不同浓度的IBMX对海马区cGMP及GFAP合成的影响

目的　观察伊菠丁基甲基黄嘌呤 (IBMX)对海马区环磷酸鸟苷 (cGMP)及胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)合成的影响。方法　钳夹沙土鼠的双侧颈总动脉制造脑缺血模型 ,应用免疫荧光法染色观察海马组织切片。结果　脑缺血再灌流后 ,海马区cGMP合成增加 ,多数cGMP阳性细胞是星形胶质细胞 ,cGMP强阳性细胞对应细胞的GFAP染色多数也呈强阳性 ,使用磷酸二酯酶 (PDE)抑制剂IBMX ,cGMP合成增加 ,多数对应细胞的GFAP染色增强。结论　cGMP可能与海马区胶质纤维酸性蛋白的合成调节有关。     

免疫荧光法检测L-NNA对脑缺血再灌流后海马区cGMP合成的影响

目的　探讨 Ｎ Ｇ 硝基 Ｌ 精氨酸（ Ｌ Ｎ Ｎ Ａ） 对沙土鼠海马区ｃ Ｇ Ｍ Ｐ 合成的影响。方法　钳夹沙土鼠的双侧颈总动脉制造脑缺血模型,应用免疫荧光法染色。结果　 Ｌ Ｎ Ｎ Ａ 能抑制海马区ｃ Ｇ Ｍ Ｐ 的合成。结论　 Ｌ Ｎ Ｎ Ａ 是一氧化氮合酶强有力的抑制剂,从而抑制了 Ｎ Ｏ 的产生及其介导的ｃ Ｇ Ｍ Ｐ的合成     

亚低温对沙土鼠前脑缺血再灌注海马神经元凋亡及p38活性的影响

目的通过动态观察亚低温(33℃,4h)对沙土鼠前脑缺血再灌注后不同时间点海马神经元凋亡细胞及磷酸化p38表达的影响,探讨亚低温脑保护的可能机制。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断5min前脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组,常温再灌注组,低温假手术组,低温再灌注组。每组根据再灌注的不同时间点(2h、4h、d1、3、d5)又分为5个对应的亚组(n=6)。在预定时间点行开阔法迷宫检查,TUNEL法检测海马CA1/3区的凋亡细胞,免疫组化检测pp38在海马各区的动态变化。结果4h亚低温可显著减少缺血沙土鼠d1、d3、d5的探索活动及CA1/区的凋亡细胞,明显抑制脑缺血后海马CA1区pp38早期的表达(2h、4h)。结论4h亚低温治疗对沙土鼠5min前脑缺血有明确的保护作用,抑制海马CA1区缺血再灌注早期pp38的激活可能是其减少海马细胞凋亡、产生脑保护作用的机制之一。     

ERK和JNK通路在沙土鼠脑缺血预处理中的表达及作用

目的探讨ERK和JNK在沙土鼠脑缺血预处理中的表达及作用。方法采用沙土鼠前脑缺血再灌注损伤模型。随机分为假手术组(SH)、预处理对照组(IC)、预处理缺血组(IP)及脑缺血再灌注组(IR);各组根据再灌注15 m in、2 h、4h、6 h、1 d、3 d、5 d及7 d又分8个亚组。在预定时间点行开阔法行为学检查、TUNEL法海马CA1/3区凋亡细胞检测、免疫组织化学SP法测定p-ERK、p-JNK在海马区的变化。结果IP可减少沙土鼠探索活动及海马CA1区凋亡锥体细胞数量(vsIR,P<0.01)各组CA1区p-ERK无表达,IR组海马CA1区p-JNK表达较强,再灌后1d最为明显,IP可明显减弱CA1区p-JNK的表达(vsIR,P<0.01),明显增强CA3区p-ERK的表达(P<0.05,P<0.01)。结论脑缺血可导致ERK及JNK在海马各亚区的差异性表达。缺血预处理可能通过抑制CA1区JNK磷酸化、增强CA3区ERK活性而保护海马细胞。     

脑室注射左旋硝基精氨酸甲酯对迟发性神经元坏死的影响

目的 :探讨一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯 (L NAME)在短暂性前脑缺血再灌注损伤中的作用。方法 :钳夹沙土鼠的双侧颈总动脉制造脑缺血模型 ,应用尼氏染色观察迟发性神经元坏死 (DND)的分布与数量。结果 :短暂性前脑缺血再灌注可导致海马CA1区锥体细胞DND ,一氧化氮合酶抑制剂L NAME明显地减少了DND。结论 :L NAME可能通过抑制神经原生型NOS对脑缺血起保护作用     

亚硒酸钠对沙土鼠海马CA1区神经元缺血/再灌注损伤的影响

目的探讨亚硒酸钠对沙土鼠海马CA1区神经元缺血/再灌注损伤的影响。方法采用夹闭双侧颈动脉法制备沙土鼠前脑缺血/再灌注模型,双重染色,电镜下观察各组海马CA1区神经元的超微结构变化。TUNEL染色光镜下观察和计数凋亡神经元,计算凋亡密度。结果硒处理组沙土鼠脑缺血/再灌注后,神经元超微结构的病理形态损伤减轻,凋亡细胞减少,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论亚硒酸钠对沙土鼠脑缺血/再灌注损伤的海马CA1区神经元超微结构及凋亡细胞具有保护作用。     

褪黑素对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究褪黑素(melatonin,MT)对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法用沙土鼠双侧颈总动脉结扎法建立全脑缺血再灌注损伤模型。用开场迷宫测试沙土鼠的定向运动活性的变化。用T迷宫测试沙土鼠的学习及工作记忆能力。光镜下观察缺血后d 7海马CA1区神经元组织形态学变化。结果缺血模型组沙土鼠定向运动活性较假手术组显著增高,学习及工作记忆能力降低。MT可降低沙土鼠的定向运动活性,提高沙土鼠的工作记忆能力;还可显著减轻海马CA1区锥体神经元的病理改变,且作用呈剂量依赖性。结论MT对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

亚低温对沙土鼠前脑缺血/再灌注海马CA1区神经元凋亡及Bcl-2、Caspase-3表达的影响

目的通过动态观察亚低温(33℃,4h)对沙土鼠前脑缺血/再灌注后不同时间点海马CA1区Bcl-2、Caspase-3的表达及凋亡细胞的影响,探讨亚低温脑保护的可能机制。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断5min前脑缺血/再灌注损伤模型,随机分为假手术组,常温再灌注组,低温假手术组,低温再灌注组,每组根据再灌注的不同时间点(2h、4h、1d、3d、5d)又分为5个对应的亚组(n=6)。在预定时间点行开阔法迷宫检查,TUNEL法检测海马CA1区的凋亡细胞,HE染色检测海马存活细胞,免疫组化检测Bcl-2、Caspase-3在海马各区的动态变化。结果4h亚低温可减少缺血沙土鼠1、3、5d的探索活动及CA1区的凋亡细胞,增加存活细胞,明显抑制脑缺血后海马CA1区Caspase-3早期的表达(2、4h),但对Bcl-2的表达没有影响。结论4h亚低温对沙土鼠5min前脑缺血有确切的保护作用,对Bcl-2的表达没有影响,抑制海马CA1区缺血/再灌注早期Caspase-3的激活可能是其减少海马细胞凋亡,产生脑保护作用的机制之一。     

亚低温对沙土鼠海马CA1区缺血后细胞凋亡的影响

目的 探讨亚低温对沙土鼠短暂性脑缺血后海马CA1区细胞凋亡的影响。方法 阻断沙土鼠双侧颈总动脉15分钟造成前脑缺血模型。实验动物随机分为假手术组、缺血再灌注组、亚低温治疗组。用光镜观察海马CA1区的神经元死亡过程．采用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡的神经元。结果 脑缺血后．海马CA1区锥体神经元于再灌注后2～7天死亡,再灌注第3天神经元开始凋亡．第5天达高峰。亚低温治疗抑制了缺血后海马CA1区神经元的死亡及细胞凋亡。结论 亚低温治疗对脑缺血后的神经元具有保护作用．并可抑制神经细胞凋亡的发生。     

3-硝基丙酸预处理诱导沙土鼠脑缺血耐受与海马星形胶质细胞的激活

目的：探讨海马区星形胶质细胞的激活与3－硝基丙酸（3－NPA）预处理诱导脑缺血耐受的关系。方法：阻断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型，通过HE染色和免疫组化观察海马锥体细胞死亡和星形胶质细胞的反应。结果：对照组海马CA1区已失去正常结构，锥体细胞大部分丧失，存活神经元计数显低于假手术组。3－NPA预处理组存活神经元减少，但高于对照组，假手术组海马CA1区仅见少量胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞，染色较弱，突起不明显，对照组海马CA1区GFAP阳性细胞增多，多为弱阳性。3－NPA预处理组海马CA1区GFAP阳性细胞数目明显增多，染色较深，突起增粗。结论：星形胶质细胞形态和机能的改变可能与3－硝基丙酸预处理诱导脑缺血耐受有关。     

用免疫荧光法探讨硝普钠对海马区胶质纤维酸性蛋白合成调节的影响

目的　探讨硝普钠对海马区胶质纤维酸性蛋白合成的影响。方法　应用免疫荧光组织化学染色方法。结果　硝普钠使海马本部放射层、分子层及齿状回GFAP合成的增加 ,海马锥体细胞层及颗粒细胞层未见GFAP阳性细胞 ,GFAP阳性细胞的数量与SNP的剂量有关。结论　硝普钠增加GFAP的合成。     

NO对红藻氨酸癫痫发作和IL-6表达的影响

目的　探讨脑内一氧化氮 (NO)介质对癫痫发作及白细胞介素 6(IL 6)表达的影响。方法　采用红藻氨酸 (KA)诱导大鼠癫痫发作 ,以一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L 硝基精氨酸 (L NNA)和NO前体L 精氨酸 (L Arg)进行干预 ,从行为学评估及形态学的角度 ,对KA癫痫发作和IL 6的相关变化做了观察。结果　一次惊厥剂量的KA (1 0mg·kg- 1 )可使动物发生明显的时间相关性癫痫发作 ,并伴随着海马结构、梨状区及大脑皮层等相关脑区IL 6免疫反应(IL 6ir)的快速升高与增强。而经L NNA(50mg·kg- 1 )或与其等摩尔量的L Arg(40mg·kg- 1 )预处理后 ,其癫痫行为发生了明显变化。L NNA促进和加重了癫痫发作 ,KA给药后 3h许多动物死亡 ,而L Arg可使癫痫发作行为减缓。与行为干预相对应 ,L NNA对海马结构等相关脑区内的IL 6ir有明显的上调作用 ,L Arg则显示出相反的效应。结论　内源性NO介质对KA癫痫发作具有抑制作用 ,对IL 6的快速表达具有下调作用 ,但这种下调作用与内源性NO介质抗癫痫发作的稳态关系还需进一步探讨     

Distribution of protein kinase C in the hippocampus of the gerbil and rat: autoradiographic analysis by [3H]phorbol 12,13-dibutyrate.

In-vitro quantitative receptor autoradiography with [3H]phorbol 12,13-dibutyrate (PDBu) was used to determine the affinity constant (Kd) and the maximum number of receptor sites (Bmax) for protein kinase C (PKC) in subregions of the gerbil hippocampus, and to compare the distribution of [3H]PDBu binding sites in the gerbil hippocampus with that in the rat hippocampus. The Kd and Bmax values in the subregions of the gerbil hippocampus were estimated at 2.6-3.8 nM and 2.38-2.54 pmol (mg tissue)-1, respectively. The distribution of hippocampus [3H]PDBu binding sites was uniform in the gerbil but not in the rat. The [3H]PDBu binding activities in the strata oriens of the CA1 and CA3 subfields and the molecular layer of the dentate gyrus in the rat hippocampus were significantly higher than in the gerbil hippocampus. However, binding activity in the stratum lacunosum-moleculare of the rat CA1 subfield was statistically lower. These data demonstrate a difference in the distribution of [3H]PDBu binding activity in the hippocampus between the gerbil and rat.     

机械加载对慢性脑缺血大鼠学习记忆障碍的改善作用

摘要：目的 探讨脉冲式机械加载对慢性脑缺血大鼠学习记忆能力的改善作用。方法 27只健康雄性SD大鼠 按随机数字表法分为假手术组（Sham组）、血管性痴呆模型组（VD组）和脊柱加载治疗组（VD+L组），每组9只。Sham 组仅分离双侧颈总动脉但不结扎；VD组分离双侧颈总动脉后永久性结扎建立VD模型；VD＋L组建立模型后每天接 受脊柱机械加载治疗，共5周。Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力；HE染色及尼氏染色观察大鼠大脑皮质及海马 组织的病理改变；免疫组织化学技术检测神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果 与VD组相比，VD+L组大 鼠逃避潜伏期明显缩短，穿越平台次数和停留平台象限时间显著增加，加载后明显改善神经元形态结构和存活状 态，海马锥体细胞明显增多，并抑制了海马及皮质中GFAP的表达。结论 机械加载可以明显改善慢性脑缺血后大 鼠的学习记忆障碍、保护缺血后神经元，该治疗作用可能与机械加载减轻海马和皮质神经元病理损伤、抑制胶质细 胞的活化有关。     

羟丁酸钠对沙土鼠脑缺血损伤的保护作用

目的　探讨羟丁酸钠 (SO)对沙土鼠全脑缺血有无保护作用 ,为其新的临床应用提供理论依据。方法　采用双侧颈总动脉结扎法制作全脑缺血 ( 10min)再灌注损伤模型 ,观察SO( 5 0 ,10 0 ,2 0 0mg·kg- 1,ip ,每日 1次 ,连续 7d)对脑缺血后神经功能和海马组织损伤的影响。缺血后d 3 ,d 7用开场行为测试法检测自发活动 ,d 4,d 5 ,d 6用T迷宫测试学习记忆能力 ,d 7进行海马CA1区神经元病理学检查。结果　SO能降低脑缺血沙土鼠的自发活动 ,提高其学习记忆能力 ,并且显著减轻海马CA1区锥体神经元的损伤 ,其作用呈剂量依赖性。结论　SO对脑缺血损伤有一定的保护作用。     

肾脏是体内N~G-D-硝基精氨酸单向手性转化的主要器官

目的　研究NG D 硝基精氨酸 (NG nitro D arginine,D NNA)在体内发生手性转化的的部位。方法　考察肾脏结扎对于D NNA诱导大鼠动脉压升高活性的变化 ,并运用毛细管电色谱 (capillaryelectrochromatography ,CEC)分析技术测定D NNA在体内手性转化的情况。结果　肾脏结扎使大鼠完全丧失对D NNA (32mg·kg-1)升高血压反应 ,但不影响由NG L 硝基精氨酸 (NG nitro L arginine ,L NNA)(16mg·kg-1)引起的升压反应。而D NNA/肾匀浆孵育液(32mg·kg-1)则可使肾脏结扎大鼠产生升压反应。CEC血药检测证实D NNA在大鼠体内转化生成L NNA ,而L NNA在体内未被代谢生成D NNA ;肾脏结扎则使D NNA的手性转化大量减少。结论　D NNA在大鼠体内可单向代谢转化L NNA ,肾脏是D NNA发生手性转化的主要器官