miR-204靶向GPRC5A对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-204(miR-204)对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 体外培养人正常结肠上皮细胞(FHC)和人结肠癌肿瘤细胞(HCT116);将HCT116细胞随机分为对照组、miR-204 mimic组和miR-204 NC组;利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组HCT116细胞miR-204及G蛋白耦联受体C型家族(GPRC)5A表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组HCT116细胞的增殖情况;划痕实验检测各组HCT116细胞的迁移能力;Transwell法检测各组HCT116细胞的侵袭能力;Western检测各组HCT116细胞GPRC5A蛋白的表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-204与GPRC5A的靶向关系。结果 与正常组相比,各组HCT116细胞miR-204表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组和miR-204 NC组相比,miR-204 mimic组HCT116细胞miR-204表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、GPRC5A mRNA及GPRC5A蛋白表达水平显...     

RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及STAT3信号通路的影响

目的探讨RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 Western blotting法检测人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞及正常结肠NCM460细胞中CST1的蛋白表达。以Lipofectamine~(TM) 2000为载体,将设计合成的CST1的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染HCT116细胞(si-CST1组和NC组),并设置空白对照组。转染48 h,MTT法检测细胞活力,Transwell小室检测穿膜细胞数,Western blotting法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达。结果人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞中CST1蛋白的表达均显著高于正常结肠NCM460细胞(P0.05)。si-CST1组HCT116细胞中CST1蛋白的表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,si-CST1组细胞活力和侵袭能力显著降低,p-STAT3、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论 RNA干扰CST1基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与下调STAT3信号通路有关。     

曲美替尼对K-ras突变直肠癌细胞恶性行为、耐药蛋白及巨噬细胞极化的作用机制的研究

目的 探讨曲美替尼对K-ras突变直肠癌细胞恶性行为、耐药蛋白及巨噬细胞极化的作用机制。方法 取K-ras突变直肠癌细胞HCT116,将其随机分为HCT116组(HC组)、西妥昔单抗+HCT116组(CE组)、低剂量曲美替尼+HCT116组(LT组)、中剂量曲美替尼+HCT116组(MT组)、高剂量曲美替尼+HCT116组(HT组),Transwell实验及划痕实验检测细胞恶性行为，MTT法检测药物敏感性，RT-PCR法检测耐药蛋白表达，免疫印迹法检测巨噬细胞极化相关指标。结果 与HC组相比，其余四组细胞侵袭、迁移及GST-π、P-gp、TopoⅡ、CD163表达显著降低(P<0.05),CD40蛋白表达显著升高(P<0.05);与LT组相比，MT组、HT组细胞侵袭、迁移及GST-π、P-gp、TopoⅡ、CD163表达显著降低(P<0.05),CD40蛋白表达显著升高(P<0.05),且HT组比MT组变化明显(P<0.05);HCT116细胞对西妥昔单抗与曲美替尼均敏感，但与西妥昔单抗相比，曲美替尼的IC₅₀明显更低(P<0....     

siRNA沉默ERCC1基因表达对结肠癌细胞奥沙利铂耐药的影响和机制

目的 采用小干扰RNA(siRNA)技术作用于人结肠癌细胞HCT116中的ERCC1,探讨其对结肠癌铂类耐药细胞株增殖、凋亡的影响。方法 体外培养结肠癌奥沙利铂耐药细胞株HCT116/L-OHP并验证其耐药性;qRT-PCR和蛋白印迹技术检测细胞和组织中ERCC1表达量的变化;采用siRNA-NC和siRNA-ERCC1转染细胞,CCK-8法检测耐药细胞的增殖能力,流式细胞术检测耐药细胞的凋亡变化。结果 结肠癌耐药组织和人结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP ERCC1的表达水平明显升高(P<0.05);转染siRNA ERCC1后,HCT116/L-OHP细胞中的ERCC1 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05);奥沙利铂联合处理后,siRNA ERCC1转染使HCT116/L-OHP细胞的增殖活性下降、凋亡率升高。结论 siRNA能有效下调ERCC1基因表达,抑制细胞增殖,增加细胞凋亡,增强奥沙利铂对耐药细胞株HCT116/L-OHP的杀伤作用。     

微小RNA-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭迁移影响及其与同源盒基因A10结合力

目的 观察微小RNA-144(miR-144)对人结肠癌细胞株增殖、迁移、侵袭的影响及其与同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)的结合力。方法 (1)人结肠癌细胞株HCT116、SW480、CL-11和永生化正常人结肠上皮细胞株FHC中miR-144及HOXA10 mRNA检测：采用实时荧光定量PCR法检测HCT116、SW480、CL-11及FHC中miR-144与HOXA10 mRNA，观察人结肠癌细胞和人结肠上皮细胞miR-144、HOXA10 mRNA表达变化，选择miR-144相对表达量最低HCT116细胞为后续研究对象。(2)miR-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭及迁移的影响观察：取对数生长期HCT116细胞分为3组，1组细胞顺序转染miR-144模拟物（miR-144 mimics）和HOXA10过表达质粒pcDNA3.1-HOXA10,2组细胞转染miR-144 mimics,3组细胞转染空白质粒。转染24 h时测算各组细胞增殖活性、观察各组细胞的侵袭及迁移情况、检测各组细胞miR-144及HOXA10蛋白。(3)HCT116细胞中miR...     

HT29和HCT116结肠癌细胞无血清培养形成肿瘤干细胞球特性的差异性研究

目的比较HT29和HCT116两种结肠癌细胞系中肿瘤干细胞的差异，初步探讨结肠癌干细胞研究模型。方法以无血清培养法培养HT29和HCT116细胞，观察其在不同时间形成肿瘤干细胞球的差异，用限制性稀释法计算两者的成球率；流式细胞术分析HT29和HCT116细胞系中CD44／CD24的表达情况；裸鼠体内成瘤实验鉴定HT29细胞球与HCT116细胞球成瘤能力。结果无血清培养法发现HCT116较HT29更易形成肿瘤干细胞球且所需时间更短，即HT29在无血清培养的第7天开始形成规则的球体，而HCT116则在第5天就已形成规则的球体，HCT116成球率（11．4±1．15）％高于HT29（3．31±0．27）％，且差异有统计学意义（P〈0．05）；HT29和HCT116中CD44±／CD24±各细胞含量有显著差异，结果显示具有干细胞特性的CD44＋／CD24＋结肠癌细胞在HCT116中所占比例（60．33±5．75）％明显高于HT29（9．23±2．15）％，差异有统计学意义（t=13．939，P〈0．05）；体内成瘤实验发现HCT116细胞球在裸鼠体内的成瘤能力明显强于HT29细胞球，HCT116细胞球的成瘤速度及瘤体生长速度都较HT29细胞球快。结论与HT29相比，HCT116结肠癌细胞系更适合作为肿瘤干细胞研究的模型。     

下调BAP31基因表达抑制结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号

目的探讨下调B细胞受体相关蛋白(BAP)31基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号的影响。方法以正常结肠上皮细胞NCM460为对照细胞,Western印迹检测结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的蛋白表达。设计合成BAP31的特异性siRNA及阴性对照siRNA,分别命名为si-BAP31组和NC组,参照LipofectamineTM 2000说明转染HCT116细胞,仅加入脂质体的为空白对照组,Western印迹检测BAP31、β-catenin、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK)8检测细胞活力;Transwell小室检测穿膜细胞数。结果结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的表达均显著高于在NCM460细胞表达(P0.05)。转染si-BAP31的HCT116细胞BAP31表达明显受到抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。与NC组比较,si-BAP31组在24、48和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞侵袭能力及β-catenin、PCNA和MMP-2的蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论下调BAP31基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖侵袭能力,机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

结肠癌组织中细胞周期蛋白E和增殖细胞核抗原表达的研究

目的研究细胞周期蛋白E(CyclinE)和增殖细胞核抗原(PCNA)在结肠癌组织中的表达及二者之间的关系。方法采用原位杂交法和免疫组化S-P法,对40例结肠癌、10例结肠腺瘤和10例结肠正常黏膜组织进行CyclinE mRNA和PCNA的检测。结果结肠癌组织中CyclinEmRNA的阳性表达率为62.5%,PCNA指数为(50.09±11.15),均显著高于结肠腺瘤和结肠正常组织(P<0.05);CyclinE mRNA表达阳性组的PCNA指数明显高于CyclinE mRNA阴性组(P<0.05);CyclinE mRNA与肿瘤的浸润深度、有无淋巴结转移密切相关(P<0.05),与肿瘤的分化程度、有无肝转移不相关(P>0.05);PCNA与肿瘤的浸润深度、分化程度及有无淋巴结转移密切相关(P<0.05),与有无肝转移无明显相关(P>0.05)。结论CyclinE可作为结肠癌的又一细胞增殖指标,其对结肠癌的发生、发展起重要作用。     

miR-346及分泌型卷曲相关蛋白4在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞增殖的作用

目的检测结肠癌组织及细胞中miR-346及人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)的表达,观察其对结肠癌细胞增殖的作用及可能的机制。方法选取30例经手术切除的结肠癌组织及其相应的癌旁正常组织(距离肿瘤边缘5cm),另选取结肠癌细胞株及正常结肠上皮细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)方法检测组织及细胞中的miR-346、SFRP4mRNA及蛋白的表达,采用Pearson rank检验miR-346与SFRP4的相关性,采用Target Scan及Find Tar软件预测两者的靶向调节作用。转染miR-346拟似物(mimics)或抑制物(inhibitor)以上调或下调miR-346的表达,MTT法检测结肠癌细胞的增殖,qRT-PCR及Western blot检测SFRP4mRNA和蛋白的表达。结果 miR-346在结肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(t=12.871,P0.001)。SFRP4mRNA及蛋白在结肠癌组织中的表达低于癌旁正常组织(t=8.609,P0.001;t=20.892,P0.001)。miR-346在结肠癌细胞株(SW480、SW620、HCT116、CaCo-2、LoVo、HT29)中的表达高于正常结肠上皮细胞株FHC(F=10.17,P0.001)。SFRP4mRNA及蛋白在结肠癌细胞株中的表达低于正常结肠上皮细胞株(F=39.01,P0.001;F=16.25,P0.001)。结肠癌组织中miR-346与SFRP4mRNA的表达呈负相关(r=-0.55,95%CI:-0.757～-0.230,P=0.001 8)。与miRNA阴性对照(miR-NC)组比较,给予miR-346mimics后,MTT显示在72h、96h时间点miR-346组细胞存活率升高(t=3.484,P0.05;t=5.868,P0.001),SFRP4mRNA及蛋白表达下降(t=2.267,P0.05;t=5.889,P0.01);给予miR-346inhibitor后,MTT显示在72h、96h时间点miR-346组细胞存活率下降(t=4.400,P0.001;t=3.591,P0.001),SFRP4mRNA及蛋白表达升高(t=4.495,P0.01;t=7.130,P0.01)。结论 miR-346在结肠癌中高表达,SFRP4低表达,miR-346通过靶向作用于SFRP4来调控结肠癌细胞的增殖。     

Cdk3在结肠癌变过程中的表达及其意义

目的:研究Cdk3在结肠息肉、结肠腺瘤、结肠癌组织中的表达,探讨Cdk3在结肠癌变过程中的演变规律及其意义.方法:用免疫组织化学和原位杂交的方法检测22例结肠癌组织、22例结肠腺瘤组织、24例结肠息肉组织中Cdk3蛋白和mRNA的表达.结果:Cdk3蛋白和mRNA在结肠息肉、结肠腺瘤、结肠癌组织中的表达呈核.质型,以质为主.图像分析结果显示,结肠癌组织中Cdk3蛋白表达平均光密度值(0.80±0.36)明显高于结肠腺瘤组织(0.48±0.22)和结肠息肉组织(0.25±0.13)(P<0.05),结肠腺瘤组织中Cdk3蛋白表达平均光密度值明显高于结肠息肉组织(P<0.05),结肠癌组织中的阳性细胞数(266.5±40.2)明显高于结肠腺瘤组织(132.0±37.4)和结肠息肉组织(129.3±26.7).结论:Cdk3在结肠癌变过程中表达逐步增强,在结肠癌组织中异常高表达,可能在结肠癌变过程中发挥重要作用.     

Gasdermin D蛋白对内毒素导致肺泡巨噬细胞焦亡的影响

目的探讨Gasdermin D(GSDMD)蛋白在内毒素导致肺泡巨噬细胞焦亡中的作用。 方法使用小干扰RNA技术建立GSDMD蛋白低表达的MH-S细胞株。将细胞分为野生型MH-S细胞组(WT)、转染空病毒载体的空白对照细胞组(NC)和GSDMD敲低MH-S细胞组(KD)，分别接受PBS、LPS+尼日利亚菌素和LPS+霍乱毒素B亚单位进行处理。通过测定其乳酸脱氢酶(LDH)和IL-1β，荧光显微镜下观察细胞PI染色情况，RT-qPCR和蛋白免疫印迹检测焦亡相关蛋白表达等指标，来判定MH-S细胞有无焦亡发生和炎症因子水平的差异。 结果在接受LPS+nigericin和LPS+CTB的处理后，三组细胞均出现了焦亡现象。其中KD组接受LPS+nigericin刺激后，细胞培养上清LDH水平和IL-1β浓度明显低于WT和NC组(P<0.05)；PI染色阳性百分比明显少于WT和NC组(P<0.05)；而GSDMD mRNA相对表达量和GSDMD-NT蛋白相对表达量也是三组中最低的(P<0.05)。而在经LPS+CTB处理后，WT和NC组细胞死亡发生率明显高于KD组(P<0.01)；细胞上清中IL-1β水平和PI染色阳性百分比增加幅度也是WT和NC组更大(P<0.05)。此外，KD组中GSDMD mRNA相对表达量和GSDMD-NT蛋白相对表达量相较于另两组也是更低的(P<0.05)。 结论下调MH-S细胞GSDMD蛋白表达可以起到抑制LPS导致的MH-S细胞焦亡和IL-1β分泌释放的作用。     

慢病毒介导的RNA干扰沉默PIM2表达对结肠癌HT29细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的探讨沉默PIM2表达对结肠癌HT29细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测人正常结肠上皮NCM460细胞和结肠癌HT29细胞中PIM2 mRNA和蛋白表达。以含PIM2 shRNA慢病毒载体感染HT29细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测感染效果,CCK-8法、Transwell实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡能力。结果与NCM460细胞相比,HT29细胞中PIM2 mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05)。PIM2 shRNA慢病毒感染使HT29细胞中PIM2 mRNA和蛋白表达显著降低,显著抑制SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移并促进细胞凋亡(P0.05)。结论 PIM2在结肠癌HT29细胞中高表达,干扰其表达可抑制HT29细胞增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡。     

5-烷基间苯二酚诱导人结直肠癌细胞凋亡的机制探讨

目的探讨5-烷基间苯二酚(5-alkylresorcinols,5ARs)诱导人结直肠癌细胞凋亡及与BCL2、Bax、PARP1和Caspase3表达的影响.方法体外细胞实验应用5AR s直接对HT29、HCT116进行干预诱导.利用倒置相差显微镜观察5ARs对HT29、HCT116干预后细胞形态的变化.CCK8法测定不同浓度5ARs诱导人HT29及HCT116抑制率.Annexin V-F ITC/P I流式细胞术检测5ARs诱导人HT29及HCT116凋亡.Western-blot检测分析不同浓度5ARs诱导HT29及HCT116后凋亡相关蛋白变化(BCL2、Bax、PARP1和Caspase3).结果5A R s可呈浓度依赖性地抑制H T 2 9及HCT116增殖(P0.05);5ARs可诱导HT29及HCT116凋亡,并可增强Bax、PARP1和Caspase3表达,抑制BCL2表达,并提高Bax/BCL2的比值比例(P0.05).结论5ARs可诱导HT29及HCT116凋亡,并且可能与激活Bax、PARP1和Caspase3表达及增加Bax/BCL2比值比例相关.     

花青素协同奥沙利铂对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响

目的 探究花青素协同奥沙利铂对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的机制。方法 体外培养人结肠癌HCT116细胞,并分为:对照组、花青素组、奥沙利铂组、联合组;采用MTT法检测花青素、奥沙利铂单药及联合使用对人结肠癌HCT116细胞的增殖情况;采用克隆形成实验检测细胞生长情况;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;采用Western blot检测TGF-βsmad信号通路相关蛋白及增殖凋亡蛋白表达情况。结果 由MTT实验发现,花青素对人结肠癌HCT116细胞48 h的半数致死浓度(IC50)为100 g/L,奥沙利铂人结肠癌HCT116细胞48 h的IC50为0. 01 g/L,两者联合使用其半数致死浓度显著下降为60 g/L和0. 6 g/L。相比对照组,花青素组和奥沙利铂组克隆形成率、Ki67蛋白相对表达、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低(P 0. 01),人结肠癌HCT116细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达、Smad2和p-Smad2蛋白相对表达、Smad3和p-Smad3蛋白相对表达、TGF蛋白相对表达均显著升高(P 0. 01);相比花青素组和奥沙利铂组,联合组克隆形成率、Ki67蛋白相对表达、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低(P 0. 01),人结肠癌HCT116细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达、Smad2和p-Smad2蛋白相对表达、Smad3和p-Smad3蛋白相对表达、TGF蛋白相对表达均显著升高(P 0. 01)。结论 花青素协同奥沙利铂可以促进人结肠癌HCT116细胞的凋亡并抑制其增殖,且作用效果显著优于使用单一药物,其作用机制可能是通过调节TGF-β/Smad信号通路实现。     

错配修复基因MLH1激活p53和线粒体凋亡通路参与雌激素诱导的结肠癌细胞凋亡

临床和流行病学研究显示雌激素替代治疗可降低绝经后妇女的结直肠癌发生风险。前期研究发现雌激素能上调结肠癌细胞的错配修复(MMR)基因MLH1表达,在MLH1基因缺失的结肠癌细胞中再表达MLH1能明显增强雌激素诱导的细胞凋亡。目的:探讨MLH1参与雌激素诱导结肠癌细胞凋亡所涉及的信号通路以及p53及其相关基因在此凋亡通路中的作用。方法:以含人野生型MLH1(hMLH1)全长cDNA的质粒转染MLH1基因缺失的人结肠癌细胞株HCT116。以转染空质粒的HCT1 16细胞作为对照,在有或无雌激素作用的条件下,采用电泳法检测凋亡DNA Ladder,蛋白质印迹法检测p53等凋亡相关蛋白表达。结果:转染hMLH1后,10~(-8)mol/L雌二醇(E_2)能明显诱导HCT116细胞凋亡。转染hMLH1并经E_2处理的HCT116细胞(D组)与经E_2处理但未转染hMLH1的HCT116细胞(B组)相比,其caspase-3、caspase-9、p53、Bax、胞质细胞色素C蛋白表达均显著增强,D组上述蛋白表达亦均高于转染hMLH1但未经E_2处理的HCT116细胞(C组)。结论:MMR基因MLH1主要通过激活p53和线粒体凋亡通路参与雌激素诱导的人结肠癌细胞株HCT116凋亡。     

人pEGFP-GEF-H1载体的构建及其表达

背景:研究表明GEF-H1能激活Rho蛋白,与肿瘤发生、发展、浸润、迁移等密切相关。目的:构建人pEGFPGEF-H1载体并稳定转染结肠癌HCT116细胞后检测GEF-H1表达。方法:在线合成引物软件设计人GEF-H1基因引物,构建重组质粒pEGFP-GEF-H1,并转染结肠癌HCT116细胞,以转染空质粒和未转染的细胞分别作为空质粒组和空白对照组。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测GEF-H1 mRNA和蛋白表达水平。结果:成功构建了人pEGFP-GEF-H1载体,测序结果表明序列正确。转染重组质粒pEGFP-GEF-H1后,荧光显微镜下可见较强的绿色荧光,GEF-H1 mRNA和蛋白表达水平均较空质粒组和空白对照组明显上调。结论:体外成功构建了人pEGFP-GEF-H1载体,且转染结肠癌HCT116细胞后高表达GEF-H1,为进一步探讨结肠癌与GEF-H1的关系提供了必要的实验材料。     

干预膜联蛋白A4表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响

目的探讨干预膜联蛋白(ANX) A4表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、黏附、剥脱和侵袭的影响及机制。方法采用RT-PCR和Western印迹检测结直肠癌HCT116细胞和正常结肠上皮NCM460细胞中ANXA4 m RNA和蛋白表达情况。将HCT116细胞分为Control组(未转染)、NC组(转染阴性对照)和ANXA4组(转染si RNA-ANXA4),脂质体lipofectamineTM2000转染HCT116细胞,RT-PCR检测各组细胞中ANXA4 m RNA表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HCT116细胞增殖能力,黏附实验、剥脱实验和侵袭实验分别检测HCT116细胞的黏附能力、剥脱能力和侵袭能力,Western印迹检测ANXA4、埃兹蛋白(Ezrin)、骨桥蛋白(OPN)和细胞表面黏附分子(CD44v6)蛋白的表达。结果 HCT116细胞中ANXA4 m RNA和蛋白表达水平均显著低于NCM460细胞;与Control组相比,干扰ANXA4表达后,HCT116细胞的增殖能力受到抑制,同时黏附能力、剥脱能力和侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P0. 05); ANXA4组细胞中ANXA4 m RNA表达水平及ANXA4、Ezrin、OPN和CD44v6蛋白表达水平较Control组均显著减弱,差异有统计学意义(P0. 05);而NC组与Control组各指标差异无统计学意义(P0. 05)。结论干预ANXA4表达能够抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖、黏附、剥脱和侵袭能力,其分子机制可能与下调Ezrin、OPN和CD44v6蛋白表达有关。     

NOX1在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1) mRNA及蛋白在结肠癌组织中的表达情况及其与临床病理参数、预后的相关性。方法:选取126例结肠癌患者作为研究对象,留取癌组织及其癌旁组织。采用实时荧光定量PCR法检测NOX1 mRNA表达水平,免疫组织化学法检测NOX1蛋白表达情况;Ualcan数据库检索NOX1 mRNA及蛋白在结肠癌中的表达情况;分析结肠癌患者NOX1 mRNA及蛋白表达水平与预后的关系;分析影响结肠癌预后的因素。结果:Ualcan数据库中,TCGA数据集显示结肠癌组织NOX1 mRNA水平明显高于正常结肠组织(P<0.05),CPTAC数据集显示结肠癌组织NOX1蛋白水平与正常结肠组织比较差异无统计学意义。结肠癌患者癌组织NOX1 mRNA水平及蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌患者癌组织NOX1 mRNA及蛋白表达水平与肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期、分化程度有关(P<0.05)。NOX1 mRNA高表达结肠癌患者5年生存率明显低于NOX1 mRNA低表达患者(χ²=13.098,P<0...     

DAC及TSA对结肠癌细胞系中TIP30基因表达的影响及伊立替康敏感性探讨

目的 探讨DAC及TSA对结肠癌细胞系中抑癌基因TIP30表达的影响,以及与伊立替康敏感性的关系.方法 DAC及TSA处理体外培养的结肠癌细胞系HCT116及HT29,RT-PCR法检测结肠癌细胞系HCT116及HT29药物干预前后抑癌基因TIP30表达情况的变化.MTT法检测结肠癌细胞株HCT116和HT29在不同浓度CPT-11下的凋亡情况,绘制生长抑制曲线并计算半数抑制浓度.结果 HCT116及HT29细胞系经DAC及DAC和TSA联合作用后使原来不表达或低表达的抑癌基因TIP30重新表达或表达增强;结肠癌细胞系HT29与HCT116相比伊立替康敏感性较强,DAC处理后2个细胞系伊立替康敏感性均增强.结论 TIP30基因的异常甲基化是结肠癌发生发展中的常见现象,结肠癌细胞系中TIP30启动子甲基化可能是基因失活的主要调控机制,DAC单独干预和DAC及TSA联合干预效果相似,均能显著增加高甲基化抑癌基因的重新表达.基因甲基化水平可能与化疗敏感性相关.     

二甲双胍对结肠癌细胞增殖的影响

目的研究发现,二甲双胍在多种肿瘤中显示出抗肿瘤作用。在结直肠癌中,二甲双胍对肿瘤的抑制作用机制尚不明确,本研究旨在探究二甲双胍对结肠癌细胞增殖的影响。 方法MTT实验检测不同浓度的二甲双胍对HT29结肠癌细胞增殖率变化的影响。利用蛋白免疫印迹方法检测二甲双胍作用下的HT29结肠癌细胞增殖相关蛋白表达的变化。 结果二甲双胍能够抑制结肠癌HT29细胞的增殖且呈浓度依赖性。利用二甲双胍处理HT29细胞不同时间点后发现,二甲双胍能够抑制蛋白激酶B（Akt）与细胞外调节蛋白激酶（ERK）的磷酸化水平。进一步研究证实,二甲双胍能够抑制结肠癌细胞Akt、Erk上游IGF1R磷酸化水平。 结论二甲双胍能够通过阻断胰岛素样生长因子受体（IGF1R）进而抑制下游Akt、Erk信号抑制结肠癌HT29细胞增殖。