不同核酸提取试剂盒对血浆游离DNA提取效果的比较

目的 比较北京天根生化科技有限公司生产的大体积游离核酸提取试剂盒(磁珠法,货号:DP-710,以下简称天根)与德国Qiagen公司生产的Circulating Nucleic Acid kit(硅胶膜吸附柱法,货号:55114,以下简称Qiagen)对血浆当中游离DNA(cfDNA)的提取效果.方法 收集Qiagen和...     

三种核酸共提取试剂盒对血液病毒提取效能的比较研究

目的比较不同核酸共提取试剂盒对血液病毒的提取效能差异。方法选择国内外广泛使用的3种血液病毒核酸共提取试剂盒,分别为OMEGA试剂盒、QIAGEN试剂盒和WATSON试剂盒,HBV阳性、HBV阴性、HCV阳性和HCV阴性血清样本均取自南京军区南京总医院。样本核酸提取按照各试剂盒说明书进行操作,定量方法采用实时荧光定量PCR。结果 OMEGA试剂盒对DNA的提取效率最高,对RNA的提取效率最低,耗时最短,成本居中;QIAGEN试剂盒DNA和RNA提取效率均较高,耗时居中,成本最高;国产WATSON试剂盒对DNA或RNA提取效率居中,耗时最长,成本最低。结论不同试剂盒对血液病毒的提取效能各不相同。对于已知病毒载量和病毒种类的样本,根据提取液DNA浓度和RNA浓度选择试剂盒;而对于未知病毒载量和病毒种类的样本,首选QIAGEN试剂盒,其次可选WATSON试剂盒。如只考虑成本,则首选WATSON试剂盒。     

4种不同核酸提取试剂在自建新型冠状病毒核酸检测系统中性能比较

目的 比较不同品牌核酸提取试剂盒在自建新型冠状病毒核酸检测中的性能差异,为临床实验室自建新型冠状病毒核酸检测系统提供参考依据。方法 将第3方新型冠状病毒核酸检测质控品稀释成4种浓度,采用上海之江生物科技股份有限公司(A)、重庆中元生物技术有限公司(B)、广州和信生物科技有限公司(C)及杭州博日科技有限公司(D)4个不同厂家核酸提取试剂组成的4种自建检测系统进行检测,比较其阳性检出率及批内重复性。结果 在不同浓度样本中,D品牌提取试剂盒提取的样本结果阳性率最高,靶基因检出率最高;B品牌扩增结果的Ct值最小,提取产物浓度最高。结论 不同品牌核酸提取试剂的提取性能在自建检测系统中存在一定差异,实验室在自建核酸检测系统时,选择核酸提取试剂盒时应进行充分验证,以保证检测结果的准确性。     

4种血浆游离DNA提取方法的比较

目的比较4种方法对血浆游离结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA和质粒DNA的提取效率。方法MTBDNA和重组质粒DNA经紫外分光光度法准确定量并梯度稀释,建立标准品。构建含有一定浓度MTBDNA和质粒DNA的血浆,分别采用4种方法提取血浆游离DNA,采用实时荧光PCR技术定量检测模拟血浆中MTBDNA和质粒DNA的含量,比较各种方法的提取效率。结果4种方法中,磁珠法对MTBDNA和质粒DNA的提取效率最高,分别为52.8%和69.2%;相对丢失率最低,分别为40.1%和31.8%;重复性最好,其变异系数分别为26.7%和26.0%。结论在4种方法中,磁珠法对血浆游离DNA的提取效率最高,尤其适合于小片段DNA的提取。     

用不提取核酸PCR扩增孕妇血浆中胎儿游离DNA的SRY和FMR1基因

摘要：目的：建立一种不提取核酸的孕妇血浆中胎儿游离DNA的检测方法。 方法：构建不提取核酸PCR法,用巢式PCR扩增Y染色体上的SRY基因序列和X染色体上的FMR1基因序列,检测44例孕妇血浆中游离DNA。根据随访判断结果的准确性。 结果：44例孕妇经随访确认24例有男性胎儿,20例有女性胎儿。24例孕男性胎儿的孕妇血浆标本中有21例扩增出SRY基因和FMR1基因,敏感性为87.5%（21/24);20例孕女性胎儿的孕妇血浆标本中有17例扩增出FMR1基因,敏感性为85.0%（17/20)。 结论：建立的不提取核酸PCR法具有快速、简便等优点,可用于性连锁遗传病的产前诊断。     

循环游离核酸的检测及意义

游离核酸与肿瘤、妊娠相关性疾病、自身免疫病、移植排斥反应、创伤、急救医学等有着密切关系,其检测对疾病的早期诊断、分期、监测、预后判断等有重要意义.     

孕妇血浆中的游离胎儿核酸

目前 ,产前诊断主要是利用胎儿的组织来检测一些遗传性疾病 ,这对于预防及控制新生儿发病率及死亡率具有十分重要的临床意义。然而 ,损伤性的诊断如羊水和绒毛膜穿刺等方法都有机会对胎儿和孕妇造成一定的危害[1] 。因此 ,这些方法通常仅用于那些怀疑怀有遗传性疾病胎儿的高风险孕妇。鉴于损伤性产前诊断的局限性 ,故非损伤产前性诊断的方法 ,具有极大的发展空间和潜力。其中 ,母亲与胎儿之间存在细胞相互渗透的现象已为研究所证实[2 3] ,而孕妇血液中的胎儿细胞为有效地进行非损伤性诊断 ,提供了有价值的遗传物质[4 ] 。然而孕妇血液中的…     

手工与全自动核酸提取仪提取石蜡包埋组织DNA的比较

目的：比较手工与全自动核酸提取仪提取石蜡包埋组织DNA的浓度和纯度之间的差异,探讨不同提取方法、不同消化方式对DNA提取的影响。方法：选取27例中性福尔马林固定石蜡包埋组织标本,同一技师分别用手工提取与全自动核酸提取仪提取DNA的方法以及分别置于金属浴和恒温箱中消化,进行DNA提取。结果：使用金属浴对组织进行消化,手工提取DNA的浓度为107.1±30.1 ng/μL,全自动核酸提取仪提取DNA的浓度为39.1±16.5 ng/μL;使用恒温箱对组织进行消化,手工提取DNA的浓度为75.5±28.2 ng/μL,全自动核酸提取仪提取DNA的浓度为29.6±17.1 ng/μL,手工提取DNA的浓度均较高,差异有统计学意义(两者均为P<0.01)。手工提取和全自动DNA提取中,使用金属浴消化提取的DNA浓度均比使用恒温箱消化的高(107.1±30.1 VS 75.5±28.2,39.1±16.5 VS 29.6±17.1),差异有统计学意义(两者均为P<0.05)。不同提取方法及消化方式提取DNA的纯度无显著性差异。 结论：手工提取石蜡包埋组织DNA的浓度较高,使用金属浴消化组织提取DNA较恒温箱消化好,不同方式提取的DNA质量均满足分子病理检测需求。     

不同核酸提取方法SARS-CoV-2核酸检测性能比较

目的 比较磁珠吸附法和样本释放剂法对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测结果的符合率、重复性及检出限,优选出提取效率高、耗时短、成本低的核酸提取方法.方法 采用2种核酸提取方法的3种商品化核酸提取试剂,分别对阴性样本、阳性样本及不同浓度(稀释度20～28)的SARS-CoV-2 RNA标准品进行...     

三种方法提取毛霉菌核酸效能的比较实验研究

目的 比较改良碱裂解法、一步法和磁珠法提取毛霉菌核酸效能的差异,探索一种用于PCR扩增的快速、高效、简便、经济的毛霉菌核酸提取方法。方法 分别用改良碱裂解法、一步法和磁珠法提取黑根毛霉（Rhizomucor miehei,R.miehei）、伞枝犁头霉（Lichtheimia corymbifera,L. corymbifera）和卷枝毛霉（Mucor circinelloides,M. circinelloides）3株毛霉菌核酸,使用Qbit4核酸浓度测定仪测定核酸浓度,并进行实时荧光定量PCR扩增实验,比较其扩增后的循环阈值（Ct）差异和核酸提取效率。结果 改良碱裂解法、一步法及磁珠法均能提取R. miehei,L. corymbifera和M.circinelloides 3株毛霉菌核酸,其中一步法提取所得核酸的浓度最高,改良碱裂解法次之,磁珠法最低,差异具有统计学意义（F=38.803,2 160.759,325.175,均P<0.05）。改良碱裂解法提取毛霉菌核酸耗时最短（10.00±1.50 min）,一步法次之（25.00±1.50 min）,磁珠法最长（75.0...     

血浆血清中游离核酸在结直肠癌基因诊断中的应用

结直肠癌是威胁人类健康的一类常见的消化道恶性肿瘤,血浆血清中游离核酸的发现为结直肠癌的基因诊断开辟了一个新的方向。结直肠癌病人血浆血清中肿瘤相关基因的改变,如染色体微卫星不稳定性、癌基因突变、杂合性缺失等,与原发灶的改变相一致,使得利用血浆血清中游离核酸作为结直肠癌早期诊断和预后判断的素材有一定的靶向性。     

国产化时间分辨免疫荧光法游离雌三醇检测试剂盒性能验证

目的 对国产游离雌三醇定量检测试剂盒进行分析性能验证,判断该试剂盒是否能够满足医学实验室的临床检验要求。方法 分析中孕期母血清游离雌三醇定量检测试剂盒的批内精密度、批间精密度、总精密度,正确度和线性范围,同时与试剂盒厂家声称的参数范围进行比对。结果 在精密度验证中,低、中、高浓度检测样本的批内变异系数分别为4.72%、2.22%、2.25%;批间变异系数分别为2.76%、2.26%、3.33%;总精密度的变异系数分别为5.00%、3.00%、3.90%,均在厂家声称的标准上限范围之内。在正确度验证中作为验证样本的国家卫健委室间质评样本参考物质的均值分别为2.60、4.50、1.80、6.00、6.90 nmol/L均在验证区间之内。在线性范围验证中,配置覆盖整个标准曲线的6个浓度血清样本。以测量值为横坐标,理论值为纵坐标画出曲线,拟合曲线方程,得出相关系数r²=0.995 4。根据行业标准>0.995可判断厂家声称的线性范围符合要求。结论 本国产游离雌三醇定量检测试剂盒分析性能验证有效,可满足临床检验需求。     

六种新型冠状病毒核酸检测试剂的性能评价及其与核酸提取试剂匹配性分析

目的:通过比较6种新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂的最低检出限、扩增效率、特异性、准确度以及与6种核酸提取试剂匹配性分析,为选择核酸提取试剂、扩增试剂以及临床诊疗提供科学依据。方法:将国家标准物质进行浓度梯度稀释得到6个浓度梯度,用广州达安、北京金豪、武汉明德、四川迈克、江苏硕世和上海之江6种2019-n...     

两种RT-PCR 检测SARS-CoV-2 核酸试剂盒实验室应用评价

目的　应用两个厂家生产的试剂盒平行检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染的肺炎（COVID-19）患者样本, 对其检测效果进行实验室应用评价。方法　A,B 两试剂盒共同靶基因为ORF1ab 和N,B 试剂盒增加靶基因E;两试 剂盒同为磁珠核酸提取,RT-PCR 扩增法。结果　298 份痰液、咽拭子、肛拭子和尿液标本中,两种试剂盒共同确认阳 性结果120 份,阴性结果178 份。其检测分别表达为:A 试剂盒ORF1ab 阳性120 份,N 阳性120 份,阴性178 份,内 标（IC）297 份,质控合格全覆盖;B 试剂盒ORF1ab 阳性120 份,N 阳性118 份,E 阳性120 份,阴性178 份,内标（IC） 298 份,质控合格全覆盖;阳性结果的Ct 值有限配对的t 检验,均P ＞ 0.05（ORF1ab:n=120,t=1.839,P=0.069;N:n=118, t=1.881,P=0.063）, 差异无统计学意义。结论　两种试剂盒表达的Ct 值趋同性较理想,标本的阳性表达上符合指南规定, 结果一致。A 试剂盒有内标（IC）1 份未能表达,不可忽视;B 试剂盒N 基因有2 份缺项需找原因克服,而具备的E 基 因提高了SARS-CoV-2 核酸检测的可控性。     

全血DNA提取试剂盒改良法

目的建立简便、快捷、高纯度、高浓度的DNA提取方法。方法对原美国生产的EZNABloodDNAKit试剂盒方法进行改良(简称全血DNA提取试剂盒改良法),并与原试剂盒法、经典酚氯法改良法(微量法)[1]进行比较。取EDTA2Na抗凝血,分别用3种方法提取DNA,用琼脂糖凝胶电泳对其进行定性测定,并用紫外分光光度法定量测定。结果DNA提取的纯度A260/A280试剂盒改良法、原试剂盒法和微量法分别为1.8083±0.1655、2.0877±0.3230、1.7734±0.1152,前两法有显著性差异(P<0.05),试剂盒改良法提取DNA的纯度明显高于原试剂盒法,与微量法无显著性差异(P>0.05);改良法提取DNA的浓度分别为75.2476±18.0259、45.2771±14.973、123.8758±74.7367,与前两法的DNA提取浓度有显著性差异(P<0.05),明显高于原试剂盒法;DNA电泳图显示试剂盒改良盒法与微量法均很清晰,原试剂盒法有明显的拖尾现象。结论试剂盒改良法提高了DNA提取的纯度和浓度,可作为分子生物学研究DNA提取较好的选用方法。     

4种SARS-Cov-2核酸检测试剂盒测定结果分析

目的 比对4种严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒测定结果,为实验室选择试剂盒和评估试剂盒性能提供参考.方法 收集318例咽拭子标本,提取核酸后,分别用4种SARS-CoV-2核酸检测试剂盒进行检测.结果 4种试剂盒检测结果比对的Kappa值分别为0.741(试剂盒A与B比较)、0.653...     

三种直接法测定HDL—c试剂盒的性能比较分析

目前，实验室检测HDL－c的方法很多，中华医学会检验学会推荐磷钨酸一镁法（PTA）作为常规方法犤１犦。随着自动化分析仪的日益普及，自动分析直接检测HDL－c逐步取代了PTA法，我们选择了一种进口和两种国产试剂盒进行比较分析，现报告如下。１材料和方法１．１血清标本均取自我院门诊病人的标本。１．２试剂盒采用进口Randox试剂盒和两种国产试剂盒（国产A；国产B），三种试剂盒均为化学修饰法，定值血清采用Randox高值和低值定值血清（含有IFCC的标定值）。l．３仪器采用日立７１７０A自动生化分析仪。１．４测定方法均按照各自…     

抗ENA4种试剂盒对风湿病诊断性能的比较研究

临床上与自身免疫有关的一组疾患，如红斑性狼疮（SLE），类风湿性关节炎（IRA），多发性肌炎（PM），皮肌炎（SM），多发性系统性硬化（SS），Sjogren综合症（SjS）等曾命名为结缔组织病，现统一归类为风湿病。     

核酸提取仪在肝炎病毒核酸定量检测中的应用研究

目的 比较核酸提取仪和手工法核酸提取对荧光定量PCR准确定量的影响.方法 血清样本分别用NP968核酸提取仪和手工法提取DNA和RNA,提取产物作为模板,用ABI 7500进行荧光定量PCR分别检测HBV和HCV,对比CT值,比较两种核酸提取方法的效率.结果 核酸提取仪提取的核酸PCR扩增的CT值明显低于手工法的CT值,处理大批量样本的时间也明显短于手工法.结论 核酸提取仪具有速度快、提取效率高的优点,值得在临床实验室推广应用.     

2种国产新型冠状病毒核酸检测试剂检测结果的比较与分析

目的对不同的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂的检测结果进行比较和分析,以供实验室参考。方法收集本院2月9日至2月11日期间共101例检测SARS-CoV-2核酸的临床样本,用两种国产试剂盒进行平行检测,根据检测结果比较试剂盒差异。结果 101例样本中试剂A阳性32例(阳性率31.68%),阴性56例(阴性率55.45%),试剂B阳性35例(阳性率34.65%),阴性53例(阴性率52.48%),两组对比,差异无统计学意义(c2=0.2169,P=0.8972)。试剂单通道结果统计发现两种试剂盒N检测位点检出率较ORF1a/b检测位点检出率高,其中试剂A两个通道的检出率分别为ORF1a/b:31.68%,N:44.55%;试剂B为ORF1a/b:35.64%,N:40.59%且14例确诊患者检测结果显示两种试剂盒对于N位点检出的Ct值非常接近。结论本研究中两种SARS-CoV-2核酸检测试剂的检出率无明显差异,两种试剂盒的N位点检出率都较ORF1a/b高,且两种试剂盒对于N基因检测结果相似。