激光散斑衬比成像技术观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注后脑微血流的影响

目的：建立脑缺血再灌注大鼠模型,观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注后脑微血流的影响。方法：将动物分为对照组、模型组、补阳还五汤组、重组人血管内皮抑制素组、补阳还五汤+重组人血管内皮抑制素组,应用激光散斑衬比成像技术观察大鼠梗死区域脑血流状态,测定脑组织的含水量,并检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白及基因表达水平。结果：与对照组相比,脑缺血再灌注大鼠模型大鼠脑血流速度明显降低（P<0.01）,脑组织含水量增高（P<0.01）,VEGF蛋白和基因的表达减少（P<0.01）;与模型组相比,补阳还五汤组能明显提高脑缺血再灌注大鼠模型大鼠脑血流速度（P<0.01）,降低脑组织含水量（P<0.01）,提高VEGF蛋白和基因的表达（P<0.01）。结论：补阳还五汤具有改善缺血再灌注后脑血流的作用,而调节VEGF蛋白及基因的表达水平是其参与改善脑血流的主要途径之一。     

补阳还五汤联合依达拉奉对小鼠急性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的 研究补阳还五汤联合依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤模型的保护作用。方法 改良线栓法建立小鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。小鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、依达拉奉组和补阳还五汤+依达拉奉组。术后1,3,7 d观察治疗后各组小鼠神经功能缺损评分。术后7 d,比较各组脑梗死体积大小,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 与假手术组比较,模型组小鼠神经缺损评分、脑梗死体积、凋亡细胞数均显著增加(P<0.01)。与模型组比较,各用药组神经缺损评分、脑梗死体积、凋亡细胞数均显著减少(P<0.05),且联合用药组以上指标均显著好于单用药组。结论 补阳还五汤与依达拉奉联合用药对小鼠脑缺血再灌注损伤有协同神经保护作用,比单药使用更有效地抑制细胞凋亡。     

白藜芦醇对大鼠脑缺血/再灌注损伤后星形胶质细胞活化的影响

目的研究白藜芦醇对大鼠脑缺血/再灌注损伤后星形胶质细胞活化的影响。方法 45只SD♂大鼠随机分成假手术组(Sham)、对照组(Con)和白藜芦醇组(30 mg·kg-1,Res),每组15只。于缺血/再灌注后3 h使用白藜芦醇或溶剂治疗,连用7 d。脑缺血24 h时,TTC法检测脑梗死体积,HE染色检测病理变化,Longa评分行神经功能评分,免疫组织化学检测缺血半暗带皮质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。脑缺血14 d时,免疫组织化学及免疫荧光法检测胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和神经元NeuN蛋白表达。结果白藜芦醇治疗较对照组能明显改善神经功能、减小梗死体积、减少神经元脱失及凋亡,抑制星形胶质细胞的活化与增殖(P<0.01)。结论白藜芦醇治疗可抑制星形胶质细胞的异常活化,保护缺血半暗带神经元,改善神经功能。     

补阳还五汤联合依达拉奉对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的 研究补阳还五汤联合依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法 60 只小鼠随机分假手术组（sham）,模型组（I/R）,补阳还五汤组（BYHWD）,依达拉奉组（ED）,补阳还五汤+依达拉奉组（BYHWD+ED）,每组再分2个亚组：1 d组和7 d 组。采用改良线栓法制作小鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,分别给药。TUNEL法观察神经细胞凋亡率;进一步Western bolt检测大脑皮质缺血区bcl-2 和 bax的蛋白的定量表达。结果 补阳还五汤+依达拉奉组较其他组能更明显地降低神经细胞凋亡指数(P<0.01),且较其他组可更明显地升高凋亡相关蛋白bcl-2的表达和下调bax的表达 (P<0．05)。结论 补阳还五汤与依达拉奉联用能降低脑缺血再灌注损伤后小鼠脑组织细胞中促凋亡蛋白bax的表达,增加具有神经元保护作用的抑凋亡蛋白bcl-2的表达,从而抑制神经细胞凋亡,加速神经功能的恢复,协同发挥脑保护作用。     

急性脑缺血/再灌注后细胞病理改变及星形胶质细胞活化规律

目的 观察脑缺血/再灌注后不同时间点细胞病理改变及星形胶质细胞活化的规律。方法 本实验共采用85只SD雄性SPF级大鼠,将其随机分为假手术组、大脑中动脉闭塞90 min再灌注不同时间点组,后者分为再灌注3、6、12、24、48 h组。HE染色观察细胞病理改变,采用透射电镜观察脑缺血/再灌注后星形胶质细胞的亚显微结构,免疫印迹联免疫荧光法检测脑缺血/再灌注损伤后的GFAP表达。结果 脑缺血/再灌注后不同时间点可导致神经细胞发生不同程度的缺血/再灌注损伤,再灌注后24 h细胞损伤最为严重。透射电镜结果提示星形胶质细胞亚显微结构发生改变,细胞出现不同程度肿胀,线粒体嵴断裂等。脑缺血/再灌注后在缺血区GFAP表达呈时间依赖性逐渐升高,再灌注48 h后表达最高,而在梗死区表达逐渐减少。结论 脑缺血/再灌注后24 h神经细胞损伤最重,缺血半暗带区的星形胶质细胞形态发生变化,星形胶质细胞激活,伴随再灌注的推移,梗死区、缺血区边界逐渐清晰,可能出现胶质瘢痕。     

补阳还五汤治疗脑缺血性疾病的临床观察

补阳还五汤治疗脑缺血性疾病的临床观察左爱云，谭淑桃（湖南省宁乡县中医院４１０６００）宁乡县人民医院脑缺血性疾病是一种常见病、多发病，尤其是近十多年来，城乡发病人数明显增多。笔者治疗观察十五年，在住院病人中，用补阳还五汤治疗４００例，疗效满意，现介绍如...     

补阳还五汤抗脑缺血的实验研究进展

补阳还五汤出自清代王清任的《医林改错》 ,由黄芪、当归尾、川芎、赤芍、地龙、桃仁、红花组成 ,是益气活血之名方 ,临床用于治疗缺血性脑血管疾病及其后遗症 ,并广泛用于治疗高血压、冠心病、类风湿关节炎、糖尿病及周围神经炎、慢性肾功能衰竭等疾病。近年来随着大量深入的实验和临床研究 ,较全面地阐明了该方的药理作用机制。现就其抗脑缺血的实验研究综述如下。1　改善血流动力学和血液流变学 ,抗血栓形成动物实验证实补阳还五汤可扩张脑血管 ,降低脑血管阻力 ,显著持久地增加脑血流量 ,改善脑血循环和微循环。该方可明显降低全血和血…     

氯胺酮对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的：研究氯胺酮对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡状态及相关基因bax、bcl—2表达的影响。方法：沙土鼠全脑缺血模型，缺血10min，再灌注24h。分为假手术组、缺血再灌注组和氯胺酮组。采用TUNEL法原位标记DNA片段检测凋亡细胞，采用SP法进行bax、bcl—2的免疫组织化学染色。结果：缺血再灌注组及氯胺酮组脑组织中TUNEL及bax阳性细胞数明显多于假手术组(P＜0．01)；氯胺酮组阳性细胞数目明显低于缺血再灌注组(P＜0．01)。bcl—2阳性细胞数3组间比较无明显差异。结论：氯胺酮减少沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞的凋亡，bax/bcl—2比值较再灌注组相对降低可能为此作用的机理之一。     

甘露醇对脑缺血再灌注模型大鼠星形胶质细胞活性的研究

目的 探讨甘露醇干预对大鼠急性缺血性脑卒中大脑不同时期不同部位星形胶质细胞活性的影响.方法 采用改良型线栓法实施左侧大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)2h后再灌注建立脑缺血再灌注模型.随机将大鼠分成空白组、假手术组和缺血再灌注模型组,各12只.每组再随机分成甘露醇组(甘露醇最小有效剂量即10mg/kg大鼠尾静脉缓慢注射,每6h 1次)和非甘露醇组(注射等量的无菌注射用水),各6只,分别于手术后24h和72h处死解剖,取脑组织切片做免疫组化染色,计算缺血周边、海马CA1区的骨架蛋白即胶质纤维酸性蛋白(glial fibrilary acidic protein,GFAP)阳性细胞数,通过观察GFAP阳性数目研究缺血性卒中后缺血周边、海马CA1区星形胶质细胞(astrocyte,AS)的增殖情况.结果 在大鼠空白组、假手术组和缺血再灌注模型组中,缺血再灌注模型组中的甘露醇组比各组的非甘露醇组缺血周边区域、海马CA1区域GFAP阳性细胞数明显增多,具有显著统计学意义(P＜0.01),并随时间的延长而增加(P＜0.05).结论 大鼠缺血再灌注组在甘露醇干预24h和72h后,其缺血周边区域和海马CA1区域GFAP阳性细胞数表达增强,AS活性增加,增生活跃,并随时间的延长而增加,提示甘露醇除脱水降颅压外,还参与了大鼠缺血再灌注模型组缺血周边及海马等区域的AS增殖反应.     

补阳还五汤加味在急性脑梗死后疲劳中的应用效果

目的探讨补阳还五汤加味在急性脑梗死后疲劳（post stroke fatigue,PoSF）中的应用效果。方法对80例PoSF患者,按接受治疗的先后顺序随机分为对照组和治疗组,每组各40例。对照组采用卒中单元常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上给予补阳还五汤加味治疗,以2周为1个疗程,2组疗程完成后,根据症状改善情况对其进行疗效评价。结果共65例纳入研究,其中治疗组33例,对照组32例。治疗后2组精力量表评分均升高,疲劳症状评分均下降,与治疗前比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。治疗后2组间精力量表评分和疲劳症状评分比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论补阳还五汤加味联合卒中单元治疗PoSF能显著提高临床效果,有利于提高患者康复训练效果。     

隐丹参酮对脑缺血再灌注损伤神经元细胞凋亡的作用

目的 探讨隐丹参酮(CTs)抑制c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路对脑缺血再灌注损伤(CIRI)神经元细胞凋亡的作用.方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和实验组,每组10只,模型组和实验组参照改良Longa法制备CIRI模型.造模成功后,实验组腹腔注射CTs...     

Protective effects of orally administered honokiol on cerebral ischemia reperfusion in rats and on stroke in SHRsp

Honokiol is a protective agent for cerebral ischemia injury when administered intravenously. In the present study, we aimed to investigate the oral effect of honokiol microemulsion on cerebral ischemia-reperfusion (I-R) injury in rats and stroke in SHRsp. Both tMCAO and SHRsp models in rats were used to evaluate the efficacy of the microemulsion. Rat aortic segment contraction test, primary rat aortic endothelial cells and primary brain microvascular endothelial cells (BMECs) injured by OGD-R were used to explore its potential action mechanism. Oral honokiol microemulsion significantly reduced infarct volume, neurological score and brain water content in tMCAO model, and it evidently reduced neurological score and increased the survival rate of SHRsp. Moreover, honokiol significantly inhibited aortic contraction induced by KCl and phenylephrine, and L-NAME suppressed these inhibitory effects. On the other side, honokiol increased NO and p-eNOS levels in rat endothelial cells. In addition, it also protects BMECs against OGD-R injury and increased eNOS expression in BMECs. In conclusion, oral honokiol administration has protective effects in tMCAO and in SHRsp rats, and its action mechanism is likely to be associated with its vasodilative effect produced by eNOS activation and with its protective effect on BMECs.     

当归补血汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血管新生及Ang-1、Ang-2、VEGF和Tie-2的影响

目的 探究当归补血汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血管新生及Ang-1、Ang-2、VEGF和Tie-2的影响.方法 采用线栓法复制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,模型复制后随机分为假手术组、模型组、当归补血汤低剂量组和当归补血汤高剂量组.连续给药14 d,评价术后第1天和第14天的神经功能,免疫组化检测脑缺血区域及周围的微血管密度和Tie-2表达水平,酶联免疫吸附法检测血清中Ang-1和Ang-2浓度,Weatern Blotting法检测脑组织中VEGF表达水平.结果 连续给药14 d后当归补血汤高剂量组和低剂量组的神经功能评分、MVD、Ang-1和Ang-2浓度、Tie-2和VEGF表达水平均显著高于模型组,且随着当归补血汤剂量的增加,各指标亦显著性增加.结论 当归补血汤促进脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能的恢复,而其作用机制可能为通过促进Ang-1、Ang-2、Tie-2和VEGF的表达而使脑缺血部位的血管新生.     

复元醒脑汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的 探讨复元醒脑汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法 将SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、复元醒脑汤低、中、高（5.5、11、22 g/kg）剂量组。采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注24 h,对各组大鼠进行神经功能缺失评分,TTC染色测定脑梗死体积,HE染色观察脑组织病理变化,Nissl染色观察脑组织中尼氏小体的变化,Tunnel染色观察脑组织中神经细胞的凋亡情况。测定血清中的超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的水平。结果 与模型组相比,复元醒脑汤低、中、高剂量组均可明显改善大脑中动脉缺血再灌注损伤大鼠的神经行为障碍;TTC染色结果显示,复元醒脑汤低、中、高剂量组大鼠脑梗死体积明显减小;HE结果显示给药组改善脑组织病理结构,Nissl染色结果表明给药组尼氏小体形态数量得到改善,Tunnel染色阳性细胞数减少,细胞凋亡率下降;与模型组相比,复元醒脑汤可提高脑缺血再灌注大鼠血清中SOD的水平,降低MDA水平。结论 复元醒脑汤对大鼠大脑脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

补阳还五汤对脑出血治疗的影响

目的探讨补阳还五汤对脑出血治疗的影响。方法笔者所在医院2010年3月～2011年3月收治的51例高血压脑出血患者,随机分为实验组和对照组,观察两组的疗效。结果实验组的有效率为84.62%,高于对照组的72.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。平均住院日方面,实验组(20.37±1.25)d少于对照组(22.21±1.13)d,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补阳还五汤对于脑出血的治疗结果优于一般的常规治疗。     

Effect of berberine against cerebral ischemia and reperfusion involving in the methylation of PPARγ promoter

Cerebral ischemia has higher incidence and causes irreversible damage to people. As a traditional drug for anti-inflammation, berberine (BBR) has recently been reported to have protective effect against cerebral ischemia. However, the mechanism has not been explored thoroughly. By employing in vivo and in vitro models for cerebral ischemia and reperfusion, we studied the mechanism of BBR against the ischemia-reperfusion. We found that BBR regulated the expression of peroxisome proliferator-activated receptor (PPARγ) in a specific way upon ischemia-reperfusion injury. BBR enhanced the PPARγ expression during cerebral ischemia-reperfusion. By inhibiting PPARγ activity uisng GW9662, a PPARγ inhibitor, we confirmed that BBR protected the mouse brain against the ischemia in a PPARγ-dependent mechanism. In addition, we found that BBR reduced the overall global methylation, declined the expressions of DNMT1 (DNA methyltransferases 1) and DNMT3a (DNA methyltransferases 3a) in the ischemia-reperfusion and reduced the methylation of PPARγ promoter region. Therefore, our data suggested that PPARγ was one of major targets of BBR, and such BBR-induced PPARγ expression during cerebral ischemia and reperfusion might be correlated to the reduced methylation of PPARγ promoter.     

通窍活血汤对脑缺血再灌注小鼠血脑屏障通透性及脑内单胺类神经递质含量的影响

目的：观察通窍活血汤（TQHXD）对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障（BBB）通透性及脑组织中单胺类神经递质的影响。方法将昆明种小鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组,脑脉泰组,通窍活血汤低、中、高剂量组（分别为3．85,7．7,15．4 g·kg－1）。于给药第7天采用双侧颈总动脉结扎法制造急性脑缺血再灌注模型,通过测定渗出脑血管外的伊文思蓝含量分析药物对BBB通透性的影响,及采用酶联免疫法（ELISE）测定脑组织中单胺类神经递质去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）和5－羟色胺（5-HT）的含量。结果 TQHXD各剂量组均能降低小鼠脑中伊文思蓝的含量,且均能阻止脑损伤后单胺类神经递质的降低。结论 TQHXD对脑缺血再灌注模型小鼠有一定的保护作用。     

四逆汤对大鼠肠缺血再灌注后肠粘膜细胞凋亡的影响及神经酰胺机制

目的　研究四逆汤(SND)对大鼠肠缺血再灌注 (II/R后肠粘膜细胞凋亡的影响,并从神经酰胺信使通路探讨其抗凋亡机制。方法　24只SD大鼠随机分为 3组(n=8):对照组(仅分离不阻断肠系膜上动脉)、模型组 (阻断肠系膜上动脉 1h后再灌注 3h)、SND组(每天 3g·kg-1 SND灌胃,连续 3天后手术)。取回肠末端组织行电镜检查;检测肠粘膜组织SOD活性、MDA及神经酰胺含量的变化,TUNEL法检测肠粘膜上皮细胞的凋亡指数,RT PCR法分析肠粘膜组织鞘磷脂酶(SMase)基因表达的变化。结果　模型组电镜下可发现许多典型凋亡的上皮细胞,凋亡指数达 30 82%6 34%,SND预处理后凋亡指数为 14 91%±5 40%,明显低于模型组(P<0 01);模型组SOD活性明显低于对照组 (<0 01),MDA与神经酰胺含量以及SMase的基因表达明显高于对照组(P<0 01),且神经酰胺含量与凋亡指数具有良好的正相关 (r=0 852,P<0 01),与SOD活性具有负相关(r= -0 775,P<0 01 )。SND预处理能明显增强SOD活性,降低肠粘膜组织MDA及神经酰胺含量,减少肠粘膜组织SMase的基因表达(P<0 01)。SND组凋亡指数与神经酰胺的含量亦呈显著的正相关 (r=0 832,P<0 01 )。结论　SND具有抗II/R后肠粘膜细胞凋亡的作用,其作用与它清楚氧自由基、抑制SMase的基因表达、减少神经酰胺的生成有关。     

Xanthone对小鼠反复脑缺血再灌流后行为学的影响

观察Xanthone(XT)对小鼠反复脑缺血再灌流后行为学的影响。将40只小鼠分为4组,经反复脑缺血再灌流加降血压法造模后,分别给予注射用水、XT静脉注射高剂量50mg/kg和低剂量10mg/kg,术后进行跳台、水迷宫实验测试。结果显示,模型组小鼠潜伏期缩短,游全程时间延长、错误次数增多;XT高、低二个剂量组均使上述指标改善,有显著性差异。揭示XT可对抗反复脑缺血再灌流后行为学的障碍,学习记忆力的下降。