磷酸化细胞外信号调节激酶和P21ras在高血压血管平滑肌细胞中表达增强

目的探讨高血压血管平滑肌细胞增生和ERK激活的机制。方法采用免疫组织化学和Westernblotting技术,对比观察肾血管性高血压和自发性高血压大鼠肾细小动脉平滑肌细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和P21ras表达。结果实验期间,Wistar肾血管性高血压组动脉血压从(104±18)mmHg升高到实验结束时的(198±33)mmHg,自发性高血压大鼠16周龄时的血压为(163±23)mmHg。肾血管性高血压组肾小球发生了明显的纤维化(P<0.05),自发性高血压大鼠肾小球纤维化等与对照组无显著性差异。肾血管性高血压组入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉血管平滑肌细胞中磷酸化ERK1/2染色阳性率分别为7.09%、14.57%、29.44%和13.63%,均明显高于对照组(P<0.01)。自发性高血压大鼠入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉血管平滑肌细胞中磷酸化ERK1/2染色阳性率分别为16.09%、24.17%、32.44%和18.61%,均明显高于对照组(P<0.01);肾血管性高血压组和16周龄自发性高血压大鼠入球动脉、小叶间动脉和弓形动脉平滑肌细胞中P21ras的阳性率明显高于对照组(P<0.01);Westernbloting检测可见高血压组和16周龄自发性高血压大鼠肾组织磷酸化ERK1/2和P21ras蛋白含量明显高于对照组(P<0.01)。结论在大鼠两肾一夹型高血压和自发性高血压时,P21ras基因表达增加使部分血管平滑肌细胞丝裂原激活蛋白激酶系统激活,导致部分小动脉血管平滑肌细胞增生。     

细胞外信号调节激酶与血管平滑肌细胞的增生、肥厚

哺乳动物细胞丝裂原活化的蛋白激酶家族（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ／ＭＡＰＫ）至少包括细胞外信号调节激酶（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ／ＥＲＫ）、ｃ－ｊｕｎＮ末端蛋白激酶（ｃ－ｊｕｎＮ－ｔｅｒｍｉｎａｌｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ／ＪＮＫ）和ｐ３８三个亚族［１］。ＥＲＫ是最主要的ＭＡＰＫ,也是研究得最透彻的一部分。活化的ＥＲＫ有两种形式：ＥＲＫ１（ｐ４２ＭＡＰＫ）和ＥＲＫ２（ｐ４４ＭＡＰＫ）,能催化激活蛋白－１（ＡＰ－１）等…     

细胞外信号调节激酶1/2在压应力诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨压应力对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制.方法用自行研制的压力培养箱加不同压力（大气压0 mmHg、正常血压120 mmHg、高血压180 mmHg和高血压危象血压240 mmHg）处理原代血管平滑肌细胞24 h.用MTT法和细胞计数法观察压应力对血管平滑肌细胞增殖的影响;用免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶1/2的含量.结果与大气压组比较,正常血压压力组和高血压压力组的血管平滑肌细胞增殖速度和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的含量都明显增高 （P《0.01）,其中正常血压压力的作用又比高血压压力要明显（P《0.05）;而高血压危象血压压力没有促增殖效应（P》0.05）.结论在一定范围内,压应力可通过细胞外信号调节激酶1/2途径促进血管平滑肌细胞增殖.     

细胞外信号调节激酶在乳腺癌中的表达及意义

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)在乳腺癌中的表达及在乳腺癌发生发展中的作用。方法:采用Westernblot技术和免疫组化方法,研究ERK1和ERK2蛋白在60例乳腺癌,10例乳腺良性肿瘤,10例正常乳腺组织中的表达。结果:ERK1和ERK2在乳腺癌中有过度表达,与正常乳腺及乳腺良性肿瘤相比,其差异有显著性(P<0.01),乳腺癌Ⅲ～Ⅳ期表达高于Ⅱ期和Ⅰ期,差异有显著性(P<0.05);有腋窝淋巴结转移者表达高于无腋窝淋巴结转移者,差异有显著性(P<0.05)。ERK1和ERK2在高、中、低分化乳腺癌中无显著差异,与乳腺癌病理类型无关。结论:ERK的过度表达在乳腺癌的发生发展及淋巴结转移中起重要作用。     

细胞外信号调节激酶及其不同作用

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated pro tein kinase, MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一,参与介导生长、发育、分裂、分化、死亡以及细胞间的功能、同步等多种细胞过程,普遍存在于多种生物,包括酵母和哺乳动物细胞。MAPK家族本身又是蛋白激酶级联反应的下游激酶,是多条信号通路的汇总点。迄今为止已发现 MAPK 家族有4个成员:(1)细胞外信号调节激酶(extrallular sig nal regulated protein kinase, ERK),又称为P42/44MAPK; (2) c Jun氨基末端激酶(c Jun N terminalkinase, JNK),又称为应激激活蛋白激酶( stressacti…     

细胞外信号调节激酶在人纤维化肝组织中的表达

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)在人纤维化肝组织中的表达及其与肝纤维化发生的相关性。方法:收集肝手术标本(纤维化肝组织和远癌的纤维化肝组织,以正常的肝组织做对照),以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测正常肝和不同程度纤维化肝组织中ERK的表达情况,对结果进行统计分析。结果:人肝纤维化的发生发展过程中,ERK的表达增加。结论:ERK参与并介导其中的RAS/RAF/MEK/ERK信号通路,可能与肝纤维化的发生密切相关。     

糖尿病大鼠脑内微血管细胞外信号调节激酶磷酸化的研究

目的研究链脲佐菌素诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠脑膜、脑实质微血管的病理改变及其中细胞外信号调节激酶ERK1/2及其下游作用底物转录因子Elk-1的磷酸化状态,探讨糖尿病血管的发病机制。方法应用链脲佐菌素制备Ⅰ型糖尿病大鼠模型,HE染色观察制模后3d和2、4、8周脑膜、脑实质微血管病变,免疫组织化学观察高血糖状态下脑内微血管中p-ERK1/2及下游作用底物p-ELK1的表达情况。结果 p-ERK1/2、p-ELK1在各时间点正常对照组和糖尿病组大鼠脑膜、脑实质微血管中均有不同程度的表达。p-ERK1/2在糖尿病4、8周组脑膜、脑实质微血管中表达均明显上调;p-ELK1在糖尿病4、8周组脑膜、脑实质微血管内皮细胞中表达均明显的上调(P<0.05),分别与糖尿病3d、2周组及各期正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。糖尿病各组与正常对照组各组脑膜微血管平滑肌细胞中p-ELK1的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论在糖尿病4、8周组SD大鼠脑内微血管中存在ERK1/2信号转导通路的异常激活。     

细胞外信号调节激酶-2在结肠癌中的表达及临床意义

目的研究细胞外信号调节激酶-2（ERK-2）在结肠癌组织中的表达及临床意义。方法选取山东省临朐县人民医院2008年1月~2010年12月经手术病理证实的结肠癌患者79例,采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶（streptavidin-peroxidase,SP）法检测正常结肠组织、癌旁组织和结肠癌组织中ERK-2蛋白阳性表达情况;分析ERK-2蛋白表达与结肠癌临床病理特征及预后的关系。结果①结肠癌组织中ERK-2蛋白阳性表达率[75.9%（60/79）]高于癌旁组织[51.9%（41/79）]及正常组织[13.9%（11/79）],差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。②ERK-2蛋白阳性表达率在不同年龄（〈60岁、≥60岁）[77.5%（31/40）、74.4%（29/39）]、性别（男/女）[70.7%（29/41）、68.4%（26/38）]、Dukes分期（A、B、C、D期）[73.3%（11/15）、76.7%（23/30）、71.4%（10/14）、70.0%（14/20）]、癌胚抗原水平（〈5μg/L、≥5μg/L）[68.2%（15/22）、64.9%（37/57）]因素间进行比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;ERK-2蛋白阳性表达率在不同分化程度（高、中分化/低分化）[82.8%（48/58）、57.1%（12/21）]、浸润深度（未穿透肌层/浆膜或浆膜外）[46.2%（6/13）、72.7%（48/66）]和淋巴结转移（阳性/阴性）[76.5%（26/34）、53.3%（24/45）]因素间比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。③ERK-2蛋白阳性表达患者12个月生存率（58.2%）与ERK-2蛋白阴性表达患者（60.4%）比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;ERK-2蛋白阳性表达患者24个月生存率（38.7%）低于ERK-2蛋白阴性表达患者（58.6%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ERK-2蛋白阳性表达与结肠癌多种临床病理因素有关,检测ERK-2蛋白对结肠癌的诊疗有一定意义。     

细胞外信号调节激酶蛋白在肺癌中的表达及意义

目的：检测细胞外信号调节激酶（ERK）在人肺癌和肺良性病变组织中的表达,探讨ERK蛋白与肺癌的组织类型、分化程度和淋巴结转移的关系。方法：选取77例肺癌标本和20例肺良性病变的组织,通过常规石蜡包埋行免疫组织化学染色,检测ERK2蛋白表达。结果：肺癌组和对照组ERK2蛋白表达的阳性率分别为51.9%和20.0%,两组间具有显著性差异（P〈0.05）。ERK2蛋白表达在肺癌不同病理类型即鳞癌和腺癌中无显著性差异（P〉0.05）。在高分化、中分化和低分化肺癌之间比较,ERK2表达阳性率有显著性差异（P〈0.05）。ERK2在有无淋巴结转移中有显著性差异（P〈0.05）。结论：肺癌组织中存在ERK2蛋白的高表达;ERK2蛋白的高表达与肺癌组织类型无关,而与分化程度和淋巴结转移有密切关系。因此,ERK2的表达与肺癌发生及发展的生物学行为和预后可能有关。     

乳腺癌中细胞外信号调节激酶-2磷酸化表达的意义

目的探讨乳腺癌中细胞外信号调节激酶磷酸化表达及其意义。方法采用免疫组织化学和Western blot技术检测乳腺腺病、乳腺纤维腺瘤、原发性乳腺癌病灶中磷酸化细胞外信号调节激酶-2(extracellular signal-reg- ulated kinase 2,ERK2)表达情况。结果免疫组化检测在乳腺腺病、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌中磷酸化ERK2蛋白阳性率分别为38.10%(8/21)、66.67%(14/21)、87.50%(84/96),磷酸化ERK2蛋白表达在三种疾病之间有统计学意义(χ~3=25.044,P=0.000);Western blot技术检测乳腺腺病、乳腺纤维腺瘤、乳腺原位癌、乳腺浸润性癌中磷酸化ERK2蛋白表达的平均OD值分别为0.655、0.818、0.882、0.933,乳腺癌中磷酸化ERK2表达量明显高于良性病变,结果与免疫组化检测结果一致;乳腺癌ERK2蛋白表达情况在不同年龄段有统计学意义(χ~2=5.677,P=0.017);乳腺癌ERK2蛋白表达与乳腺癌病理组织学类型、临床分期、生存率无显著相关性。结论在乳腺癌中ERK2磷酸化增强与癌细胞生长活性增加有关,ERK2在判断乳腺良恶性疾病时具有辅助价值。     

高血压大鼠血管平滑肌细胞中细胞外信号调节激酶和c-jun及凋亡相关基因的表达

目的:探讨血管平滑肌细胞(VSMC)在高血压中的作用及其机制。方法:Wis-tar大鼠两肾一夹型高血压模型,采用免疫组织化学方法,观察肾细小动脉平滑肌细胞中ERK-2、c-jun和bax及bcl-6表达。结果:实验期间,高血压大鼠血压从112±18mmHg升高到实验结束时的198±33mmHg;高血压组肾小叶间动脉ERK-2染色阳性率(16.86%)明显高于对照组(P<0.01),入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉VSMC中ERK-2染色阳性率均明显高于对照组(P<0.01);高血压组入球动脉、小叶间动脉和弓形动脉VSMC中c-jun的阳性率明显高于对照组(P<0.01);高血压组肾弓形动脉及叶间动脉VSMC中bax染色阳性率均明显低于对照组(P<0.01);高血压组肾小叶间动脉bcl-6染色阳性率(12.96%)明显高于对照组(P<0.01),入球动脉、小叶间动脉VSMC中bcl-6阳性率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:两肾一夹型高血压时,少数肾小动脉血管平滑肌细胞ERK-2过表达,使得转录相关基因c-jun等活化,凋亡基因抑制,最终使VSMC增多导致血管重构。     

ERK1／2信号蛋白在单侧尿路梗阻大鼠肾组织中的表达

目的：探讨单侧尿路梗阻（UUO）模型大鼠。肾组织细胞外信号调节激酶（ERKI／2）的表达及意义。方法：42只SD大鼠随机分为模型组和假手术组。模型组采用UUO术，术后1，3，7，14，21d和28d处死动物取肾组织，观察肾组织病理改变；用免疫组化法测定肾组织TGF—β1、磷酸化ERK1／2和CollagenⅠ表达。结果：病理结果显示，UUO3d肾小管上皮细胞肿胀、肾间质炎症细胞浸润；UUO14d肾组织大量炎症细胞浸润和纤维组织增生，28d肾小管结构基本破坏，纤维组织弥漫增生。免疫组化显示，正常肾组织有基础TGF—β1、磷酸化ERK1／2和CollagenⅠ的表达。UUO3dTGF—B1增加明显，7d达高峰，此后表达减少；磷酸化ERK1／2的表达在UUO术后3d明显增加，并持续增加到第7d，此后表达减少；而UUO术后3d肾组织CollagenⅠ表达亦明显升高，并持续增加到28d。模型组肾组织TGF—β1、磷酸化ERK1／2的表达时相一致并呈明显正相关，并与肾间质CollagenⅠ的积聚密切相关。结论：磷酸化ERK1／2信号蛋白在单侧尿路梗阻大鼠肾组织中的表达明显增高．可能在梗阻性肾病肾间质纤维化过程中起首要作用．     

ERK1/2信号蛋白在单侧尿路梗阻大鼠肾组织中的表达

目的:探讨单侧尿路梗阻(UUO)模型大鼠肾组织细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的表达及意义。方法:42只SD大鼠随机分为模型组和假手术组。模型组采用UUO术,术后1,3,7,14,21 d和28 d处死动物取肾组织,观察肾组织病理改变;用免疫组化法测定肾组织TGF-β1、磷酸化ERK1/2和CollagenⅠ表达。结果:病理结果显示,UUO 3 d肾小管上皮细胞肿胀、肾间质炎症细胞浸润;UUO 14 d肾组织大量炎症细胞浸润和纤维组织增生,28 d肾小管结构基本破坏,纤维组织弥漫增生。免疫组化显示,正常肾组织有基础TGF-β1、磷酸化ERK1/2和CollagenⅠ的表达。UUO3 d TGF-β1增加明显,7 d达高峰,此后表达减少;磷酸化ERK1/2的表达在UUO术后3 d明显增加,并持续增加到第7 d,此后表达减少;而UUO术后3 d肾组织CollagenⅠ表达亦明显升高,并持续增加到28 d。模型组肾组织TGF-β1、磷酸化ERK1/2的表达时相一致并呈明显正相关,并与肾间质CollagenⅠ的积聚密切相关。结论:磷酸化ERK1/2信号蛋白在单侧尿路梗阻大鼠肾组织中的表达明显增高,可能在梗阻性肾病肾间质纤维化过程中起重要作用。     

糖皮质激素受体通过细胞外信号调节激酶途径参与吗啡耐受机制

目的 探讨糖皮质激素受体参与吗啡耐受形成的机制及细胞外信号调节激酶(ERK)信号途径在其中的作用.方法 将40只健康雄性SD大鼠行鞘内置管后随机分为4组(n=10),盐水对照组(C组)鞘内注射生理盐水lOμl;慢性吗啡耐受组(M组)鞘内注射吗啡10μg;糖皮质激素受体拮抗剂组(MR组)鞘内注射吗啡10μg,再注射糖皮质激素受体拮抗剂RU38486 2μg;糖皮质激素受体激动剂组(MD组)鞘内注射吗啡10μg,再注射糖皮质激素受体激动剂地塞米松4μg,鞘内注射每种药物均为2次/d,连续7 d.采用甩尾实验评价大鼠热痛觉,于给药后第8天取出腰膨大处脊髓分别进行Western印迹检测μ阿片受体(MOR)、糖皮质激素受体(GR)、磷酸化ERK(pERK)蛋白表达及TUNEL染色.结果 地塞米松和RU38486分别对吗啡耐受诱导的热痛敏具有促进和抑制作用.与M组(凋亡细胞数5.4±1.1,蛋白表达MOR 37±5,GR 20±6,pERK1 39±4,pERK2 41±5)比较,MR组凋亡细胞数(3.2±0.4)显著少(P<0.01);MD组(16.0±1.6)显著多(P<0.01);MR组MOR(28±5)、GR(12±6)、pERK1(33±4)、pERK2(34±5)蛋白表达均下调(均P<0.01);MD组MOR(55±6)、GR(28±9)、pERKl(49±6)、pERK2(59±5)蛋白表达均上调(均P<0.01).结论 糖皮质激素受体的活性可影响吗啡诱导的脊髓神经凋亡及吗啡耐受中脊髓pERK的表达.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of glucocorticoid receptors(GR)participating in morphine tolerance development via the extracellular signal-regulated kinase(ERK)signal pathway.Methods Forty healthy male SD rats were implanted with intrathecal catheters and then randomized into 4 groups:Group C received an intrathecal injection of 10 μl saline,Group M 10μg morphine,Group MR 10μg morphine followed by 2μg GR antagonist RU38486 and Group MD 10μg morphine followed by 4μg GR agonist dexamethasone(DEX)respectively.Each intrathecal drug was administered twice daily for 7 days.Tail-flick test was employed to evaluate the thermal hyperalgesia.After tail-flick test at Day 8,the lumbar intumescentias were isolated by Western blot to examine the protein expressions of Mu opioid receptor(MOR).GR and pERK.And terminal deoxynucleotidyl transferase mediated X-dUTP nick end labeling(TUNEL)stain was performed.Results DEX and RU38486 enhanced and inhibited morphine induced hyperalgesia to heat respectively.Compared with Group M(count of spinal dorsal horn apoptotic cells 5.4±1.1,protein expression:MOR 37±5,GR 20±6,pERK1 39±4,pERK2 41±5),apoptotic cells decreased in Group MR(3.2±0.4)(P<0.01)and increased in Group MD (16.0±1.6)(P<0.01);the protein expressions of MOR(28±5),GR(12±6),pERK1(33±4)and pERK2(34±5)were down-regulated in Group MR(P<0.01)while up-regulated in Group MD(55±6,28±9,49±6,59±5)(P<0.01).Conclusion The activity of glucocorticoid receptors affects the morphine-induced spinal neural apoptosis and the expression of spinal pERK in morphine tolerance.     

流体切应力对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨流体切应力（SS）对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）形态学影响。方法运用倒置相差显微镜和免疫组化ABC方法对VSMC进行鉴定，采用荧光显微镜和TuNEL—AP方法观察其变化。结果组织块贴壁法培养的VSMC呈典型的长梭形，α—actin染色显示95％以上VSMC呈阳性；SS强度分别为1．041、4．767和10．389dyne／cm^2冲击VSMC12h其凋亡百分率分别为（1．56±0．28）％、（1、95±0．23）％和（2、62±0．49）％，而对照组分别为（0、61±0．12）％、（0．55±0．16）％和（0、64±0．24）％，两组比较差异有统计学意义（P〈0.01），随着冲击时间的延长凋亡细胞有进一步增多的趋势。结论VSMC大量凋亡可由SS所诱导，颅内动脉瘤组织内VSMC过度凋亡可能与局部升高的SS密切相关。     

Gal-3通过ERK1/2通路诱导血管平滑肌细胞增殖促进大鼠动静脉内瘘狭窄发生的机制

目的 探讨半乳糖凝集素-3(Gal-3)诱导血管平滑肌细胞增殖及促进大鼠动静脉内瘘(AVF)狭窄发生的作用,并探讨可能机制。方法 取30只AVF大鼠,随机数字法分为AVF组、柑橘果胶组、联合组,每组10只;另取10只大鼠行假手术,设为假手术组。联合组灌胃柑橘果胶生理盐水溶液(含柑橘果胶0.15 mg/kg),尾静脉注射表皮生长因子[细胞外信号调节激酶(ERK)通路激动剂(EGF)](10μg/kg);柑桔果胶组灌胃柑橘果胶生理盐水溶液(0.15 mg/kg),尾静脉注射等体积PBS;假手术组、AVF组灌胃等量生理盐水,尾静脉注射等体积PBS。每日1次。干预4周。MTT法检测血管平滑肌细胞增殖能力;ELISA法检测血清炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)]水平;ELISA法检测血管组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平;Western blot法检测血管组织p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、p-p38 MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达量。结果 与AVF组比较,柑橘果胶组24、48、72 h吸光度值,血清...     

中药对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用的研究

犤目的犦研究中药抑制血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖的作用和机制。犤方法犦采用3H-TdR(氚胸腺苷)掺入和外源性c-juncDNA在血管平滑肌细胞中表达的方法,观察血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖变化。犤结果犦与对照血清+内皮素组(cpm2534.54±54.22/105细胞)相比,中药血清+内皮素组(cpm1104.33±37.31/105细胞)血管平滑肌细胞3H-TdR掺入量有显著下降(P<0.01),而且血管平滑肌细胞原癌基因的c-junmRNA表达也较弱。犤结论犦本实验表明复方丹参对血管平滑肌细胞增殖及其原癌基因c-junmRNA的表达有明显的抑制作用。     

直肠癌组织中细胞外信号调节激酶的表达与临床病理特征的相关性

目的　检测细胞外信号调节激酶ERK - 1和ERK - 2在不同临床病理时期直肠癌组织中的蛋白表达水平 ,研究它们在直肠癌发生发展中的意义及其与转移的关系。方法　采用蛋白印迹法检测 86例不同临床病理时期直肠癌组织中ERK - 1和ERK - 2蛋白的表达情况 ,分析ERK - 1和ERK - 2在不同临床分期直肠癌中的表达差异 ,并对有无转移直肠癌的ERK - 1和ERK - 2蛋白表达水平进行对比。结果　直肠癌中ERK - 1和ERK - 2的蛋白表达水平高于正常肠黏膜 ,随着直肠癌病期的发展 ,ERK - 1和ERK - 2的蛋白表达水平逐渐增高 ,即D >C >B >A ;有淋巴结或者肝转移的直肠癌 ,ERK - 1和ERK - 2的蛋白表达水平较高。结论　ERK - 1和ERK - 2在直肠癌中呈现高表达 ,随着直肠癌的发展其表达水平逐渐增高 ,ERK可能成为判断直肠癌临床病期和预测直肠癌预后的良好指标。