肺内M受体异质性的研究Ⅰ——豚鼠肺内两种不同亲和性M受体结合部位的检定

以~3H-QNB为标记配基,应用放射性配基结合法,对豚鼠肺组织内的M受体进行了检定。发现在豚鼠肺内的M受体对~3H-QNB表现出两种不同的亲和性,其中高亲和性M受体结合部位的平衡解离常数Kd=1.58±0.71nM,最大结合容量Bmax=28.29±5.98fmol/mg蛋白质;低亲和性M受体结合部位的Kd=16.29±3.89nM,Bmax=68.64±12.58fmol/mg蛋白质。高、低亲和性结合占总结合部位的比例分别约为29%和71%,二者的比值(H/L)约为1∶2.4。     

大鼠脑局部缺血再灌注后M受体的变化

目的　研究大鼠大脑中动脉梗塞造成局灶缺血再灌注模型中大脑皮层M受体最大结合容量 (Bmax)与亲和力 (Kd)随时间的变化。方法　采用线栓法阻断大鼠大脑中动脉产生局灶性脑缺血再灌注模型。以3H -QNB为M受体放射性配基 ,采用受体结合分析方法测定M受体Bmax与Kd值。结果　各实验组的Kd值都没有发生变化 ;再灌注 8小时组Bmax同对照组相比开始下降 ,但没有统计学差异 ,再灌注 2 4、 72小时组的Bmax明显降低 ,于再灌注 2 4小时达到最低。结论　M受体在整个脑缺血及再灌注过程中的亲和力并没有改变 ,但M受体数量并不是立即而是逐渐降低的。     

电针对哮喘豚鼠肺中β受体和cAMP含量的动态变化的影响

采用放射配基结合分折法和蛋白结合分析法,分别测定实验性过敏性哮喘豚鼠肺组织内β受体最大结合量(Bmax)和cAMP含量的动态变化,以及电针刺激对哮喘发作的初期(第1天起给予刺激)与后期(第9天起给予刺激)的影响。结果表明,哮喘豚鼠肺组织中β受体Bmax值和cAMP含量,哮喘发作的第8天及第14天时明显低于对照组;电针刺激可使哮喘豚鼠肺组织内β受体Bmax值和cAMP含量,无论在发作的初期还是在后期均能恢复至正常水平,但电针刺激对正常豚鼠未见有影响。     

肺内两组不同亲和力的M受体的检定(简报)

应用放射性配基结合法对正常豚鼠肺组织的M五胆碱能受体进行了核定。结果:肺组织细胞膜匀浆与M受体的高特异性标记配基。~3H-QNB的结合呈现为一条向下凹陷的双曲线。此现象表明:受体对其配基表现出不同的亲和     

外周血完整淋巴细胞β受体饱和性质的研究

用放射配基测定法探讨人和大鼠血淋巴细胞β受体与[~3H]DHA结合的饱和性质。试验表明:人及大鼠血淋巴细胞β受体存在高亲和力低容量及低亲和力高容量两个结合部位,在测定有生理活性的高亲和力低容量位点时,正常人完整血淋巴细胞β受体密度(Bmax)为548.64±79.71fmol/10~7细胞,平衡解离常数(Kd)为6.80±1.40nM。正常SD大鼠完整血淋巴细胞β受体Bmax为285.21±32.71 fmol/10~7细胞,Kd为5.94±1.47nM。     

中药外敷对哮喘豚鼠肺组织β和M受体含量的影响

目的：观察豚鼠哮喘急性发作时肺组织β肾上腺素能受体和M胆碱能受体含量变化及中药外敷对其影响。方法：用Hutson法造模和诱喘，治疗组予中药外敷，对照组予0．9％生理盐水浸润纱布外敷，2周后取肺组织，用放射配基结合分析法测定其中β受体和M受体含量。结果：豚鼠哮喘性发作时肺组织β受体含量明显降低，M受体含量明显升高，而中药外敷能其恢复正常。结论：提高肺组织β受体含量和降低M受体含是是中药外敷治疗哮喘的机理之一。     

融合蛋白LHRH-PE40与癌细胞表面LHRH受体结合的特性

目的 :探讨重组毒素 LHRH- PE40与癌细胞表面 LHRH受体结合的特性。方法 :用放射性配基结合分析的方法测定亲和力和受体容量。结果 :LHRH- PE40与 Hela细胞的亲和力 :Kd=( 0 .36± 0 .1 2 ) nmol,容量 Bmax=( 0 .2 3± 0 .1 5 )μmol· g-1;与 Hep2细胞亲和力 :Kd=( 0 .33±0 .1 1 ) nmol,容量 Bmax=( 0 .46± 0 .1 2 ) μmol· g-1。结论 :重组毒素 LHRH- PE40保留了天然LHRH与其受体结合的高亲和力     

甲状腺激素低下对小鼠脑β-肾上腺素能受体的影响

为证实甲状腺激素对中枢神经系统的影响与β受体活动的关系,本文采用内服甲基硫氧嘧啶制作小鼠低甲状腺激素的模型,再用放射配基结合分析法测定小鼠脑β受体最大结合容量(Bmax)和亲和力(KD)的变化。并以助阳药进行实验性治疗。结果表明:脑组织B受体Bmax较对照组显著减少(p<0.00     

小鼠急性肺损伤后糖皮质激素受体的活性改变与热休克蛋白的关系

目的 研究急性肺损伤(ALI)后机体内糖皮质激素受体(GR)的配体结合活性显著下降与其分子伴侣热休克蛋白(Hsps)改变的关系.方法 以小鼠油酸急性肺损伤为模型,用Western blotting和受体的放射配体结合试验动态观察伤后GR、Hsp90、Hsp70和GR的结合容量和亲和力变化.结果 伤后小鼠肺组织水肿、肺体指数和肺含水量显著升高;GR在伤后1 h升高,然后显著下降,在12 h达最低点;Hsp90和Hsp70在伤后的表达逐渐升高,在12 h达最高点.配体结合试验显示在伤后GR Bmax逐渐下降,Kd值升高,与Hsp90/GR的变化趋势一致.结论 急性肺损伤后的GR配体结合活性的改变可能与Hsp90的变化有关.     

肝细胞肝癌与癌旁肝组织胰岛素受体结合特性的对比研究

目的　研究肝细胞肝癌与癌旁肝组织胰岛素受体密度与亲和力的差异。方法　采用体外受体结合实验 ,通过 Scatchard分析 ,计算两种细胞膜的最大结合容量 (Bmax)与平衡解离常数 (Kd值 )。结果　肝癌细胞膜胰岛素受体 Bmax为 1.94± 0 .6 4pm ol/ mg蛋白 ,Kd值为 2 .12± 0 .6 2 nmol/ L;癌旁肝组织细胞膜胰岛素受体 Bmax为1.42± 0 .5 7pmol/ mg蛋白 ,Kd值为 2 .2 1± 0 .78nm ol/ L。肝癌细胞膜胰岛素受体 Bmax显著高于癌旁组织细胞膜 (P<0 .0 5 ) ,而肝细胞肝癌与癌旁肝组织细胞膜的胰岛素受体亲和力无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论　肝细胞肝癌较癌旁肝组织表达胰岛素受体增高 ,而受体亲和力无明显差异     

豚鼠呼吸道合胞病毒感染咳嗽模型及神经原性炎症机制

目的 建立豚鼠呼吸道合胞病毒(RSV)感染急性和感染后咳嗽模型,探讨其神经原性炎症在咳嗽发病中的的作用.方法 50只豚鼠随机分成对照组以及病毒感染后6、12、28和42 d组各10只,滴鼻接种RSV;测定咳嗽反射敏感性(CRS).支气管肺泡灌洗液细胞学和肺组织病理学观察气道炎症.免疫荧光和荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测RSV抗原和核酸.酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆P物质含量;FQ-PCR法检测肺组织P物质受体神经肽受体1(NK1)的mRNA表达;免疫组化检测肺组织P物质蛋白表达;进行P物质、NK1 mRNA水平与CRS的相关性分析.结果 免疫荧光可见RSV感染肺组织病毒抗原表达;FQ-PCR结果显示肺组织RSV RNA随着感染后时间推移呈逐步降低趋势.感染后6、12、28和42 d组豚鼠咳嗽总次数分别为(8.0±3.8)、(8.7±6.2)、(7.6±4.4)和(6.7±3.7),均明显高于对照组(2.5±1.4)的水平(均P<0.05),以感染后12 d组最为明显(P<0.01).肺泡灌洗液细胞学和肺组织病理学显示,感染组在急性期以气道炎症表现为主.各感染组肺组织P物质含量均明显高于对照组,蛋白检测可见明显阳性表达.感染组肺组织NK1 mRNA表达除6 d组外,均高于对照组.相关分析显示,各感染组CRS均与P物质和NK1 mRNA水平呈正相关(均P<0.05).结论 RSV感染咳嗽模型成功建立;P物质及其受体释放增加引起的神经原性炎症可能是模型豚鼠CRS增高和感染后咳嗽的关键机制.

Abstract：

Objective To establish a guinea pig model of acute and postinfectious cough caused by respiratory syncytial virus (RSV) infection and investigate the role of neurogenic inflammation in its pathogenesis. Methods Fifty guinea pigs were randomly divided into control group and four groups of Days 6, 12, 28 and 42 after RSV inoculation (n=10 each). The RSV suspension was inoculated by intranasal instillation. Buxco system was used to assess the cough reflex sensitivity (CRS) to inhaled capsaicin. Airway inflammation was determined by bronchoalveolar lavage fluid(BALF)cytology and lung histopathology. RSV antigen and nucleic acid were detected by immunofluorescence and real-time fluorescence quantitative PCR (polymerase chain reaction). After modeling, the content of substance P in homogenate of lung tissue was detected by ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) kit. The level of neurokinins receptor 1 (NK1) mRNA in lung tissue was detected by real-time PCR. The expression of substance P protein in lung tissue was detected by immunohistochemistry. The correlation analyses between CRS and the levels of substance P and NK1 mRNA were performed respectively. Results The viral antigen expression could be found in lung tissue of RSV infected guinea pigs. The concentration of RSV RNA content showed a gradually decreasing trend with infection time until 42 days at very low titers. The CRS values were (8.0±1.2), (8.7±2.0), (7.6±1.4) and (6.7±1.2) cough counts at Days 6, 12, 28 and 42 respectively. Compared with (2.5±0.5) cough counts of control group, the CRS to capsaicin increased significantly in all animals with PIV3 inoculation (all P<0.05) and peaked at Day 12 (P<0.01). BALF cytology and lung tissue pathology showed airway inflammation during the acute stage of infection without pneumonia. All the contents of substance P in lung tissue homogenates increased markedly in infected groups. The immunohistochemical results of substance P in lung tissue of infected groups showed a distinct brown-yellow positive expression. In addition to Group Day 6, the NK1 mRNA contents of lung tissue in all other infection groups became elevated significantly. The correlation analysis showed a positive correlation between CRS and the levels of substance P and NK1 mRNA (all P<0.05). Conclusion A guinea pig model for cough of RSV infection has been successfully established. The elevated releases of substance P and its receptor may cause neurogenic inflammation. And airway neurogenic inflammation may play a decisive role in the heightened CRS and postinfectious cough induced by RSV.     

呼吸道合胞病毒所致豚鼠中耳内耳病变的光镜观察

将呼吸道合胞病毒注入豚鼠中耳腔内,于接种后不同时间取材进行病毒分离,血清学检查及光镜观察。中耳粘膜病毒培养阳性率一周内为50％。血清特异性抗体IgG滴度呈逐渐增高的趋势。光镜观察中耳粘膜以变性坏死性炎症为主。伴有以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润,三周后基本恢复。耳蜗毛细胞部分变性,少数坏死。前庭终器感觉毛细胞亦出现变性。结果表明:呼吸道合胞病毒能致豚鼠急性中耳炎症,并使内耳感觉毛细胞变性。     

呼吸道合胞病毒感染小鼠Th17细胞亚群的变化

目的观察辅助性T淋巴细胞17（Th17）在呼吸道合胞病毒（RSV）感染小鼠肺部炎症中的变化,探讨其在RSV感染后宿主免疫机制中的作用。方法 30只3～5周龄雌性BALB/c小鼠随机分为实验组（18只）和对照组（12只）。实验组每只小鼠鼻腔滴入0.1 mL滴度为107.5TCID 50/mL的病毒液,对照组鼻腔滴入0.1 mL的2.5%灭活鸡血清的DMEM维持液。在处理后的第1、4、8 d分别处死小鼠,并留取肺脏和肺门淋巴结。用HE染色观察RSV感染后肺组织病理变化;实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织中RSV-F、IL-17A、IL-17F和IL-23p19 mRNA表达水平;流式细胞术检测小鼠肺门淋巴结中Th17细胞水平。结果在RSV感染后第4 d小鼠肺组织出现典型间质性肺炎表现,第8 d炎性细胞明显减少;肺组织中RSV病毒的相对表达量在第4 d为9.208±0.548,较第1 d显著增多（P〈0.01）,到第8 d则较第4 d显著减少（P〈0.01）;肺组织中IL-23p19和IL-17A等细胞因子的表达在RSV感染后也呈现增高的趋势,并在第4 d达到高峰,但IL-17F mRNA表达在RSV感染后不同时间点与对照组比较无显著变化（P〉0.05）;RSV感染后第4 d和第8 d小鼠肺门淋巴结Th17亚群比例分别为（0.370±0.043）%和（0.853±0.048）%,均明显高于相应的对照组（P〈0.05）,而且第8 d的Th17比例也显著高于第4 d（P〈0.01）。结论在RSV感染小鼠导致的肺部炎症反应过程中,出现肺组织中IL-17A的表达增加和肺门淋巴结Th17细胞水平增高,说明Th17细胞可能参与宿主的抗病毒免疫过程。     

SA脂质体介导GFP／bFGF基因在豚鼠耳蜗中的表达

目的 :观察天然碱性脂 (Stearylamine,SA)脂质体介导绿色荧光蛋白 /碱性成纤维细胞生长因子(GFP/bFGF)基因于不同时间段豚鼠耳蜗中的表达 ,为进一步研究耳聋的基因治疗提供实验基础。方法 :取豚鼠 1 6只 ,分成 4组 ,每组 4只。其中 3只右耳圆窗内注入SA -GFP/bFGF复合物 ,1只同法注入生理盐水作为对照。分别于术后第 2、7、1 4、2 1天取材。在荧光显微镜下观察GFP的表达 ,用免疫组化法检测bFGF的转导情况。结果 :荧光显微镜下见双侧耳蜗于术后第 2天开始部分细胞发出绿色荧光 ,第 7天达到高峰 ,支持细胞及内外毛细胞均显荧光 ,细胞轮廓清晰 ;第 1 4天开始减弱 ,第 2 1天消失。免疫组化染色显示 ,除血管纹外 ,耳蜗各回Corti器、螺旋韧带、螺旋缘及螺旋神经节细胞均有高浓度的表达产物 ,对照动物呈阴性表达。结论 :SA脂质体介导的GFP/bFGF基因单耳给药双侧耳蜗均有高效表达 ,为进一步研究基因治疗耳聋提供了可能。     

胰岛素及其受体在肾缺血再灌注损伤中的作用

目的　探讨肾缺血再灌注 (IR)过程中胰岛素及其受体的作用。方法　采用钳夹肾动脉的方法建造急性缺血再灌注肾损伤模型。将大耳白兔分为对照组、单纯缺血再灌注组 (IR组 )、胰岛素处理组 (Ins+IR组 ) 3组 ,Ins+IR组再灌注的同时给予胰岛素溶液 (Ins3U/ kg.wt) ,而对照组和 IR组则给予等量生理盐水。测定各组动物的血糖、血清胰岛素水平及肾组织胰岛素受体高、低亲和力常数 (Kd1 ,Kd2 )和高、低亲和力受体最大结合容量(Bmax1 ,Bmax2 )。结果　缺血再灌注 2 h后 ,3组动物血糖值、血清胰岛素水平均较术前显著升高 (P<0 .0 5 ) ,IR组尤为显著 ,IR组 Kd1 、Kd2 、Bmax1 、Bmax2 均较对照组显著降低 (P<0 .0 5 ) ,Ins+IR组仅 Bmax2 较对照组显著降低 (P<0 .0 5 ) ;4 8h后 ,3组动物血糖值恢复至正常水平 ,对照组胰岛素水平恢复至正常水平 ,IR组也较 2 h时明显下降(P<0 .0 5 ) ,但仍明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,3组动物 Kd1 、Bmax1 值无差异 ,Ins+IR组 Bmax2 仍维持较低水平 (P<0 .0 5 ) ,Ins组 Kd2 明显高于对照组 (P<0 .0 5 )。结论　在肾 IR过程中 ,内源性胰岛素的作用减弱 ,外源性胰岛素对肾组织高亲和力受体位点无下降调节作用 ,但胰岛素可引起低亲和力受体数目的下调。胰岛素减轻 IR肾损伤的作用主要是     

Overview of bronchiolitis

Respiratory syncytial virus RSV, a nonsegmented, single stranded ribonucleic acid virus, infects one-half of all infants within the first year of life. Respiratory syncytial virus possesses pathogenetic qualities that may be attributed to the interplay of viral and host-specific factors including virus strains of different virulence, size of the inoculum, family history of asthma or airway hyper-reactivity and immunologic anomalies of the host. Inflammatory cell recruitment and activation occur in response to RSV infection of epithelial cells. Epithelial cells initiate the inflammatory response to RSV by elaborating a wide variety of cytokines and chemokines that trigger further inflammatory responses. Treatment of RSV in infants with bronchiolitis is complicated due to the multifactorial nature of this infection. Treatment of RSV bronchiolitis rests primarily on supportive care with oxygen and fluid management. Other therapies commonly used include bronchodilators, corticosteroids and ribavirin, where considered appropriate. Although oxygen administration and judicious fluid replacement are the only interventions proved to be of reliable benefit to infants with bronchiolitis, newer studies support a role for adjunctive therapies aimed at relieving airway obstruction, especially when administered very early in the course of the illness or given to infants with more severe disease.     

Serotonin (5-HT1c) receptors in pig choroid plexus.

It is very important to find suitable reaction conditions to attain a high specific binding (specific/total binding) in the receptor binding study. Membrane homogenates of pig choroid plexus are known to have exclusively serotonin (5-hydroxytryptamine, 5-HT) receptor of the subtype 5-HT1c. In this study, we used the membrane preparation of pig choroid plexus tissue and the specific binding of [3H]5-HT was 72-84% to serotonin receptor subtype 5-HT1c, as defined by the inhibition of 1 uM 5-HT, when a radioligand concentration of 0.5 nM of [3H]5-HT was used in the assay. Analysis of the properties of specific [3H]5-HT binding in pig choroid plexus tissue membrane preparation revealed linear Scatchard plots. In Tris-HCl buffer without CaCl2, pargyline or ascorbic acid, high average of affinity dissociation constant (Kd) of 1.3 +/- 0.2 nM (SEM, n = 4) and also a high average of receptor density (Bmax) of 284 +/- 12 fmol/mg of protein were found. Pig choroid plexus proves to be a good material for 5-HT1c receptor binding study.     

头部X线照射后大鼠血清中皮质酮含量和脾细胞中糖皮质激素受体变化及其相互关系的研究

给Wistar大鼠以10Gy X射线头部照射后不同时间测定血清皮质酮含量和脾细胞中糖皮质激素受体,结果表明:头照后24h受体数已降到对照组的25％,以后逐渐回升,至第9天恢复到接近正常水平。头照后受体的最大结合容量有降低趋势,但差异不显著,而Kd值显著增大,亲和力降低。皮质酮含量的变化呈双峰曲线,第1天即显著增高,至第9天仍显著增高,皮质酮含量和受体的变化规律不一致。体外实验还证实了1～10倍血清浓度的皮质酮在短时间内不会引起所测定的GCR改变。证明皮质酮的变化虽然可能是引起受体变化的一个原因,但不是主要原因。