大鼠短暂性局灶脑缺血后早期NOS变化动态研究

在短暂性局灶脑缺血模型上，以依赖还原型辅酶Ⅱ的黄递酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）作为一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的代表物，用组织化学染色体方法结合计算机图像分析，观察局部神经细胞在遭受缺血缺氧后，ＮＯＳ早期变化情况，结果表明，缺血侧早期，ＮＯＳ含量和活性与非缺摁侧相比明显升高，ＮＯＳ含量和活性与缺血时间呈负相关性线关系，结合模型上的组织学变化，显示生物酶学变化在前，形态学改变滞后的规律。     

大鼠局灶性脑缺血后一氧化氮与细胞凋亡关系的研究

目的：研究脑缺血后一氧化氮合酶表达与细胞凋亡的关系。方法：采用大鼠右侧大脑中动脉闭塞模型,观察脑梗塞体积、ＮＯＳ表达,细胞凋亡及ＮＯＳ抑制剂硝基－Ｌ－精氨酸（Ｌ－ＮＡ）,ＮＯ供体硝普钠（ＳＮＰ）对上述结果的影响。结果：ＮＯＳ表达与血再灌流（ＩＲ）早期细胞凋亡有关,ＳＮＰ增加ＩＲ早期细胞凋亡,Ｌ－ＮＡ能够抑制ＩＲ早期的细胞凋亡,但使脑梗塞体积增大。结论：ＩＲ早期ＮＯＳ表达对细胞凋亡有促进作用。     

不同外源性途径干预血管新生对脑缺血模型大鼠神经功能缺失修复的影响

目的探讨脑缺血区血管新生和神经功能缺失修复的关系以及选择较理想的外源性干预途径增加脑缺血区血管新生。方法选择240只SD大鼠分为假手术组、缺血对照组、缺血加VEGF腹腔注射组、缺血加血管内皮祖细胞移植组和缺血加血管内皮因子单克隆抗体组,在1、3、7、14、30、60 d观察各组脑缺血及周边区的血管密度和大鼠的电生理指标(体感诱发电位和运动诱发电位)及行为学(感觉损伤移交实验、轮转跑步机运动功能测定和mNSS改良神经功能评分)。结果缺血加VEGF腹腔注射组、缺血加血管内皮祖细胞移植组的新生血管密度除1 d外其他各时间点均高于缺血对照组(P<0.05),缺血加血管内皮因子单克隆抗体组在后5个时间点新生血管密度小于缺血对照组(P<0.05)。缺血加VEGF腹腔注射组、缺血加血管内皮祖细胞移植组和缺血加血管内皮因子单克隆抗体组在7 d后体感诱发电位和运动诱发电位与缺血对照组有统计学差异(P<0.05)。与缺血对照组相比,缺血加VEGF腹腔注射组、缺血加血管内皮祖细胞移植组和缺血加血管内皮因子单克隆抗体组在3 d后行为学评分有统计学差异(P<0.05)。结论通过外源性干预脑缺血模型大鼠缺血区血管新生,可以影响神经功能缺...     

褪黑素对大鼠局灶性脑缺血后NO含量和NOS活性的影响及其机制

目的：探讨褪黑素对大鼠局灶性脑缺血后NO含量和NOS活性变化的影响及机制。方法：用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。大鼠随机分为假手术组（阴性对照组），缺血组，褪黑素组（给药组）（4mg/kg)，尼莫地平组（阳性药物对照组）（0.2mg/kg)，缺血前30分钟舌下静脉给药。持续性缺血30分钟，6小时，24小时后处死动物，测定NO含量和NOS活性（用分光光度法）。结果：MCAO后，缺血30分钟NO含量及NOS活性升高，缺血6小时降低，24小时再度升高。与模型组比较，缺血30分钟，褪黑素使NO含量及NOS活性或高，6小时，24小时降低。结论：褪黑素对大鼠局灶脑缺血有一定的保护作用，其机制可能与降低脑组织中NO含量与NOS活性，减轻脑组织自由基的损伤有关。     

大鼠脑缺血再灌流脑区一氧化氮合酶的变化

研究大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层,海马,纹状体和小脑组织一氧化氮合酶的变化。方法采用放射免疫法检测脑组织中ＮＯＳ的活性。结果大鼠脑缺血后５ｍｉｎ,各脑区结构型ＮＯＳ（ｃＮＯＳ）活性明显升高,持续到脑缺血３０ｍｉｎ,脑缺血３０－６０开始下降,诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）活性在脑缺血后１０－１５ｍｉｎ开始升高,并持以脑缺血６０ｍｉｎ;脑缺血３０ｍｉｎ再灌注１５ｍｉｎ,各脑区ｃＮＯＳ和ｉＮＯＳ活性明显高于缺血     

脑缺血及再灌流早期大鼠大脑皮质一氧化氮合酶表达的变化

目的　探讨脑缺血和再灌流早期一氧化氮合酶 (NOS)表达的变化。方法　选用体重2 0 0～ 3 50 g的雄性 SD大鼠 3 6只随机分为 6组 :假手术组、单纯脑缺血 15min、2 0 min、3 0 min组以及脑缺血 15min再灌流 3 0 min和 2 4h组。采用 4血管脑缺血动物模型 ,到期动物行 4%多聚甲醛灌注固定 3 0～ 40 min,取脑并后固定 3～ 4h,连续冠状冰冻切片 ,片厚 40μm,NOS组化染色显示 NOS,镜下观察计数 NOS阳性神经元以进行半定量分析。结果　对照组大脑皮质有一定量阳性神经元分布 ;单纯脑缺血早期 NOS表达呈“单峰”变化 ;脑缺血 15min再灌流早期 NOS表达呈“双峰”变化。结论　脑缺血早期和脑缺血再灌流早期 NOS表达变化不同 ,这可能是再灌流加重缺血神经元损伤的原因     

三黄泻心汤抗大鼠脑缺血再灌注损伤作用机制的研究

1　材料与方法1 .1　药物大黄、黄连、黄芩 ( 2∶ 1∶ 3)合并按常规水煎 ,生药含量为 5 0 0 mg/ml。1 .2　动物雄性 Wistar大鼠 2 4只 ,体重 2 80～ 30 0 g,由山东大学医学院实验动物中心提供。1 .3　实验方法大鼠随机分为假手术组、模型组和三黄泻心汤组。实验前 7d三黄泻心汤     

参附注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后NO、NOS的影响

目的 观察参附注射液对局灶性脑缺血再灌注大鼠一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(N0S)活性的影响。方法 Wistatr大鼠随机为分假手术组、脑缺血再灌注组、参附注射液小剂量组、参附注射液大剂量组。采用改良的Longa's法制作大脑中动脉脑缺血再灌注模型，分别测定各组血清、脑组织NO含量和脑组织N0S的活性。结果 大鼠脑缺血2h再灌注24h血清、脑组织NO含量和脑组织N0S的活性明显升高。不同剂量的参附注液能使脑缺血再灌注大鼠血清、脑组织的NO含量及N0S活性明显降低。结论 参附注射液能降低N0S活性，降低NO含量，从而对大鼠脑缺血再灌注有保护作用。     

DDPH对脑缺血的保护作用及其机制的研究

采用家兔急性脑缺血及缺血再灌注模型,观察了ＤＤＰＨ对缺血及缺血复灌时脑组织内Ｃａ＾２＋,Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋等离子及ＮＯＳ（一氧化氮合酶）与ＭＤＡ（丙二醛）含量的影响,０实验发现ＤＤＰＨ８ｍｇ／ｋｇ于缺血前静脉注射,可明显降低ＮＯＳ的活性,减少ＭＤＡ的含量,并可减少由缺血所致脑组织内Ｃａ＾２＋,Ｎａ＾＋等离子的含量。结果提示,ＤＤＰＨ对动物脑缺血具有一定的保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后兴奋性氨基酸、NOS和NO的含量变化

目的 :通过测定大鼠脑缺血再灌注后兴奋性氨基酸 (EAA)、一氧化氮合酶 (NOS)和一氧化氮 (NO)含量的变化 ,探讨脑缺血再灌注损伤的发生机制。方法 :将动物分为假手术组和缺血 30min后再灌注组 ,通过高效液相色谱或分光光度法测定再灌注后不同时间 (1h、6h、2 4h、4 8h和 72h)脑组织EAA、NOS和NO的含量。结果 :再灌注后 1hEAA水平较假手术组显著增高 ,以谷氨酸最为明显 ,随后逐渐下降 ,2 4h达正常水平。NOS和NO于再灌注后1h即升高 (P <0 .0 5 ) ,2 4h达最高水平 (P <0 .0 1) ,72h降至正常。结论 :脑缺血再灌注后EAA、NOS和NO含量发生变化 ,与缺血再灌注脑损伤有相关关系     

川芎嗪对小鼠脑缺血再灌注后Bax、Bcl-2及NO、NOS的影响

目的探讨川芎嗪（TMP）对小鼠脑缺血再灌注后Bax、Bcl-2及NO、NOS的影响及作用机制。方法将72只健康昆明小鼠,分为假手术组、缺血损伤组、TMP干预组,分别予以相应处理。术后24h采用生化方法检测脑组织NOS活性和NO含量;采用免疫组化方法检测海马组织Bax和Bcl-2蛋白表达。术后7d光镜下观察海马CA1区组织学分级和神经元密度（ND）。结果缺血损伤组小鼠脑组织NOS活性（40.7±4.0）U/g pro高于假手术组（17.0±5.0）U/g pro和TMP干预组（31.1±2.4）U/g pro（P均〈0.01）;NO含量缺血损伤组（1.42±0.11）μmol/g pro高于假手术组（0.71±0.14）μmol/g pro和TMP干预组（1.03±0.09）μmol/g pro（P均〈0.01）。与缺血损伤组（Bax 59.7%±15.0%、Bcl-2 23.8%±19.1%）相比,TMP干预组Bax（35.6%±16.3%）表达相对减少（P〈0.01）,Bcl-2（54.8%±17.5%）表达相对增多（P〈0.01）。ND比较：假手术组（144±9）个/mm〉TMP干预组（96±6）个/mm〉缺血损伤组（60±5）个/mm,差异均有统计学意义。结论川芎嗪能够增强脑组织抗氧化应激能力,减轻氧自由基损伤,从而抑制细胞凋亡,减轻脑缺血引起的海马神经元损伤。     

神经干细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响

目的探讨神经干细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响。方法分离培养新生大鼠海马神经干细胞,BrdU进行标记。采用大脑中动脉阻塞法复制脑缺血模型,动物于造模3d后侧脑室注射标记细胞,分别于1、7、14和28d处死动物,观察动物神经功能和移植细胞存活情况。结果神经干细胞能移行至缺血部位并存活,移植后缺血大鼠神经功能明显得到恢复,在14、28d与模型组差异有显著性。结论神经干细胞移植能促进局灶性脑缺血大鼠神经功能的恢复,是中风治疗的有效方法。     

醒脑静对急性脑出血患者术后神经功能、脂蛋白的影响

目的　观察早期手术联合醒脑静治疗急性脑出血 (ACH)对患者神经功能、脂蛋白的影响。方法12 0例ACH随机分为 2组 ,治疗组 (6 0例 )采用早期手术联合醒脑静注射液治疗 ;对照组 (6 0例 )应用脑复新注射液治疗 ;均观察 4周。治疗前后进行神经功能缺损程度评分 ,检测高密度脂蛋白 (HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、胆固醇 (CHO)、甘油三脂 (TG)。结果　治疗组治疗后神经功能缺损评分 (17 2± 1 6分 )与对照组(2 6 6± 1 8分 )比较 ,显著降低 (P <0 0 1) ,临床总有效率为 91 7% ,显著高于对照组 75 0 % (χ2 =4 9,P<0 0 5 ) ;与对照组比较 ,治疗组HDL升高显著 (P <0 0 1) ,LDL下降明显 (P <0 0 5 ) ,CHO、TG下降显著(P >0 0 1)。结论　早期手术联合醒脑静治疗急性脑出血能显著改善患者的神经功能缺损程度 ,提高临床疗效 ,降低致残率 ,同时使患者的脂代谢紊乱得到改善。     

脑缺血/再灌注前后一氧化氮合酶在脑皮质中的表达

目的观察小鼠脑缺血/再灌注(CIR)前后一氧化氮合酶(NOS)的3个亚型:神经元型(nNOS)、诱导型(iNOS)和内皮型(eNOS)在小鼠脑皮质中的变化,探讨NOS在CIR损伤后的不同作用。方法健康雄性ICR小鼠32只,随机分为假手术组(n=16)和短暂性大脑中动脉闭塞再灌注(tMCAO)模型组(n=16)。tMCAO模型组采用改良的线栓法制作,再灌注24 h后应用氯化三苯四氮唑(TTC)染色测量梗死体积,应用免疫组织化学法观察各组小鼠脑皮质中nNOS、iNOS和eNOS的表达。结果假手术组nNOS、iNOS和eNOS在脑皮质中少量表达,与假手术组比较,tMCAO组小鼠脑梗死体积明显增加;脑皮质区nNOS、iNOS和eNOS阳性细胞数均显著增多(P<0.05)。结论小鼠CIR损伤后,nNOS和iNOS表达的增加可以引起神经损伤,而eNOS表达的增加,可能发挥神经保护作用。     

脉冲Nd∶YAG激光对口腔溃疡组织中NO及NOS含量的影响

目的 探讨脉冲Nd:YAG激光不同照射剂量对大鼠实验性口腔黏膜溃疡组织中一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)含量的影响.方法 健康Sprague-Dawley大鼠56只,随机分为7组(n=8):1组为正常埘照组,其余6组建立口腔黏膜溃疡动物模型,分别为溃疡组,药物组和激光含量1.5 W 40 rnJ组、1.5 W 60 mJ组、1.5 W 80 mJ组、1.5 W 100 mJ组.末次治疗24 h后观察溃疡愈合时间.采用分光光度仪测定大鼠口腔黏膜组织中NO、NOS的含量.结果 实验剂量范围内,1.5 W 60 mJ、1.5 W 80 mJ激光组较溃疡组N0、NOS活性显著降低(P<0.05).1.5 w 60 mJ、1.5 W 80 mJ激光组与正常对照组NO、NOS活性含量没有显著性差异(P<0.05).结论 适合的剂量参数,采用适量脉冲Nd:YAG激光照射口腔黏膜溃疡能有效降低组织中NO、NOS活性含量,起到治疗口腔黏膜溃疡的作用.     

"楼梯测试"评价局灶性脑梗死大鼠前肢功能研究

目的:探索"楼梯测试"评价局灶性脑梗死大鼠前肢延伸和抓取能力的有效应性.方法:实验选择左利爪SD大鼠18只,随机分为正常组、假手术组和手术组,每组6只;正常组不作任何手术处理,假手术组仅作颈外动脉结扎,手术组用线栓法制成局灶性脑梗死大鼠模型;用树脂玻璃材料做成的可抽取楼梯测试盒比较3组大鼠前肢的延伸和抓取能力.结果:所有大鼠经过适当训练均能完成"楼梯测试"实验,3组在训练的第7天组间无统计学差异(P＞0.05);正常组和假手术组在3个时间点的抓取能力均无统计学差异(P＞0.05);手术组的术后第7天和第14天的抓取能力与术前第1天比较均有显著性差异(P＜0.05),术后第7天和第14天抓取能力无统计学差异(P＞0.05).结论:"楼梯测试"能简单和有效的评估局灶性脑梗死大鼠前肢独立伸展技术能力,能客观定量地反映实验大鼠的前爪功能,是研究实验干预脑梗死大鼠前肢功能恢复的方法学手段之一.     

线栓法制作大鼠脑缺血模型不同类型神经功能缺损特点的研究

目的分析线栓法大脑中动脉阻塞(MCAO)制作大鼠脑缺血模型的类型及不同类型的神经功能缺损情况。方法 150只雄性SD大鼠参照Zea-Longa线栓法造模,术后24 h行MR扫描,根据扫描结果将大鼠分成皮质梗死组(CIG)、皮质下梗死组(SIG)及无梗死组(NIG)3组,分析造模术后1 h及24 h的行为学表现。结果 CIG组与SIG组的神经功能缺损在MCAO1h后均与NIG组有统计学差异(P<0.01),而在24 h后CIG组的神经功能缺陷程度明显大于SIG组(P<0.01),但是SIG组大鼠的神经功能缺陷程度与NIG组无明显统计学差异(P>0.05),而在SIG组中1h后与24h后比较神经功能缺损差异有统计学意义(P<0.01)。结论线栓法MCAO制作大鼠脑缺血模型的不同类型所表现的神经功能缺损特点不一样,皮层下梗死在24h内可自行恢复。     

不同脑缺血方式对大鼠学习记忆能力的影响

目的建立一种合适的脑缺血动物模型对于探寻疾病的发生以及防治至关重要。方法本研究采用双侧颈总动脉(CCA)永久性结扎法、双侧椎动脉(VA)电凝并双侧颈总动脉反复夹闭法、双侧颈总动脉反复夹闭并全身低血压3种不同的脑缺血模型制作方法处理大鼠,并于术后15d、30d、60d、90d4个不同时间点进行Morris水迷宫测试,应用SPSS11.0统计软件分析各组大鼠的行为学检测结果,采用平均逃避潜伏期和搜索策略两个指标评价大鼠学习记忆能力。结果脑缺血30d以内,大鼠的学习记忆能力以双侧VA电凝并双侧CCA反复夹闭法和双侧CCA反复夹闭并全身低血压制作的模型组最差[术后30d,逃避潜伏期分别为:(29.23±5.39)s,(30.03±8.84)s;综合得分:(766.20±173.55)分,(610.20±73.81)分];脑缺血30~60d,以双侧CCA永久性结扎法和双侧VA电凝合并双侧CCA反复夹闭法制作的模型组最差[术后60d,逃避潜伏期为:(18.56±4.15)s,(20.61±4.87)s,综合得分:(449.4±95.45)分,(437.4±80.22)分];60d以上,以双侧CCA永久性结扎法制作的模型组成绩最差[术后90d该组的逃避潜伏期:(16.63±3.00)s;综合得分:(410.8±92.37)分]。结论不同脑缺血方式对大鼠学习记忆能力的影响和不同的缺血时间密切相关,适合于不同病因诱发的脑缺血梗死疾病的研究。     

注射用心肌肽对幼鼠离体心脏缺血再灌注能量代谢的影响

目的：探讨注射用心肌肽对幼鼠离体心脏缺血再灌注能量代谢的影响及机制。方法：50只SD幼鼠,随机分为5组（n=10）,正常对照组：心脏灌流20 min稳定后,再持续灌注150 min;正常+注射用心肌肽组：同正常对照组,但在灌流液中加入注射用心肌肽50 mg/L;模型对照组：心脏灌流20 min稳定后,停搏液停搏（缺血）90 min,再恢复正常灌流（再灌注）60 min,建立心肌缺血再灌注损伤模型,灌流用K-H缓冲液,停搏用ST.Thomas’II停搏液;注射用心肌肽1组(CMP1组)：停搏液加入注射用心肌肽100 mg/L;CMP2组：灌流液加入注射用心肌肽50 mg/L及停搏液加入注射用心肌肽100 mg/L）。监测不同组离体灌流心脏心率(HR）、收缩力(△T)及最大收缩速度(+dT/dtmax)和最大舒张速度(-dT/dtmax)、冠状动脉流量(CF)、复搏时间,透射电镜观察缺血再灌注损伤模型组中幼鼠心肌组织超微结构改变。进一步检测3个缺血再灌注损伤组冠状动脉流出液中肌酸激酶同工酶（CK-MB）含量的变化,心肌组织能量及氧化抗氧化代谢指标、丙二醛、NO的含量,检测心肌组织NOS、醛糖还原酶的活性,实时荧光定量PCR相对定量检测心肌组织iNOS,eNOS和Akr1b4 mRNA表达。结果：正常对照组离体心脏长时间灌流后心功能无明显变化,注射用心肌肽对正常心脏心功能无明显影响。与模型对照组比较,两个用药组心搏功能下降轻微,冠状动脉流量较好。电镜观察可见模型对照组心肌肌原纤维断裂,线粒体肿胀,而用药组心肌组织结构较完整,线粒体未见明显肿胀变性。再灌注后,模型对照组CK-MB增加。与模型对照组比较, 两个用药组的CK-MB含量低,Na+-K+ ATP酶、Ca2+-Mg2+ ATP酶、心肌总ATP酶活性相对较高,超氧化物歧化酶活性也增高,丙二醛、NO含量低,心肌组织NOS、醛糖还原酶的活性下降,iNOS,Akr1b4 mRNA表达下调,其中CMP2组改变更为明显（P＜0.01或P＜0.05）。此外eNOS mRNA表达在CMP2组升高（P＜0.05）,而在CMP1组中变化无统计学意义（P>0.05）。结论： 注射用心肌肽可改善缺血心脏再灌注后的能量代谢,增加冠状动脉流量,提高心功能,对幼鼠未成熟心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,灌流液及停搏液均加入注射用心肌肽对未成熟心肌缺血再灌注损伤的保护作用效果更佳。其作用机制可能与抑制心肌细胞iNOS, Akr1b4 mRNA表达,减少NO生成,抑制醛糖还原酶的活性有关。     

大鼠局部脑缺血后NADPH-d神经元的变化

目的：观察缺血性脑损害中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）神经元的变化规律,探讨一氧化氮（ＮＯ）参与缺血性脑损害的机制。方法：采用组织化学染色方法观察大鼠局灶性脑缺血后尼克酰胺腺啶呤二核酸磷黄递酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）阳性神经元的变化规律。结果：大鼠局灶性脑缺血后ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性神经元明显增加,缺血２ｈ后出现形态学改变,且以细胞皱缩、胞浆致密为主要死亡方式。结论：ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性元对缺血性损害相对耐受,细胞凋