miR-214对胃癌细胞SGC7901侵袭和转移能力的影响

目的:探讨miR-214对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响及其可能作用机制。方法:应用miRanda,TarBase v.5c靶基因预测网站分析miR-214与PTEN mRNA的可能结合位点,分别将miR-214模拟物(mimics),拮抗物(inhibitors)和无关序列转染到SGC7901细胞株,以空白转染组为阴性对照,用Western blot的方法比较各组细胞PTEN蛋白的表达,用Transwell侵袭小室检测各组细胞侵袭能力的变化。结果:Western blot结果显示,miR-214 mimics转染组的SGC7901细胞中PTEN蛋白表达较其余各组显著降低(均P<0.05),Transwell侵袭小室检测结果表明,miR-214 mimics转染组的细胞侵袭细胞数明显多于其余各组(均P<0.05)。结论:miR-214能促进胃癌细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制PTEN的表达有关。摘要     

TGFβ对胃癌细胞浸润、转移的影响及其作用机制研究

目的:探讨TGFβ与胃癌浸润、转移之间的关系及其作用机制。方法:以胃癌细胞株SGC7901和BGC823为对象，应用transwell迁移浸润、matrigel fibronectin基质黏附、内皮细胞黏附、明胶酶谱及裸鼠成瘤等实验分别检测0 ng/mL或10 ng/mL TGFβ1处理前后胃癌细胞株生物学行为的变化。结果:经TGFβ1处理成瘤裸鼠4周后肝转移数量远高于未处理组（P<0.05）; SGC7901和BGC823细胞经TGFβ1处理后，瘤细胞浸润基质胶的能力增强; 瘤细胞的迁移、黏附能力亦明显增加。结论:TGFβ1促进胃癌浸润、转移，其机制可能与其促进瘤细胞运动、黏附以及基质金属蛋白酶分泌有关。     

miR-193b在胃癌细胞中对uPA的调控作用及机制

目的：探讨胃癌细胞中miR-193b对根据靶基因预测选出的纤溶酶原活化因子（uPA）的调控作用及机制。方法：胃癌BGC823细胞分别瞬时转染miR-193b正义序列（正义序列转染组）,反义序列（反义序列转染组）及无意义序列（阴性转染组）,以无转染的BGC823细胞为空白对照。用real-time PCR检测各组转染后miR-193b的表达水平,RT-PCR和Western blot法检测各组细胞uPA mRNA和蛋白的表达水平。结果：与空白对照组比较,阴性转染组miR-193b表达水平未见明显改变（P>0.05）,正义序列转染组的miR-193b的表达水平明显上调,反义序列转染组miR-193b的表达水平明显下调（均P<0.05）;各转染组uPA mRNA表达水平均无明显变化;阴性转染组uPA蛋白表达水平无变化,正义序列转染组uPA蛋白表达水平降低,反义序列转染组uPA蛋白表达水平增加。结论：uPA可能是miR-193b的靶基因,miR-193b可能通过抑制其转录后翻译负向调节其表达,从而利于胃癌细胞的侵袭。

     

LncRNA C21orF96通过调控miR-875-5p和USF2基因表达促进胃癌细胞的侵袭和转移

目的探讨lncRNA-C21orF96调控miRNA-875-5p和USF2基因表达促进胃癌细胞的侵袭和转移机制。方法采用RT-PCR技术检测胃癌细胞中与lncRNA-C21orF96相关的m iRNA的含量;胃癌细胞KATO-Ⅲ经pcDNA3.1质粒过表达lncRNA-C21orF96,SGC-7901细胞经siRNA干扰lncRNA-C21orF96表达后,采用R T-PCR技术检测胃癌细胞中miR-875-5p和USF2基因表达量的变化;胃癌细胞MKN45过表达lncRNA-C21orF96后,采用Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化。结果在胃癌细胞中,lncRNA-C21orF96与miR-875-5P值呈显著的相反关系,两者之间相对定量值差异具有统计学意义(SGC-7901细胞:21.19±1.09比3.28±0.06,P<0.01;SNU-16细胞:24.76±2.09比8.16±0.07,P<0.01);转染lncRNA-C21orF96表达载体的KATO-Ⅲ细胞中miR-875-5p表达显著下降而USF2基因表达升高(0<0.01);转染lncRNA-C21orF96干扰载体的SGC-7901细胞中miR-875-5p表达显著升高而USF2基因表达降低(P<0.05);lncRNA-C21orF96过表达后,实验组穿过人工基底膜的平均细胞数与对照组相比差异具有统计学意义[迁移实验:(216.19±2.30)个比(89.19±4.60)个,P<0.001;侵袭实验:(146.18±5.3)个比(59.18±2.60)个,P<0.001]。结论lncRNA-C21orF96的过表达能显著调控miR-875-5p表达同时促进USF2基因表达,促进胃癌细胞的侵袭和转移。     

CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探究CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞AGS顺铂(DDP)耐药的影响。方法:培养AGS与AGS/DDP细胞,比较两种细胞增殖抑制率以及CircNRIP1、mi R-193b-3p、STMN1表达情况;将AGS/DDP细胞分为AGS/DDP组、sh NC组、sh CircNRIP1组、sh CircNRIP1+inhibitor NC组、sh CircNRIP1+mi R-193b-3p inhibitor组,测定各组AGS/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率、侵袭能力以及STMN1蛋白水平;测定mi R-193b-3p与CircNRIP1、STMN1靶向关系。结果:与AGS细胞比较,AGS/DDP细胞CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白水平升高,细胞增殖抑制率、miR-193b-3p降低(P<0.05);与AGS/DDP组相比,sh CircNRIP1组细胞增殖抑制率、凋亡率、mi R-193b-3p升高,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白减少(P<0.05);与sh CircNRIP1组相比,sh CircNRIP1+miR-193b-3p inhibitor组细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-193b-3p降低,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白升高(P<0.05);miR-193b-3p与CircNRIP1、STMN1均存在靶向关系。结论:沉默AGS/DDP细胞中CircNRIP1表达,可靶向mi R-193b-3p/STMN1抑制AGS/DDP细胞增殖、侵袭,促进AGS/DDP细胞凋亡,实现AGS/DDP细胞对DDP耐药的逆转。     

L-NAME对大肠癌细胞侵袭和转移的影响

目的 探讨N-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）对人大肠癌细胞（LS-174T）侵袭、运动能力的影响及其可能的机制。方法 用不同浓度的L—NAME干预LS-174T细胞，用硝酸还原酶法测定L-NAME对细胞分泌NO的影响；用重组基底膜侵袭实验观察药物对癌细胞侵袭、运动能力的影响；用RT-PCR法检测MMP2和TIMP2的表达。结果（1）L-NAME降低了sL-174T细胞NO的分泌，呈浓度依赖性。（2）0．2mmol／L，0．4mmol／L，0．8mmol／L和1．0mmol／LL-NAME处理sL-174T细胞72h，对细胞侵袭重建基底膜的抑制率分别为10．29％，19．62％，34．08％和42．23％（P〈0．05或P〈0．01）；（3）对细胞趋化运动抑制率分别为20．76％，24．95％，39．43％和46．85％（P〈0．01），同时可降低细胞MMP2mRNA的表达，而提高TIMP2 mRNA的表达。（4）NO浓度与MMP2mRNA表达呈正相关（r=0．8124，P〈0．01），而与TIMP2mRNA呈负相关（r=-0．7106，P〈0．01）。结论L-NAME具有抑制sL-174T细胞侵袭和转移的作用；L—NAME的抗侵袭活性与肿瘤细胞MMP2mRNA和TIMP2mRNA的表达有关。     

胃腺癌淋巴结转移危险因素的分析

目的 探讨胃腺癌组织学类型及浸润深度与淋巴结转移的关系.方法 回顾性分析1615例胃腺癌的临床病理资料,对不同组织学类型和不同浸润深度以及淋巴结的转移率及转移个数进行统计分析.结果 平均每例取淋巴结28.62个,共46 227个,其中有转移的10 173个,平均转移率22.01%;1 615例胃腺癌有淋巴结转移的1 046例,转移率为64.77%.其中TNM分期T1(M),T1(SM),T2,T3的转移率分别为2.78%,13.61%,55.59%和84.84%;组织学高分化癌转移率50.25%,低分化癌转移率78.95%,差异均有统计学意义(均P＜0.001).结论 胃腺癌的转移率与组织学分类有关;随着浸润深度的增加,转移的危险性呈梯度增高.     

淋巴结转移对无浆膜浸润胃癌患者预后的影响

目的 探讨淋巴结转移对无浆膜浸润胃癌预后的影响.方法 回顾性分析1994年1月至2005年12月间大连医科大学附属第一医院普通外科行D2或D2以上胃癌根治术、且具有完整随访资料的616例无浆膜浸润胃癌患者的临床资料;并选取同期接受相同术式的有浆膜浸润的162例胃癌患者为对照组.结果 无浆膜浸润胃癌患者的5年生存率为77.9％,明显高于浆膜浸润组的37.3％（P＜0.01）.不同浸润深度患者5年生存率分别为T１a（M）95.6％,T1b（SM） 92.5％,T2（MP）73.5％,T3（SS） 62.7％,T4（SE、SI） 37.3％.按日本第13版《胃癌处理规约》,N0、N1（第1站）、N2（第2站）和N3（第3站）无浆膜浸润胃癌患者的5年生存率分别为91.5％、75.3％、54.8％和14.7％,差异有统计学意义（P＜0.01）;按第7版TNM分期,N0、N1（1～2枚）、N2（3～6枚）、N3a（7～15枚）和N3b（15枚以上）无浆膜浸润胃癌患者的5年生存率分别为91.5％、83.6％、59.8％、17.2％和11.8％,差异亦有统计学意义（P＜0.01）.淋巴结转移是无浆膜浸润胃癌患者预后的独立预后因素（P＜0.0l）.结论 无论是按转移淋巴结的范围还是数量进行评价,淋巴结转移均能对无浆膜浸润胃癌患者的预后作出较好的预测.     

microRNA与乳腺癌浸润转移关系的研究进展

目的总结microRNA（miRNA）与乳腺癌浸润、转移关系的研究进展。方法检索并筛选近年来国内外发表的有关miRNA与乳腺癌浸润、转移关系的文献并对其进行综述。结果许多miRNA在乳腺癌发生、发展与浸润、转移过程中都起着关键作用,按其作用可分为促癌miRNA（miR-21、miR-10b等）和抑癌miRNA（miR-31、let-7等）两类。结论miRNA调控乳腺癌浸润及转移的具体过程还需要更多、更详细的实验研究。     

胃癌浸润性树突状细胞CD83和S100的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤组织浸润树突状细胞（tumor infiltrating dendriticcells,TIDCs）在胃癌组织的表达及临床意义.方法采用免疫组化、原位杂交及流式细胞术分别检测45例胃癌组织的TIDCs的S100,CD83及CD83 mRNA表达,并分析它们与临床病理特点的关系.结果免疫组化显示胃癌组织（42/45）中有S100＋DCs不均一表达,CD83表达于癌旁及正常黏膜.原位杂交显示CD83mRNA有少量（7/45）表达.流式细胞术可检测到较低水平CD83表达（4%）.S100和CD83 mRNA表达数量与患者年龄、性别、肿瘤部位、浸润深度、病理分期及淋巴结转移情况无显著相关性.免疫组化检测CD83表达与TNM呈负相关（r=-0.924,P＜0.01）;流式细胞术检测CD83与TNM分期及淋巴结转移呈负相关（r=-0.879,P＜0.01;r=-0.7 82,P＜0.05）.结论胃癌TIDCs以未成熟状态为主,S1 00表达提示其数量,CD83表达提示其功能,且与胃癌TNM分期及淋巴结转移有关,是更好的临床观测指标.     

胃癌腹腔微转移的研究及其临床意义

目的运用细胞学及RT-PCR方法检测胃癌患者术中腹腔冲洗液和腹膜组织,以探讨这些方法对预测胃癌腹腔微转移的意义.方法收集3 8例胃癌和5例胃良性病变患者的术中腹腔冲洗液,并同时切除少量大网膜、腹膜作为对照.用RT-PCR方法测定冲洗液中游离细胞的CEAmRNA表达,同时作冲洗液细胞学检查（PLC）.结果腹腔冲洗液和腹膜组织中的CEA mRNA的阳性率分别为36.8%（14/38）和39.5%（15/38）,皆高于腹腔冲洗液PLC的26.3%（10/38）.CEA mRNA的阳性率与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、浆膜侵犯深度有关.结论CEART-PCR方法对于检测腹腔微量游离癌细胞较PLC有更高的灵敏度和特异性,是一种检测胃癌腹腔微转移的有效方法.     

CDH17对胃癌细胞侵袭性的影响及其机制

目的:探讨CDH17在胃癌细胞中的表达及其对胃癌侵袭性的影响。方法:分别用Transwell侵袭实验、免疫荧光染色及Western blot法检测正常胃黏膜GES-1细胞和胃癌MGC803细胞与BGC823细胞的侵袭力与CDH17、上皮标志物E-cadherin、间质标志物N-cadherin的表达,以及两种胃癌细胞转染CDH17si RNA后以上指标的变化。结果:正常胃黏膜GES-1细胞无穿膜细胞、无CDH17与N-cadherin表达,而有明显的E-cadherin表达;与GES-1细胞比较,两种胃癌细胞均有明显的穿膜细胞及明显的CDH17与N-cadherin表达,而E-cadherin呈低表达(均P0.05),且高侵袭力的MGC803细胞上述变化较低侵袭力的BGC823细胞更为明显;两种胃癌细胞转染CDH17si RNA后,上述指标变化较转染前明显抑制(均P0.05),且在两种细胞间的差异缩小(均P0.05)。结论:CDH17高表达可能通过上皮间质转化促进胃癌细胞系侵袭性。     

胃癌卵巢转移：附17例报告

目的 探讨胃癌卵巢转移的临床病理特点、诊断方法和治疗经验.方法 回顾分析33年间17例经手术治疗及病理证实的胃癌卵巢转移患者的临床资料.结果 胃癌卵巢转移患者的平均年龄48.41岁,常以卵巢转移灶为首发表现.超声检查以混合性肿块或实质性肿块为主要表现,多伴有腹腔积液,双侧卵巢转移多见（13例）.该病术前诊断困难,本组术前误诊率64.7%.本组均采用手术治疗,但预后较差,平均生存时间仅11.6个月.结论 胃癌卵巢转移预后差,对于双侧卵巢肿瘤患者应注意检查胃部情况.根治性切除原发灶的同时一并切除子宫及双附件,术后采取综合治疗有助于改善预后.     

BDNF|TrkB在原发性肝癌中的表达及BDNF对肝癌细胞株Bel-7402的作用

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB在原发性肝癌中的表达及BDNF对肝癌细胞株Bel-7402的作用。方法 (1)检测肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中BDNF和TrkB的表达,分析BDNF和TrkB的表达与临床病理因素之间的关系。(2)检测BDNF,TrkB,Bcl-2在肝癌细胞株Bel-7402及正常肝细胞株L-02的表达及其对Bel-7402细胞增殖、失巢凋亡、黏附、浸润转移能力的影响。结果 (1)肝癌组织中BDNF呈高表达(60.4%,29/48),与Edmondson分级、有无包膜有关(P0.05);TrkB表达率为52.1%(25/48),与Edmondson分级及肿瘤结节数有关(P0.05);BDNF与TrkB在肝癌中的表达呈正相关(r=0.332,P0.05)。BDNF和TrkB在正常肝组织中均无表达。两者在肝癌组织中表达远高于癌旁组织中的表达(P0.01)。肝癌组织中BDNF和TrkB呈高表达者,其2年内复发率增高(P0.05)及生存率下降(P0.01)。(2)外源性BDNF均能增强Bel-7402细胞的增殖、黏附、体外迁移、侵袭能力及抵抗失巢凋亡的能力(P0.01);(3)各浓度的BDNF均可上调Bel-7402细胞Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达(P0.05)。结论 (1)BDNF及TrkB在肝癌中高表达,可能与复发、生存率有关;(2)BDNF可调节肝癌细胞的生长、黏附、迁移和侵袭;(3)BDNF可上调Bcl-2的表达,抑制肿瘤细胞的失巢凋亡。     

miR-526b在胰腺癌中的表达及作用

目的:探讨mi R-526b在胰腺癌中的表达与作用。方法:用q RT-PCR法检测mi R-526b在52例胰腺癌和癌旁组织,以及在4种胰腺癌细胞系(Bx PC-3、SW1990、PANC-1和As PC-1)和正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)中的表达。将胰腺癌细胞分别转染mi R-526b模拟物、mi R-526b抑制物及阴性对照序列后,采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术分别测定细胞增殖、侵袭与凋亡情况。生物软件和双荧光素酶报告基因法分析mi R-526b潜在靶基因,并用Western blot和q RT-PCR法及相关性分析验证。结果:mi R-526b在胰腺癌组织中表达量明显低于癌旁组织,在4种胰腺癌细胞系中的表达量均明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(均P0.05)。胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,增殖能力明显降低、细胞凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱,而转染mi R-526b抑制物后则呈反向变化(均P0.05)。分析结果显示XRCC5是mi R-526b靶基因;胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,XRCC5的m RNA和蛋白表达均明显下调,mi R-526b抑制物后则均明显上调(均P0.05);胰腺癌组织中mi R-526b和XRCC5 m RNA表达水平呈显著负相关(r=-0.456,P0.05)。结论:mi R-526b在胰腺癌中下调表达,mi R-526b低表达可促进胰腺癌细胞增殖、侵袭并抑制凋亡,机制可能与上调其靶基因XRCC5的表达有关。     

miR-26b的表达及其与Foxf2相互作用在乳腺癌细胞生物学行为中的作用

目的:探讨miR-26b在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的的影响。方法:比较正常乳腺细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7中miR-26b的表达差异。以无处理的MCF-7细胞为空白对照,分别检测MCF-7细胞转染miR-26b模拟物(miR-26b组)、空质粒(阴性对照组)后的miR-26b表达与增殖、迁移、侵袭能力,以及Foxf2的mRNA与蛋白表达的变化。用双荧光素酶报告系统检测miR-26b对MCF-7细胞中Foxf2转录活性的影响。结果:miR-26b在MCF-7细胞中的表达水平明显低于MCF-10A细胞(P0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-26b组miR-26b mRNA表达水平明显升高、细胞增殖迁移、侵袭能力明显降低,Foxf2的mRNA和蛋白表达量均明显下调(P0.05)。转染miR-26b模拟物后,MCF-7细胞中Foxf2-3'UTR的转录活性明显抑制(P0.05)。结论:miR-26b在乳腺癌细胞中表达降低、增加其表达能抑制乳腺癌细胞的恶性生物学行为,机制可能与其下调Foxf2的表达有关。     

miR-105-5p在胃癌中的表达及其意义与生物学功能

目的:探讨miR-105-5p在胃癌(GC)中的表达情况、临床意义及生物学功能及其潜在的作用机制。方法:应用real-time PCR检测miR-105-5p在GC组织与癌旁组织以及不同GC细胞(MGC-803,MKN-1,SGC-7901,BGC-823和AGS)与正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达;分析miR-105-5p的表达与GC临床病理特征及患者预后的关系;采用Transwell迁移和侵袭实验以及MTT实验检测miR-105-5p对GC细胞迁移与侵袭能力以及增殖能力的影响;应用生物信息学工具预测miR-105-5p的下游靶点,并应用荧光素酶报告实验以及Western blot分析miR-105-5p对靶点的调节作用。结果:miR-105-5p在GC组织的表达明显高于癌旁组织,在各GC细胞中的表达均明显高于正常胃黏膜细胞(均P0.05)。miR-105-5p的表达水平与肿瘤大小(P=0.020)和远处转移(P=0.004)明显有关;miR-105-5p低表达GC患者的总体生存率明显高于miR-105-5p高表达组的患者(P=0.001 8)。选择miR-105-5p表达量相对较低的BGC-823细胞和相对较高的MKN-1细胞,分别转染miR-105-5p模拟物和miR-105-5p抑制物,转染后结果显示,BGC-823细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显增强,而MKN-1细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显抑制(均P0.05)。生物信息学分析发现,DIRAS家族GTP结合RAS样3(DIRAS3)可能是miR-105-5p的作用靶点;荧光素酶报告实验显示,miR-105-5p能够负向调节DIRAS3-3'UTR的荧光素酶活性;Western blot显示,转染miR-105-5p模拟物的BGC-823细胞中DIRAS3的表达明显下调,转染miR-105-5p抑制物的MKN-1细胞DIRAS3的表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-105-5p在GC中表达升高,其可能通过靶向作用于DIRAS3增强GC细胞的迁移、侵袭及增殖,进而促进GC的发生发展。