大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及TSC-36基因表达的影响

 目的通过观察大豆苷元对血管平滑肌细胞的抑制及其对转化生长因子β诱导蛋白36(TSC-36)基因表达的影响,探讨该药对血管平滑肌细胞的作用机制。方法分离培养人新生儿脐动脉平滑肌细胞,不同浓度的大豆苷元与细胞共孵育,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,并通过竞争性PCR定量分析TSC-36基因在脐动脉平滑肌细胞中的表达。结果与对照组相比,大豆苷元组脐动脉平滑肌细胞活性比率显著降低(P<0.05);大豆苷元组细胞中TSC-36基因表达量显著高于对照组(P<0.01),且TSC-36基因含量增加与大豆苷元浓度呈剂量依赖性。结论大豆苷元在抑制培养的人脐动脉平滑肌细胞增殖的同时,TSC-36基因表达上调,推测调控TSC-36基因表达可能是大豆苷元抑制平滑肌细胞增殖的作用途径之一。     

桂竹糖芥苷对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:考察桂竹糖芥苷对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:应用80%乙醇回流提取,正己烷萃取,MCI柱层析甲醇洗脱获得桂竹糖芥苷。采用体外培养的血管平滑肌细胞,检测细胞增殖、细胞内钙和c-myc基因的mRNA表达,并与哇巴因、地高辛进行比较。结果:(1)桂竹糖芥苷浓度在10-5mg·mL-1时具有促血管平滑肌细胞增殖作用;哇巴因和地高辛浓度分别在10-14和10-9mg·mL-1时具有促血管平滑肌细胞增殖作用,最大增殖率分别为49.08%和51.05%。(2)桂竹糖芥苷浓度在10-3mg·mL-1时可暂短升高细胞内钙;哇巴因浓度在10-4mg·mL-1时可持久升高细胞内钙。(3)桂竹糖芥苷浓度在10-8mg·mL-1时对c-myc mRNA表达没有影响;哇巴因和地高辛浓度在10-12mg.mL-1时可增加c-myc mRNA表达。结论:与哇巴因和地高辛相比,桂竹糖芥苷对血管平滑肌细胞增殖的影响较小。     

淫羊藿苷与葛根素诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的：研究淫羊藿苷（icariin,ICA）与葛根素（puerarin）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）凋亡的影响。方法：建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的淫羊藿苷与葛根素共同培养48h后,用TUNEL法检测凋亡细胞,荧光显微镜形态学观察并进行凋亡指数分析。结果：淫羊藿苷与葛根素各组凋亡细胞数明显增多,与HCY组相比,差别有统计学意义（P〈0．01）。结论：淫羊藿苷与葛根素联用可拮抗HCY诱导的兔VSMC增殖,促进其凋亡。     

葛根素通过线粒体途径诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的:探讨线粒体途径在葛根素(PUE)诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用.方法:葛根素高、中、低剂量(1.5×104,1.5×10-4,1.5×10-5 mol·L-1)干预体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC),观察线粒体膜电位的变化,Western Blot检测凋亡相关基因Caspase-9,Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果:葛根素加药组与正常组相比线粒体膜电位明显降低,葛根素可使Caspase-9的蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下降而Bax蛋白表达升高,葛根素对PASMC的诱导作用还具有浓度依赖性.结论:葛根素可通过线粒体途径诱导PASMC凋亡.     

3'-大豆苷元磺酸钠对H_2O_2诱导大鼠心肌成纤维细胞衰老的影响

目的:观察氧化应激对心肌成纤维细胞(CFb)衰老的影响以及3'-大豆苷元磺酸钠(DSS)的干预作用,初步探讨3'-大豆苷元磺酸钠抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制。方法:差速贴壁法培养SD乳鼠心肌成纤维细胞,MTT法检测细胞增殖能力,硝酸还原酶法检测细胞上清液NO含量,采用免疫细胞化学染色检测心肌成纤维细胞的-平滑肌肌动蛋白(-SMA)表达,用吖啶橙荧光染色检测细胞的衰老。结果:在H2O2刺激下,心肌成纤维细胞增殖率降低,-SMA免疫化学染色出现明显强阳性,与正常组比较有显著性差异(P<0.01),NO含量与正常组比较明显降低(P<0.01),3'-大豆苷元磺酸钠3种浓度均具有延缓H2O2诱导的以上效应,与H2O2刺激组比较有显著性差异(P<0.05;P<0.01)。结论:3'-大豆苷元磺酸钠通过抑制氧化应激加速心肌成纤维细胞的衰老,恢复心肌成纤维细胞正常增殖能力,其作用机制可能是通过影响NO系统以及受体机制来抑制心肌成纤维细胞表型转化,这也可能是3'-大豆苷元磺酸钠抗心肌肥厚的机制之一。     

TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖及橙皮素、芍药苷的干预

目的:探讨橙皮素和芍药苷对正常培养及TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:首先,0、50、100、150、200μg/mL的橙皮素或芍药苷作用于正常培养条件下的人肺动脉血管平滑肌细胞,24 h及48 h检测药物的细胞增殖抑制率。接着,应用均匀设计制订TGF-β1与BMP的剂量组合,诱导细胞增殖,多元线性回归和单因素方差分析确定诱导细胞增殖的TGF-β1与BMP的优化剂量组合;应用该剂量诱导细胞增殖,MTT和Brd U两种方法检测药物对细胞增殖的影响。结果:150、200μg/mL的橙皮素或芍药苷抑制正常培养条件下的细胞增殖(P0.05或0.01)。多元回归方程显示:TGF-β1和BMP-4对细胞增殖的影响相互拮抗,7.5 ng/mL TGF-β及20 ng/mL BMP-4显著增加细胞的增殖(P0.05)。12.5~100μg/mL的橙皮素不能显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖(P0.05);25~100μg/mL的芍药苷显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖(P0.05或0.01)。结论:橙皮素和芍药苷均抑制正常肺动脉平滑肌细胞的增殖。芍药苷抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖,具有较高的研究与开发价值。     

羊栖菜多糖对软脂酸诱导的HL-7702细胞凋亡的保护作用

目的:探讨羊栖菜多糖(SFPS)对软脂酸诱导的肝细胞凋亡的保护作用及其可能机制。方法:SFPS不同浓度(25、50、100μg/mL)预处理24h后,0.5mmol/L软脂酸(PA)作用48h诱导正常人肝细胞株(HL-7702)凋亡。MTT比色法检测SFPS对细胞增殖的影响;Annexin V-FITC标记法检测细胞的凋亡;RT-PCR法检测凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达并计算其比值(Bcl-2/Bax)。结果:0.5mmol/L PA处理48h的HL-7702细胞存活率下降为正常对照组的64.9%,细胞凋亡率为35.1%,Bax表达上升,Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值明显下降(均P<0.05);与模型组相比,SFPS不同浓度(25、50、100 ug/ml)预处理后细胞存活率逐渐升高,细胞凋亡率显著降低,Bax表达逐渐下降,Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值逐渐上升(均P<0.05)。结论:SFPS对PA诱导的肝细胞凋亡有较好的保护作用,其作用机制可能与调节Bcl-2、Bax基因的表达有关。     

芍药苷对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察芍药苷对血管紧张素Ⅱ刺激下离体大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响和基质金属蛋白酶-2活性的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、芍药苷干预血管平滑肌细胞,采用MMT法检测细胞增殖,硝酸还原酶及化学比色法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,应用酶谱法测基质金属蛋白酶-2活性的变化.结果 AngⅡ能明显促进平滑肌增殖、提高基质金属蛋白酶-2活性,芍药苷在125～1000 μg/mL能显著提高NO、NOS、iNOS水平,抑制平滑肌增殖,并呈剂量及时间依赖性;能显著抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌基质金属蛋自酶-2活性的升高.结论 芍药苷可能通过升高NO和NOS水平抑制AngⅡ诱导的平滑肌胞增殖.     

绿茶多酚抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的 :观察绿茶多酚对低密度脂蛋白 (LDL)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,LDL刺激时 ,应用不同剂量的绿茶多酚作用 2 4h后 ,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果 :与对照组相比 ,LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖 ,绿茶多酚对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P <0 .0 5 ) ,并呈现剂量依赖性。流式细胞术检测表明 ,绿茶多酚可以使LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞大部分处于G0 /G1期 ,与LDL组相比有明显差异 (P <0 .0 5 )。结论 :绿茶多酚可明显抑制LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

厚朴酚对MPTP诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨厚朴酚(mangolol,Mag)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导PC12细胞凋亡的抑制作用及可能作用机制。方法:将厚朴酚(终浓度0.1,10μmol.L-1)或/和MPTP(终浓度50,100,150,200μmol.L-1)加入到培养的PC12细胞中。四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞增殖活性,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,以及Western-blot法检测Bax和Bcl-2的蛋白表达变化。结果:在加入不同浓度的MPTP处理细胞24 h,细胞增殖活性渐次降低,而厚朴酚0.1～10μmol.L-1预处理1 h可明显减轻MPTP导致的PC12细胞的损伤,抑制细胞凋亡,以及Bcl-2/Bax比值的改变。结论:厚朴酚对MPTP诱导的PC12细胞凋亡损伤有一定的抑制作用,其作用机制涉及到影响细胞内Bcl-2/Bax蛋白的表达。     

丹参对H2O2诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨丹参对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响及其可能机制.方法:选用体外培养的第3～5代大鼠VSMCs,以H2O2作为外源性活性氧(ROS)诱导VSMC凋亡,用丹参进行干预,以MTT比色法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,同时用免疫细胞化学法检测VSMCs中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果:1 mmol/L H2O2诱导VSMCs凋亡,细胞存活率明显低于对照组,细胞凋亡率、Bax/Bcl-2蛋白表达的阳性指数(PI)明显高于对照组(P＜0.01);丹参干预后,和H2O2组相比,细胞存活率明显升高,而细胞凋亡率、Bax/Bcl-2蛋白表达的PI显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:丹参可通过下调Bax/Bcl-2蛋白表达而对抗H2O2诱导的VSMCs凋亡.     

活血胶囊对动脉粥样硬化兔平滑肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨活血胶囊干预对动脉粥样硬化兔主动脉平滑肌细胞凋亡及凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法通过高脂饮食建立实验性动脉粥样硬化兔动物模型,采用TUNEL法检测平滑肌细胞凋亡,SP免疫组化法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与模型组比较,活血胶囊低、高剂量组均能降低兔主动脉平滑肌细胞凋亡的凋亡指数(P<0.05,P<0.01),降低Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),并呈现一定的量效关系(P<0.05)。结论活血胶囊可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少平滑肌细胞凋亡,从而抑制动脉粥样硬化斑块的形成。     

雷公藤红素对大鼠血管平滑肌细胞c-myc和血小板源性生长因子的mRNA的影响

目的：观察雷公藤红素对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）中原癌基因（ｃ－ｍｙｃ）和血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）的ｍＲＮＡ表达水平的影响。方法：分别将所培养的第５￣１０代ＶＳＭＣ同步化培养２４ｈ后，加入２０％胎牛血清（ＦＣＳ）和不同剂量的雷公藤红素（０．１、０．２和０．３ｍｇ／Ｌ），共同孵育６ｈ和１２ｈ后，分别提取ＶＳＭＣ胞浆总ＲＮＡ，通过地高辛标记探针，采用斑点杂交方法检测ｃ－ｍｙｃ和ＰＤＧＦ的ｍＲ     

大黄虫丸拆方对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究大黄[庶虫]虫丸拆方对动脉粥样硬化（AS）模型家兔胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖与凋亡的影响。方法采用免疫性内皮损伤合并高脂饲料喂养的方法建立家兔AS模型,通过SP免疫组化法检测增殖细胞核抗原（PCNA）在VSMC中的表达,缺口末端标记法（TUNEL）观察VSMC的凋亡情况。结果与模型对照组比较,大黄[庶虫]虫丸拆方各功效组分均可使AS模型家兔胸主动脉VSMC中PCNA阳性细胞显著减少（P〈0．01）,而凋亡阳性细胞数显著增加（P〈0．01）。结论大黄[庶虫]虫丸各功效组分通过抑制VSMC增殖、诱导其凋亡,从而调节VSMC增殖和凋亡之间的平衡,发挥抗AS作用,其中拆方1号是主要组分。     

益气活血化瘀方药对血管胶原转换及相关基因表达的影响

目的：观察益气活血化瘀中药对大鼠血管细胞外基质(ECM)重塑的影响并探讨其分子机制。方法：采用^3H—TdR和^^3H—Pro掺入实验和血管壁羟脯氨酸含量测定检查血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性及胶原合成与降解程度;应用Northern印迹和Ⅳ型胶原酶(MMP-2)酶图分析检测MMP-2和骨桥蛋白表达的变化。结果：益气活血化瘀中药可显著抑制bFGF对VSMC的促胶原合成作用,降低血管内皮剥脱大鼠血管壁胶原转换速率,下调MMP-2和骨桥蛋白在体外培养的VSMC及血管壁中的表达水平,抑制VSMC增殖。中药血清去蛋白后对VSMC的影响不发生明显变化。结论：益气活血化瘀中药通过调节MMP-2和骨桥蛋白基因表达及降低胶原转换速率可抑制和(或)减缓ECM重塑。     

软脉煎对实验性晚期动脉粥样硬化家兔平滑肌细胞凋亡的调控作用

目的:通过对颈动脉粥样硬化家兔模型的治疗观察,研究软脉煎对动脉粥样硬化形成晚期血管平滑肌细胞Bcl-2、Bax及Caspase-8表达的影响。方法:采用高脂喂养加颈动脉内膜空气干燥术制备家兔颈动脉粥样硬化模型3,8只新西兰家兔随机分成4组,正常对照组8只,模型组8只,软脉煎组11只,辛伐他汀组11只1,2周后采用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax、Caspase-8的表达。结果:软脉煎组与模型组比较,能升高Bcl-2蛋白水平,降低Bax、Caspase-8蛋白表达,从而升高Bcl-2/Bax比值,具有显著性意义(P0.05)。结论:软脉煎能调控动脉粥样硬化形成晚期平滑肌细胞凋亡信号途径中Bcl-2、Bax及Caspase-8的表达,从而提高斑块的稳定性,减少心脑血管事件的发生。     

三七总皂苷含药血清对溶血磷脂酸诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制研究

目的:观察三七总皂苷含药血清对溶血磷脂酸(LPA)诱导的血管平滑肌细胞增殖效应的影响,分析该作用与细胞外信号调节激酶ERK信号通路的关系。方法:采用贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同分组对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果:空白血清+LPA组较空白血清组OD值升高(P<0.05),S期指数升高(P<0.01);三七总皂苷含药血清+LPA组与卡托普利含药血清+LPA组比较OD值降低(P<0.05),S期指数无差异;三七总皂苷含药血清+LPA+PD98059组较空白血清组OD值降低(P<0.05),S期指数无差异。结论:三七总皂苷对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用,且作用强于卡托普利,其作用机制可能与抑制LPA对ERK信号通路的激活,从而抑制DNA合成,阻止细胞进入S期有关。     

黄芪、当归对血管平滑肌细胞粘着斑激酶表达和细胞凋亡的影响

目的：探讨黄芪,当归对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）粘着斑激酶（FAK）表达和细胞凋亡的影响。方法：应用RT-PCR,Western blot检测黄芪,当归对FAK表达的影响;应用Greiss试剂检测VSMC培养液中NO2^-含量;应用流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2和caspase-3表达活性。结果：黄芪,当归注射液可以显著抑制由碱性成纤维细胞生长因子所诱导的FAK表达。增加细胞培养液中的NO2^-含量,诱导cas-pase-3表达,下调bcl-2表达,促进体外培养的VSMC凋亡。结论：黄芪,当归诱导VSMC凋亡与其促进NO合成,抑制FAK表达,诱导促凋亡基因caspase-3表达及下调抗凋亡基因bcl-2表达有关。