生物素标记组合探针杂交检测患儿尿液以诊断巨细胞病毒感染

利用 HCMV AD 169株的克隆 DNA 片段制成生物素标记的组合探针进行临床标本的 HCMV DNA 的杂交检测,此探针特异性强,不与其它类 DNA 发生非特异性杂交,可检出25pg 同源 DNA,100～500个 HCMV 感染细胞或2.57LgTCID50 HCMV 病毒悬液.杂交法结果与病毒分离结果符合率极高.初步用于临床尿标本检测得出,先天畸型,乳儿肝炎及激素治疗三组患儿中,HCMV 的排毒率分别为100%(3/3),61%(11/18)和75%(3/4).提示 HCMV 可能是临床部分患儿的重要致病源.同时表明杂交法对 HCMV 感染的检测是快速、特异及敏感的.     

原位杂交检测人动脉粥样硬化斑块组织中人巨细胞病毒DNA

为进一步探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）在动脉组织及细胞中的存在状态，分布情况以及ＨＣＭＶ感染在动脉粥样硬化改变中的作用。作者以生物素标记的ＨＣＭＶＤＮＡ探针作原位杂交，检测了３２例临床确诊为动脉粥样硬化患者的动脉血管组织以及３２例患者的正常血管组织（２２例脑外伤死亡患者取动脉，１０例动脉硬化患者于搭桥术时取大隐静脉组织）中ＨＣＭＶＤＮＡ序列。结果其阳性分别为１３／３２及３／２２，表明ＨＣＭＶ感染与动脉粥样硬化的发生密切相关。在ＨＣＭＶＤＮＡ阳性标本中，ＨＣＭＶＤＮＡ主要见于血管内皮，内膜下平滑肌及中膜平滑肌，并多集聚于细胞核中，外膜组织及细胞外间质则少见。提示ＨＣＭＶ感染可能参与动脉粥样硬化的发生发展过程。     

人巨细胞病毒基因HindⅢF片段重组质粒PAT153的...

Transformation of the recombinant plasmid pAT153 containing human cytomegalovirus (HCMV) gene Hind III F fragment into E.coli strain HB 101 was made by the CaCl2 method with a 24% of transformation efficiency. The bacterial colonies containing the recombinant plasmid were selected in colony hybridization with 32P-labelled HCMV Hind III F fragment. The recombinant plasmid was isolated by the modified alkaline lysis method which is characterized by high quality, great quantity, and time-saving. HCMV Hind III F fragment has no homology to the other herpes virus. The 32P-labelled HCMV Hind III F fragment probe could detect 0.25 pg homological sequences of HCMV DNA. The use of this probe allows the detection of HCMV in clinical specimens with the advantages of quickness, good sensitivity and specificity.     

用核酸杂交技术检测抗病毒i-RNA制剂中病毒核酸的残留及其在免疫小鼠体内的动态变化

以生物素化dUTP标记CI(?)、株基因组Hind Ⅲ酶切Y片段为探针,用核酸杂交技术检测抗HCMV-iRNA制剂中巨细胞病毒核酸的残留,同时用HCMV免疫小鼠观察病毒核酸在小鼠体内的存留时间。结果,HCMV DNA在小鼠体内的存留时间有明显的个体差异,而与HCMV DNA有同源序列的RNA在免疫后7天被清除。在4批来自羊肝、脾组织的抗HCMV-iRNA 制剂中,有3批查出HCMV核酸。     

Laboratory and clinical diagnosis of human cytomegalovirus infection after transplantation

Summary Urine and blood specimens from 32 recipients of allograft organ transplant were investigated for human cytomegalovirus (HCMV) by conventional cell culture, indirect immunofluo.rescent assay subsequent to the rapid cell culture and DNA-DNA hybridization. The results showed that the rapid cell culture technique might be the best method for rapid detection of active HCMV infection after transplantation because it possesses the advantages of simplicity, speediness, sensitiveness, and high reliability of detecting productive HCMV infection. The major symptoms were prolonged or intermittent fever unresponsive to antibiotics, dysfunction or loss of function of the transplanted organ, pulmonary infiltrates and leukopenia. As our results suggested, reactivation of a latent infection appears to be the most probable etiologic factor contributing to HCMV infection after transplantation.     

Evaluation of a sulfonated DNA probe (sulfoprobe) for diagnosis of falciparum malaria

In this study,the DNA probe pPF14 was nonradioactively labelled by sulfo-modifica-tion,and used in a dot blot hybridization assay for detection of P.falciparum.The resultsshowed that the sulfoprobe successfully detected 25pg purified DNA and 0.001% parasitemia ofcultured P.falciparum,and did not react with human leukocyte DNA.In the study of 179clinical blood samples of malaria patients from Yunnan province,the DNA probe results corre-lated well with blood smear ones.Of 107 P.falciparum samples determined by microscope ex-amination,99 were positive by sulfoprobe (92.5%);Of 72 P.vivax samples,1 was crosslyreacted;no cross reactions were found with any of 48 normal blood samples.It is indicated thatsulfoprobe may be useful in specific diagnosis and epidemiological investigation of P.falciparuminfection.     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射性标记系统制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｎｇＨＣＭＶＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。表明ＲＡＰＤ－ΡＣＲ技术可用于少量ＤＮＡ模板制备大量ＤＮＡ探针，适用于原位杂交等需高浓度探针的核酸杂交及临床大量标本的测试，是一种经济方便的探针制备技术     

聚合酶链反应检测患儿尿标本中的巨细胞病毒DNA

本文建立了聚合酶链反应(PCR)检测人巨细胞病毒(HCMV)方法,探讨了该方法的某些实验条件。用PCR检测24例临床患儿尿标本。证明PCR方法特异、敏感、简便而快速。同科不同属病毒如HSV、EBV等以及人源正常细胞均无假阳性结果:最小检出量可达0.1fg DNA,相当于6个基因拷贝;用水浴箱手控时间即可进行PCR循环,30次循环仅需97min30s;PCR和DNA杂交检测尿标本中HCMV阳性例数分别为20和14例。该结果证明HCMV感染儿童的广泛性和严重性,初步表明儿童肾病综合症与HCMV有关。     

应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％；其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％。与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．２％；提示ＰＣＲ检测临床标本中ＨＣＭＶ，不仅敏感特异，而且与ＣＣＣ，ＤＥＡ两法相比快速简便。     

巨细胞病毒感染与婴儿肝炎综合征的关系及其对体液免疫影响的研究

本文以巨细胞病毒(CMV)核酸杂交技术检测34例婴儿肝炎综合征患者尿标本的带病毒水平。结果表明其感染率(44.1％)明显高于正常对照组(15％,P<0.05)。并初步发现CMV感染在患者母婴间分布有较高的相关性(符合率为13/14)。对患者体液免疫分析的结果表明,伴发CMV感染的婴儿肝炎病理过程不涉及类似Ⅲ型变态反应的免疫病理变化,但其血清C_3水平明显低下,原因值得进一步探讨。     

核酸杂交法检测分娩期妇女血及新生儿尿中HCMVDNA

以地高辛标记人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡＪ序段为探针，用核酸杂交法检测南通地区７８３例分娩期妇女血标本，ＨＣＭＶ　ＤＮＡ阳性者６１８例，感染率为７８．９３％；检测６９１例出生后１周内新生儿尿标本，ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者４５例，排毒率为６．５１％；其中３３５对母婴中ＨＣＭＶ　ＤＮＡ同时阳性者３９例，垂直传播率为１０．９９％。本文结果证明了ＨＣＭＶ感染的普遍性和严重性，垂直传播是新生儿先天性ＨＣＭＶ感染的重要途径。     

婴幼儿人巨细胞病毒感染154例PCR与ELISA检测比较

目的:探讨采用不同的定量方法及不同的标本检测婴幼儿人巨细胞病毒(HCMV)感染阳性率。方法:采用荧光定量PCR法和ELISA定量法分别对154例疑感染HCMV住院患儿进行HCMV DNA和HCMV IgM抗体的定量检测,其中对73例患儿的血及尿标本同时进行HCMV DNA的检测。结果:血和尿HCMV DNA同时检测,尿检出率明显高于血;血和尿HCMVDNA检出率明显高于血清HCMV IgM;两种方法的联合检测进一步提高阳性率。结论:两种方法同时检测可提高HCMV的检出率;尿标本HCMV DNA的检出率明显高于血标本,采用尿标本更方便,且阳性率高。     

人乳头瘤病毒DNA在原发性肺癌组织中的表达

目的：探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ在原发性肺癌组织中的表达．方法：利用西京医院病理科２７５例肺癌病理标本进行研究,以同期３２例支气客粘膜鳞状化生和３４例粘膜慢性炎症标本作为双非肿瘤对照组．采用随机引物法制备地高辛标记ＨＰＶ６Ｂ／１１,１６,１８,３１型ＤＮＡ探针,应用原位杂交检测肺癌组织中的ＨＰＶ－ＤＮＡ存在情况．结果：ＨＰＶ感染总阳性率为３３．８％（９３／２７５）而各细胞类型阳性率为：肺鳞癌     

IgG抗体亲和力指数在儿童巨细胞病毒感染诊断中的意义

目的探讨IgG抗体亲和力指数(AI)在儿童巨细胞病毒(HCMV)感染诊断中的意义。方法分别收集120例临床疑似HCMV感染患儿的尿液和外周血标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和微粒子酶免化学发光法检测尿液HCMV DNA载量和血清HCMV IgM/IgG抗体;采用尿素变性结合酶联免疫吸附试验(ELISA)测定HCMV IgG抗体亲和力指数(AI)。结果 120例疑似HCMV感染患儿的尿液HCMV DNA、血清HCMV IgM和HCMV IgG阳性检出率分别为70.83%(85/120)、60.83%(73/120)和76.67%(92/120),差异有统计学意义(χ2=7.252,P=0.027);25例HCMV IgM-/IgG+患儿中,以高亲和力抗体检出为主,占92%(23/25);67例HCMV IgM+/IgG+患儿中,以低、中等亲和力抗体为主,分别占26.87%(18/67)和53.73%(36/67);高、中、低IgG抗体AI患儿尿液HCMV DNA阳性检出率分别为36.11%(13/36)、86.84%(33/38)和100%(18/18),差异有统计学意义(χ2=32.262,P<0.01)。结论 IgG抗体亲和力指数测定能准确地反映HCMV感染的活动状况,有助于HCMV感染的诊断与治疗。     

器官移植术后受者人巨细胞病毒的PCR检测

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对３０例器官移植受者血、尿标本进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ检测。结果显示，１６例ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率５３．３％。提示ＰＣＲ是一种敏感特异、简便快速、能早期诊断ＨＣＭＶ感染的方法，适用于监视器官移植病人术后ＨＣＭＶ感染。     

HCMV感染患儿血浆可溶性HLA-G及IL-10检测的意义

目的探讨血浆可溶性人类白细胞抗原-G(soluble human leukocyte antigen-G,sHLA-G)及白细胞介素-10(in-terleukin-10,IL-10)在儿童巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染中的意义。方法分别收集75例HCMV活动性感染患儿的外周血及尿液标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆sHLA-G和IL-10水平;采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测尿液HCMV DNA载量。结果 HCMV活动性感染患儿血浆sHLA-G水平[54.91(6.75～282.72)U/ml]明显高于对照组[21.32(1.07～260.35)U/ml],差异有统计学意义(P<0.001);血浆IL-10的水平[9.24(1.61～41.77)pg/ml]明显高于对照组[1.82(1.03～3.98)pg/ml],差异有统计学意义(P<0.001);血浆sHLA-G和IL-10水平与尿液HCMV DNA载量之间无明显相关性(P>0.05)。结论 HCMV活动性感染患儿血浆sHLA-G和IL-10水平显著升高,可作为HCMV活动性感染诊断的指标。     

地高辛配基标记DNA打点杂交和原位杂交...

DNA of Leptospira interrogans sv. lai strain 017 was labelled with digoxigenin or alpha 32P or biotin and used as probes to detect DNA of leptospires. Probes labelled with digoxigenin were able to detect 0.1-1 pg of homologous DNA and 10(2) of L. interrogans sv. lai strain 017. Probes alpha 32P and biotin detected 1 pg and 10 pg of homologous DNA and 10(3), 5 x 10(3) of L. interrogans sv. lai strain 017 respectively. These three probes couldn't detect L. biflexa sv. patoc strain Patoc I, L. illini strain 3055, Escherichia coli. Bacillus aerogenes capsulalus, Salmonella anatis, K-DNA of Leishmania, and of human WBC. Comparison of digoxigenin-, alpha 32P- and Biotin-labelled probes in the dot-blot hybridization assay on different serogroup sv. of leptospires revealed that digoxigenin-labelled probes were more sensitive than alpha 32P and biotin-labelled probes. The results indicate that digoxigenin-labelled probes DNA can be used for detection of leptospires in field and clinic. We also report procedures in situ hybridization with leptospira in tissues smear and plasma sediment of an experimentally infected guinea pig. It offers the advantage of recognizable of leptospiral morphology in combination with a hybridization signals. The results indicate that digoxigenin-labelled DNA probes of 017 strain might provide tool for routine diagnosis and classification in cases of leptospiral interrogans infection.     

对献血者巨细胞病毒感染的研究

目的 了解献血中巨细胞病毒(HCMV)感染状况，并探索一种比较简便的检测方法。方法 用PCR法和DNA杂交法检测同一献血的白细胞及血清中的HCMV—DNA，并用ELISA法检测血清中的HCMV-IgM、IgG(测4个滴度)，连续2a共检测白细胞和血清样本各200人份。结果 PCR法检测白细胞中的HCMV-DNA阳性率分别为63％和70％，DNA杂交法检测的阳性率分别为42％和50％；PCR法检测血清中的HCMV-DNA的阳性率分别为49％和53％，DNA杂交法检测的阳性率分别为33％和39％；HCMV-IgM阳性率2a均为5％；HCMV-IgG阳性率分别为54％和58％。结论 HCMV-IgG抗体可作为HCMV感染的指标。     

孕早期绒毛细胞原位杂交监测人巨细胞病毒宫内感染的价值

用地高辛标记人巨细胞病毒 (HCMV) DNA探针 ,对 10 5例孕早期妇女 (其中有异常妊娠史者 4 5例 )绒毛细胞进行原位杂交 (ISH)。结果发现 :正常组与异常妊娠史组 ISH阳性率分别为 2 5 .0 0 %及 4 8.89% ,P<0 .0 5。与 PCR法相比 ,该方法敏感度 5 5 .0 0 % ,特异度 76 .92 % ,符合率 6 8.5 7% ,且可进行病毒核酸定位及半定量。提示 :用地高辛标记探针进行绒毛细胞原位杂交 ,监测 HCMV宫内感染是可行的 ,为进一步探讨 HCMV感染引起不良妊娠的机理提供了一条新途径 ,并为胎儿取舍提供更确切的科学依据 ,减少低质儿的出生