17β-雌二醇对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的研究17β-雌二醇（E2）对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组（A组）、磷酸盐缓冲液对照组（B组）及E2治疗组（C组）。应用重物打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型（A组仅行椎板切除术），分别于伤后7、14、21及28d，按照改良Tarlov评分法和Rivlin斜板试验观察脊髓功能恢复情况。伤后6、24h和3、7、14、28d分别处死动物取材，HE染色观察病理变化，TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果TUNEL法和流式细胞术检测结果均表明大鼠脊髓损伤后存在细胞凋亡。TUNEL法显示细胞凋亡在伤后3d达高峰，C组伤后24h、3d及7d凋亡细胞比率均显著低于B组（P〈0．01或P〈0．05）；流式细胞术显示细胞凋亡率在伤后7d达高峰，C组细胞凋亡率在24h以后各观察时间点均显著低于B组（P〈0．01或P〈0．05）。14d以后，C组脊髓神经功能恢复显著好于B组（P〈0．01或P〈0．05）。结论E2能减少继发性脊髓损伤后细胞凋亡，促进脊髓功能的恢复。     

褪黑素对脊髓损伤早期大鼠神经生长因子表达的影响

目的:通过观察褪黑素(MT)对脊髓损伤(SCI)早期大鼠体内神经生长因子(NGF)表达的影响,探讨MT治疗SCI的机制。方法:60只成年SD大鼠随机分为3组:模型组、MT组和假手术组,每组20只。前2组以改良的Allen’sWD法建立脊髓T12水平损伤模型,假手术组仅行椎板切除不损伤脊髓。MT组于术后10min腹腔注射MT100mg/kg,模型组则腹腔注射等体积无水乙醇。术后12h对3组大鼠进行BBB运动功能评分后处死,取血液检测NGF水平;取脊髓标本进行病理观察,RT-PCR法检测NGFmRNA,免疫组化SP法检测NGF蛋白。结果:模型组和MT组大鼠于术后均出现了严重的下肢神经功能障碍,2组的BBB运动功能评分差异无统计学意义(P>0.05)。MT组脊髓组织病理变化较模型组减轻。3组大鼠脊髓内NGFmRNA、NGF蛋白表达水平和血清NGF水平差异均有统计学意义(F=336.819,321.762和122.707,P均<0.001),3者均在MT组中最高,SCI组次之,假手术组最低(P<0.01)。结论:MT可通过提高SCI大鼠体内NGF的表达减轻SCI。     

细胞外ATP对大鼠脊髓损伤后MAP-2表达及运动功能恢复的影响

目的研究细胞外三磷酸腺苷（ATP）对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2（MAP-2）表达及运动功能恢复的影响。方法选择健康成年Wistar大鼠110只,随机取10只作为正常对照组,其余100只制作成脊髓打击伤动物模型,然后分为A组（ATP组）和B组（阳性对照组）,每组50只。伤后1、3、7、14、28d取材,应用免疫组织化学方法观察MAP-2的表达;并用改良的Tarlov评分观察大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复情况。结果脊髓损伤后14d和28d。A组大鼠MAP-2表达明显强于B组（P〈0．05）;伤后14d和28d,A组大鼠改良Tarlov评分明显优于B组（P〈0．05）。结论细胞外ATP能促进大鼠脊髓损伤表达MAP-2,并能促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复。     

大鼠脊髓慢性损伤脊髓组织PLA2、PGE2的检测

目的检测大鼠脊髓慢性损伤脊髓组织磷脂酶A2（PLA2）的活性、前列腺素E2（PGE2）的含量。方法采用生化活性法测定PLA2的活性，采用放射免疫法测定PGE2的含量。结果（1）PLA2活性：脊髓受压后各模型组PLA2活性增高，其中以中压组增高最明显（与假手术组比较，P〈0．01）；而重压组、轻压组与假手术组比较，P〈0．05；（2）PGE2含量：中、重压模型组与假手术组相比有非常显著性差异（P〈0．01），轻压模型组与假手术组相比有显著性差异（P〈0．05），重压模型组与轻压模型组相比也有显著性差异（P〈0．05）。结论大鼠脊髓慢性损伤后会继发炎症反应，炎症加重了脊髓的继发性损伤。     

脊髓损伤对大鼠生殖激素水平的影响

目的 研究大鼠脊髓损伤后生殖激素水平的改变。方法 应用放射免疫法检测大鼠行脊髓损伤术后第2周、第4周血清FSH、LH、T（睾酮）的水平。结果 术后第2周，手术组与假手术相比较，血清FSH、LH、T水平没有显著性差异。术后第4周，手术组与假手术组比较，手术组LH水平显著升高（P＜0．05），T水平显著降低（P＜0．05）。结论 生殖激素的改变与脊髓损伤后各组生精细胞的减少有密切关系。     

糖尿病大鼠脊髓损伤后血小板衍化生长因子的表达研究

目的观察糖尿病大鼠脊髓机械性损伤后损伤处脊髓血小板衍化生长因-7-（PDGF）在星型胶质细胞中的表达量,以探讨脊髓损伤过程中PDGF的作用。方法将36只大鼠随机分为假手术对照组、脊髓损伤组和糖尿病脊髓损伤组并制作相关模型,观察脊髓损伤24h和7d后大鼠运动功能的改变、损伤脊髓的病理变化及PDGF在星型胶质细胞中的表达情况。采用UTHSCSA Image Tools 3．0图像分析处理系统进行分析,统计各张切片单位面积（mm^2）内PDGF阳性细胞的数量和光密度：BIO-RAD软件Quantityone测定并用相对灰度值表示PDGF蛋白的表达量：然后对所得数据进行分析。结果脊髓损伤24h后,两组大鼠均出现严重运动功能障碍,BBB功能评分分别为（0.7±0．4）、（0．7±0.5）分：损伤7d后,脊髓损伤组大鼠恢复为（6．7±1.2）分,而糖尿病脊髓损伤组仅恢复为（3．9±0.7）分,两组差异有统计学意义（P〈0．01）：而假手术对照组大鼠运动自如,术后24h和7d评分均为（21．0±0．0）分,与另两组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。术后24h脊髓损伤组和糖尿病脊髓损伤组脊髓损伤部位白质中可见肿胀的轴突和大量空泡。灰质中存在极少量的神经元和胶质细胞;7d后损伤范围确定,损伤段变细,脊髓内有空洞形成,其中糖尿病脊髓损伤组的空洞大于脊髓损伤组,并且周围有炎性细胞浸润。PDGF阳性表达部位为星形胶质细胞,术后24h、7d假手术对照组PDGF表达少,没有太大的变化：24h后脊髓损伤组和糖尿病脊髓损伤组损伤部位的PDGF表达增多,且脊髓损伤组明显多于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）：7d后脊髓损伤组PDGF持续高表达,仍明显多于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）。在Western blot检测中,假手术对照组在两个时段均仅有少量PDGF蛋白表达,24h后脊髓损伤组PDGF表达明显多于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）,损伤7d后脊髓损伤组PDGF持续高表达,仍明显高于糖尿病脊髓损伤组（P〈0．01）。结论糖尿病脊髓损伤大鼠脊髓损伤后BBB评分明显低于脊髓损伤组大鼠,PDGF表达量亦明显减少,可能与高血糖状态加重脊髓的损伤以及抑制其损伤后恢复有关。     

COX-2抑制剂塞来昔布对大鼠脊髓损伤的保护作用

目的 观察选择性环氧化酶一2抑制剂塞来昔布（celecoxib）对大鼠脊髓损伤的保护作用。方法 48只SD大鼠，随机分为单纯损伤组及治疗组。采用改良Allen’s打击法制作脊髓损伤动物模型，分别在伤后12、24、72h测定脊髓标本的丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量。用苏木精-伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化，原位末端标记法（TUNEL）标记凋亡细胞。同时采用Tarlov评分和斜板实验观察脊髓神经功能恢复情况，比较各组之间的差异。结果 治疗组较单纯损伤组神经功能明显改善（P〈0．05）。治疗组各时间点MDA含量较单纯损伤组明显降低（P〈0．05），SOD含量明显升高（P〈0．05），病理形态改变较轻且凋亡细胞少（P〈0．05）。结论 COX-2抑制剂塞来昔布可减少神经细胞凋亡，对继发性脊髓损伤起到保护作用。     

脊髓损伤后弱激光照射对胶质瘢痕的影响

目的：研究大鼠脊髓损伤后弱激光经皮照射对脊髓胶质瘢痕的影响．方法：SD大鼠30只,随机分成对照组和照射组（n=15）,制成脊髓半横断模型,经皮照射相应的损伤脊髓节段．在1,3,7,14d行BBB评分,在3,7,14d行普通HE染色和免疫荧光标记染色观察．结果：照射组的BBB评分高于对照组,有统计学差异（P〈0．05）;照射组比对照组脊髓空洞范围减小（P〈0．05）,并且损伤区周边NF分布较多,GFAP表达较少;照射组损伤区内硫酸软骨素蛋白多糖（CSPGs）的表达明显低于对照组（P〈0．05）．结论：脊髓损伤后用弱激光经皮照射导致损伤区范围胶质瘢痕减少,CSPGs表达下降,从而减轻继发性损伤,有利于神经轴突再生和功能恢复．     

人参皂甙对大鼠急性脊髓损伤的保护作用及其机制

目的 探讨人参皂甙（Ginsenodides,Gs）对急性脊髓损伤的保护作用及其机制。方法采用改良Allen’s重物打击法制作急性脊髓损伤模型。大鼠随机分为对照组、损伤组和Gs治疗组。每组36只,分别于术后6h、12h、1d、3d、7d、14d完整取大鼠Tq脊髓段。斜板实验和BBB行为学评分评价大鼠脊髓功能的恢复情况;TUNEL法标记脊髓组织凋亡细胞;Westernblot方法检测B细胞淋巴瘤／白血病基因-2（Bcl-2）和Bcl伴随蛋白x（Bax）蛋白表达;RT—PCR方法检测半胱氨酸基天冬氨酸-特异性蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达。结果损伤组和Gs组大鼠术后14d内脊髓功能均有不同程度恢复,Gs组恢复优于损伤组（P〈0．05或P〈0．01）;损伤组大鼠脊髓TUNEL标记的阳性细胞数于术后3d达高峰,Gs组于相应各时间点均低于损伤组（P〈0．01）;术后各时间点Gs组大鼠脊髓Bcl-2蛋白表达高于损伤组（P〈0．01）,术后12h、1d、3d、7d、14dGs组大鼠脊髓Bax蛋白表达均低于损伤组（P〈0．05或P〈0．01）;术后各时间点Gs组大鼠脊髓caspase-3mRNA表达低于损伤组（P〈0．01）。结论通过提高Bcl-2／Bax比值并抑制caspase-3mRNA表达减少脊髓损伤后神经元凋亡是Gs对脊髓损伤后具有保护作用的可能机制之一。     

锂盐治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的观察锂盐对脊髓损伤大鼠的治疗效果，比较不同浓度的氯化锂的损伤脊髓的保护作用。方法采用NYC方法创建脊髓损伤大鼠的动物模型。50只大鼠后路手术创建脊髓损伤大鼠模型，术后所有大鼠随机分成5组：脊髓损伤无治疗组（NO，n=10），脊髓损伤氯化钠治疗组（NA，n=10），2mEq／kg氯化锂治疗组（L12，n=10），4mEq／kg氯化锂（LI4，n=10），6mEq／kg氯化锂治疗组（LI6，n=10）。所有氯化锂给药均通过腹腔注射完成，术后即刻开始，每日1次，连续28d。损伤大鼠辅助排尿2～3次／d，术中及术后1周内死亡大鼠即刻补上。采用BBB（Basso DM，Beattie MS，Bresnahan JC．）评分评价大鼠后肢功能的恢复；使用运动诱发电位（MEP）评价损伤脊髓的电生理功能；灌注固定，损伤脊髓石蜡切片进行HE染色，光镜观察神经。结果（1）MEP显示氯化钠治疗组与不治疗组间无显著差异，氯化锂治疗组优于对照组（P〈0．05），但治疗组间无显著差异。（2）脊髓损伤后4周脊髓损伤组灰质液化、坏死、空洞形成，仅仅残留周边部分白质，空腔周边有血管成分、神经胶质、巨噬细胞形成的界面。治疗组脊髓灰、白质结构有所保留，神经细胞数量减少。（3）B船评分提示4mEq／kg氯化锂治疗组评分高于其他治疗组，治疗组评分高于对照组。（4）各组大鼠的死亡率无统计学差异。结论氯化锂可以减轻大鼠脊髓损伤程度，提高后肢功能恢复。     

NGF对腰神经根慢性压迫性模型大鼠脊髓神经细胞凋亡的影响

目的 通过大鼠腰神经根慢性压迫性损伤模型,探讨神经生长因子（NGF）对腰神经根慢性压迫性损伤致脊髓神经细胞凋亡的影响.方法 将54只大鼠分为生理盐水（NS）对照组、NGF硬膜外隙给药组、NGF尾静脉给药组,术后每组动物分别存活1、2、4周,不同时段各组动物均为6只.手术经大鼠左侧L5椎间孔插入长4 mm、直径0.5～0.6 mm的中空钢管,对神经根形成稳定的压迫,同时中空钢管套接PE管引至项部皮下行硬膜外隙用药.造模术后压迫组与NGF硬膜外隙给药组分别经PE管于硬膜外隙注射NS与NGF,NGF尾静脉给药组经尾静脉注射NGF.术后进行行为学及大体观察,对L5神经根相连的脊髓节段切片进行组织学等染色,观察各组脊髓神经细胞的病理变化.结果 神经根压迫性损伤后,出现神经行为学改变,各时相点NGF给药组神经行为学特征恢复优于对照组（P＜0.05）;组织学染色证实受压神经根相连的脊髓节段出现神经细胞变性、凋亡,在各时相点NGF给药组与NS对照组比较,NGF给药组凋亡细胞数量减少（P＜0.05）;NGF给药组Bax蛋白的表达降低（P＜0.05）;NGF给药组bcl-2蛋白的表达上调（P＜0.05）,而NGF用药各组间在同一时相点差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 建立大鼠腰神经根慢性压迫性损伤后可致相应脊髓节段神经细胞的凋亡,分别经硬膜外隙或尾静脉给予NGF治疗后均可抑制脊髓神经细胞的凋亡.     

5-HT3受体在慢性神经病理性疼痛模型脊髓组织中的表达

目的观察慢性神经病理性疼痛大鼠脊髓组织中5-HT,受体的表达变化。方法采用大鼠坐骨神经结扎（慢性压迫性损伤）制备慢性神经病理性疼痛模型。坐骨神经结扎造模后7天,采用测定热缩足反射潜伏期（TWL）和机械缩足反射阀值（MWT）2种行为学方法检测大鼠痛觉闽值变化,免疫组织化学染色法检测大鼠脊髓背角5-HT,受体表达,Westernblot方法检测大鼠脊髓背角中5-HT,受体蛋白水平。结果造模7天后：模型组大鼠的TWL和MWT均低于正常组和假手术组（P〈0．05）,模型组大鼠脊髓背角组织中5-HT,受体表达明显高于正常组和假手术组（P〈0．05）、5-HT,受体蛋白水平高于正常组和假手术组（P〈0．05）。结论在慢性神经病理性疼痛中,脊髓背角组织中5-HT,受体表达增加;脊髓背角组织中5-HT,受体可能参与了慢性神经病理性疼痛的痛觉信息传导过程。     

亚低温对急性脊髓损伤后肿瘤坏死因子-α表达及运动功能恢复的影响

目的探讨亚低温对急性脊髓损伤（SCI）患者损伤后血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平及运动功能恢复的影响。方法回顾性分析南通大学附属医院2006年2月～2011年12月收治人院的脊柱骨折伴脊髓损伤成年患者60例临床资料,随机分为两组常规治疗组30例和亚低温组30例,用放射免疫分析法测定两组脊髓损伤患者伤后12、24、72h外周血血清TNF—α水平。并利用Tarlow评分检测两组治疗方法对运动功能恢复的影响。结果脊髓损伤后患者血清TNF一“水平呈早期水冲样动态变化,在伤后12h快速升至高峰,然后逐渐下降,伤后72h恢复正常;对照组治疗后6、12、24、72h、1周、4周时血清TNF-α水平均低于治疗前（P〈0．05）：亚低温组治疗后6、12、24、72h、1周、4周时血清TNF-α水平均低于治疗前（P〈0．05）。治疗后6、12、24、72h时亚低温组脊髓损伤患者血清TNF-α水平低于对照组（P〈0．05）;亚低温组运动功能评分每个时间点都明显高于对照组,且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论亚低温对脊髓损伤后炎症细胞因子TNF-α分泌有一定的抑制作用,并具有良好的恢复运动功能作用。     

神经营养因子3在促进脊髓损伤大鼠功能恢复中的价值研究

目的分析神经营养因子3在促进脊髓损伤大鼠功能恢复中的价值。方法将80只大鼠采用Allen打击法制作脊髓损伤模型,随机分为对照组（电刺激治疗组）40只和观察组（电刺激联合神经营养因子3治疗组）40只,分别于干预前和干预后7、14、28 d对两组大鼠Tarlov评分、皮质运动和体感诱发电位及脊髓组织巢蛋白（Nestine）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、5-羟色胺（5-HT）阳性细胞数进行统计并比较。结果两组大鼠干预前Tarlov评分、皮质运动和体感诱发电位及脊髓组织Nestine、GFAP、5-HT阳性细胞数比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;而干预后7、14、28 d观察组Tarlov评分0、1级比例分别为60%、50%和40%,皮质运动诱发电位峰峰值和潜伏期分别为（172.08±15.56）、（221.46±18.63）、（255.56±20.43）μV和（2.97±0.25）、（2.89±0.22）、（2.78±0.20）ms,皮质体感诱发电位峰峰值和潜伏期分别为（229.19±19.69）、（280.73±23.07）、（312.48±27.85）μV和（2.91±0.22）、（2.80±0.19）、（2.65±0.15）ms,均优于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;脊髓组织Nestine阳性细胞数分别为（17.26±1.98）、（21.33±2.68）及（18.78±2.53）个/HP,GFAP为（36.27±4.83）、（44.18±6.37）及（41.26±5.94）个/HP,5-HT为（26.83±1.78）、（33.27±2.38）及（30.68±2.07）个/HP,均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;并且观察组上述指标干预后7、14、28 d均优于同组干预前,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论神经营养因子3在促进脊髓损伤大鼠功能恢复中的价值较高,对于运动及神经功能相关指标的改善均更为明显,且改善作用也较为持久。     

透明质酸钠对大鼠脊髓损伤后膀胱黏膜修复的影响

目的：探讨透明质酸钠对大鼠脊髓损伤后膀胱黏膜修复的影响。方法将48只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组及透明质酸钠灌注组,每组16只。采用脊髓横断法建立大鼠脊髓损伤的神经源性膀胱模型。通过观察各组大鼠膀胱大体情况、HE染色情况、组织学损伤评分以及膀胱组织中IL-6的表达情况评估其炎症的严重程度。结果正常对照组膀胱组织无明显病理改变;模型对照组膀胱组织可见大量中性粒细胞浸润,黏膜严重充血、出血,上皮细胞坏死,黏膜、黏膜下层及肌层均有炎性水肿;透明质酸钠灌注组膀胱组织可见黏膜充血,少量炎性细胞浸润。模型对照组及透明质酸钠灌注组组织学损伤评分及膀胱组织中IL-6阳性表达率均显著高于正常对照组,透明质酸钠灌注组组织学损伤评分及膀胱组织中IL-6阳性表达率明显低于模型对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）。结论透明质酸钠膀胱灌注可以减轻大鼠脊髓损伤后膀胱黏膜急性炎症反应以及促进损伤后的膀胱黏膜修复。     

骨髓单个核细胞对大鼠脊髓损伤后行为功能影响的研究

目的：通过建立大鼠脊髓半横断模型,观察骨髓单个核细胞（BMMNCs）对大鼠后肢功能及受损脊髓组织中神经营养因子3（NT-3）表达的影响.方法：无菌条件下取大鼠双侧股骨和胫骨骨髓细胞,用Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞备用.将104只Wistar大鼠随机分为A组（假手术组）,8只;B组（PBS对照组）,48只;C组（BMMNCs实验组）,48只.大鼠术后1d、3d、5d、7d、14d和21d行BBB评分后,用免疫组织化学技术观察各组大鼠受损脊髓组织中NT-3的表达.结果：各个时间点BBB评分测试表明A组较B、C组分值高（P＜0.05）;B组分值较C组低（P＜0.05）.免疫组织化学技术检测显示各个时间点C组大鼠受损脊髓中NT-3的表达量高于B组（P＜0.05）,A组与B、C组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论：BMMNCs能够促进损伤脊髓组织中NT-3的表达,可能是其修复损伤脊髓,促进脊髓功能恢复的机制之一.     

复方丹参注射液对大鼠急性脊髓损伤的保护作用

目的观察复方丹参注射液对急性脊髓损伤大鼠的保护作用。方法采用改良Allen weight dropping（AllenWD）打击法将42只Wistar大鼠制成脊髓中度损伤模型,分别给予复方丹参注射液、甲基强的松龙及生理盐水治疗,观察动物不同时间的神经功能评分、斜板试验及脊髓细胞凋亡率的变化。结果从伤后2周起,丹参组的神经功能评分和斜板最大角度分别与生理盐水组比较,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。从伤后12 h起,丹参组细胞凋亡率与生理盐水组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,丹参组与甲强龙组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论复方丹参注射液对大鼠脊髓损伤细胞凋亡具有保护作用,能够达到治疗急性脊髓损伤的作用。     

骨髓单个核细胞移植对脊髓半横断大鼠损伤组织中髓鞘碱性蛋白表达的影响

目的：研究骨髓单个细胞移植脊髓半横断大鼠脊髓损伤区域后髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）表达的影响.方法：取Wistar大鼠胫骨及股骨提取骨髓单个核细胞,采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,制成细胞悬液.建立大鼠脊髓右半横断模型,造模后分为假手术组、模型组、骨髓单个核细胞移植组.于模型建立成功后7d,14d,21d,28d手术的大鼠进行BBB评分从而评估损伤脊髓神经功能恢复情况,利用RT-PCR观察MBP mRNA的表达变化.结果：术后各时间点假手术组BBB评分均明显高于骨髓单个核细胞移植组、模型组（P＜0.05）;术后随时间延长骨髓单个核细胞移植组、模型组BBB评分逐渐增加,14、21、28d时骨髓单个核细胞移植组BBB评分明显优于模型组（P＜0.05）.PT-PCR测试各时间点骨髓单个核细胞移植组和模型组大鼠脊髓中MBP mRNA的表达量高于假手术组,且骨髓单个核细胞移植组高于模型组（P＜0.05）.结论：骨髓单个细胞移植可提高脊髓组织中MBP的表达,有助于大鼠半横断脊髓损伤神经功能的恢复.