模拟失重条件下骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞蛋白激酶MEK 1的活性变化

背景：模拟失重条件下，骨形态发生蛋白2诱导的大鼠骨肉瘤成骨样细胞（ROS17／2．8）的Ⅰ型胶原αⅠ链的基因表达下降，而丝裂原激活的蛋白激酶信号传导通路中的蛋白激酶MEK1参与了骨形态发生蛋白2对成骨细胞Ⅰ型胶原αⅠ链mRNA表达的调节过程，但是在模拟失重条件下MEK1的活性如何变化尚不清楚。目的：观察模拟失重条件下由骨形态发生蛋白2诱导的ROS17／2．8细胞中MEK1激酶活性的变化。设计：不完全随机对照的实验。单位：解放军第四军医大学航空航天生物动力学教研室。材料：大鼠骨肉瘤成骨样细胞。方法：实验于2002-08／2003-01在北京航天医学工程研究所航天细胞与分子生物学实验室完成。在地面1G和回转器模拟失重条件下培养ROS17／2．8细胞，培养时间分别为24，48和72h。分为7组：第1组，空白对照组，即1G条件下不加骨形态发生蛋白2培养24h；第2组．1G培养24h；第3组，失重培养24h；第4组，1G培养48h；第5组，失重培养48h；第6组，1G培养72h；第7组，失重培养72h；第2组至第7组均加入骨形态发生蛋白2，培养结束前1h加入骨形态发生蛋白2（500mg／L），1h后提取细胞蛋白，应用Western Blotting法检测MEK1的活性。主要观察指标：观察细胞中的总ERK1／2和磷酸化ERK1／2（p-ERK1／2）的含量。结果：①模拟失重条件下骨形态发生蛋白2诱导后ROS17／2．8细胞的总ERK1／2的表达：各实验组细胞的总ERK1／2蛋白表达量无明显差异：②模拟失重条件下骨形态发生蛋白2诱导后ROS17／2、8细胞的磷酸化ERK1／2的表达：第1组，细胞培养液中不含骨形态发生蛋白2在1G重力条件下培养24h，p-ERK1／2呈低水平表达，第2组，即培养液中加入骨形态发生蛋白2在1G条件下培养24h，p-ERK1／2的表达量明显高于第1组（P〈0．01）。各模拟失重组p-ERK1／2表达量均低于相同时间点1G重力对照组，即第3，5，7组的表达分别低于第2，4，6组（P〈0．01），且随着失重时间延长，第3，5，7组的p-ERK1／2表达量呈逐渐降低的趋势（P〈0．01）。结论：模拟失重条件下骨形态发生蛋白2诱导的成骨细胞丝裂原激活的蛋白激酶信号通路中蛋白激酶MEK1的活性下降。     

骨形态发生蛋白2在骨修复中的应用

目的：回顾分析近年来国内外有关骨形态发生蛋白2在骨修复中应用的研究近况。 资料来源：应用计算机检索Medline1999-01／2005-06相关骨形态发生蛋白2的文献，检索词“bone morphogenetic protein-2．bone tissue engineering，gene therapy”并限定文献语言种类为English。同时计算机检索CNKI中文数据库1999-01／2005-06相关骨形态发生蛋白2的文献，检索词为“骨形态发生蛋白2，骨组织工程，基因治疗”。并限定文献语言种类为中文。 资料选择：对资料进行初审，选出包含研究目的的文献，筛选与目的有关的文献。纳入标准：①骨修复与骨组织工程。②骨形态发生蛋白2。排除标准：①文献中重复研究和综述文章。②Meta分析类文章。资料提炼：共收集到中文文献67篇，英文文献55篇，另有英文摘要近百篇。符合标准的文章15篇。排除的文献多为重复研究或非骨组织工程研究。 资料综合：骨形态发生蛋白2可诱导间充质细胞分化为成骨细胞和成软骨细胞而促进新骨形成，并具有强大的异位成骨作用。载体或基因释放的骨形态发生蛋白2可有效修复骨缺损。骨形态发生蛋白2的基因治疗研究为修复骨缺损提供了新途经。 结论：应用骨形态发生蛋白2修复骨缺损是肯定可行的，但方法有待进一步研究。     

骨形态发生蛋白2在骨修复中的应用

目的:回顾分析近年来国内外有关骨形态发生蛋白2在骨修复中应用的研究近况。资料来源:应用计算机检索Medline1999-01/2005-06相关骨形态发生蛋白2的文献,检索词“bonemorphogeneticprotein-2,bonetissueengineering,genetherapy”并限定文献语言种类为English。同时计算机检索CNKI中文数据库1999-01/2005-06相关骨形态发生蛋白2的文献,检索词为“骨形态发生蛋白2,骨组织工程,基因治疗”,并限定文献语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选出包含研究目的的文献,筛选与目的有关的文献。纳入标准:①骨修复与骨组织工程。②骨形态发生蛋白2。排除标准:①文献中重复研究和综述文章。②Meta分析类文章。资料提炼:共收集到中文文献67篇,英文文献55篇,另有英文摘要近百篇,符合标准的文章15篇。排除的文献多为重复研究或非骨组织工程研究。资料综合:骨形态发生蛋白2可诱导间充质细胞分化为成骨细胞和成软骨细胞而促进新骨形成,并具有强大的异位成骨作用。载体或基因释放的骨形态发生蛋白2可有效修复骨缺损。骨形态发生蛋白2的基因治疗研究为修复骨缺损提供了新途经。结论:应用骨形态发生蛋白2修复骨缺损是肯定可行的,但方法有待进一步研究。     

N-乙酰氨基葡萄糖对骨折修复中成骨细胞活性和骨形态发生蛋白的影响

背景：已证实甲壳质及其衍生物具有免疫凋节、促进伤口愈合、止血笔生物学作用，N-乙酰氨基葡萄糖作为甲壳质的衍生物。是否能够产生声骨折愈合的影响。目的：在骨折修复过程中介入N-乙酰氨基葡萄糖．观察成骨细胞活剥和骨形态发生蛋白的变化。设计：随机对照实验．单位：青岛大学医学院的人体解剖学教研室。材料：实验于2002-03／08在青岛大学医学院神经解剖实验室完成。遄用健康新西兰兔70只，随机分为3组：生理盐水组23只，接骨片组23只，N-乙酰氨基葡萄糖组24只。方法：所有动物均制备右桡骨中段3mm骨缺损模型，模型建立后生弱盐水组给予生理盐水1.00mL／kg，接骨片组给予接骨片1．00mL／kg，N-乙酰氨基葡萄糖组给予N-乙酰氨基葡萄糖0.28g／kg，每天灌胃给药直至取材为止。分别于术后9．17，30，42d进行取材。通过X-线片与苏木精-伊红染色观察各组骨折愈合情况．骨形态发生蛋白的表达采用免疫组织化学法观察。主要观察指标：①各组动物术后大体情况。②术后不同时间各组骨折叠合X线观察结果。③术后不同时间各组骨缺损断端间骨形态发生蛋亡表达的平均吸光度值．④术后不同时间各组组织形态学观察结果、结果：按意向处理分析，实验纳入70只兔均进入结果分析：①术后不忙时间各组骨折愈合评级X线观察结果：术后9，17，30，42dN-乙酰氨孝葡萄糖组骨折愈合程度均高于生理盐水组和接骨片组（P均〈0．05）．键术后不同时间各组骨缺损断端间骨形态发生蛋白表达的平均吸光膳值：与生理盐水组比较，术后9，17d接骨片组与N-乙酰氨基葡萄糖纣骨形态发生蛋白的表达均呈上升趋势，N-乙酰氨基葡萄糖组尤为明蜀（P均〈0.05）：而术后30．42d时骨形态发生蛋白的表达降低。③术定不同时间各组组织形态学观察结果：术后9d．N-乙酰氡基葡萄糖组墙端间隙变小，有比较均匀的骨小梁形成，成骨细胞排列较整齐：生理型水组断端间隙较大，少有或偶有不均匀的骨小梁形成，成骨细胞无或枉少．术后30d，N-乙酰氨基葡萄糖组断端之间全部为骨小梁填充，骨蜃腔骨小梁将要穿通，骨小梁周围成骨细胞排列整齐间有破骨细胞；生型盐水组断端之间大部分为骨小梁，但有中间部分未衔接．断端间软骨缉胞极少。术后42d，N-乙酰氨基葡萄糖组断端处骨板编织骨初始形成骨髓腔贯通。破骨细胞多而活跃，有骨小窝：生理盐水组断端之间充帮骨小梁．但连接线不清，髓腔将要贯通，成骨细胞排列较为整齐，有破骨细胞出现。结论：N-乙酰氨基葡萄糖能够促进骨折的愈合，可能与其促进成骨细Ⅲ活性和早期增加骨形态发生蛋白在骨折愈合中的表达有关。     

Brg1调控重组人骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化

背景:Brg1是依赖ATP的染色质改变复合物的核心催化亚基,该亚基在基因的转录调控、复制、重组,骨骼肌的分化、抑制肿瘤的发生等活动中起着重要的作用.目的:探索Brg1基因在骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化过程中的调控机制.方法:采用胶原酶消化法进行小鼠颅骨成骨细胞的原代培养;分别用0,50,200 μg/L的重组人骨形态发生蛋白2诱导原代培养的成骨细胞的分化,摸索骨形态发生蛋白2的最佳作用剂量;实时荧光定量PCR和Western blot进行骨形态发生蛋白2对Brg1的作用时间的动力学分析;实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测敲除Brg1对骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化的影响;构建Dlx5腺病毒重组表达载体,实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测Brg1在骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化过程中对Dlx5的调控作用.结果与结论:用自行合成的重组人骨形态发生蛋白2可诱导原代培养小鼠成骨细胞分化,200 μg/L剂量有着较好的诱导分化效果;重组人骨形态发生蛋白2可诱导Brg1基因转录水平和翻译水平表达水平上调;敲除Brg1可抑制重组人骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化;Brg1能够调控Dlx5的表达水平.说明Brg1通过调控Dlx5的表达水平调控重组人骨形态发生蛋白2诱导的小鼠成骨细胞的分化.     

补肾中药血清对成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7活性的影响

背景:课题组拟以骨形态发生蛋白作为研究靶点来认识肾虚骨质疏松症的病理机制.目的:体外观察补肾中药血清对SD大鼠成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7活性的影响.方法:采用多次胶原酶消化法体外培养获取新生SD大鼠颅盖骨的成骨细胞;随机将28只SD大鼠分为4组,分别灌胃补肾益精壮骨中药、补中益气颗粒剂和骨疏康颗粒,正常组不灌胃.干预8 d后,通过血清药理学方法使用各组大鼠血清培养成骨细胞48 h.结果与结论:与正常组相比,补肾组和骨疏康组成骨细胞骨形态发生蛋白2、7表达水平明显增加(P < 0.01),补脾组成骨细胞骨形态发生蛋白2、7表达水平降低(P < 0.01).结果表明补肾中药对成骨细胞保持自身功能、维持骨密度的作用上发挥重要的作用,成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7可能有促进成骨细胞分化、增殖的功能.     

补肾中药血清对成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7活性的影响

背景：课题组拟以骨形态发生蛋白作为研究靶点来认识肾虚骨质疏松症的病理机制。目的：体外观察补肾中药血清对SD大鼠成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7活性的影响。方法：采用多次胶原酶消化法体外培养获取新生SD大鼠颅盖骨的成骨细胞;随机将28只SD大鼠分为4组,分别灌胃补肾益精壮骨中药、补中益气颗粒剂和骨疏康颗粒,正常组不灌胃。干预8d后,通过血清药理学方法使用各组大鼠血清培养成骨细胞48h。结果与结论：与正常组相比,补肾组和骨疏康组成骨细胞骨形态发生蛋白2、7表达水平明显增加（P〈0.01）,补脾组成骨细胞骨形态发生蛋白2、7表达水平降低（P〈0.01）。结果表明补肾中药对成骨细胞保持自身功能、维持骨密度的作用上发挥重要的作用,成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7可能有促进成骨细胞分化、增殖的功能。     

三种不同载体对重组人骨形态发生蛋白2诱导成骨的放大效应

目的：比较牛松质骨粒、磷酸三钙、天然珊瑚载体对重组人骨形态发生蛋白2诱导成骨的放大效应。方法：实验于1998-12／2002—06在第四军医大学骨科实验室完成。①重组人骨形态发生蛋白2与牛松质骨粒、天然珊瑚和磷酸三钙按相同比例复合形成3种载体释放系统。②取昆明小鼠90只，随机分为3组，牛松质骨粒组、天然珊瑚组和磷酸三钙组，每组30只。于小鼠股部肌袋一侧植入重组人骨形态发生蛋白2载体释放系统，另一侧单纯植入0．2mg重组人骨形态发生蛋白2。③分别于植入后7，14，21d周麻醉状态下每组各处死10只，取材行组织学检查、成骨量分析和碱性磷酸酶活性测定。结果：90只小鼠全部进入结果分析。①组织学检查术后不同时间牛松质骨粒组和磷酸三钙组成软骨和成骨能力较强，而天然珊瑚组成骨能力稍差。21d的成骨量分析显示牛松质骨粒组、磷酸三钙组和天然珊瑚组分别较对照组成骨量放大了5．47倍、4．90倍和1，65倍。②牛松质骨粒组、磷酸三钙组之间碱性磷酸酶活性没有显著差异（P〉0．05），均显著大于天然珊瑚组（P〈0．05），3组的碱性磷酸酶活性高峰出现在术后第21天[依次为（285．09&;#177;52．29），（256．48&;#177;45．99），（177．92&;#177;22．69）nkat／g]。结论：比较3种不同的重组人骨形态发生蛋白2载体释放系统。异种松质骨粒表现较强的成骨能力，提出载体放大效应应成为重组人骨形态发生蛋白2载体选择标准之一。     

动物模型中人骨形态发生蛋白2重组腺病毒活性观测

目的：利用基因工程技术构建人骨形态发生蛋白2重组腺病毒，并进行体内表达，测定活性；为深入开展的基因治疗研究创造条件。方法：实验于2000—05／2002—06在西安交通大学第一附属医院骨科实验室完成。应用PcR技术扩增出人骨形态发生蛋白2全长基因，体外同源重组构建重组腺病毒后，随机将30只SD大鼠分为治疗组和对照组，每组15只，将纯化后的重组腺病毒50μL注入sD大鼠股部肌肉陷窝病损处，通过组织学染色、X射线片对动物模型的组织变化进行观测。结果：6周后治疗组可见明显骨诱导形成，2周时治疗组碱性磷酸酶活性明显高于对照组，重组腺病毒治疗组有明显的诱导成骨活性。结论：应用于动物实验中目的基因表达，并具有生物学活性。本研究是在骨缺损基因治疗的一次尝试，且人骨形态发生蛋白2重组腺病毒的构建成功，也为国内骨科疾病基因治疗的进一步研究提供了基础。     

N-乙酰氨基葡萄糖对骨折修复中成骨细胞活性和骨形态发生蛋白的影响

背景:已证实甲壳质及其衍生物具有免疫调节、促进伤口愈合、止血等生物学作用,N-乙酰氨基葡萄糖作为甲壳质的衍生物,是否能够产生对骨折愈合的影响。目的:在骨折修复过程中介入N-乙酰氨基葡萄糖,观察成骨细胞活动和骨形态发生蛋白的变化。设计:随机对照实验.单位:青岛大学医学院的人体解剖学教研室。材料:实验于2002-03/08在青岛大学医学院神经解剖实验室完成。选用健康新西兰兔70只,随机分为3组:生理盐水组23只,接骨片组23只,N-乙酰氨基葡萄糖组24只。方法:所有动物均制备右桡骨中段3mm骨缺损模型,模型建立后生理盐水组给予生理盐水1.00mL/kg,接骨片组给予接骨片1.00mL/kg,N-乙酰氨基葡萄糖组给予N-乙酰氨基葡萄糖0.28g/kg,每天灌胃给药,直至取材为止。分别于术后9,17,30,42d进行取材。通过X-线片与苏木精-伊红染色观察各组骨折愈合情况,骨形态发生蛋白的表达采用免疫组织化学法观察。主要观察指标:①各组动物术后大体情况。②术后不同时间各组骨折愈合X线观察结果。③术后不同时间各组骨缺损断端间骨形态发生蛋白表达的平均吸光度值。④术后不同时间各组组织形态学观察结果。结果:按意向处理分析,实验纳入70只兔均进入结果分析。①术后不同时间各组骨折愈合评级X线观察结果:术后9,17,30,42dN-乙酰氨基葡萄糖组骨折愈合程度均高于生理盐水组和接骨片组(P均<0.05)。②术后不同时间各组骨缺损断端间骨形态发生蛋白表达的平均吸光度值:与生理盐水组比较,术后9,17d接骨片组与N-乙酰氨基葡萄糖组骨形态发生蛋白的表达均呈上升趋势,N-乙酰氨基葡萄糖组尤为明显(P均<0.05);而术后30,42d时骨形态发生蛋白的表达降低。③术后不同时间各组组织形态学观察结果:术后9d,N-乙酰氨基葡萄糖组断端间隙变小,有比较均匀的骨小梁形成,成骨细胞排列较整齐;生理盐水组断端间隙较大,少有或偶有不均匀的骨小梁形成,成骨细胞无或极少。术后30d,N-乙酰氨基葡萄糖组断端之间全部为骨小梁填充,骨髓腔骨小梁将要穿通,骨小梁周围成骨细胞排列整齐间有破骨细胞;生理盐水组断端之间大部分为骨小梁,但有中间部分未衔接,断端间软骨细胞极少。术后42d,N-乙酰氨基葡萄糖组断端处骨板编织骨初始形成,骨髓腔贯通,破骨细胞多而活跃,有骨小窝;生理盐水组断端之间充满骨小梁,但连接线不清,髓腔将要贯通,成骨细胞排列较为整齐,有破骨细胞出现。结论:N-乙酰氨基葡萄糖能够促进骨折的愈合,可能与其促进成骨细胞活性和早期增加骨形态发生蛋白在骨折愈合中的表达有关。     

自制人骨形态发生蛋白2复合骨修复材料诱导骨再生

背景:骨形态发生蛋白是目前发现的一类惟一可独立诱导骨再生的细胞因子,临床应用前景广阔.但它们价格昂贵,限制了在中国的应用.目的:探讨自主生产的重组人骨形态发生蛋白2的骨诱导活性及对骨缺损的修复作用.方法:通过电泳及质谱的方法检测其复性后重组人骨形态发生蛋白2的纯度,通过C2C12细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导下向成骨细胞分化检测其骨诱导活性.将重组人骨形态发生蛋白2与以动物骨为原料加工制成的新型骨修复材料复合,植入新西兰兔桡骨缺损实验模型观察其对骨缺损的修复作用.结果与结论:自主生产的重组人骨形态发生蛋白2纯度≥95%,能明显诱导C2C12细胞向成骨细胞分化,分化早期大量表达碱性磷酸酶,分化末期形成大量的矿化小节,诱骨活性良好.在兔桡骨修复试验中,X射线影像学及苏木精-伊红染色组织学检查结果表明,重组人骨形态发生蛋白2复合材料组在2个月时形成大量骨痂,4-6个月时载体与自体骨融合,材料大量降解,修复效果良好;单纯骨填充材料组4-6个月时只有少量新生骨桥与自体骨连接,降解量极少;空白对照组损伤部位为纤维化组织所填充.结果提示自主生产的重组人骨形态发生蛋白2促进骨修复作用明显,适合应用于临床.     

骨形态发生蛋白2和音猬因子体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化

背景:研究表明,骨形态发生蛋白2和音猬因子联合诱导干细胞的定向分化存在理论上的可能性,但目前联合诱导间充质干细胞的方向纷繁复杂,且众说纷纭.目的:观察骨形态发生蛋白2和音猬因子在体外联合和单独应用促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的能力.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-12在江苏大学临床医学院实验室完成.材料:6周龄SPF级SD大鼠10只,体质量140～160 g,雌雄不拘,用于间充质干细胞的获得、培养和传代.重组人骨形态发生蛋白2、音猬因子为PeproTech公司产品.方法:将SD大鼠的间充质干细胞分离培养后分为4组:重组人骨形态发生蛋白2组:加入100 mg/L重组人骨形态发生蛋白2:音猬因子组:加入20 μg/L音猬因子:联合组:100 mg/L重组人骨形态发生蛋白2联合20 μg/L音猬因子作用于SD大鼠间充质干细胞:对照组:不加任何干预措施.主要观察指标:倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;MTT法检测细胞培养第3,6,9,12天细胞增殖数和细胞碱性磷酸酶活性;以及成骨细胞表型的检测和Ⅰ型胶原蛋白免疫印迹分析,以比较各组诱导成骨能力的差异.结果:①间充质干细胞培养24 h后部分贴壁,贴壁细胞呈圆形或椭圆形,第7天左右细胞铺满瓶底,多为梭形.条件培养基培养3 d后,联合组细胞由长梭形转变为多角形.随后重组人骨形态发生蛋白2组细胞发生成骨样改变,音猬因子组细胞未见明显形态学改变.②相同时间点联合组、重组人骨形态发生蛋白2组、音猬因子组细胞吸光度均高于对照组(P<0.05).联合组和重组人骨形态发生蛋白2组在各时间点碱性磷酸酶表达量均高于音猬因子组和对照组(P<0.05).③间充质干细胞经诱导培养7 d后,碱性磷酸酶细胞化学染色联合组和重组人骨形态发生蛋白2组呈阳性,联合组可见胞质中棕黄色颗粒,音猬因子组和对照组阴性.诱导培养14 d后,Ⅰ型胶原免疫荧光染色音猬因子组和对照组均为阴性,联合组和重组入骨形态发生蛋白2组为阳性,但联合组细胞数量明显增多,细胞间融合较好,重组人骨形态发生蛋白2组细胞融合欠佳.矿化沉积茜素红染色音猬因子组和对照组仍为阴性,联合组和重组人骨形态发生蛋白2组为阳性,联合组细胞间可见红色的钙结节.④蛋白免疫印迹分析显示,与对照组相比,联合组和重组人骨形态发生蛋白2组Ⅰ型胶原蛋白表达增加,联合组尤其明显,音猬因子组与之接近.结论:骨形态发生蛋白2和音猬因子在体外能明显促进间充质干细胞向成骨细胞分化并且具有明显的协同相关性.     

骨形态发生蛋白2诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中长链非编码RNA的作用

背景：人类长链非编码RNA是现今的研究热点,已有研究报道其在肿瘤发生中的作用机制,但其在成骨分化方面的机制并不明确。目的：观察人类长链非编码RNA在经骨形态发生蛋白2诱导小鼠C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用,并探讨其分子机制。方法：首先进行碱性磷酸酶染色和成骨指标基因检测。对C3H10T1/2细胞在骨形态发生蛋白2诱导下的成骨分化过程长链非编码RNA表达变化进行芯片分析。采用高通量测序比较骨形态发生蛋白2诱导组和未经骨形态发生蛋白2诱导组的表达变化,筛选出表达下降的基因。过表达相应长链非编码RNA后观察对骨形态发生蛋白2诱导成骨分化的影响。结果与结论：骨形态发生蛋白2诱导C3H10T1/2细胞导致碱性磷酸酶活性增加。骨形态发生蛋白2诱导72 h后,碱性磷酸酶、Id1、骨钙素、Runx2、sp7表达上升（P〈0.05）。未诱导C3H10T1/2细胞与骨形态发生蛋白2诱导细胞芯片杂交后结果比较,下降达1.5倍的长链非编码RNAs有24条,其中只有AK035085有内含子。与未过表达AK035085的对照组相比,骨形态发生蛋白2诱导72 h后AK035085过表达的C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶、Id1、骨钙素、Runx2、sp7表达均下降（P〈0.05）。提示骨形态发生蛋白2可刺激C3H10T1/2细胞发生成骨分化,AK035085可能对C3H10T1/2细胞的成骨分化存在抑制作用。     

骨形成蛋白-7对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化的影响

目的探讨骨形成蛋白-7(BMP-7)对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响。方法晚期糖基化终产物诱导发生上皮-间叶转化的体外培养大鼠腹膜间皮细胞,分别经含5 ng/mL及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基和含10 ng/mL BMP-7及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基培养48 h,以含80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基为对照,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen I)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达;应用ELISA法检测间皮细胞TGF-β1、VEGF蛋白表达水平。结果 BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGFmRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论 BMP-7能上调上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin表达和下调α-SMA、Collagen I、TGF-β、VEGF表达,BMP-7能逆转晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。     

益骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织骨形态发生蛋白2表达的影响

背景：骨形态发生蛋白-2是高教骨诱导因子。骨形态发生蛋白-2诱导骨内、外膜和骨髓基质细胞分化为骨母细胞，有加强骨床再生能力的作用，还可以活化或诱导血管周围的间充质细胞分化为软骨和成骨细胞。 目的：观察益骨胶囊预防和治疗用药对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织骨形态发生蛋白-2蛋白表达的影响。 设计：随机分组设汁、对照实验。 单位：暨南大学附属第一医院中医科。 材料：实验于2003-03／10在暨南大学中药学实验室完成。动物：选择10月龄普通级雌性SD大鼠72只，体质量（380&;#177;20）R，由广东省医学蛮验动物中心提供（合格证号：粤检证字第2002A024号）。随机抽取24只分为假手术（腹部切口但不切除卵巢）预防用药组（12只）和治疗用药组（12只），余48只行腹部切口双侧卵巢切除术复制骨质疏松模型后随机分为4组：模型预防用药组、模型冶疗用药组、预防用药组、治疗用药组，每组12只。药物：益骨胶囊南淫羊藿、枸杞：产、熟地黄、牛膝等组成，深圳三九医药股份有限公司提供免煎颗粒，配制成水溶液，含生药1．0g／mL。干预：益骨胶囊预防用药于手术后3d即开始灌胃，假手术预防用药组、模型预防用药组灌胃生理盐水3ml、预防用药组灌胃益骨胶囊水溶液3mL，1次／d。共24周；益骨胶囊治疗用药于手术后第13周开始灌胃，假手术治疗用药组、模型治疗用药组灌胃生理盐水3mL、治疗用药组灌胃益骨胶囊水溶液3mL。1次／d，共12周。免疫组化方法检测骨组织骨形态发生蛋白-2蛋白表达。 主要观察指标：骨组织骨形态发生蛋白-2阳性反应细胞的平均灰度值。 结果：大鼠造模24周时，模型预防用药组、预防用药组、假手术预防用药组大鼠骨组织骨形态发生蛋白-2阳性反应细胞的平均灰度值分别为81．84&;#177;10．01，124．46&;#177;6．55，130．15&;#177;10．09，模型预防用药组明显低于假手术预防用药组（P〈0．01），预防用药组显著高于模型预防用药组（P〈0．01），与假手术预防用药组相近（P〉0．05）。模型治疗用药组、治疗用药组、假手术治疗用药组大鼠骨组织骨形态发生蛋白-2阳性反应细胞的平均灰度值分别为77．97&;#177;10．35，110．32&;#177;8．69。131．79&;#177;12．10，模型治疗用药组明显低于假手术治疗用药组（P〈0．01），治疗用药组显著高于模型治疗用药组（P〈0．01），与假手术治疗用药组相近（P〉0．05）。 结论：益骨胶囊预防和治疗用药均能促进骨组织骨形态发生蛋白-2蛋白表达.     

骨形态发生蛋白2体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景:目前研究者尝试使用各种细胞因子、中药单体和组织裂解液等诱导剂作用于其分化过程,用以修复梗死的心肌组织。目的:探索骨形态发生蛋白2在大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞过程中的作用。方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞。应用含有骨形态发生蛋白2的培养基定向诱导培养(对照组为普通培养基培养)72h,其后换用普通培养基继续培养4周。结果与结论:初分离的细胞经纯化培养后,显示CD29阳性、CD34阴性,符合骨髓间充质干细胞的特征,生长曲线显示各代细胞生长规律相近。经骨形态发生蛋白2体外诱导培养后,细胞形态狭长,排列紧密、方向一致。分化后的细胞均阳性表达C-TnI、C-TnT、desmin、α-sarcomericactin和P38MAPK。空白对照组则基本不表达以上蛋白。提示骨形态发生蛋白2可以诱导大鼠骨髓间充质干细胞体外定向分化为心肌样细胞,是骨髓间充质干细胞体外心肌分化的一种新的有效诱导剂。     

rhBMP-2对骨骼肌卫星细胞增殖与粘附的影响

目的：探讨人重组骨形态发生蛋白(rhBMP)一2对骨骼肌卫星细胞增殖与粘附的影响。方法：体外分离与培养骨骼肌卫星细胞，分别用0、50、100、500、1000ng/ml的rhBMP-2诱导培养基培养48h。利用MTT法测定细胞增殖能力的变化，通过荧光法测定接种后1h的粘附细胞率。结果：rhBMP-2可促进骨骼肌卫星细胞的增殖，这种作用从BMP浓度为500ng/ml即可表现出来，并随着浓度的增加而越发明显。在rhBMP-2作用下骨骼肌卫星细胞的粘附率增高，在500ng/ml的浓度时达最高，但当BMP浓度进一步增加时，细胞粘附率却不再增加。结论：rhBMP-2可促进骨骼肌卫星细胞的增殖，增强其粘附特性。     

纳米羟基磷灰石复合骨形态发生蛋白2与骨髓基质干细胞的体外培养

背景：纳米级羟基磷灰石支架材料复合骨形态发生蛋白2因子组织构建模式组合后对骨髓基质干细胞的作用是叠加促进或抑制作用以及其生物相容性如何？目的：验证纳米羟基磷灰石复合骨形态发生蛋白2与骨髓基质干细胞在体外共同培养下的生物相容性和成骨性。方法：将兔骨髓基质干细胞体外培养、传代和扩增,经鉴定后将第3代细胞分别接种在对照组、骨形态发生蛋白2组、纳米羟基磷灰石组、纳米羟基磷灰石/骨形态发生蛋白2组4种培养液中。结果与结论：对照组和纳米羟基磷灰石组的细胞倍增时间较骨形态发生蛋白2组、纳米羟基磷灰石/骨形态发生蛋白2组两组长;骨形态发生蛋白2组和纳米羟基磷灰石/骨形态发生蛋白2组细胞增殖能力及碱性磷酸酶测量值明显大于对照组和纳米羟基磷灰石组（P〈0.01）。提示纳米羟基磷灰石复合骨形态发生蛋白2的组织构架不仅与骨髓基质干细胞之间具有良好的生物相容性,还可发挥骨形态发生蛋白2促进骨髓基质干细胞增殖和定向分化成骨的作用。