异有统计学意义(P<0.01).免疫印迹结果亦显示食管鳞癌组织中Fyn蛋白表达强于食管正常黏膜组织.结论 Fyn蛋白在食管鳞状细胞癌组织中高表达,提示Fyn基因在食管鳞状细胞癌的发生发展过程中可能起重要作用.     

胶原蛋白酶诱发兔膝关节骨性关节炎软骨组织中HIF2α表达上调

目的 研究低氧诱导因子HIF2α在胶原蛋白酶诱发兔膝关节骨性关节炎（Osteoarthritis, OA )模型中的表达情况,为下一步以HIF2α为靶点进行OA靶向治疗研究提供实验基础。方法 取健康16周龄雄性日本大耳白兔24只,随机分为磷酸盐缓冲液（PBS)对照组和胶原蛋白酶诱发OA ( Collagenase-induced OA, CIOA)组。利用右侧膝关节腔内注射II型胶原蛋白酶 (剂量为0. 5 mg)方法建立膝关节OA模型。给药后24周处死动物,采用大体形态观察与HE、甲苯胺蓝染色观察关节软骨退变程度,应用微型CT( Micro-CT)观察软骨下骨改变情况,采用免疫组织化学（immunohistochemistry ,IHC)、蛋白质免疫印迹 (Western Wotting, WB)和实时荧光定量PCR( quantitative real time PCR, qRT-PCR)检测软骨中 HIF2α 表达情况。结果 大体形态观察结果显示,CIOA组关节面粗糙、糜烂,与溃疡形成,关节囊增厚,滑膜增生。组织病理学检测结果显示,CIOA组关节软骨缺损,软骨细胞数量减少,排序紊乱,有细胞簇聚现象。Micro-CT结果显示,CIOA组软骨下骨可见大量骨赘形成,关节间隙狭窄。IHC结果显示,CIOA组关节软骨中HIF2α蛋白阳性细胞数增加;WB结果显示,CIOA组关节软骨组织中HIF2α蛋白表达显著增加;而qRT-PCR结果显示,HIF2α mRNA表达显著降低。结论 在成功建立膝关节OA模型基础上,发现HIF2α在胶原蛋白酶诱发兔膝关节OA软骨中表达上调,其表达调控可能在转录后水平进行。我们的实验结果提示HIF2α特异性抑制剂可能被用于缓解OA发生。     

基质金属蛋白酶9及TGF-β1 mRNA和蛋白在骨关节炎中的表达

目的 TGF-β1对骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨起保护作用,探讨OA中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、TGF-β1 mRNA和蛋白表达的相关性,为临床治疗OA寻找有效的干预靶点提供理论依据。方法取自愿捐赠的关节软骨及滑膜标本,其中OA患者60例(实验组),外伤截肢、交叉韧带断裂、盘状软骨损伤与半月板损伤患者20例(正常对照组)。行HE染色观察关节软骨与滑膜的病理组织学改变,免疫组织化学染色观测MMP-9及TGF-β1蛋白表达,原位杂交技术检测MMP-9及TGF-β1 mRNA表达;并进行相关性分析。结果 HE染色显示实验组关节软骨细胞固缩、坏死、排列紊乱,细胞外基质断裂,关节滑膜细胞肥大增生、淋巴细胞和单核细胞浸润,多数小血管增生;正常对照组软骨细胞排列整齐、基质染色均匀,滑膜组织无慢性炎症表现、无明显增生。两组均可见MMP-9、TGF-β1 mRNA和蛋白阳性表达,阳性细胞包括软骨细胞、滑膜衬里层细胞及滑膜下层的血管内皮细胞、成纤维细胞、炎性浸润细胞等。实验组MMP-9及TGF-β1 mRNA和蛋白表达均高于正常对照组(P<0.01)。实验组MMP-9 mRNA与蛋白表达成正相关(r=0.924,P=0.000),TGF-β1 mRNA及蛋白表达亦成正相关(r=0.941,P=0.000);实验组MMP-9及TGF-β1蛋白表达成负相关(r=—0.762,P=0.000),MMP-9 mRNA及TGF-β1 mRNA表达成负相关(r=?0.681,P=0.000)。结论 OA中TGF-β1的高表达下调了关节软骨与滑膜中MMP-9的表达,对OA关节软骨起保护作用,从而延缓OA进展。     

胃癌组织中CX3CR1的表达研究

目的 探讨CX3CR1在胃癌组织的表达及其意义.方法 收集30例胃癌患者手术切除的癌组织及对应癌旁组织,采用Western blot和免疫组织化学法对CX3CR1在蛋白质水平上进行检测.结果 Western blot和免疫组织化学法显示30例胃癌组织和对应癌旁组织中均存在CX3CR1蛋白的表达,CX3CR1蛋白在胃癌组织中的表达水平高于对应癌旁组织（P＜0.05）;免疫组织化学法显示胃癌组织中CX3CR1蛋白的表达主要位于癌细胞.结论 胃癌组织中CX3CR1的高表达可能与胃癌的发生发展密切相关.     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。