不对称PCR杂交显色方法的建立及其对HBV DNA的检测

目的：建立一种灵敏、快速、特异的检测ＨＢＶ ＤＮＡ ＰＣＲ产物的杂交显色方法．方法：使用一个生物素标记的上游引物对ＨＢＶ ＤＮＡ进行不对称ＰＣＲ扩增,使扩增出的单链带有生物素,并可结合在固定有链亲合素的微孔板表面．用标有辣根过氧化物酶的探针与固定的单链ＰＣＲ产物杂交,而后加底物显色测定吸光值。结果：该方法比常规的琼脂糖凝胶电泳法更特异,而且灵敏度高１０倍￣１００倍,对简便处理的标本适应性强,具有良     

原位PCR技术检测肝中HBV—DNA的应用

目的：探讨原位ＰＣＲ技术在ＨＢＶ低水平感染中的意义。方法：用原位ＰＣＲ方法检测４２例肝炎患者石蜡包埋肝组织的ＨＢＶ－ＤＮＡ并与原位杂交技术检测结果进行比较。结果：原位ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为５０％，明显高于原位杂交法（１９％，Ｐ〈０．０１），肝组织中ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率与临床诊断无关。阳性杂交信号均位于肝细胞浆，呈簇状和弥散状分布。结论：原位ＰＣＲ检测肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ具有快速、灵敏、     

检测人巨细胞病毒的免疫—PCR方法的建立

目的：依据免疫－ＰＣＲ基本原理，建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）活动性感染的免疫＿ＰＣＲ方法。方法：我们建立的免疫－ＰＣＲ方法与酶联免疫ＥＬＩＳＡ不同之处是，用ＰＣＲ扩增生物素化线性ＰＢＶ２２０ＤＮＡ代替ＥＬＩＳＡ的酶催化底物，经琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色观察分析扩增产物异条带，判断结果。结果：用本法检测ＨＣＭＶ的敏感性高于ＥＬＩＳＡ法１０＾３－１０＾５倍，可检测到５个感染ＨＣＭＶ细胞；而检测ＨＳ     

PCR检测HBV—DNA及其临床意义探讨

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测肝炎患者血清中的乙肝病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ－ＤＮＡ），以探讨ＰＣＲ技术在乙肝病毒感染诊断中的应用，及ＨＢＶ－ＤＮＡ与血清ＨＢＶ标记ＨＢＶ－Ｍ之间的关系。结果表明１１５例ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率与ＨＢＶ活动复制情况相一致，认为ＰＣＲ方法灵敏度高，特异性强，为早期发现病人的ＨＢＶ的隐性感染提供了可靠的手段。     

聚合酶链反应及微板杂交法对人乳头瘤病毒分型检测

目的：为适应临床人乳头瘤病毒分型检测,建立了通用引物扩增（ＧＰ－ＰＣＲ）及微孔板杂交－ＥＬＩＳＡ检测法。方法：先进行ＧＰ－ＰＣＲ,其中一条引物５’端标记有地高辛,探针标记有生物素,通过包被在微孔板上的亲和素预先固定;将扩增产物加入预先包被有ＨＰＶ型特异寡核 酸探针和ＨＰＶ基因组混合探针的聚苯乙烯微孔板中,４２℃杂交仅需２０～３０ｍｉｎ;最后,用酶底物与所标记的酶进行显色择应,通过测定吸光度来判断结     

乙肝病毒PCR产物的鉴定及单项抗HBc阳性血清的HBV基因扩增

本文报道ＨＢＶ基因扩增产物的限制性酶切分析和寡核苷酸探针杂交鉴定、应用血清ＨＢＶＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物制备基因探针和单项抗ＨＢｃ阳性血清的ＨＢＶ基因扩增。ＰＣＲ用ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｗ３种亚型ＨＢＶ的Ｃ基因区共有序列为内外两对引物分单次或套式扩增，产物为６６ａｂｐ或４２８ｂｐ，两者序列中段共含－ＢｇＩⅡ酶切点并与一寡核苷酸探针同源。４２８ｂｐ产物被用以缺口平移标记３２Ｐ探针作斑点和转印杂交检测。结合分子杂交的ＰＣＲ结果从单项抗ＨＢｃ阳性的８／４２例慢性肝炎和２／１２例无症状受测者血清中检出ＨＢＶＤＮＡ，证实病毒低度复制和传染性。     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９份乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比斑点杂交高（Ｐ＜０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５７．１％（１２／２１）；血清阳性率为６１．３％（１３／２１）；两者总阳性率为８０．９％（１７／２１），说明用ＰＣＲ同时检测肝组织和血中ＨＢＶＤＮＡ，可明显提高ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

应用聚合酶反应制备HBV DNA生物素探针

通过聚合酶链反应将Ｂｉｏ－１１－ｄｕＴＰ掺入扩增的ＨＢＶ ＤＮＡ中，制备了长度为１２０ｂｐ的生物素探，检测到０．１ｐｇ的ＨＢＶ ＤＮＡ。ＰＣＲ标记法简便迅速，特异性，用ＤＮＡ量少且无需分离纯化，其标记探针得率高，活性强。     

双带PCR提高检测血清HBV—DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ。该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性，与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品）和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品），ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交。     

用聚合酶链反应微孔板杂交技术检测HBV DNA

目的 :建立并优化HBVDNA的PCR 微孔板杂交技术检测体系 ,使临床PCR结果判定更加客观可靠。方法 :采用碱裂解标本中的HBV、玻璃粉吸附提纯模板DNA ,用 5’端标记生物素的引物进行PCR ,PCR扩增产物与包被于微孔板中的靶基因杂交 ,酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合后 ,用酶底物与所标记酶进行显色反应 ,最后通过测定其光密度来判定结果。结果 :建立并优化的PCR 微孔板杂交检测方法提高了检测的灵敏度和特异性。PCR 微孔板杂交法对HBVDNA的检出阳性率 (79.8% )比电泳法 (6 9.0 % )高 ,2 0份非乙肝患者血清标本两方法检测均阴性。结论 :本方法灵敏、特异、操作简便、快速、结果客观可靠。     

用聚合酶链反应检测乙肝患者血清中的HBV－DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了１１４例传染科门诊病人血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与ＨＢＶ有关的血清学标志（ＨＢＶＭ）进行了比较。结果表明：在９２和ＪＨＢｓＡｇ（＋）病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者５０例，占５４．３４％；在２８例ＨＢｅＡｇ（＋）病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者２６例，占９２．８６％；在２０例ＨＢＶＭ均为阴性的病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者有６例，占３０．００％。证明ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ较用ＥＬＩＳＡ法检测抗原一抗体更加灵敏、可靠。     

外参照PCR及其产物酶联杂交定量检测HBV DNA

建立一种敏感,特异和精确的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因ＰＣＲ及其产物的酶联杂交定量分析技术。方法：（１）常规ＰＣＲ法扩增ＨＢＶ ＤＮＡ质粒和血清ＨＢＶ ＤＮＡ,引物（ＳＰ１,ＳＰ２）为一对ＨＢＶ ＤＮＡ Ｓ区基因特异引物,扩增片段长３１９ｂｐ,ＳＰ２的５′端用生物素修饰。扩增条件经过严格优化组合,以最大限度减少非特异片段,包括引物二聚体产生。设定５个不同梯度的ＨＢＶ ＤＮＡ外参照管,制作标准曲线。（     

微板核酸杂交—ELISA方法对肝炎病人血清中HBV DNA的定量检？…

采用微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ技术测定肝炎病人血清中ＨＢＶＤＮＡ含量。方法用ＰＣＲ法将病人血清标本扩增后，与现任要特异性探针夹心杂交，然后通过酶联显色对６９例不同临床表现的肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ进行定量检测。结果２０例急性型肝炎血清中的ＤＮＡ含量超μｇ／Ｌ，８８．２４％的急性轻型肝炎患者和５４．５５％轻度慢性肝炎患者血清中的ＨＢＶＤＮＡ含量少于２μｇ／Ｌ，６６．６７％中度慢性肝炎患者血清ＨＢＶＤ     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

有用聚合酶链反庆（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９例乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比为杂交高（Ｐ〈０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ一率为５７．１％；血清阳性率为６１．３％；两者总阳性率为８０．９％，说明ＰＣ     

用聚合酶链反应检测乙肝患者血清中的HBV—DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了１１４例传梁科门诊病人血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与ＨＢＶ有关的血清学标志（ＨＢＶＭ）进行了比较。结果证明ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ较用ＥＬＩＳＡ法检测抗原－抗体更加灵敏、可靠。     

时间分辨荧光核酸杂交分析体系的建立及其初步应用

建立时间分辨荧光核酸杂交分析体系应用于临床乙型肝炎病毒ＤＮＡ检测。采用本室自制螯合剂异硫氰酸苯基－ＥＤＴＡ制备铕离子标记的链霉亲和素,抽提患者血清中的ＤＮＡ,包被于聚苯乙烯微滴板中,与生物素化ＨＢＶ ＤＮＡ杂交后,以Ｅｕ＾３＋－ＳＡ为检测物,应用时间分辨荧光技术检测血清样本中的ＨＢＶ ＤＮＡ。     

原位PCR—杂交—步法检测胆管细胞癌组织内HBV－DNA

原位ＰＣＲ—杂交—步法检测胆管细胞癌组织内ＨＢＶ－ＤＮＡ顾广玉，王文亮（病理学教研室西安７１００３３）关键词原位ＰＣＲ；ＨＢＶ；胆管细胞癌中图号Ｒ７３５．８近年来原位ＰＣＲ方法在病毒感染的诊断中逐步得到应用．目前，用原位杂交与免疫组化方法检测组织中的...     

聚合酶链反应检测血清HBV—DNA

评价聚合酶链反应法检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ的临床意义及其优越 性。方法：用ＰＣＲ法测定８１例血清ＨＢＶ标志物阳性的ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与固相放射免疫测定法作比较。     

HBV感染者外周血单个核细胞中HBV DNA的检测

目的；研究乙型肝炎毒（ＨＢＶ）感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中ＨＢＶ ＤＮＡ的存在及其与血清ＨＢＶ ＤＮＡ的关系。方法：用ＰＣＲ法及斑点杂交法对５０例ＨＢｓＡｇ（＋）的感染者ＰＢＭＣｓ ＨＢＶ ＤＮＡ进行检测。同时用ＰＣＲ法检测感染者血清ＨＢＶ ＤＮＡ。结果：ＰＣＲ法和斑点杂交法分别从３５份和３２份ＰＣＭＣｓ检出率均为６０．０％左右。ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为３６．０％。结论：Ｈ     

应用PCR技术检测慢性乙肝病毒性肝病血清及外周血单个核细胞中HBV－DNA

本文应用多聚酶连反应（ＰＣＲ）技术检测了１０４例慢性乙肝病毒性肝病患者血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＢＶ－ＰＮＡ，并与放免法进行了比较。结果显示，ＰＣＲ检测结果更能客观地反应ＨＢＶ在体内存在的状态，在外周血单个核细胞中有ＨＢＶ感染；１０４例慢性肝病患者外周血单个核细胞中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为２８．８％，而血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性的２０例患者有７例ＰＢＭＣ中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ，占３５％。因此，在检测血清ＨＢＶ标志物及ＨＢＶ－ＤＮＡ的同时检测ＰＢＭＣ中的ＨＢＶ－ＤＮＡ可进一步防止ＨＢＶ传播与输血后肝炎的发生。