神经性毒剂对人脑乙酰胆碱酯酶的抑制及肟类药物的重活化作用

本文观察了神经性毒剂沙林，梭曼，塔崩和ＶＸ对纯化人脑乙酰胆碱酯酶的抑制作用及肟类药物对这些毒剂抑制的酶的体外重活化作用。结果表明，毒剂抑制人脑乙酰胆碱酯酶的ｐＩ５０为７．９一９．１，毒剂的抑制能力为：梭曼＞沙林≈ＶＸ＞塔崩，脂类药物氯磷定，双解磷，双复磷和ＨＩ一６对沙林和ＶＸ抑制的人脑乙酰胆碱酯酶的重活化作用非常显著，但对梭曼和塔崩抑制的酶则弱，且不同药物对这两种毒剂抑制的乙酰胆碱酯酶的重活化作用也明显不一样，与大鼠脑乙酰胆碱酯酶的实验结果相似。     

不同磷酰化乙酰胆碱酯酶活性部位空间结构差异

<正> 本文以五种结构相近似的H系列肟类重活化药物(包括HI-6)分别对沙林,梭曼,塔崩和VX抑制的人红细胞乙酰胆碱酯酶(AChE)进行体外重活化实验,药物的结构除了吡啶环上肟基分别为2位和4位以外,其余均相似。毒剂加入红细胞悬液于37℃孵温10min以完全抑制AChE(为延缓梭曼抑制的AChE老化,梭曼的抑制反应于冰浴中进行),洗去剩余毒剂(梭曼于4℃低温下洗去),并加药物于37℃下重活化30min。     

神经性毒剂中毒对动物心脏损伤的研究

神经性毒剂从结构上可分为Ｇ类毒剂 (主要包括沙林、梭曼、塔崩 )和Ｖ类毒剂 (ＶＸ)。它和有机磷农药杀虫剂一样 ,同属于有机磷酸酯类化合物 ,具有毒性大、作用迅速、防治困难等特点 ,是外军装备的主要化学战剂之一。作为有机磷化合物 ,神经性毒剂的主要中毒机制是抑制乙酰胆碱酯酶活力 ,使乙酰胆碱不能很快被酶水解 ,造成乙酰胆碱在中枢及外周神经系统的蓄积 ,进而诱发一系列胆碱能神经亢奋症状。中毒者出现流涎、肌颤、大汗、缩瞳、步态不稳、呼吸困难、心律不齐、惊厥及昏迷等 ,严重时危及患者生命。在神经性毒剂急性中毒的致死原因中 ,…     

脯氨肽酶在军事医学中的应用

应用酶清除神经性化学毒剂及有机磷农药的研究课题已有 5 0多年。 194 6年Mazur[1] 首次报道了兔组织中一种酶有水解二异丙氟磷酸酯 (DFP)的能力。 1992年国际生化组织 (TheInternationalUnionofBiochemistry)将此酶定义为有机磷酸酸酐水解酶 (Organophophorusacidanhydrolase ,OPAA ,E .C .3.1.8.2 )。它能水解多种有机磷酸乙酰胆碱酯酶抑制剂 ,包括DPF、神经性化学毒剂梭曼 (Soman)、沙林 (Sarin)和塔崩 (Tabun)以及杀虫剂对硫磷 (parathion)和对氧磷 (paraoxon)等。酶法去污染及化学毒剂的销毁意义重大。以前曾根据水解底物的不…     

微量电鳐乙酰胆碱酯酶抑制法测定低剂量梭曼浓度

微量电鳐乙酰胆碱酯酶抑制法测定低剂量梭曼浓度刘星，陈起展梭曼是一种能对机体内乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）强烈抑制而产生毒性的有机磷化合物。我们在Ｈａｍ－ｍｏｎｄ［１］等建立的微量ＡＣｈＥ抑制法测定微量有机磷毒剂浓度基础上改进，建立了一种新型的测定方法，其...     

老年痴呆症药物石杉碱甲类似物研究Ⅳ（±）-8，15-二氢-去-11，15-二甲基-8-羟基石杉碱甲的合成

石杉碱甲（１）是从我国草药千层塔中分到的一个可逆性的强效乙酰胆碱酯酶抑制剂，将成为新一代治疗早老性和老年痴呆症的药物．基于乙酰胆碱酯酶的Ｘ－衍射晶体结构及石杉碱甲抑制乙酰胆碱酯酶的作用机制研究结果，设计合成了（±）－８，１５－二氢－去－１１，１５－二甲基－８－羟基石杉碱甲（９ａ，９ｂ）．生物活性试验表明这些类似物抑制酶活性远低于天然石杉碱甲     

人血清对氧磷酶的部分纯化及解毒效应

目的　寻求对氧磷酶 (paraoxonase ,EC 3.1.8.1)作为外源性抗毒剂对抗G类有机磷毒剂的可能性。方法　采用亲和凝胶柱层析进行了人血清对氧磷酶的部分纯化 ,测定了其对于不同底物的米氏常数 (Km)以及钙离子对于酶活性的影响 ,比较了不同种属的对氧磷酶活性 ,采用体外解毒 ,体内染毒的方法检测了对氧磷酶对于不同的底物的作用。结果部分纯化的对氧磷酶对于梭曼和对氧磷均有较好的催化水解作用。以对氧磷为底物时 ,Km 值为 0 .2 2mmol·L- 1,比活性为 375 μmol·min- 1·g- 1蛋白 ;以梭曼为底物时 ,Km 值为 0 .6 0mmol·L- 1,比活性为 4 34μmol·min- 1·g- 1蛋白。不同种属来源的血清对氧磷酶的活性差异较大 ,是造成不同种属动物对有机磷毒剂中毒敏感性差别的原因之一。部分纯化的对氧磷酶在含 1mmol·L- 1CaCl2 的缓冲液中活性良好 ,加入乙二胺四乙酸 (EDTA)后 ,无论以对氧磷或梭曼为底物 ,酶活性均受到明显抑制 ,表明人血清对氧磷酶是钙离子依赖性酶。EDTA的pI50 约为 1.8mmol·L- 1。人血清对氧磷酶能有效地水解对氧磷、梭曼、沙林、塔崩及敌敌畏 ,但对VX及乐果无效 ,表明其对P F、P CN及P O键有选择性 ,对P S键无作用。结论　对氧磷酶可作为G类毒剂的抗毒剂     

梭曼单链抗体的基因克隆和表达

成功地扩增了有机磷毒剂梭曼类似物１－羟基－１－对胺基苯基甲膦酸单频哪基醇酯与血蓝蛋白结合物免疫小鼠脾细胞中抗体重链和轻链基因片段，构建了单链抗体可变区基因（ＶＨ－ｌｉｎｋｅｒ－ＶＬＤＮＡ），并将该基因克隆到噬菌体表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ的外壳蛋白ｇ３ｐ基因中，使单链抗体以融合蛋白的形式在Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１中表达在噬菌体表面，构成噬菌体抗体库．通过免疫亲和淘洗和竞争抑制酶联免疫吸附测定法筛选，得到１２株克隆，其分泌的单链抗体与梭曼有结合活性．     

二乙酰单肟和硝苯地平对梭曼中毒小鼠的保护

羟酸酯酶（ｃａｒｂｏｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅ,ＣａＥ）,是一组能催化水解羟酸酯生成羟酸和乙醇的同工酶,在体内主要分布于肝、肺、血浆、小肠等组织器官。研究表明,梭曼中毒时不仅抑制乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）,而且还可逆性结合并抑制ＣａＥ。ＣａＥ与梭曼结合可使体内游离梭曼浓度降低,从而减轻梭曼对靶部位ＡＣｈＥ的抑制。因此ＣａＥ作为内源性毒剂清除剂已引起了人们的广泛重视。那么,通过加速梭曼抑制的ＣａＥ的重活化,或扩张外周血管增加血浆ＣａＥ与梭曼的结合,充分调动ＣａＥ在体内解毒潜力,可能对提高梭曼的防治水平有…     

催化神经毒剂梭曼水解的抗体酶

催化神经毒剂梭曼水解的抗体酶赵毅民荣康泰徐勤惠（军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）梭曼是难防难治的有机磷毒剂．为了寻找新的解毒途径，本研究设计并合成了全新化合物１－羟基－１－对胺基苯基甲膦酸单频哪基醇酯．此化合物可竞争性地抑制梭曼水解酶...     

药物预防神经性毒剂中毒的研究进展

神经性毒剂是有机磷酸酯衍生物,包括塔崩、沙林、梭曼和维埃克斯等,至今仍然是战争和恐怖主义活动使用的主要毒剂。它们的主要作用是抑制体内胆碱酯酶的活力,尤其是副交感神经功能亢进的现象最为突出[1]。有关神经性毒剂的解毒治疗原则早在20世纪70年代初就由英国制定,而且几乎     

4种高毒有机磷化合物体外稳定性及小鼠染毒后体内活性持续时间

目的 评价梭曼、沙林、塔崩和维埃克斯(VX)4种有机磷化合物的体外稳定性及小鼠染毒后毒剂分子在血液中活性持续时间，为有机磷化合物中毒救治中药物的使用频率和给药时间等提供参考和指导。方法 (1)有机磷化合物体外稳定性评价。梭曼、沙林和VX分别用无菌水稀释1×10⁵倍，塔崩用无菌水稀释1×10⁴倍，将以上稀释好的4种有机磷化合物再分别用PBS稀释100倍后置37℃恒温培养箱孵育，分别在0,10,20,40,90,120和240 min取出一定量有机磷化合物与乙酰胆碱酯酶(AChE)溶液0.2 g·L^-1反应，采用Ellman法测定AChE活性，并计算酶活抑制率。(2)有机磷化合物染毒小鼠后血液分离物对AChE活性抑制作用。将4种有机磷化合物配置成不同浓度梯度后对KM小鼠进行腹部皮下染毒，以组内小鼠未出现死亡时的最高使用剂量为随后建模的动物染毒剂量，在该剂量染毒后分别于0,10,20,40,90,120和240 min取全血，采用超滤离心法分离各时间点体内残留的有机磷化合物并采用Ellman法测定其对AChE活性抑制率。结果 ...     

对硫磷与对氧磷抑制的人脑乙酰胆碱酯酶的老化及重活化

目的　了解对硫磷与对氧磷在试管内对人脑乙酰胆碱酯酶 (AChE)的抑制 ,膦酰化酶的老化速率及肟类药物的重活化效能有何差别。方法　微量羟胺比色法测定AChE活性。结果　对硫磷与对氧磷抑制人脑AChE 5 0 %活性的摩尔浓度的负对数值(pI50 )分别为 4 .10及 7.5 1,抑制人脑AChE 90 %活性的摩尔浓度的负对数值 (pI90 )值分别为 2 .5 5及6 .5 7。氯磷定、双复磷、双磷定和酰胺磷定 4种重活化剂对对硫磷与对氧磷抑制的人脑AChE的重活化作用有较大差异 ,等摩尔浓度条件下 ,其对对氧磷的重活化作用普遍好于对硫磷。且双肟类重活化剂作用普遍强于单肟类重活化剂 ;对硫磷与对氧磷的最佳重活化剂均为双复磷。对硫磷与对氧磷人脑AChE磷酰化酶的半老化时间 (t0 .5)分别为 14及 12h ,老化达到 99%的时间 (t0 .99)分别为 95及 81h。结论　对硫磷或对氧磷中毒时应尽早使用双复磷或双磷定。且在急性中毒症状控制后 ,仍须连续使用重活化剂 4d。     

卡托普利对大鼠血液中梭曼消除的影响

啮齿类动物对梭曼有很强的解毒能力，但在梭曼解毒中，肝脏及肠道等外周器官中羧酸酯酶强大的解毒能力并未得到充分发挥，如能调法提高它们的利用度，就有可能减少梭曼到达靶器官的量，并降低梭曼的毒性，梭曼中毒后，可以引起外周血管痉挛，使更多的梭曼向脑中分布，因此加重脑功能性乙酰胆碱酯酶的抑制程度。尼莫地平通过外周血管扩张作用，山莨菪碱通过改善外周微循环作用，增加了梭曼与外周解毒酶的结合而加快了梭曼的消除。为了解其他因管扩张机制的药物是否也有类似作用，我们观察了卡托普利对大鼠血液中梭曼消除的影响。     

沙林对猴全血乙酰胆碱酯酶老化的抑制及重活化作用

目的 采用沙林抑制猴全血乙酰胆碱酯酶（AChE），研究磷酰化酶的老化速率及肟类药物的重活化作用。方法 （1）37℃恒温水浴条件下，采用沙林抑制猴全血AChE的90%活性，后分别加入浓度为0.1, 0.33和1 mmol·L^-1双复磷、氯解磷定（PAM-2-Cl）、碘解磷定（PAM-2-I），用DTNB法分别测定各样品AChE活性，计算重活化率；（2）37℃水浴条件下，采用沙林抑制猴全血AChE的90%活性，每隔10 min, 1, 2, 4和14 h取出100 μl，然后，加入终浓度为1 mmol·L^-1的氯解磷定，用DTNB法测定AChE活性，计算重活化率。以重活化剂重活化率的对数对时间作图，可得磷酰化酶的老化曲线，曲线的斜率即为重活化剂抑制AChE的老化速率常数（K_老化），半老化时间（t_0.5）＝0.693／K_老化，老化率达到99％所需时间（t_0.99）＝4.605／K_老化。结果 在0.1, 0.33和1 mmol·L^-1的浓度下，氯解磷定对沙林抑制猴全血AChE的重化活率分别为16%, 45%和83%；双复磷对沙林抑制猴全血AChE的重化活率分别为18%, 39%和70%；碘解磷定对沙林抑制猴全血AChE的重化活率分别为14%, 41%和72%。在0.1 mmol·L^-1时，双复磷重活化效果最好；氯解磷定在低浓度时，其重活化效果稍差于双复磷，但是，随着其浓度提高，显示出比双复磷较好的重活化效果。采用氯解磷定1 mmol·L^-1为重活化剂时，沙林抑制猴全血AChE磷酰化酶的半老化时间约为12 h。结论 本文实验中使用的3种重活化剂均对沙林抑制的猴全血AChE有较好的重活化作用，其中，氯解磷定对沙林抑制的猴全血AChE有较高的重活化率，实际应用中可能会取得相对较好的急救效果；随着沙林对猴全血AChE抑制时间的延长，磷酰化胆碱酯酶可失去重活化的能力，而成为“老化酶”，很难被重活化，因此, 沙林中毒后应尽早使用氯解磷定等肟类重活化剂。研究发现有一些有机磷中毒用肟类治疗后，有中毒症状缓解后又发生反复的现象，因此使用氯解磷定为重活化剂时，急性中毒症状控制后，建议在磷酰化胆碱酯酶老化之前酌情重复使用重活化剂，直至中毒症状彻底缓解。     

有机磷中毒机理和治疗的新进展

有机磷化合物是胆碱酯酶的强抑制剂。早已证明,对磷原子上的亲核攻击能使中毒酶脱磷酰化。抑制剂-酶键断裂可导致酶重激活。解毒剂中以N-烷基吡啶肟季铵盐的作用最为有效。肟的芳香季氮原子与酶的阴离子部位连接,可使肟进一步与磷酰化酶形成共价键,产生磷酰化肟,释放出酶,从而恢复胆碱酯酶的活性。选择合适的肟化合物很重要,因为有些磷酰化肟本身是乙酰胆碱酯酶的强抑制剂。     

苯巴比妥及氯贝丁酯对小鼠体内梭曼解毒作用的影响

考察了肝微粒体酶诱导剂苯巴比妥及氯贝丁酯对小鼠体内解毒酶的诱导作用及对小鼠体内梭曼解毒作用的影响 .结果表明 ,苯巴比妥 ,氯贝丁酯预处理均能显著提高小鼠肺脏 ,肝脏中羧酸酯酶及小鼠脑中胆碱酯酶活性 ,不同之处在于苯巴比妥亦能显著提高血中羧酸酯酶活性 .小鼠按 798μg·kg- 1梭曼iv后 0 .2 5～ 1.5min时 ,苯巴比妥能显著降低小鼠血中梭曼残留浓度 ,而氯贝丁酯则没有加速梭曼在小鼠体内消除的作用 .提示血中羧酸酯酶在梭曼解毒中发挥了重要的作用 ,针对提高血中羧酸酯酶活性为指标 ,有可能筛选出更为有效的解毒剂 .     

大鼠肝脏对维埃克斯的降解效率

大鼠肝脏对维埃克斯的降解效率傅风华滨州医学院（山东２５６６０３）孙曼霁军事医学科学院毒物药物研究所维埃克斯（Ｓ－β－十二异丙氨基硫赶磷酸乙酯，ＶＸ）是剧毒类有机磷酸酯，微量ＶＸ即可抑制乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）的活性而引起中毒。我们测定了ＶＸ在大鼠肝匀...     

合成左旋石杉碱甲对胆碱酯酶活性和小鼠水迷宫操作的作用

目的：比较合成和天然礤旋右杉碱甲（Ｈｕｐ Ａ）对胆碱酯酶的抑制作用以及对东莨菪碱所致记忆障碍的改善作用。方法：比色法用于测定胆碱酯酶活性，小鼠水迷宫用于评价促智作用。结果：合成ＨｕｐＡ抑制大鼠皮层和红细胞膜乙酰胆碱脂酶的ＩＣ５０值分别为６４．７（５２．６－７９．５），５３．９（４３．６－６６．６）ｎｍｏｌ·Ｌ＾－１，抑制大鼠血清丁酰胆碱酯酶的ＩＣ５０为５３．６（４４．９－０．４８）μｍｏｌ·Ｌ＾－     

梭曼代谢与体内解毒

梭曼代谢与体内解毒阮金秀梭曼有一个不对称碳原子和一个不对称磷原子，因此有４个光学异构体，即Ｃ（＋）Ｐ（＋）、Ｃ（＋）Ｐ（－）、Ｃ（－）Ｐ（＋）、Ｃ（－）Ｐ（－）。这４个异构体的毒性作用和体内代谢过程有很大的差别。已经知道，Ｃ（±）Ｐ（－）对乙酰胆碱酯...