神经性毒剂对人脑乙酰胆碱酯酶的抑制及肟类药物的重活化作用

本文观察了神经性毒剂沙林，梭曼，塔崩和ＶＸ对纯化人脑乙酰胆碱酯酶的抑制作用及肟类药物对这些毒剂抑制的酶的体外重活化作用。结果表明，毒剂抑制人脑乙酰胆碱酯酶的ｐＩ５０为７．９一９．１，毒剂的抑制能力为：梭曼＞沙林≈ＶＸ＞塔崩，脂类药物氯磷定，双解磷，双复磷和ＨＩ一６对沙林和ＶＸ抑制的人脑乙酰胆碱酯酶的重活化作用非常显著，但对梭曼和塔崩抑制的酶则弱，且不同药物对这两种毒剂抑制的乙酰胆碱酯酶的重活化作用也明显不一样，与大鼠脑乙酰胆碱酯酶的实验结果相似。     

对硫磷与对氧磷抑制的人脑乙酰胆碱酯酶的老化及重活化

目的　了解对硫磷与对氧磷在试管内对人脑乙酰胆碱酯酶 (AChE)的抑制 ,膦酰化酶的老化速率及肟类药物的重活化效能有何差别。方法　微量羟胺比色法测定AChE活性。结果　对硫磷与对氧磷抑制人脑AChE 5 0 %活性的摩尔浓度的负对数值(pI50 )分别为 4 .10及 7.5 1,抑制人脑AChE 90 %活性的摩尔浓度的负对数值 (pI90 )值分别为 2 .5 5及6 .5 7。氯磷定、双复磷、双磷定和酰胺磷定 4种重活化剂对对硫磷与对氧磷抑制的人脑AChE的重活化作用有较大差异 ,等摩尔浓度条件下 ,其对对氧磷的重活化作用普遍好于对硫磷。且双肟类重活化剂作用普遍强于单肟类重活化剂 ;对硫磷与对氧磷的最佳重活化剂均为双复磷。对硫磷与对氧磷人脑AChE磷酰化酶的半老化时间 (t0 .5)分别为 14及 12h ,老化达到 99%的时间 (t0 .99)分别为 95及 81h。结论　对硫磷或对氧磷中毒时应尽早使用双复磷或双磷定。且在急性中毒症状控制后 ,仍须连续使用重活化剂 4d。     

抗人脑乙酰胆碱酯酶单克隆抗体

本文报道３个对人红细胞乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）无免疫交叉反应性的抗人脑ＡＣｈＥ单克隆抗体．用纯化的人脑ＡＣｈＥ抗原多次多途径免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４小鼠骨髓瘤细胞融合，建立了３个分泌抗人脑ＡＣｈＥ单克隆抗体（均为ＩｇＭ）的杂交瘤细胞株（Ｂ１０，Ｈ１１，Ｅ１１），小鼠腹水抗体的滴度分别为１：９６０００．１：４８０００和１：２４０００．３个抗人脑ＡＣｈＥ单克隆抗体与天然电鳐电器官ＡＣｈＥ有明显的免疫交叉反应，而与人红细胞膜ＡＣｈＥ无免疫交叉反应．３个杂交瘤细胞株经３－６个月稳定传代后冻存于液氮中，一年后复苏，细胞生长良好，分泌抗体水平未见下降．     

柳珊瑚酸对乙酰胆碱酯酶的抑制作用

目的：研究柳珊瑚酸（ｓｕｂｅｒｏｇｏｒｇｉｎ，Ｓｕｂ）抗乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）作用的选择性，可逆性和动力学。方法：制备大鼠和人红细胞膜，大鼠脑和蚯蚓背肌提取液作为ＡＣｈＥ组织样品，人血浆为丁酰胆碱酯酶（ＢｕＣｈＥ）样品；比色法测酶活力，结果：Ｓｕｂ明显抑制上述样品的ＡＣｈＥ活力，其Ｐ／５０各为４．０３，４．９２，３．８２和４．６７，对ＢｕＣｈＥ无抑制作用，Ｓｕｂ与ＡＣｈＥ一起孵温后，酶活力性，３     

脊椎动物乙酰胆碱酯酶的多糖抗原决定簇及其抑制性单…

抗丁低双鳍电鳐电器官乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）的抑制性单克隆抗体１Ｈ１１（ＩｇＭ），丁氏双鳍电鳐，石纹电鳐电官，比目鱼肌肉，大鼠脑，牛脑，人脑，牛红细胞及人红细胞ＡＣｈＥ均以不同的亲和层析法提纯，用酶抗原免疫测定法及不同的亲和层析法提纯，用酶抗原免疫测定法及酶联免疫吸附测定法检测了１Ｈ１１与上述脊椎动物的ＡＣｈＥ的交叉免疫反应性，结果表明，１Ｈ１１可与石纹电鳐，比目鱼肌肉，大鼠脑，牛红细胞ＡＣｈＥ及     

猪血红细胞膜提纯乙酰胆碱酯酶

本实验采用亲和层析法提纯猪血红细胞膜乙酰胆碱酯酶,将乙酰胆碱酯酶(EC,3,1,1,7,简称AchE)的可逆性抑制剂(间-羧苯二甲基碘乙基季铵盐)共价连接到Sepharose4B上,用含0.5％Triton X-100的0.01M pH7.2磷酸缓冲液将AchE从猪血红细胞膜上溶解下来,再经亲和层析,比活力提高13(?)0倍,产率40.6％。     

微量电鳐乙酰胆碱酯酶抑制法测定低剂量梭曼浓度

微量电鳐乙酰胆碱酯酶抑制法测定低剂量梭曼浓度刘星，陈起展梭曼是一种能对机体内乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）强烈抑制而产生毒性的有机磷化合物。我们在Ｈａｍ－ｍｏｎｄ［１］等建立的微量ＡＣｈＥ抑制法测定微量有机磷毒剂浓度基础上改进，建立了一种新型的测定方法，其...     

血浆中游离梭曼的电鳐乙酰胆碱酯酶抑制测定法

梭曼是一种对体内乙酰胆碱酯酶 (ＡＣｈＥ)有强烈抑制作用的有机磷化合物。由于梭曼毒性强且在体内降解迅速 ,国外目前主要通过大进样量气相色谱或气 质联用方法来检测[1,2 ] ,其优点是 :(1)灵敏度较高 ,如检测下限可达1 5 ｐｇ/ｍｌ血浆 ;(2 )可以将梭曼的 4个异构体分开 ,以便研究各异构体在体内的动力学过程。不足之处是 :检测设备价格昂贵 ,样本的预处理过程比较繁琐 ,检测时间较长 ,不适合临床上对毒剂浓度的快速检测。基于ＡＣｈＥ活性抑制测定有机磷毒剂浓度的文献也有报道 ,优点是灵敏、简便[3 ] 。然而 ,该法在检测血浆中残留梭曼…     

沙林对猴全血乙酰胆碱酯酶老化的抑制及重活化作用

目的 采用沙林抑制猴全血乙酰胆碱酯酶（AChE），研究磷酰化酶的老化速率及肟类药物的重活化作用。方法 （1）37℃恒温水浴条件下，采用沙林抑制猴全血AChE的90%活性，后分别加入浓度为0.1, 0.33和1 mmol·L^-1双复磷、氯解磷定（PAM-2-Cl）、碘解磷定（PAM-2-I），用DTNB法分别测定各样品AChE活性，计算重活化率；（2）37℃水浴条件下，采用沙林抑制猴全血AChE的90%活性，每隔10 min, 1, 2, 4和14 h取出100 μl，然后，加入终浓度为1 mmol·L^-1的氯解磷定，用DTNB法测定AChE活性，计算重活化率。以重活化剂重活化率的对数对时间作图，可得磷酰化酶的老化曲线，曲线的斜率即为重活化剂抑制AChE的老化速率常数（K_老化），半老化时间（t_0.5）＝0.693／K_老化，老化率达到99％所需时间（t_0.99）＝4.605／K_老化。结果 在0.1, 0.33和1 mmol·L^-1的浓度下，氯解磷定对沙林抑制猴全血AChE的重化活率分别为16%, 45%和83%；双复磷对沙林抑制猴全血AChE的重化活率分别为18%, 39%和70%；碘解磷定对沙林抑制猴全血AChE的重化活率分别为14%, 41%和72%。在0.1 mmol·L^-1时，双复磷重活化效果最好；氯解磷定在低浓度时，其重活化效果稍差于双复磷，但是，随着其浓度提高，显示出比双复磷较好的重活化效果。采用氯解磷定1 mmol·L^-1为重活化剂时，沙林抑制猴全血AChE磷酰化酶的半老化时间约为12 h。结论 本文实验中使用的3种重活化剂均对沙林抑制的猴全血AChE有较好的重活化作用，其中，氯解磷定对沙林抑制的猴全血AChE有较高的重活化率，实际应用中可能会取得相对较好的急救效果；随着沙林对猴全血AChE抑制时间的延长，磷酰化胆碱酯酶可失去重活化的能力，而成为“老化酶”，很难被重活化，因此, 沙林中毒后应尽早使用氯解磷定等肟类重活化剂。研究发现有一些有机磷中毒用肟类治疗后，有中毒症状缓解后又发生反复的现象，因此使用氯解磷定为重活化剂时，急性中毒症状控制后，建议在磷酰化胆碱酯酶老化之前酌情重复使用重活化剂，直至中毒症状彻底缓解。     

乙酰胆碱对乙酰胆碱酯酶立体结构影响的初步原子力显微观察

目的　为探索乙酰胆碱酯酶 (AChE)活性中心狭隙与其快速水解功能的适应原理 ,研究乙酰胆碱 (ACh)对AChE立体结构的影响。方法　在云母表面重组磷脂膜 ,将AChE重组到磷脂膜上 ,用原子力显微技术观察。结果　天然AChE表面平滑 ,边界清晰 ,中间突出 ,略呈椭圆球体 ,蛋白颗粒长径为(6 2± 2 5 )nm ,短径为 (5 3± 13)nm ,高度为 (6± 2 )nm ;反应后酶蛋白表面变得粗糙 ,形态不甚规则 ,蛋白颗粒中心出现近圆形孔洞。结论　ACh对AChE立体结构具有明显影响。     

抗虫灵对大鼠脑组织乙酰胆碱酯酶的抑制作用

有机磷杀虫剂是最常用的杀虫剂之一。抗虫灵是华中师范大学农药研究所研制的新型有机磷杀虫剂,又称９１０５,化学名称为Ｏ－甲基－Ｏ－对甲硫基苯基硫代磷酰胺酯（Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｏ－Ｐ－ｍｅｔｈｉｏｐｈｅｎｙｌｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｏｔｓ）,经田间...     

纯化的抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体对乙酰胆碱酯酶活性的影响(英文)

本文研究了Balb/c小鼠杂交瘤细胞分泌的抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体对电鳐电器官乙酰胆碱酯酶催化反应的影响及其机理。小鼠腹水抗体经蛋白A琼脂糖亲和层析分离纯化,达到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯。酶联免疫吸附试验检测了11株单克隆抗体,滴度在1:5000～1:300 000范围内。在以乙酰胆碱为底物的催化反应中,3F3、2G8及1H11三株杂交瘤分泌的单克隆抗体对乙酰胆碱酯酶活性有明显的抑制作用,抑制作用随单克隆抗体用量的加大而增强。但在以乙酰靛酚为底物的催化反应中,仅3F3显示抑制作用。因而推论,3F3作用在乙酰胆碱酯酶的活力中心,而2G8及1H11可能作用在活力中心的邻近部位.乙酰胆碱酯酶的活力中心不仅是酶的催化部位,而且也是酶分子上的一个抗原决定簇.乙酰胆碱酯酶活力中心具有催化及诱导抗体产生的双重功能.     

一株具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的红树林真菌的分离及鉴定

目的 从浙江温岭红树林秋茄中筛选分离获得乙酰胆碱酯酶抑制活性菌株,并对较强活性菌株WHSL-08进行菌种鉴定。方法 以浙江省台州温岭市的红树林秋茄样品为材料,进行海洋真菌分离,采用Ellman法对分离到的菌株进行乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选。通过菌株培养性状、形态特征及ITS r DNA基因测序等方法,对菌株WHSL-08进行菌种分类鉴定。结果 本研究从秋茄根际土壤、根、茎和叶中共分离获得41株海洋真菌,经测定有16株具有乙酰胆碱酯酶抑制活性,活性菌株率达39.02%,其中根际土壤分离的菌株数最多,活性菌株率达50%。活性菌株中WHSL-08活性最强,经进一步菌种鉴定确定该菌株为Isaria javanica。结论 浙江温岭秋茄根系土壤、根、茎和叶中均可筛选到乙酰胆碱酯酶抑制活性菌株,根系土壤中的活性菌株率较高。活性最强菌株WHSL-08经鉴定为Isaria javanica,其代谢产物值得进一步研究开发。     

乙酰胆碱酯酶及其抑制剂的研究进展

阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ‘ｓｄｉｅａｓｅ,ＡＤ）为一类比较复杂的认知功能障碍性疾病,是引起老年性痴呆和行为功能异常的主要原因,胆碱能假说为ＡＤ的治疗提供第一个理论,即通过加强胆碱能传递率来预防和治疗,在缓解胆碱能的缺损和改善病人症状方面,乙酰胆碱酯酶的抑制是目前最成功的方法,本文介绍乙酰胆碱酯酶的分子类型,基因结构和作用机理,以及乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展,其中酶抑制剂可以按结构类型划分     

48种中药材的乙酰胆碱酯酶抑制活性研究(英文)

乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂是治疗阿尔茨海默病的一个重要策略。本研究对48种中药材的乙醇提取物和水提取物进行了体外AChE抑制活性的筛选,微板测试法结果表明28种中药材的乙醇提取物和11种中药材的水提取物具有AChE抑制活性。其中,香薷、益智仁、生地黄和荷叶乙醇提取物的AChE抑制活性最强,它们在终浓度为0.1mg/mL时的抑制活性分别为(68.63±1.12)%,(44.49±3.66)%,(43.78±4.76)%和(42.63±8.31)%。薄层色谱–生物自显影的方法亦证明了这四种中药材具有抑制AChE的活性成分。本实验结果为治疗阿尔茨海默病中药的传统应用提供了部分支持。     

远志皂苷碱水解产物对乙酰胆碱酯酶抑制活性的研究

目的对远志皂苷碱水解产物及其主要化学成分的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行研究。方法运用薄层色谱(TLC)-生物自显影和微孔高通量筛选技术,测定远志皂苷碱水解产物、细叶远志皂苷、黄花倒水连皂苷A、3,4,5-三甲氧基肉桂酸、对甲氧基肉桂酸和肉桂酸对乙酰胆碱酯酶的抑制活性。结果远志皂苷碱水解产物表现出明显的乙酰胆碱酯酶抑制作用;细叶远志皂苷和黄花倒水连皂苷A表现出一定的乙酰胆碱酯酶抑制作用,但是活性有限;3,4,5-三甲氧基肉桂酸、对甲氧基肉桂酸和肉桂酸没有表现出对乙酰胆碱酯酶的抑制作用。结论通过乙酰胆碱酯酶抑制实验,明确了远志皂苷碱水解产物的体外活性,为开发抗早老年性痴呆的药物提供了科学依据。