5-氮-2’脱氧胞苷对急性粒细胞性白血病细胞系HL-60中CDH13基因甲基化的影响

目的分析探讨5-氮-2’脱氧胞苷对急性粒细胞性白血病细胞系HL-60中CDH1基因甲基化的影响。方法5-Aza-dC处理培养的HL-60细胞,用甲基化特异性PCR（MSP）法检测处理前后细胞中CDH13基因的甲基化状态,RT—PCR法检测用药前后细胞中CDH1mRNA表达的变化。结果HL-60中CDH13启动子区发现甲基化,应用5-Aza—dC能使CDH1基因启动子区CpG岛去甲基化,而且经药物处理后CDH13mRNA的表达较前明显增强。结论5-Aza—dC能逆转CDH13基因甲基化状态,从而调控CDH13基因表达。     

5-氮-2'脱氧胞苷逆转人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中RIZ1基因的表达

目的:观察甲基转移酶抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne RIZ1基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨人卵巢癌细胞系OVCAR3和AnglneRIZ1基因失活的机制及5-Aza-CdR对RIZ1基因表达的调控。方法:用5-Aza-CdR(浓度为5μmol/L)处理体外培养的人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne后,采用MSP法检测用药前后细胞中RIZl基因的甲基化状态,RT-PCR及Western-blot法检测用药前后细胞中RIZ1基因mRNA及蛋白表达的变化。结果:在人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中,RIZ1基因启动子区呈异常甲基化状态,RIZ1基因mRNA及蛋白表达缺失,经过5-Aza-CdR处理后,RIZ1基因启动子区呈非甲基化状态,其mRNA及蛋白重表达。结论:5-Aza-CdR可改变人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中RIZ1基因甲基化状态,从而调控癌细胞中RIZ1基因的表达。     

5-氮杂脱氧胞苷对肿瘤细胞p16基因甲基化及表达的影响

[目的]探讨甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对肿瘤细胞p16基因的甲基化状态及其表达的影响.[方法]利用5-Aza-CdR（106 mol/L）处理肿瘤细胞株（SPC-Al、BIU-87、T-24、Hep-G2）9 d,甲基化特异性PCR法（MSP）检测了用5-Aza-CdR处理前后4株肿瘤细胞p16基因的甲基化状态,同时利用RT-PCR检测了5-Aza-CdR处理前后p16基因的表达水平差异.[结果]除BIU-87外,其他3种肿瘤细胞p16基因都有不同程度的甲基化,用5-Aza-CdR处理后比处理前p16 mRNA的表达有显著升高（P＜0.01）.[结论]p16基因的过甲基化是导致其表达失活的一个重要机制,而5-Aza-CdR可显著抑制肿瘤细胞p16基因的过甲基化.     

姜黄素对多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞RASSF2A表达及启动子区甲基化的影响

目的 探讨姜黄素联合甲基化抑制剂5氮杂2'脱氧胞苷(5 AzaCdR)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞抑癌基因RASSF2A的去甲基化作用.方法 利用RPMI-8226细胞系建立MM细胞模型,分别加入姜黄素、5 AzaCdR以及姜黄素联合5 AzaCdR处理.观察各组细胞的生长情况,采用甲基...     

甲基化抑制剂对肾癌细胞株中γ—caenin蛋白表达的影响

目的研究甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对人肾癌A498细胞增殖及^γ-连环蛋白（γ—catenin）表达的影响。方法使用不同浓度（10^-7、10^-6、10^-5mol／L）的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza—CdR处理A498肾癌细胞株。MTT检测5-Aza—CdR对。肾癌细胞株A498抑制作用。细胞免疫化学检测5-Aza—CdR处理A498肾癌细胞株后^γ—catenin表达的变化。结果5-Aza—CdR能明显抑制肾癌细胞的增殖,且与药物浓度及作用时间有关。药物处理后γ-连环蛋白表达增加。结论γ-catenin蛋白表达受甲基化的抑制,提示5-Aza—CdR可使γ-catenin基因去甲基化而抑制A498肾癌细胞株增殖。     

5-杂氮-2'脱氧胞啶联合组蛋白乙酰基转移酶抑制剂对体外RD-ES细胞的抑制作用

目的 研究5-杂氮-2'-脱氧胞啶(5aza-Cdn)联合各种组蛋白乙酰基转移酶(HDAC)抑制剂对体外人尤文瘤细胞株RD-ES细胞的抑制作用,为尤文瘤的治疗提供实验参考.方法 体外培养5×103个/ml的RD-ES细胞株,以MTT比色法观察不同浓度5aza-CdR(终浓度为10、40、100 ng/ml)联合HDAC抑制剂(10、100、400、1000 ng/ml的MS-275,2.5、5、10 ng/ml的TSA,0.6、1、2.5 ng/ml的Depsi)对RD-ES细胞染毒48 h的生长抑制作用,以高灵敏度DNA试剂盒检测5aza-cdR DNA抑制率.以RT-PCR法检测5aza-CdR联合Depsi染毒对RD-ES细胞ECAD和TSLCI表达的影响.结果 5aza-CdR对RD-ES细胞系抑制率为50%时的抑制剂浓度(IC50)为40ng/ml,48 h DNA50%抑制率的浓度约为50 ng/ml.HDAC抑制剂(MS-275,trichostatin-A,Depsi)对RD-ES细胞系的IC50值分别为400、2.5、0.6 ng/ml.5aza-CdR联合HDAC抑制剂染毒组RD-ES细胞抑制率均高于相同HDAC抑制剂单独染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).与5aza-CdR、Depsi联合染毒组比较,5aza-CdR单独染毒组和Depsi单独染毒组激活ECAD和TSCL1的RT-PCR表达较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HDAC抑制剂能增强5aza-CdR对RD-ES细胞的抑制作用.Depsi能增强5aza-CdR激活ECAD和TSCL1的表达.     

慢性淋巴细胞性白血病患者miR-9-3甲基化异常及其意义

目的本研究旨在探讨microRNA-9-3(miR-9-3)在慢性淋巴细胞性白血病骨髓细胞中的甲基化异常及其意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术检测8例正常骨髓组织、78例新确诊的慢性淋巴细胞性白血病患者和7种白血病细胞株甲基化水平。结果正常对照组miR-9-3呈未甲基化状态;7种白血病细胞株中有5种呈未甲基化状态(71.4%);78例慢性淋巴细胞性白血病患者中65例呈miR-9-3甲基化,MSP阳性率为83%。5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza Dc)处理白血病细胞株后I83-E95和WAC3CD5+细胞株miR-9-3呈未甲基化状态。结论慢性淋巴细胞性白血病患者存在miR-9-3表达受抑,可能与其基因甲基化异常有关。而miR-9-3甲基化在激活慢性淋巴细胞性白血病患者NF-κB1信号通路的作用值得进一步研究。     

普鲁卡因酰胺诱导肝癌细胞启动子区甲基化的GSTP1基因重新表达

目的　研究HepG2肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化与GSTP1基因表达的关系 ,并探讨普鲁卡因酰胺用于诱导因甲基化失活的GSTP1基因重新表达的可能性。方法　分别用 5 -杂氮 - 2′ -脱氧胞苷 (5 -Aza -CdR)和普鲁卡因酰胺处理HepG2细胞后培养 ,甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞中GSTP1基因的甲基化状况 ,RT -PCR和Westernblot分别检测细胞中GSTP1mRNA和GST -π的表达。结果　HepG2细胞在去甲基化药物处理前 ,GSTP1基因完全甲基化 ,GSTP1基因不表达 ;药物处理后 ,普鲁卡因酰胺组和 5 -Aza -CdR组GSTP1基因有表达。结论　肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化可抑制GSTP1基因表达 ,普鲁卡因酰胺与 5 -Aza -CdR一样能使启动子区甲基化的GSTP1基因重新表达     

5-氮杂胞苷对DKK3去甲基化及对SGC7901胃癌细胞增殖的影响

目的 研究5-氮杂胞苷对SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子去甲基化对细胞增殖及凋亡的影响。 方法 采用5-氮杂胞苷处理SGC7901胃癌细胞,以未行5-氮杂胞苷处理的SGC7901胃癌细胞为对照,比较DKK3基因启动子甲基化改变及细胞增殖曲线、细胞增殖及凋亡的差异。 结果 SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子在5-氮杂胞苷作用前呈甲基化状态,作用后呈未甲基化状态,表明5-氮杂胞苷对SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子具有去甲基化作用。5-氮杂胞苷作用后的SGC7901胃癌细胞G₀/G₁期比例、PI和凋亡率均显著高于作用前SGC7901胃癌细胞(均P<0.05),S期和G₂/M期显著低于作用前SGC7901胃癌细胞(均P<0.05)。 结论 DKK3基因可能具有抑癌基因作用,5-氮杂胞苷对SGC7901胃癌细胞DKK3基因启动子的去甲基化可促进细胞凋亡并抑制其增殖。     

齐墩果酸对白血病HL-60细胞cav-1表达的影响

目的：研究齐墩果酸（oleanolic acid,OA）对白血病HL-60细胞窖蛋白-1（Caveolin-1,CAV-1）表达的影响。方法：OA作用HL-60细胞后,倒置显电镜观察细胞形态;RT-PCR检测HL-60细胞cav-1的mRNA表达;Western blot检测CAV-1蛋白水平。结果：OA作用HL-60细胞后,RT-PCR检测cav-1mRNA表达上调（P〈0.01）;Western blot检测CAV-1蛋白水平升高（P〈0.01）。结论：OA通过上调CAV-1的表达,抑制HL-60细胞增殖。     

子宫颈癌细胞株表达kiss-1基因重组慢病毒的构建

目的 探讨体内表达kiss-1基因的方法 治疗子宫颈癌的可行性,构建可表达kiss-1基因的重组慢病毒.方法 采用RT-PCR方法 ,根据制备两端含有酶切位点的kiss-1基因的cDNA片段,通过常规分子生物学手段在确保信号肽酶的识别点的条件下,构建可以表达kiss-1基因的慢病毒包装专用质粒pLenti6/V5D-TOPO,与其他辅助质粒共同转染293细胞,获得能表达kiss-1的重组慢病毒.结果 测序证实克隆kiss-1的cDNA与Genebank提供的序列完全一致;经限制性内切酶物理图谱方法 证实已经成功地将kiss-1和cDNA重组到含NT4的信号肽和前导序列下游.经RT-PCR方法 证明重组慢病毒在人子宫颈癌Hela细胞中可以表达kiss-1基因.结论成功构建了能够表达kiss-1的重组慢病毒.     

GSTP1和RASSF1A在前列腺癌组织中的甲基化检测及其表达研究

目的：研究前列腺癌和前列腺增生组织中GSTP1和RASSF1A基因的甲基化差异及其蛋白表达情况,探讨GSTP1和RASSF1A基因甲基化作为前列腺癌早期诊断的价值,并揭示该基因甲基化与前列腺癌的发生发展的关系。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法检测GSTP1和RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态,并运用免疫组化SP染色法检测前列腺癌组织中GSTP1和RASSF1A基因的蛋白表达情况。结果：前列腺癌组织中GSTP1和RASSF1A基因甲基化检出率均明显高于前列腺增生组织,差异均有统计学意义（GSTP1：76.00%vs3.33%,P〈0.001;RASSF1A：68.00%vs16.67%,P〈0.001）。在前列腺癌中,GSTP1和RASSF1A蛋白阳性表达均明显低于前列腺增生组织,差异均有统计学意义（GSTP1：20.00%vs76.67%,P〈0.001;RASSF1A：38.00%vs90.00%,P〈0.001）。结论：GSTP1和RASSF1A基因异常甲基化可导致靶基因的蛋白表达降低,促进前列腺癌的发生发展。因此,GSTP1和RASSF1A基因在前列腺癌的发生、发展中起到重要作用,检测GSTP1和RASSF1A基因的甲基化有望成为前列腺癌早期诊断的分子标志物。     

蟾酥作用后HL-60细胞基因表达谱变化的研究

目的研究蟾酥作用后HL-60细胞基因表达谱的变化，为蟾酥诱导HL-60细胞凋亡的可能机制提供依据。方法采用细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡；应用DNA芯片技术检测蟾酥作用前后HL-60细胞基因表达谱的变化。结果1％(v／v)的蟾酥可明显诱导HL-60细胞凋亡。细胞凋亡发生前，在检测的1152个基因中共有9个基因表达改变，其中8个基因上调，1个基因下调。结论在蟾酥诱导HL-60细胞发生凋亡过程中有多个基因参与，BCL-2下调以及IL-8上调与凋亡的发生关系密切。     

鬼臼毒素衍生物GP-14对HL-60细胞凋亡及端粒酶活性的影响

目的 观察自旋标记鬼臼毒素衍生物4β-N-^[4\     

FEZ1基因在宫颈鳞癌组织中的表达及其意义

目的：探讨FEZ1基因在宫颈鳞癌组织中的表达及其意义。方法：收集宫颈鳞癌标本102例,宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）66例,正常宫颈组织40例。通过免疫组织化学（immuno-histochemistry,IHC）方法检测各标本中FEZ1蛋白的表达情况,并分析其表达与宫颈鳞癌临床参数的关系。结果：FEZ1蛋白在正常宫颈组织中的阳性表达率显著高于CIN和宫颈鳞癌组织（P〈0.05）;FEZ1蛋白的表达随着癌组织分化程度的降低而显著降低（P〈0.05）,而与患者年龄、浸润深度、临床分期和有无淋巴结转移无关（P〉0.05）。结论：FEZ1的表达缺失或下调可能与宫颈鳞癌的发生与演进有关。     

Effect of Carotenoids on Paraoxonase-1 Activity and Gene Expression

Paraoxonase 1 (PON1) is an antioxidant enzyme attached to HDL with an anti-atherogenic potential. It protects LDL and HDL from lipid peroxidation. The enzyme is sensitive to various modulating factors, such as genetic polymorphisms as well as pharmacological, dietary (including carotenoids), and lifestyle interventions. Carotenoids are nutritional pigments with antioxidant activity. The aim of this review was to gather evidence on their effect on the modulation of PON1 activity and gene expression. Carotenoids administered as naturally occurring nutritional mixtures may present a synergistic beneficial effect on PON1 status. The effect of carotenoids on the enzyme depends on age, ethnicity, gender, diet, and PON1 genetic variation. Carotenoids, especially astaxanthin, β-carotene, and lycopene, increase PON1 activity. This effect may be explained by their ability to quench singlet oxygen and scavenge free radicals. β-carotene and lycopene were additionally shown to upregulate PON1 gene expression. The putative mechanisms of such regulation involve PON1 CpG-rich region methylation, Ca(2+)/calmodulin-dependent kinase II (CaMKKII) pathway induction, and upregulation via steroid regulatory element-binding protein-2 (SREBP-2). More detailed and extensive research on the mechanisms of PON1 modulation by carotenoids may lead to the development of new targeted therapies for cardiovascular diseases.     

Piceatannol and Its Metabolite,Isorhapontigenin, Induce SIRT1 Expression in THP-1 Human Monocytic Cell Line

Piceatannol is a phytochemical that is present in large amounts in passion fruit (Passiflora edulis) seeds, and is an analog of resveratrol. Recently, the absorption and metabolism of piceatannol were investigated in rats, and isorhapontigenin, O-methyl piceatannol, was detected as a piceatannol metabolite in rat plasma. To elucidate the function of piceatannol and its metabolites, we investigated the expression of sirtuin 1 (SIRT1) in THP-1 monocytic cells after treatment with piceatannol and its metabolites, and compared their effects with those of resveratrol and its metabolites. Piceatannol and resveratrol upregulated the expression levels of SIRT1 mRNA and SIRT1 protein. An extract of passion fruit seeds, which contained high levels of piceatannol, also upregulated SIRT1 mRNA expression. As for the metabolites, isorhapontigenin upregulated SIRT1 mRNA expression, whereas resveratrol glucuronides and sulfate did not affect SIRT1 expression. These findings indicate that after intake of piceatannol, not only piceatannol itself, but also its metabolite, isorhapontigenin, contributed to the upregulation of SIRT1 expression.