头面部常规^60钴照射及顺铂应用对豚鼠耳蜗的影响

将实验豚鼠分成60钴70Gy照射组，60钴50Gy照射组，顺铂治疗组，60钴50Gy照射加顺钱治疗组，对照组，共5组每组9耳，顺铂腹腔注射2mg/kg/次，共10次，用电瓜在测听仪分别在实验前、60钴照射后或应用顺铂后10周测定ABR阈值，对全耳蜗铺片基底膜上的内、外毛细胞及柱细胞缺损九进行定量观察计数。结果各组实验耳在ABR阈值测定上均无显著性差异。在基底膜内、外毛细胞及柱细胞缺损方面，提示随着放射剂量的增大，耳蜗毛细胞的损伤也随之增加。应用顺铂后可加重放射对耳蜗的损害，但按临床常规应用顺铂的剂量则对耳蜗是安全的。     

^60Co照射对豚鼠耳蜗的影响

对9只豚鼠右耳用~(60)Co照射70Gy,左耳作为正常对照。用电反应测听仪分别在照射前和照射后10周测定ABR阈值,并对基底膜上的外毛细胞、内毛细胞和柱细胞缺损数进行定量观察。发现照射耳与对照耳听功能均无明显改变,但内、外毛细胞和柱细胞缺损计数有显著差异。提示~(60)Co照射总量低于70Gy时对听功能无明显影响,但仍能造成不可逆的毛细胞散在性缺失。     

丹参对顺铂耳蜗毒性的防护作用

目前有研究发现一氧化氮(nitric oxide,NO)与顺铂导致的内耳毒性关系密切,增加的NO可能参与了顺铂的耳毒性作用。近来又有文献报道,丹参salvia miltiorrhiza)可以通过降低一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性以降低庆大霉素耳毒性。但是,丹参能否降低顺铂耳毒性,是否通过影响NOS表达来实现,目前尚未见报道。本研究拟采用顺铂内耳中毒的动物模型,通过免疫组织化学、图像分析、听性脑干反应测定、电镜观察等方法,来探讨顺铂耳蜗毒性的机制,以期寻求防治顺铂耳蜗毒性损伤的有效药物。     

顺铂作用下沙鼠耳蜗细胞Bcl-2及Bax的表达

目的 :通过检测应用顺铂 (CDDP)前后凋亡相关蛋白 Bcl- 2蛋白家族中 Bcl- 2和 Bax在沙鼠耳蜗 Corti氏器和螺旋神经节 (SG)神经元的表达情况 ,探讨 Bcl- 2蛋白家族是否参与了 CDDP诱导耳蜗细胞凋亡。材料和方法 :对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射 ,4 mg/ kg,分别于给药 4、5、6、7天组各处死沙鼠 10只 ,取左侧耳蜗 ,做平行蜗轴的石蜡切片 ,用免疫组织化学方法检测连续用药不同时间后底转 SG及 Corti氏器的 Bcl- 2及 Bax的表达变化情况。结果 :在用药 4～ 7天中 ,耳蜗底转 SG及 Corti氏器的 Bcl- 2表达不断下降 ,分别在用药第 6天和第 7天时低于正常 ;Bax在用药第 5～ 7天时显著高于正常。结论 :CDDP作用下 ,Bcl- 2和 Bax表达发生变化 ,Bcl- 2蛋白家族参与了 CDDP诱导的耳蜗细胞凋亡。     

卡那霉素对豚鼠耳蜗碳酸酐酶活性的影响

本实验对豚鼠在卡那霉素（ＫＭ）致聋后和对照组进行了碳酸酐酶（ＣＡＨ）组织化学活性研究，结合图象分析技术和听觉脑干反应（ＡＢＲ）测试，观察豚鼠用ＫＭ后听力发生变化时耳蜗ＣＡＨ的变化。探讨了耳蜗内、外毛细胞区及血管纹ＣＡＨ的变化及其与听功能的关系。结果指示，ＫＭ所致听力损伤与耳蜗ＣＡＨ的变化有关。     

豚鼠耳颞部60Coγ射线照射对耳蜗核影响的实验研究

目的探讨60 Coγ射线照射对豚鼠耳蜗核神经元的影响。方法 48只豚鼠随机分为对照组(8只)和实验组(40只),实验组豚鼠于右耳颞部做一次性40Gy 60 Coγ射线照射后的1、4、7、14、30d行听性脑干反应(audi-tory brainstem response,ABR)测试,然后处死,行耳蜗核石蜡切片HE染色及免疫组织化学染色,观察细胞形态及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)。对照组不予60 Coγ射线照射,行ABR测试后行耳蜗核HE染色,方法同实验组。结果对照组ABR反应阈为29.17±1.95dB SPL,实验组在接受60 Coγ射线照射后1、4、7、14、30dABR阈值升高,分别为31.88±2.59、35.00±3.17、35.83±2.04、39.17±2.05、41.67±2.58dB SPL,照射后4、7、14、30d ABR反应阈与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组各时间点ABR波I、II、III潜伏期及I-II、II-III、I-III波间期延长,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示实验组在照射后不同时间点均出现耳蜗核神经细胞肿胀、胞核皱缩或碎裂、尼氏体减少,以14、30天时改变明显。对照组耳蜗核Caspase3免疫组化染色的灰度值为172.33±17.81,实验组60 Coγ射线照射后1、4、7、14、30d耳蜗核Caspase3免疫组化灰度值分别为136.37±24.42、94.67±15.33、91.40±11.71、110.80±4.23、123.56±32.56,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 60 Coγ射线照射可导致耳蜗核损伤;Caspase3表达上调可能与耳蜗核神经元射线损伤有关。     

顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞钙蛋白酶表达的影响

目的：观察顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞钙蛋白酶（calpain ）表达的影响,探讨顺铂致耳蜗毛细胞凋亡的机制。方法取出生后3 d的昆明小鼠300只（600耳）,分离出耳蜗基底膜600条,体外培养24 h后,随机分为对照组和4、8、16μg／ml顺铂组,每组150条;对照组加入2ml新鲜培养基,顺铂组分别加入2 ml含不同浓度顺铂（4、8、16μg／ml）的新鲜培养基,再继续培养24 h后,应用Hoechst 33258荧光染色观察耳蜗毛细胞凋亡情况,并应用免疫荧光染色和免疫印迹（Western blot）技术检测calpain 1（μ－calpain）和calpain 2（m －calpain）在耳蜗毛细胞的表达。结果4、8、16μg／m l顺铂组耳蜗毛细胞凋亡率分别为15．63％±0．20％、38．40％±2．64％和64．24％±0．05％,均高于对照组（5．55％±0．12％）,呈现明显的量效关系;不同浓度顺铂组μ－calpain和m －cal‐pain的表达均较对照组明显增强（ P＜0．01）,且m －calpain的表达随顺铂浓度的增高而明显增强（ P＜0．01）。结论顺铂可通过calpain通路诱导小鼠耳蜗毛细胞凋亡,从而发挥毒性效应。     

一次性大剂量60钴辐射对豚鼠耳蜗影响的实验研究

目的观察一次大剂量６０钴（６０Ｃｏ）辐射对耳蜗功能与结构的影响。方法应用６０Ｃｏ５０Ｇｙ对豚鼠耳颞部一次照射,在辐射后４小时及以后７天中应用ＡＰ反应阈观察其听功能变化,并应用光镜及电镜作耳蜗基底膜损害的形态学观察。结果实验发现在接受辐射后第２天至第７天实验豚鼠听力呈渐进性下降,第７天ＡＰ反应阈达５８．７ｄＢ。光镜及电镜观察可见耳蜗基底膜毛细胞出现损害且内毛细胞的病损比外毛细胞更为明显和严重。结论一次性应用６０Ｃｏ５０Ｇｙ对豚鼠耳颞部照射可造成耳蜗功能与结构的损害。     

顺铂对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞外向延迟整流钾电流的影响

目的:观察记录顺铂作用下急性分离新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGNs)延迟整流钾通道的电流曲线,分析顺铂对SGNs钾电流激活动力学的影响,并初步探讨其耳毒性机制。方法:采用全细胞膜片钳技术记录SGNs外向延迟整流钾电流及顺铂对此电流的影响。结果:钳制电压为-60mV,刺激电压从-60mV到 80mV逐渐去极化,阶跃电压为10mV,持续时间为500ms,可在SGNs上记录到外向钾电流,该电流对TEA-Cl(4-乙基胺)敏感,具有延迟整流特性;在细胞外液中加入10μmol/L顺铂,能明显抑制SGNs延迟整流钾电流;顺铂对此电流的抑制作用与细胞外液中顺铂的浓度呈剂量依赖性;外液洗脱后SGNs电流可基本恢复正常。结论:钾通道与SGNs动作电位的产生密切相关,顺铂可抑制SGNs钾通道电流,导致听觉功能障碍。     

连翘酯苷对顺铂作用后豚鼠耳蜗c-jun表达的影响

目的：研究连翘酯苷对顺铂作用后豚鼠耳蜗c—jun表达的影响。方法：将30只豚鼠随机分为对照组（10只）,顺铂组（10只）和连翘酯苷组（10只）。腹腔注射顺铂溶液（8mg／kg）,1次／d,连续7d,建立顺铂耳毒性模型;连翘酯苷组在每次注射顺铂溶液30rnin前腹腔注射连翘酯苷25．0mg／kg／d,连续7d;对照组以生理盐水代替顺铂溶液注射,连续7d。实验动物被处死前,检测其DPOAE幅值变化;采用蛋白质印迹杂交（Western Blotting）检测各组豚鼠耳蜗c—jun蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应检测各组豚鼠耳蜗c—jun基因mRNA的表达。结果：顺铂组DPOAE幅值明显低于对照组（P〈0．01）;相比于顺铂组,连翘酯苷组DPOAE幅值明显升高（P〈0．05）。顺铂组豚鼠耳蜗c—jun蛋白与mRNA表达水平均显著高于对照组（P〈0．01）;相比于顺铂组,连翘酯苷组C-jun蛋白与mRNA表达水平明显降低（P〈0．05）。结论：连翘酯苷能够通过降低c—jun的表达防护顺铂所致的耳蜗损伤。     

熊果酸对顺铂致毒小鼠耳蜗瞬时感受器电位香草酸受体1表达的影响

目的：研究熊果酸（ursolic acid ,UA）对顺铂（cisplatin ,CDDP）致毒小鼠耳蜗瞬时感受器电位香草酸受体1（transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）表达的影响。方法60只健康BALB／c小鼠随机分成对照组（腹腔注射等量生理盐水）、UA组（腹腔注射熊果酸80 mg／kg）、CDDP组（腹腔注射CDDP 4．5 mg／kg）和CDDP＋UA组（一侧腹腔注CDDP 4．5 mg／kg ,同时对侧腹腔注射熊果酸80 mg／kg）,每组15只。各组动物均连续腹腔注射给药5天,每天1次,给药前及停药后24 h行ABR检测,然后应用免疫组织化学染色、显微图像分析及蛋白质印迹技术观察小鼠耳蜗中TRPV1的表达。结果 CDDP组小鼠耳蜗TRPV1表达和ABR阈移均较对照组明显增加（P＜0．05）,UA＋CDDP组小鼠ABR阈移及TRPV1表达较CDDP组明显降低（P＜0．05）,且TRPV1表达变化与ABR阈移改变高度相关（｜r｜＞0．7,P＜0．05）。结论 UA可抑制CDDP所致TRPV1的高表达,有效降低CD_DP的耳毒性,改善听功能。     

低剂量顺铂对小鼠耳蜗内毛细胞形态及otoferlin蛋白的影响

目的：建立稳定有效的低剂量顺铂损伤听觉模型,探讨顺铂造成听功能损伤的机制。方法：将C57小鼠随机分为7组,分别为正常组,不同剂量、不同时间损伤实验组,每组8只。通过小鼠听性脑干反应（ABR）阈值测量、AgNO。毛细胞形态染色、免疫荧光法、RT—PCR测定基膜底回内毛细胞otoferlin蛋白的表达等方式检测顺铂对耳蜗内毛细胞形态及otoferlin蛋白的影响。结果：在同一时间点,用药4d后,1．5mg／kg和3．0mg／kg实验组较正常组小鼠ABR阈值明显升高,用药7d的各实验组ABR阈值较正常组均明显升高。同一剂量下,0．75mg／kg×7d组较0．75mg／kg×4d组阈值明显增高,其余剂量无明显时间差异。实验组中3．0mg／kg实验组蛋白表达均降低,1．5mg／kg实验组与正常组无差异。3．0mg／kg×7d组内毛细胞形态改变最明显,但在各组均未缺失。结论：低剂量顺铂可造成听功能损伤,其损伤机制很可能与内毛细胞的损伤及otoferlin蛋白有关。