2014年北京地区啮齿类实验动物质量的病理学评价

目的 从病理学角度评价啮齿类实验动物的健康情况, 为实验动物标准化饲养提供建议, 确保相关科研结果的准确性。方法 本文主要对2014年10月北京市15家实验动物单位的啮齿类实验动物病理学抽检情况进行统计分析。采集啮齿类实验动物的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠后经甲醛钙液固定, 通过石蜡切片HE染色、PAS 染色、冰冻切片油红O染色后于显微镜下观察。结果 实验动物总体合格, 但个别单位仍然存在问题。检出病变器官主要是肝脏和肺脏, 肝脏病变检出率小鼠为6%, 大鼠为2.5%, 豚鼠为8.2%, 地鼠未检出, 肝脏病变表现为细胞肿胀, 且经特殊染色确证部分为脂肪变性;肺脏病变检出率豚鼠为15.5%, 其余未检出, 肺脏病变表现为淤血、渗出及间质性肺炎。结论 实验动物病理学检测基本健康, 肝脏出现损伤可能与饲料有关;而肺脏病变可能与垫料及空气有关, 而秋冬季雾霾及低温可能对实验动物健康有所影响。     

改良氯化金染色法对髓鞘染色的定性、定量分析

目的 改良氯化金髓鞘染色方法并且证明该方法可用于髓鞘染色的定性、定量分析.方法 采用7、14、21日龄的新生正常SD大鼠,各5只;APP/PS1小鼠(阿尔茨海默病动物模型)5只和PS1小鼠(无淀粉样蛋白沉积的阴性对照正常小鼠模型)6只.断头取脑处理后冰冻切片机切片,用改良的氯化金染色方法对脑组织切片染色.直接在光学显微镜下观察髓鞘染色效果,测定目标区域平均吸光度值,进行髓鞘化定量分析比较.结果 新生7 d大鼠髓鞘化染色阴性,21 d大鼠的髓鞘化程度比14 d大鼠的髓鞘化程度明显增高.APP/PS1组小鼠可观察到病理性髓鞘染色,定量分析显示其目标区域平均吸光度值低于PS1组,APP/PS1组存在明显的脱髓鞘改变.结论 改良的氯化金髓鞘染色快速、简单、敏感、稳定,可进行髓鞘化定性、定量分析.     

消除超薄切片染色沉淀的冰醋酸处理法

用铀、铅对超薄切片染色可增强电子反差,但有时会出现沉淀,当出现沉淀时,要重新切片和染色,甚至更换染液,不但耗时、耗力,且某些定位的结构在新片中难以重现。为解决上述问题,我们根据Kuo法,用不同浓度的冰醋酸水溶液,对消除超薄切片染色沉淀进行了实验,获得满意的结果,现介绍如下:1 材料和方法1.1 处理液配制 1.7 mol/L,3.3 mol/L冰醋酸水     

改善HE染色技术提高病理石蜡切片制作质量的体会

病理组织学观察及分析是病理学教学、临床病理诊断中最重要的部分。HE染色技术是制作病理石蜡切片的重要环节,而石蜡切片质量的优劣直接决定了病理诊断的准确性,因此提高病理石蜡切片质量才能圆满完成病理学教学及临床病理诊断任务。     

常规石蜡切片制作过程及HE染色

目的探讨病理石蜡切片制作及HE染色过程中针对常见问题可以采用的处理方法。方法参照《病理学技术》进行病理石蜡切片和HE染色。结果病理石蜡切片经过处理后，减少了掉片、残片的出现．HE染色红、蓝对比鲜明。结论病理石蜡切片可以按照作者的经验，经过处理后便于病理诊断医生的阅片，避免因制片质量引起的误判和误诊。     

常规HE染色过程中分色蓝化透明方法的改良

普通HE染色是组织学、病理学技术员最基本的技术技能，也是组织学、病理学等形态学教学与科研的最基本方法，HE染色步骤在组织切片制作过程中显得尤其重要。一张HE染色切片的质量好坏不仅取决于苏木精、伊红染液的质量、染色时间、染色温度，在很大程度上还取决于染色过程中分色液、蓝化液的性质和类型的选择及分色、蓝化的时间。传统的分色液为0．5～1％的盐酸酒精；蓝化液为1％氨水溶液。在长期组织切片HE染色过程中作者发现，虽然组织切片在苏木精染液中着色较好，但一旦经过0．5～1％盐酸酒精分化液分色后，细胞核着色偏淡，而且用盐酸酒精分色时间短也不好掌握分色时间；分色后的切片再进入1％的氨水中蓝化，细胞核虽然能返蓝，     

六种实验动物主要消化腺的比较组织学研究

目的 对六种实验动物的消化腺进行比较组织学研究,并观察其自发性病变,为实验动物病理学检测标准及以它们为基础的科学研究提供理论依据.方法 选取按照现行实验动物质量国家检测标准检测合格的猕猴30只、比格犬16只、树鼩20只、日本大耳白兔18只、SD大鼠20只及昆明小鼠20只,经麻醉后处死并剖检.选取消化腺组织体积分数10％甲醛固定,常规石蜡切片,HE染色、免疫组化染色及特殊染色,光镜观察,比较它们在组织学结构方面的异同及有无自发性病变.结果 （1）腮腺、颌下腺、舌下腺的组织学差异主要是腺泡的组成、腺泡内脂肪组织的含量、黏液性腺泡AB/PAS染色的情况及导管系统的组织学结构;（2）作为一种独有的唾液腺,比格犬有一对颧腺,日本大耳白兔有一对眶下腺;（3）肝脏的组织学差异主要是肝小叶的组织学结构、门管区的组织学结构及肝细胞的形态;（4）胰腺的组织学差异主要是胰腺小叶内有无淋巴组织以及胰腺导管系统的组织学结构;（5）胆囊的组织学差异主要是表面上皮的形态、黏膜窦是否明显;（6）炎症是肝脏普通存在的自发性病变,在部分实验动物的颌下腺及胰腺也可观察到炎细胞浸润.结论 获得了六种实验动物宝贵的组织学资料并分别揭示了各自的组织学特点.研究人员在制定病理学检测标准、实验研究、药物安全性评价时应充分考虑各种动物的组织学结构差异及自发性病变的存在.     

六种常用实验动物比较组织学共享数据库的初步建立

目的 建立常用实验动物比较组织学数据库.方法 选取小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬和食蟹猴6种实验动物的所有主要器官和组织,制作石蜡切片后经HE染色,在镜下观察各种组织的形态特征并拍照描述.对采集好的图片、文字信息采用SQL Server 2008数据库管理软件,汇编开发成易于查询的比较组织学数据库系统.结果 通过6种实验动物的所有组织和器官的形态进行比较分析,获得了这些组织器官形态学差异的特征,镜下拍取具有组织特征的显微图片,对每张图片进行文字描述,建立了常用实验动物比较组织学数据库,对其内容进行初步分析,实现了界面友好、便于查询和资源共享的目的.结论 建立了常用实验动物主要器官和组织的比较组织学数据库,可为生命科学领域中动物实验的病理学研究及疾病动物模型研究提供使用方便的组织形态学参考资料.     

微波在病理技术中的应用

目的探讨微波在病理特殊染色中的应用。方法对我院200例各类标本利用微波染色法进行病理染色,分析其结果。结果经过微波进行脱水后组织切片具有组织结构清晰,切片厚薄、染色均匀、背景无气泡、颜色鲜艳、细胞变形小、切片完整等特点,对比度好,无脱片现象,并可明显缩短整个制片过程。甲级片率在50％以上,没有丙级切片。结论本方法节省时间、染色效果稳定可靠、操作简便的特点,适合在病理科,尤其是基层单位开展。     

特殊染色及免疫组化双重染色在恒河猴糖尿病模型中的应用

目的 在链脲佐菌素（STZ）诱导恒河猴糖尿病动物模型基础上,用特殊染色、免疫组化双染方法显示胰腺等组织中的特征性病变。方法 健康恒河猴5只,小剂量（30mg/kg）多次静脉注射STZ,濒死状态时将动物安乐死。取胰腺、心脏、肾脏、脾脏、肝脏、眼球、脑等器官制成石蜡切片,用H.E,PAS,masson,天狼星红和甲苯胺蓝等方法进行特殊染色,用免疫组化双重染色法同时显示胰岛A、B细胞。结果 模型动物的胰岛萎缩,数量减少。Masson染色见外分泌部间质内纤维增生。局灶性慢性肾炎,病变区肾间质纤维组织增生,部分肾小球及肾小管萎缩。天狼星红染色见脾脏中央动脉管壁增厚。免疫组化双染见胰岛A胰高血糖素表达增多,胞浆呈棕褐色。B胰岛素表达减少,胞浆粉红色。结论 H.E染色结合特殊染色和免疫组化双重染色可较好地对STZ诱导糖尿病动物模型进行组织学评价。     

骨肿瘤标本病理大切片制作的改良

目的探讨骨肿瘤标本病理大切片的制作方法及作用。方法应用截肢骨组织进行病理大切片制作,并对骨大标本进行脱水包埋、切片和HE染色,然后在光学显微镜下观察。结果骨肿瘤大标本经病理大切片制作后组织软硬适中,脱钙充分,脱水完全。切片无龟裂,刀痕少,无“返砂”现象,切面光滑无皱缩脱落;HE染色后在光学显微镜下观察苏木素、伊红着色均匀无发白现象;无细胞核皱缩和肿胀变形;可以清楚地观察肿瘤组织的全貌以及肿瘤与周围组织的浸润程度,反映肿瘤的性质、肿瘤与周围软组织分界、肿瘤坏死、出血、肿瘤侵犯关节及跳跃性病灶等情况。结论骨肿瘤病理大切片制作的方法能有效地解决常规小切片取材的局限性,同时解决了临床、科研和教学上对骨肿瘤大标本本身及肿瘤周围形态的要求,为临床、科研和教学提供科学依据。     

制作临床快速冰冻切片的质量控制

目的 :探讨冰冻切片的制作、HE染色和免疫组化的标准化实验方法 ,达到质量控制标准。方法 :详细介绍了冷冻切片的方法、影响因素、标准化与质量控制及其在临床快速病理诊断的 HE和免疫组织化学染色方法。结果 :经此方法制备的冷冻切片组织结构完整、细胞染色清晰、境界清楚、核质分明、对比度好 ,无刀痕、皱折、重叠、冰晶、切片平整、厚薄均匀一致等。结论 :可为临床快速病理诊断的 HE染色、脂肪黏液染色、酶组织化学、免疫组织化学、免疫荧光、核酸原位杂交以及原位 PCR等病理诊断与研究提供优质冷冻切片     

提高网状纤维染色病理实验教学质量的探讨

目的探讨提高网状纤维染色病理实验教学质量的经验体会。方法对胃肠道平滑肌瘤与间质瘤切片分别进行HE染色和网状纤维染色,让学生显微镜观察。结果网状纤维染色显示平滑肌瘤与间质瘤的网状纤维形态存在明显差异,使学生很容易就能分辨。结论通过网状纤维染色,使病理学实验形象生动,提高了实验教学质量。     

应用微波辐射缩短组织块HE染色时间

HE染色是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。组织块染色也具有节省药品与适于大批量切片制做等特点 ,但常规组织块HE染色周期一般在半个月以上 ,作者根据微波辐射能推动分子振动原理 ,对HE染色过程中的媒染、苏木素染色、伊红染色等步骤进行了微波辐射处理实验 ,报道如下。1　材料与方法取羊肝与蛙食管、胃、肠等四种不同质地与大小的组织块为染色材料 ,组织块厚 1～ 5mm ,以WD90 0“格兰仕”微波炉为微波辐射仪器。所有材料用 1 0 %福尔马林 (36 %～ 38%甲醛水溶液 1 0ml+水 90ml)水溶液固定后水洗 1 2…     

制作临床快速冰冻切片的质量控制

目的:探讨冰冻切片的制作、HE染色和免疫组化的标准化实验方法,达到质量控制标准.方法:详细介绍了冷冻切片的方法、影响因素、标准化与质量控制及其在临床快速病理诊断的HE和免疫组织化学染色方法.结果:经此方法制备的冷冻切片组织结构完整、细胞染色清晰、境界清楚、核质分明、对比度好,无刀痕、皱折、重叠、冰晶、切片平整、厚薄均匀一致等.结论:可为临床快速病理诊断的HE染色、脂肪黏液染色、酶组织化学、免疫组织化学、免疫荧光、核酸原位杂交以及原位PCR等病理诊断与研究提供优质冷冻切片.     

B细胞淋巴瘤/白血病基因2在颅脑外伤后抗神经元凋亡作用

目的通过研究B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)高表达转基因小鼠和对照小鼠颅脑打击后神经元凋亡的差异,探寻Bcl-2抗凋亡及减轻颅脑损伤的作用。方法将构建的Bcl-2质粒转入C57BL/6J×CBA杂交小鼠的受精卵,培育得到携带Bcl-2的小鼠。Bcl-2转基因小鼠9只作为实验鼠,采用随机数字法分为实验1 d组、实验7 d组和实验14 d组,每组3只。同窝非转基因小鼠9只作为对照鼠,采用随机数字法分为对照1 d组、对照7 d组和对照14 d组,每组3只。采用液压打击法中侧方液压打击的方法,以中等打击力致小鼠中等颅脑外伤。余下3只同窝非转基因小鼠为假手术组,仅打开椎板,暴露硬脊膜,不予打击。分别于术后1、7、14 d处死小鼠,取脑组织切片行苏木精-伊红(H-E)染色,观察神经元变化;采用原位末端标记法(TUNEL)染色计数TUNEL标记的阳性细胞数即凋亡神经元,并计算TUNEL染色切片的积分光密度(IOD)值。结果经聚合酶链反应及Western印迹法检测证明所培育的转基因小鼠为Bcl-2高表达的小鼠。假手术组小鼠脑细胞未见明显变化。实验鼠和对照鼠的脑组织都有出血,结构被破坏,实验鼠的损伤肿胀及出现核固缩或解离的神经元数量少于对照鼠。假手术组小鼠的脑组织未见明显的凋亡神经元细胞。实验鼠和对照鼠的脑组织标本可见TUNEL染色阳性细胞,随时间的推移逐渐增多,在损伤后7 d达到高峰,然后稳定并逐渐减少。实验1 d组、实验7 d组、实验14 d组小鼠的每个光学显微镜高倍镜视野内的TUNEL阳性神经元数(P值分别为0.042、0.039、0.033)和TUNEL染色切片的IOD值(P值均为0.000)均分别显著少于对照1 d组、对照7 d组、对照14 d组。结论 Bcl-2蛋白是中枢神经系统内在的重要的抗凋亡因子,高表达Bcl-2能够抑制颅脑损伤后神经元的凋亡,从而减轻大脑的损害。     

病理HE制片中易出现问题的解决方略

<正>病理检查已大量应用于临床工作及科学研究中。病理学技术是病理学的重要组成部分,病理制片的质量直接影响着病理诊断的准确性[1]。在病理诊断中HE切片是最基础也是最重要的。同一组织优劣不同的切片,镜下形态却是千差万别,甚至会出现相对立的图像。所以高质量的HE切片是病理技术员一直以来的追求,是做特殊染色、免疫组化等其他工     

腺垂体不同细胞染色法的改良和应用

目的探讨腺垂体不同细胞的染色方法，提高显示效果。方法选择不同动物的脑垂体，进行染色比较，确定最佳动物供体和染色方法。结果六种细胞以不同的颜色清晰地显示在一张切片上，色彩艳丽。结论该染色方法稳定可靠，有利于对不同细胞的鉴别，适用于教学和科学研究。     

睾丸、附睾附件扭转的临床病理分析

目的：探讨睾丸、附睾附件扭转的病理变化与临床治疗方法的选择。方法：应用HE染色；特殊染色：网状纤维染色、V-G、MCT；免疫组化：Desmin、Actin、Vimentin，对21例睾丸、附睾附件扭转进行临床病理学分析。结果：21例附件扭转部分坏死10例，全部坏死11例；炎症型13例，出血型8例。附件扭转的病理改变与临床发病时间无明显相关性。结论：附件扭转以发病时间来判断是否做手术的指标没有更多的病理依据，故应及时手术治疗为宜。     

组织的HE整块染色改良法

人体至动物组织学切片染色最传统最常用的方法是石蜡包埋HE片染方法，大量教学切片制备和病理切片、科研切片连续制做时效果好，但是操作步骤非常繁多，且试剂及染色剂耗量也大，同时片染在染过苏木精并用1％的盐酸酒精分色时每次分色深浅也难以一致，全凭经验来掌握，有时出现过染色现象。