基因敲入小鼠甲亢性低钾型周期性麻痹模型的评价

目的 用基因敲入CaV1.1-R528H小鼠建立甲亢性低钾型周期性麻痹模型并对其进行评价。 方法 8周龄基因敲入CaV1.1-R528H雄性小鼠及8周龄野生型C57BL/6J雄性小鼠各36只,采用三因素两水平2??析因设计方法按体重随机原则（三因素分别为突变、甲状腺素及胰岛素因素,两水平为有或无）分为8组。其中有甲状腺素处理组的小鼠制备高甲状腺素毒症状态,按350μg/kg体重连续腹腔注射左旋甲状腺素钠12天,末次给药后有胰岛素处理组按0.8U/kg体重给予腹腔注射短效胰岛素,分别检测并记录各组小鼠注射前(0min)及注射后（30min、60min）的血钾。 结果 （1）制备高甲状腺素毒症状态的小鼠出现烦躁不安、易激怒及毛色枯燥现象,相比对照组,饮食及饮水量明显增多,而体重增加缓慢。甲功检测显示T3、T4明显高于相应对照组,TSH明显低于相应对照组,且均有统计学差异（P＜0.05）。（2）单独给予甲状腺素或胰岛素处理,突变组与野生组血钾同时间点比较并没有统计学差异,而在高甲状腺素毒症状态下给予胰岛素处理后,突变组与野生组同时间点（30min、60min）比较突变组血钾显著低于野生组（P＜0.05）。（3）主效应及交互作用：单独突变因素或甲状腺素因素对血钾并没有作用,仅有胰岛素对降低血钾有作用（P＜0.05）;甲状腺素因素和突变因素之间以及胰岛素因素和突变因素之间均有交互作用（P＜0.05）;甲状腺素因素和胰岛素因素之间没有交互作用。 结论 （1）高甲状腺素毒症状态制备成功。（2）利用基因敲入CaV1.1-R528H小鼠成功的建立了甲亢性低钾型周期性麻痹模型。     

一例低钾型周期性麻痹患者的基因分析

目的探讨低钾型周期性麻痹患者是否存在相关基因的突变。方法采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR—RFLP)、聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR—SSCP)检测1例低钾型周期性麻痹患者和150例体检健康者及患者家属的基因突变位点。结果1例患者及对照组的基因中未找到任何突变位点。结论低钾性周期性麻痹的遗传存在异质性。     

低钾型周期性麻痹33例临床研究

<正>现将我院1993~1995年共收治的33例研究报道如下.1研究对象和方法1.l 一般情况 首次发病18例.有周期性发作史15例,男30例,女3例.年龄21~61岁,平均35.1岁.青年组(14~39岁)24例,中年组(40~59岁)7例,老年组(>60岁)2例;各年龄组平均年龄依次为30.3岁、44.2岁、60.5岁.农民21例,工人10例,干部1例,其它1例.     

低钾性周期性麻痹转为高钾性周期性麻痹1例

１临床资料患者，男，４３岁。因突发四肢无力６ｈ就诊。患者于发病当日清晨起床后即感右下肢无力，至下午发展至全身，搀扶能拖行数步，余无不适。平时饮食差，体弱。病前无发热、呕吐、腹泻等不适，近两日有感冒，进食很少。１６年前患阿狄森氏病，长期口服强的松，近两...     

低钾型周期性麻痹120例临床分析

现将我院 1990年 1月～ 2 0 0 0年 12月收治的 12 0例低钾型周期性麻痹患者 ,报告如下。1　临床资料1 1　一般资料 :本组 12 0例 ,男 111例 ,女 9例 ,年龄18～ 5 5岁。≤ 4 0岁 86例 ,平均 31岁。首次发作 2 5例 ,2次发作 33例 ,发作≥ 3次 62例。病程 1ｈ～ 2 0年。起病至就诊时间多在 1～ 6ｈ内 ,个别 2～ 3ｄ。1 2　发病诱因 :剧烈运动或劳累 36例 ,饮酒饱餐 2 5例 ,上呼吸道感染 13例 ,纳差腹泻 12例 ,静滴葡萄糖 4例 ,注射地塞米松 2例 ,高糖饮食 3例 ,精神刺激 2例 ,多种因素 11例。发病季节 5～ 9月者 87例。发作多在夜间睡眠中或凌…     

低钾型周期性麻痹38例临床分析

周期性麻痹是以反复发作的骨骼肌迟缓性瘫痪为特点的一组疾病．发作时大部分伴有血清钾含量的改变．以低钾型多见．若有明确病因或疾病所伴发又称为继发性周期性麻痹。我科2000年1月～2003年12月收治38例低钾型周期性麻痹患者，现报道如下。     

低钾型周期性麻痹87例临床分析

周期性麻痹是以反复发作的骨胳肌弛缓性瘫痪为特征的一组疾病,临床上较少见,发作时大都伴有血钾含量的改变[1]。现将我院1994年1月～1998年5月收治的87例低钾型周期性麻痹患者的临床资料作一分析。结合文献报道如下。1临床资料1．1一般资料本组87例,占同期我院总住院人数的2.71％,男84例,女3例．年龄18～48岁。41例为首次发作,36例有反复发作史,起病就诊时间多在24小时以内,个别在2～5天。1．2发病诱因剧烈运动或过度劳累44例,饱食7例,受凉8例,饮酒12例,纳差或腹泻6例,其它因素10例。发作时间多在夜间睡眠起床小便或清晨起床时…     

低钾型周期性麻痹41例临床特点分析

临床上低血钾症常见 ,但低钾型周期性麻痹发作期低钾与其他原因所致的慢性低钾 ,在临床上有明显不同 ,本文对两者进行比较 ,并对低钾型周期性麻痹临床特点分析如下 :1　资料和方法1 1　一般资料　选 1994年 1月至 2 0 0 0年 7月住院的低钾型周期性麻痹患者共 4 1例 ,除外甲状腺功能亢进、原发性醛固酮增多症等其他疾病 ,其中男 4 0例 ,女 1例 ,平均年龄 36 6岁。另选 1998年 1月至2 0 0 0年 10月住院的胃炎、肝硬化、肿瘤等所致的低钾患者共 34例 ,除外感染、甲亢、心脏病等原因所致的心动过速 ,其中男 10例 ,女 2 4例 ,平均年龄 55 8岁 ,…     

重症低钾型周期性麻痹的护理

周期性麻痹是以反复发作的四肢骨骼肌弛缓性瘫痪为特征的一组疾病。其属于常染色体显性遗传疾病 ,又称家族性周期性瘫痪( 1) ,以低血钾型最为常见 ,此病一般不累及颅神经支配肌和呼吸肌 ,但严重病例可出现呼吸肌瘫痪及心律紊乱 ,此时 ,密切观察病情及加强护理是保证治疗和抢救成功的关键。现将我科 1 998年 4月至 2 0 0 2年 2月收治的 3例重症低钾型周期性麻痹患者的护理总结如下。1　临床资料　　本组 3例 ,均为男性农民 ,年龄 2 6～ 38岁 ,平均年龄 32 .7岁 ,符合以下条件 :1具有周期性麻痹的典型表现即四肢骨骼肌弛缓性瘫痪 ;2反复发作史…     

家族性低钾性周期性麻痹存在SCN4A基因R672H突变

目的筛查低钾性周期性麻痹相关基因突变位点,总结该病基因型和临床表型的相关性。方法应用PCR和DNA测序技术,对2个低钾性周期性麻痹家系进行候选基因CACNA1S和SCN4A的筛查,并总结患者的临床特点。结果DNA测序发现2个家系5例患者在SCN4A基因12外显子上存在2015G→A突变引起R672H改变。家系A另外4人也携带此突变但未发病,其中3例女性,1例男性。家系B先证者母亲存在相同突变。R672H突变特征：钾剂治疗有效,乙酰唑胺治疗无效;外显率不全,女性突变基因携带者均未发病。结论中国家族性低钾性周期性麻痹存在SCN4A基因R672H突变。     

低钾型周期性麻痹患者的临床及基因特征

目的 分析低钾型周期性麻痹患者的临床特征及基因突变特点。方法 对32例低钾型周期性麻痹患者进行基因筛查,发现6例存在基因突变,回顾性分析这6例患者的临床及基因特征,并进行家系研究。基因检测应用聚合酶链式反应后直接测序。结果 6例患者均青少年发病,5例发作有明确诱因,检测血钾低且补钾治疗有效。5例患者有明确低钾型周期性麻痹家族史。患者基因突变分别为CACNA1S基因c.1583G>A（p.Arg528His）、c.2627T>A（p.Val876Glu）、c.2690G>A（p.Arg897Met）及c.2700G>C（p.Arg900Ser）突变以及SCN4A基因c.2015G>A（p.Arg672His）和c.2024G>A（p.Arg675Gln）突变,其中CACNA1S基因p.Arg528His和SCN4A基因p.Arg672His为热点突变,Arg897Met为新的突变位点。结论 6例低钾型周期性麻痹患者临床表现典型,存在CACNA1S或SCN4A基因的胚系突变,CACNA1S Arg897Met为新的突变位点。     

低钾型周期性麻痹患者血清肌酸激酶的改变(附联邦止咳露成瘾继发低钾型周期性麻痹一例报告)

目的探讨低钾型周期性麻痹（HOPP）患者血清肌酶学的改变及其与低血钾的关系。方法回顾性分析2000年1月-2005年8月本院收治的56例低钾型周期性麻痹患者的临床和实验室检查资料，观察其血清肌酸激酶改变与血钾降低程度的关系。结果56例HOPP患者肌酶学各项指标均有不同程度的升高，其中以肌酸激酶（CK）升高最为多见且最显著。56例患者中40例（71．4％）CK升高，CK最高为10317U／L，达正常的50倍以上，CK升高的程度与血钾改变的程度呈负关系，CK升高时间稍迟于血钾的降低，恢复亦迟于血钾的恢复．结论血清肌酶升高是HOPP的重要临床特征之一。     

低钾周期性麻痹家系CACNA1S基因突变的研究

目的低钾周期性麻痹(hypokalemic periodic paralysis,HoKPP)是一种由于离子通道功能异常引起的疾病,呈常染色体显性遗传。文中筛查HoKPP家系患者的基因突变位点,为产前基因诊断提供实验依据。方法报告1个具有4代18例患者的HoKPP中国家系。提取HoKPP患者、家系中健康人以及100例无血缘正常对照血样中白细胞基因组DNA,应用PCR和DNA测序进行候选基因突变分析,包括骨骼肌二氢嘧啶敏感性钙通道α1亚单位(CACNA1S)基因和骨骼肌钠通道α亚单位基因(SCN4A)。结果分子遗传学研究显示该HoKPP家系所有患者CACNA1S基因外显子30上均存在杂合突变(G3716A),推测导致氨基酸序列改变(R1239H),家系中健康人以及无血缘正常对照组中均未见患者所携带的杂合突变位点(G3716A)。结论 CACNA1S基因的R1239H突变是该HoKPP家系发病的分子遗传学基础,可行产前基因诊断预防患儿出生。     

小鼠4-1BBL基因真核表达载体构建及其在前列腺癌细胞中的表达

目的:构建含小鼠4-1BBL编码区cDNA序列的真核表达载体,并检测其在前列腺癌细胞株(PC-3)中的表达。方法:将目的基因m4-1BBL全长cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),获得m4-1BBL定向插入重组子pcDNA3.1(+)m4-1BBL,采用限制性内切酶和测序鉴定是否成功构建。用脂质体法将重组质粒转入PC-3细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测m4-1BBL在PC-3中的表达。结果:酶切鉴定和序列分析证实,重组质粒含有小鼠4-1BBL全长cDNA编码序列,转染实验表明m4-1BBL基因能在PC-3细胞中表达。结论:小鼠4-1BBL全长cDNA基因真核表达载体构建及其在PC-3细胞中的表达均获成功,为进一步研究莫定了基础。     

潮霉素抗性转基因BDF1小鼠模型的建立

目的建立具有潮霉素（hygromycin）抗性转基因BDF1小鼠，用于制备携有hygromycin抗性筛选标志ES阳性细胞克隆的饲养层。方法通过显微注射的方法，将含有潮霉素B磷酸转移酶基因片段（5.1kb）导入BDF1受精卵雄原核中，共注射169枚受精卵，然后将129枚受精卵细胞植入同期受孕的受体母鼠输卵管内。结果共产生37只转基因小鼠，经PCR和Southern检测获得9只阳性小鼠，对一只子代鼠进行RT-PCR检测证明hyg基因已经在肾、肌肉、脾内表达。结论成功的建立具有潮霉素抗性的BDF1转基因鼠，该模型动物可以为基因敲除研究提供良好的基础条件。     

小鼠3D3/LYRIC基因重组质粒构建及蛋白表达和定位

 目的构建小鼠3D3/LYRIC真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取小鼠乳腺上皮细胞系
C127 的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增3D3/LYRIC全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测
序并转染到腺样囊性癌细胞系ACC-2 中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用免疫荧光显微镜观察pEGFP-m3D3/LYRIC
在腺样囊性癌ACC-2 细胞内的定位。结果3D3/LYRIC全长基因序列克隆到真核表达载体pEGFP-C1 中,酶切鉴定片段大小
为1 740 bp。Western blot 检测到融合蛋白GFP-m3D3/LYRIC 表达,分子量约为91 kDa。pEGFP-C1-m3D3/LYRIC主要在细胞质
内定位,在细胞核内未见表达。结论成功构建了3D3/LYRIC全长基因真核表达载体,pEGFP-m3D3/LYRIC 蛋白主要定位于
细胞质内。     

过表达SDF-1a帕金森病小鼠模型的建立与评价

目的:探讨建立及评价稳定的脑内过表达基质细胞衍生因子-1a(stromal cell derived factor-1,SDF-1a)的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠模型的方法。方法:采用间隔多次注射方法将小剂量1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-tet-rahy dropyridine,MPTP)注射已立体定向下脑内注射质粒pDsRed2-N1-SDF-1a的小鼠皮下,在不同时间点观察小鼠的行为改变,以及检测小鼠爬杆时间、脑内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞数量以及多巴胺含量(dopamine,DA)含量的变化,同时观察和检测小鼠脑内SDF-1a的表达。结果:MPTP组小鼠出现PD样行为表现,并至少持续40d;各检测时间点下,MPTP组小鼠的爬杆时间显著长于对照组,而TH阳性细胞数量及DA含量较对照组显著减少;同时,在MPTP组小鼠脑内可观察质粒红色荧光蛋白的表达,以及可以检测到SDF-1a蛋白的表达。结论:采用立体定向质粒注射及间隔多次小剂量皮下注射MPTP的方法能够有效建立了过表达SDF-1a帕金森病小鼠模型,为进一步观察SDF-1a趋化细胞迁移并治疗PD的研究提供了前提条件。     

大鼠ATPase a3基因siRNA筛选及慢病毒载体构建

[目的]设计、筛选大鼠破骨细胞(osteoclast,OC)骨吸收关键基因ATPase a3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)并构建其慢病毒表达载体,为研究以OC亢进的骨代谢疾病莫定基础.[方法]设计ATPase a3基因shRNA序列并合成小发卡RNA(short hairpin ...     

包头市汉族人群CX3CR1基因多态性研究

目的:探讨CX3CR1基因多态性在包头汉族人群中的分布,以了解不同地域和民族CX3CR1基因型及等位基因频率的差异,明确CX3CR1基因多态性的遗传易感性。方法:自2009年1月1日至2009年10月30日前瞻性登记包头医学院第一附属医院住院的包头市汉族缺血性脑卒中患者163例(病例组)和同期门诊的汉族健康体检者100例(对照组),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测CX3CR1基因T280M、V249I多态性分布。结果:对照组CX3CR1基因T280M表现为TT(95.0%)、TM(5.0%)型,V249I表现为VV(88.0%)、VI(12.0%)型,缺乏MM、II型;病例组CX3CR1基因T280M表现为TT(82.8%)、TM(16.0%)和MM(1.2%)型,V249I表现为VV(73.0%)、VI(25.2%)和II(1.8%)型,两组基因型别比较差异均有统计学意义(P0.05),T、V等位基因在CX3CR1的基因多态性中起着主要作用。结论:包头市汉族缺血性脑卒中人群CX3CR1基因型以TT、VV型为主,健康人群缺乏MM、II型,T280M、V249I中T、V等位基因位点的突变可能增加缺血性脑卒中的易感性。