多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺类相关耐药基因研究

目的 调查我院2005年临床分离多重耐药铜绿假单胞菌（PA）的耐药性分析并探讨其耐药基因的存在状况。方法对31株临床分离的铜绿假单胞菌用纸片扩散法检测其药敏表型，采用聚合酶链反应（PCR）法检测β-内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白OprD2基因，并与相关药敏表型比较。结果31株铜绿假单胞菌对16种抗菌药物的耐药率为48．4％～100％；β-内酰胺酶编码基因PER、VIM、CARB、IMP、TEM、OXA-10的检出率分别为6．4％、3．2％、3．2％、3．2％、3．2％、3．2％，未检出GES、SHV、VER基因，31株外膜通道蛋白OprD2基因缺失，检出率为100％。结论本院多重耐药铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素的耐药主要与外膜通道蛋白OprD2基因缺失有关。     

儿童感染产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞茵耐药分析

目的：了解我院患儿感染产金属p内酰胺酶铜绿假单胞菌的情况并分析其耐药性。方法：标本纯培养后采用法国梅里埃公司的VITEK-2细菌鉴定系统鉴定到种，协同法检测铜绿假单胞菌产生金属8内酰胺酶的发生率，KB法测定铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性。结果：分离的198株铜绿假单胞菌检出36株产金属β-内酰胺酶，占18．18％（36／198）。产酶株对哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、左氧氟沙星的耐药率较高（远远高于不产酶菌株），对阿米卡星的耐药率相对较低，对头孢哌酮／舒巴坦、头孢吡肟、环丙沙星部分敏感。结论：产金属β-内酰胺酶是我院患儿感染的铜绿假单胞菌对碳青霉烯孢类抗菌药物耐药的机制之一，实验室重视对金属β-内酰胺酶的检测可帮助临床合理选用抗菌药物并减少细菌耐药性的传播。     

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶基因检测及其与整合子的关系研究

目的 了解临床分离铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特征;调查金属β-内酰胺酶在铜绿假单胞菌的流行状况和基因型以及与整合子之间的关系.方法 收集广东省4家三甲医院临床分离的铜绿假单胞菌,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验;双纸片协同法和增效法筛选金属β-内酰胺酶表型阳性菌株;设计合成金属β-内酰胺酶和整合子的引物序列进行PCR扩增和测序分析,检测金属β-内酰胺酶基因型并分析其与整合子之间的关系.结果 287株铜绿假单胞菌对11种抗生素的耐药率分别为:亚胺培南(33.80％),美罗培南(33.45％)、头孢他啶(27.87％)、头孢吡肟(36.24％)、庆大霉素(45.30％)、阿米卡星(36.94％)、环丙沙星(33.10％)、左氧氟沙星(37.63％)、氨曲南(47.39％)、哌拉西林(35.19％)、哌拉西林/三唑巴坦(28.57％);多重耐药菌占34.84％(100/287),泛耐药菌株占9.41％(27/287);共有9株铜绿假单胞菌呈金属β-内酰胺酶表型阳性,其中2株产IMP-9型MBL,1株产IMP-25型MBL,4株产VIM-2型MBL;有8株金属β-内酰胺酶表型阳性菌株携带了Ⅰ类整合子,但只有2株成功扩出可变区,其中1株携带了IMP-9基因.结论 铜绿假单胞菌耐药情况严重,本地区铜绿假单胞菌中MBLs的基因型以IMP-9、IMP-25和VIM-2为主;MBLs的基因环境较为复杂,部分MBLs为整合子所携带.     

我院临床分离的26株铜绿假单胞菌耐药性及其所产β-内酰胺酶的基因型分析

目的:了解我院临床分离的铜绿假单胞菌的耐药性及其所产β-内酰胺酶的基因型。方法:采用VITEK32型全自动细菌鉴定仪对临床分离的26株铜绿假单胞菌进行细菌鉴定,采用琼脂扩散法检测其对16种常用抗菌药物的耐药性,采用聚合酶链反应法对其进行基因检测,靶基因为TEM、SHV、OXA、PER、VEB、GES、CTX-M-1等7种β-内酰胺酶基因,然后对检测的阳性产物进行测序,并对照GenBankDNA序列数据库确定基因类型。结果:26株细菌均鉴定为铜绿假单胞菌,耐药性分析结果表明其对其中12种常用抗菌药物有不同程度的耐药性,通过基因对照确定26株铜绿假单胞菌所产的β-内酰胺酶均为TEM-1型基因。结论:本组26株铜绿假单胞菌所产β-内酰胺酶可能主要为TEM-1型基因,具有多重耐药性。     

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因检测

目的:了解铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶基因类型,指导临床合理用药。方法:琼脂稀释法测定12种抗生素对临床分离70株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度;筛选出20株多重耐药菌,三维试验检测产ESBLs和AmpC酶的情况;用聚合酶链反应(PCR)法检测β-内酰胺酶基因并进行测序分析。结果:铜绿假单胞菌对亚胺培南、阿米卡星和环丙沙星的敏感率较高;6株菌产AmpC酶,2株菌产ESBLs;PCR检测出4株菌产TEM酶,经测序2株产TEM-1型,一株产TEM-29型,另一株产酶与TEM-29比较有1处氨基酸的改变,命名为TEM-147;未检出SHV、OXA、PER和VEB型β-内酰胺酶基因。结论:必须重视铜绿假单胞菌ESBLs的检测,对于该菌引起的感染采用碳青霉烯类、阿米卡星或环丙沙星治疗是较好的选择。     

93株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶检出情况及药敏分析

目的：了解铜绿假单胞菌对多种抗生素的耐药情况。为临床对由铜绿假单胞菌引起的感染的治疗提供依据．方法：对从临床不同感染部位标本中分离到的93株铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶的检测及药敏测定。并对检测结果进行分析．结果：93株铜绿假单胞菌对所测试的11种抗生素耐5种以上的有36株。占38．7％。其中p内酰胺酶阳性的30株，占32．4％。β-内酰胺酶阴性的有6株。占6．3％。结论：产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的耐药性更加严重。目前治疗铜绿假单胞菌的感染可首选亚胺培南。其次为阿米卡星和头孢他啶。     

铜绿假单胞菌产诱导型β-内酰胺酶检测及其对20种抗生素的耐药分析

目的 了解本地区铜绿假单胞菌临床分离株产诱导型β-内酰胺酶的情况及其耐药性。方法 采用美国DADE产MicroScan AutoScan—4型微生物分析仪及其NC21鉴定板检测128株铜绿假单胞菌对20种抗生素的敏感性，用符合NCCLS标准的Version 22分析软件对128株铜绿假单胞菌产诱导β-内酰胺酶情况进行分析。结果 (1)铜绿假单胞菌对头孢他啶、哌拉西林／三唑巴坦、环丙沙星、阿米卡星、头孢吡肟、亚胺培南的敏感性高达62．6％—80．0％之间，妥布霉素、哌拉西林、庆大霉素次之，而其他头孢菌素敏感性低下；(2)128株铜绿假单胞菌产β-内酰胺两者115株(89.8％)，在产诱导型β-内酰胺酶菌株中，哌拉西林／三唑巴坦、头孢他啶、哌拉西林、氨曲南诱导铜绿假单胞菌产诱导型β-内酰胺酶的出现率为64．3％—86．1％；(3)产诱导型β-内酰胺两株对哌拉西林／三唑巴坦、阿米卡星、头孢吡肟、头孢他啶、环丙沙星、妥布霉素等抗生素的敏感性显著高于不产诱导型β-内酰胺酶株，而氨苄西林／舒巴坦、SMZ／TMP的敏感性则完全相反(P＜0．05或0．005)。结论 本地区抗生素诱导铜绿假单胞菌产诱导型β-内酰胺酶率较高，哌拉西林／三唑巴坦、头孢他啶、哌拉西林、氨曲南是强诱导剂，对于产酶菌株可选择环丙沙星、阿米卡星或联合使用耐酶的抗生素。     

赣南地区耐碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌耐药基因检测结果及其对药物的耐药性分析

目的:探究和分析赣南地区耐碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌耐药的基因检测结果及其对抗菌药物的耐药性。方法:抽取2017年8月—2018年8月间赣南地区4所综合性医院中分离出的耐碳青霉烯类药物的铜绿假单胞菌80株,同时应用K-B法对80株耐碳青霉烯类药物的铜绿假单胞菌开展药敏试验,并应用PCR法对耐碳青霉烯类药物的铜绿假单胞菌耐药的基因检测,分析其基因检测结果及其对抗菌药物的耐药性。结果:80株耐碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌菌株中,69株检出携带碳青霉烯酶基因,其检出率为86.25%,其中NMD型17株占24.64%,IMP型31株占44.93%,KPC型9株占13.04%,VIM型12株占17.39%;另有NMD型合并IMP型1株(1.25%);80株中膜孔蛋白基因OprD2全部缺失;除69株检出携带碳青霉烯酶基因外,其余11株均未检出SPM型金属酶、GIM型金属酶。结论:产碳青霉烯酶在铜绿假单胞菌碳青霉烯类耐药中具有重要意义,NMD酶、IMP酶、KPC酶、VIM酶基因为赣南地区碳青霉烯类药物铜绿假单胞菌耐药的主要基因类型。     

铜绿假单胞菌多重耐药株β-内酰胺酶的检测与分析

目的 了解临床铜绿假单胞菌对14种抗生素的耐药情况,对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶检测,为临床合理使用抗生素提供参考.方法 236株铜绿假单胞菌采用K-B法进行药敏实验,筛选多重耐药铜绿假单胞菌后,再进行改良三维实验对多重耐药菌所产β-内酰胺酶进行分析.结果 在体外药敏实验中,铜绿假单胞菌对临床常用14种抗假单胞菌药物均存在不同程度耐药现象,氨基糖苷类及喹诺酮类抗生素显示出较高的敏感性,分别为环丙沙星(60.6%)、加替沙星(58.1%)、阿米卡星(43.6%)、左氧氟沙星(53.4%);其次是亚胺培南(56.4%)、头孢他啶(49.2%)、头孢哌酮/舒巴坦(40.7%).三维实验结果显示,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌8株(25.0%),产头孢菌素酶(AmpC酶)菌7株(21.8%),同时产ESBLs+AmpC酶菌4株(12.5%).乙二胺四乙酸(EDTA)协同实验检测产金属酶菌5株(15.6%).结论 产ESBLs、高产AmpCβ2内酰胺酶和(或)碳青酶烯酶是本院多重耐药铜绿假单菌主要耐药机制.     

国内9家医院铜绿假单胞菌消毒剂-磺胺耐药基因的研究

目的调查临床分离铜绿假单胞菌消毒剂-磺胺耐药基因qacE△1-sulI的存在情况。方法收集国内9家医院临床分离的311株铜绿假单胞菌,采用PCR法检测qacE△1-sulI基因。结果311株铜绿假单胞菌196株检出qacE△1-sulI基因,总检出率为63.0%。9家医院铜绿假单胞菌qacE△1-sulI基因检出率有较大差异。结论9家医院临床分离铜绿假单胞消毒剂-磺胺耐药基因qacE△1-sulI携带率高。     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的金属β-内酰胺酶检测

目的:了解金属β-内酰胺酶在广州地区铜绿假单胞菌中的流行状况及其流行亚型,完善广州地区金属β-内酰胺酶的分子流行病学资料.方法:采用双纸片协同法和双纸片增效法对164株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌筛选金属β-内酰胺酶表型阳性的菌株,采用PCR检测5类金属β-内酰胺酶的编码基因(IMP家族、VIM家族、GIM-1、SPM-1和SIM-1),利用生物信息学的方法对检测到的金属β-内酰胺酶亚型进行比对分析并制作分子进化树.结果:164株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中筛选出22株金属β-内酰胺酶表型阳性的菌株,IMP阳性15株(9.1%),其中11株为IMP-9亚型,另外4株携带一个新的亚型,命名为IMP.25,VIMI阳性5株(3.0%),均为VIM-2亚型,未检测到GIM-1、SPM-1和SIM-1型金属β-内酰胺酶.结论:广州地区铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的基因型已经出现多型化的特征,同时存在IMP型和VIM型金属β-内酰胺酶的流行,本次研究发现了一个新的金属β-内酰胺酶亚型(IMP-25),为IMP家族金属p.内酰胺酶的多样性及其分子流行病学资料提供了新的信息.     

铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性分析及机制探讨

目的:研究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及其机制。方法:取痰液中培养分离的铜绿假单胞菌55株,经K-B法检测耐药性。采用外膜蛋白图谱,对其外膜蛋白OprD2进行SDS-PAGE分析,双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶。结果:根据耐药性分为铜绿假单胞菌亚胺培南菌耐药36株和敏感19株。铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株不同程度OprD2减少,耐药组OprD2相对含量明显低于敏感组(P<0.01);产金属β-内酰胺酶6株,检出率10.9%。结论:OprD2的减少和产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。     

某三甲医院呼吸科铜绿假单胞菌耐药性及流行病学 10年间变化

目的 探讨成都医学院第一附属医院10年间呼吸科铜绿假单胞菌的耐药性和流行病学变化特征.方法 收集2007—2008年和2017—2018年间成都医学院第一附属医院呼吸科住院病人临床标本分离出的铜绿假单胞菌,采用琼脂平板倍比稀释法测定抗菌药物对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度,多位点序列分型分析菌株的基因型差异,PCR扩增测定菌株的碳青霉烯酶基因.结果 2007—2008年和2017—2018年间从呼吸科住院病人分别收集134株和85株铜绿假单胞菌,其检出率为4.3％和2.0％.2007—2008年间铜绿假单胞菌对抗菌药物普遍耐药,高于2017—2018年间菌株的耐药率(P<0.01).MLST结果 显示2007—2008年间菌株具有15个基因型,2017—2018年间菌株具有9个基因型,其中ST235、ST111和ST175为最流行的基因型,菌株的基因型10年间没有明显变化.2007—2008年间共有14株耐碳青霉烯铜绿假单胞菌携带金属β-内酰胺酶基因IMP-4,5株携带金属β-内酰胺酶基因VIM-2,而2017—2018年间仅2株菌携带IMP-4基因,无其他金属酶基因存在.结论 该院呼吸科铜绿假单胞菌耐药性具有明显下降的趋势,MLST基因型谱稳定遗传,且IMP和VIM仍是铜绿假单胞菌的一个重要耐药机制.     

老年肺部感染中尉和铜绿假单胞菌血清学分型及对抗生素的敏…

对老年肺部感染患者呼吸道分泌物分离的６８株铜绿假单力进行了分型鉴定。６８株铜绿假单胞菌以６、２、１１、１９和１型为主，占分型菌株的７３．５％，同时我们还进行了铜绿假单胞菌对１５种抗生素的敏感怀测定。老年肺部感染患者铜绿假单胞菌对环丙沙星的敏感率为８６．７％，对多粘菌素Ｂ的敏感率为８３．８％，对氨苄西林的耐药率最高为９７．１％，对其它１２种抗和素有不同的敏感性。本结果对老年肺部感染患者铜绿假单胞菌的     

铜绿假单胞菌DHA-1型AmpC酶的检测及耐药性分析

目的调查临床分离铜绿假单胞菌ESBLs、AmpC酶的产生、AmpC酶的基因型及对常用抗菌药物的耐药特征。方法采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌;ESBLs检测及药敏试验按CLSI推荐的双纸片确证法和K-B纸片扩散法;AmpC酶检测采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产阳性菌株,再经三维试验确诊;PCR扩增DHA结构基因。结果铜绿假单胞菌产ESBLs和AmpC酶总检出率分别为40.8%和38.2%,其中,单产AmpC酶、单产ESBLs和同产AmpC酶+ESBLs检出率分别为19.7%、26.3%和14.5%;26株三维试验阳性菌株PCR扩增出23株DHA-1型酶基因;药敏试验显示:产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同产AmpC酶和ESBLs菌株中更为严重,产酶株和非产酶株对亚胺培南均有较高的敏感性。结论临床分离的铜绿假单胞菌产ESBLs和AmpC酶菌株检出率较高;AmpC酶基因型以DHA-1型为主要流行株;产AmpC酶和ESBLs的菌株呈高度耐药。     

中重度AECOPD感染铜绿假单胞菌的耐药表型及基因型分析

目的 探讨中重度慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)感染铜绿假单胞菌耐药现状.方法 AECOPD患者105例,经呼吸道分泌物分离出铜绿假单胞菌21株,体外采用K-B法测定对14种抗生素的药敏结果.用PCR法检测14种耐药基因,分析铜绿假单胞菌的耐药表型和基因型.结果 21株铜绿假单胞菌对抗生素的耐药率:头孢曲松80.9％,头孢他啶76.2％,头孢吡肟66.7％,亚胺培南14.4％.21株铜绿假单胞菌中,blaTEM、blaSHV、blaOXA-10、blaPER、blaDHA阳性率分别为28.6％、21.4％、14.2％、42.8％、7.1％,而blaVEB、blaCTX-M、blaIMP、blaVIM、blaGIM、blaSPM均为阴性,oprD2基因缺失率为7.2％,ant(3″)Ⅰ,aac(6′)-Ⅱ阳性率分别为35.7％,36.8％.结论 中重度AECOPD分离的铜绿假单胞菌携带多种耐药基因,耐药基因主要与β-内酰胺类基因blaTEM、blaSHV、blaPER、blaOXA-10有关.     

186株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶检测及药敏分析

目的:了解铜绿假单胞菌对抗生素的耐药情况,为临床治疗提供依据。方法:收集临床不同感染部位标本中分离到的186株铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶的检测及药敏测定结果分析。结果:186株铜绿假单胞菌对所测试的11种抗生素耐药5种以上的有72株,占38.7%,其中β-内酰胺酶阳性的60株,占32.4%,β-内酰胺酶阴性的有12株,占6.3%。结论:产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的耐药性更加严重,目前亚胺培南是治疗铜绿假单胞菌感染的首选药物,其次是丁胺卡那和头孢他啶。     

肺部感染患者铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性分析

本通过肺部感染患呼吸道分泌物分离的54株铜绿假单胞菌，对14种抗生素敏感性测定表明，肺部感染患铜绿假单胞菌对环丙沙星敏感率为85．2％，对多粘菌素B的敏感率为81．5％；对氨苄两林的耐药率最高为96．3％，对其它11种抗生素有不同的敏感性。这对肺部感染患铜绿假单胞菌的流行病学调查以及临床治疗的药物选择具有重要意义。     

铜绿假单胞菌中Ⅰ类整合子及携带的耐药基因研究

目的 了解整合子在广州地区铜绿假单胞菌中的分布状况及其主要类型,研究Ⅰ类整合子的结构特征并探讨其与细菌多重耐药之间的相关性.方法 采用PCR检测3类整合子整合酶的编码基因,并扩增整合子的可变区,运用DNA测序技术分析整合子可变区的耐药基因及其排列顺序,利用生物信息学的方法对检测到的可变区基因序列进行比对分析.结果 在20株产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌中,15株检测到Ⅰ类整合子,未检测到Ⅱ类和Ⅲ类整合子,其中一株铜绿假单胞菌整合子全长序列含有Ⅰ类整合子整合酶、Aac A4氨基糖甙乙酰转移酶、IMP-25金属β-内酰胺酶、OXA-30 β-内酰胺酶和Cat B3氯霉素乙酰转移酶的编码基因及其相应的基因重组位点,GenBank登录号为EU588392,其中IMP-25为一个新的金属β-内酰胺酶亚型.结论 广州地区铜绿假单胞菌中存在的整合子类型是Ⅰ类整合子,并且该整合子可变区携带多种耐药基因盒,其中一个是金属β-内酰胺酶新亚型IMP-25,在分子水平上阐述了I类整合子参与铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性和多重耐药性.     

铜绿假单胞菌临床感染分布特征及耐药性分析

目的了解川北地区铜绿假单胞菌医院感染分布特征及耐药情况。方法分离自川北医学院附属医院医院感染感染患者各标本的细菌,采用法国生物梅里埃（API）公司生产的BioMerieux VITEK-32全自动细菌鉴定系统对细菌进行鉴定,回顾性分析铜绿假单胞菌的临床分布特征,琼脂稀释法进行药物敏感试验,改良三维试验检测产AmpC和ESBLs菌株,结果用美国临床实验室标准化协会（CSLI）2006公布的标准判定。结果在分离鉴定得到的238株铜绿假单胞菌中,以痰液标本和重症监护病房为主,分别占60．5％和59．7％。238株铜绿假单胞菌对复方磺胺甲噫唑、头孢噻肟、哌拉西林、头孢曲松、替卡西林、替卡西林／克拉维酸、妥布霉素、头孢哌酮、庆大霉素耐药率高,达57．6％495．6％,对其它10种抗菌药物的耐药率较低,在9％-34．8％之间。238株细菌中,检出产酶菌株69株,其中,单产AmpC、单产ESBLs、同产AmpC和ESBLs分别占15．1％,9．7％,4．2％。结论川北地区铜绿假单胞菌以引起危重患者的呼吸道和泌尿道感染为主,且β-内酰胺酶的检出率较高,多重耐药严重。