三价砷甲基转移酶基因多态性与地方性砷中毒易感性的关系研究

目的 探讨砷代谢相关酶三价砷甲基转移酶[arsenic(+3 oxidation state)methyltranaferase,AS3MT]单核苷酸多态性与地方性砷中毒患病风险的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性酶切片段多态性-单链构象多态性(PCR-RFLP-SSCP)技术对79名砷中毒患者和110名正常健康人群外周血中AS3MT基因第8内含子和第9外显子的突变情况进行初筛,并进一步对异常带型进行直接DNA测序,以确定突变位点及类型.对AS3MT基因多态性进行单因素分析和多因素非条件Logistic回归分析.结果 病例组AS3MT基因第8内含子上9149位碱基(AS3MT-9149)A→C突变的发生率(19.0％,15/79)低于对照组(23.6％,26/110),病例组AS3MT基因第9外显子上287位密码子(AS3MT-287)ATG→AC/TG突变的发生率(10.1％,8/79)低于对照组(11.8％,13/110),但差异均无统计学意义(P均＞0.05).在多因素分析中调整年龄、性别等因素后,AS3MT基因多态性与地方性砷中毒发病仍无统计学意义[AS3MT-9149:比值比(OR)=0.59,95％可信区间(CI)为0.26～1.31,P=0.195;AS3MT-287:OR=0.85,95％CI为0.32 ～ 2.30,P=0.751].结论 AS3MT-9149和AS3MT-287多态性与地方性砷中毒易感性无显著关系,出现这种情况的原因可能与分析的样本量较小,或者是有关的多态性位点在AS3MT基因其他的外显子或非编码区上有关.     

遵义汉族人群维生素D受体基因FokⅠ多态性与强直性脊柱炎的关系

目的 探讨遵义汉族人群维生素D受体（VDR）基因第二外显子（Fok Ⅰ位点）多态性与强直性脊柱炎（AS）的关系.方法 收集遵义地区汉族人群静脉血标本110例,其中AS患者49例（AS组）,体检健康者61例（对照组）;采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法测定两组标本的VDR基因Fok Ⅰ酶切位点多态性,观察AS组和对照组中基因型频率和基因频率分布规律,分析其与AS的关系.结果 AS组中Fok Ⅰ的等位基因频率F为74.00％、f为26.00％,对照组中分布F为73.80％、f为26.20％;两组中基因型分布比较,P均＞0.05.结论 VDR基因Fok Ⅰ酶切位点多态性与遵义汉族人群的AS发病无关.     

CTLA-4基因多态性与中国南方汉族人Graves病的相关性

用PCR-RFLP和PCR．SSLP分别确定CTLA-4基因第1外显子49位点基因型和第4外显子3，末端AT重复序列的基因型，分析广东汉族120例Graves病患者及123名正常对照组CTLA-4基因多态性。结果显示CTLA-4基因外显子1A49G及外显子4（AT）n多态性与广东汉族人GD不相关。     

消癌平对肝癌细胞HepG2差异表达基因及可变剪接的影响

目的通过RNA-seq分析消癌平作用前后肝癌细胞HepG2的差异表达基因(differentially expressed genes, DEG)及可变剪接(alternative splicing, AS)。方法本研究以HepG2细胞作为对照组,以质量浓度为40 mg/L消癌平作用24 h后的肝癌细胞为实验组,利用Illumina HiSeq平台对实验组和对照组进行分析,使用PossionDis方法进行DEG检测,使用rMATS软件检测不同样品间的AS和差异剪接基因(differentially spliced genes, DSG),并利用基因本体(gene ontology, GO)对其功能进行分类及富集分析。结果与对照组比较,消癌平作用后共得到DEG 608个,其中上调基因147个,下调基因461个。对照组发生AS 21 387个,消癌平使HepG2 AS减少到19 265个,且两组均以外显子(SE)跳跃最多而内含子(RI)保留最少为主。对差异表达的AS行GO富集分析,提示其中生物过程相关的22个,细胞成分相关13个,分子功能相关的有8个。结论消癌平诱导HepG2产生的大量DEG及AS在抑制肝癌生长增殖过程中发挥作用。     

发根DNA检测Alport综合征COL4A5基因突变

目的：通过发根DNA提取分析Alport综合征（Alport syndrome，AS）一家系中COL4A5基因突变，试图通过该方法简化AS家系的收集工作和推广COL4A5基因检测。方法：通过PCR和直接测序的方法，对先证者外周血DNA COL4A5基因所有51个外显子及其相邻内含子的DNA序列进行检测。发现突变位点后，提取6份该家系成员发根部DNA进行该突变位点检测。结果：①成功地从发根部提取DNA，进行了PCR和直接测序。②在COL4A5基因第50号外显子4944位点发现一错义突变，碱基G被T取代，导致其编码1648位氨基酸由色氨酸变为半胱氨酸（4944G＞TW1648C），男性患者为纯合突变，女性患者为杂合突变，正常家系成员和92例对照中均未发现此位点异常，说明W1648C为引起该家系临床病变的突变位点，并非多态性位点。在性连锁Alport综合征中，COL4A5基因此突变位点为首次报道。结论：通过毛发收集、DNA提取，可使家系收集工作更为简便易行，可帮助未开展基因检测的地Ⅸ进行基因诊断。本研究通过发根DNA提取检测Alport综合征一家系中新的COL4A5基因突变，遗传方式符合性连锁显性遗传。     

帕金森病患者parkin基因全外显子缺失突变研究

目的 观察不同亚型帕金森病(PD)患者中parkin基因全部12个外显子的缺失分布，探讨parkin基因在PD发病机制中的可能作用。方法 63例PD患者根据发病年龄分为早发性PD(32例)和晚发性PD(31例)。以基因组DNA为模板，扩增parkin基因第1～12号外显子，然后行琼脂糖电泳，观察外显子纯合性缺失的分布。结果 63例PD患者中发现外显子2、4纯合性缺失各1例，外显子3纯合性缺失2例，这些缺失均出现于早发性PD组。结论 parkin基因外显子2～4的纯合性缺失可能是我国早发性PD患者的致病原因之一。     

强直性脊柱炎患者一个新的突变位点——CXCR-1(Arg192Gly)的临床意义探讨

目的 寻找强直性脊柱炎(AS)患者高亲和力白细胞介素(IL)-8受体A(CXCR-1)基因与AS发病相关的遗传和免疫分子基础.方法 应用聚合酶链反应(PCR)测序分析方法,分析和寻找ASCXCR-1的外显子、交界区与启动子序列中结构特点、可能与疾病相关的突变点,并对突变所致的氨基酸改变的疏水性、保守性和进化距离进行分析.结果 在AS-家系的6例AS患者中发现了一个新的未知突变"Arg192Gly",第192位氨基酸在物种间高度保守,精氨酸和甘氨酸的疏水性和进化距离均有差异.结论 AS患者CXCR-1(Arg192Gly)突变可能参与AS遗传和免疫分子机制.     

内皮素-1基因Lys198Asn及TaqI多态性与原发性高血压关系的研究

目的探讨内皮素-1外显子5Lys198Asn多态性及内含子4TaqI基因多态性与原发性高血压的关系。方法对264例确诊为原发性高血压的患者及103例对照者抽取静脉血，以多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性（PCR-RFLP）分析ET-1基因中的外显子5Lys198Asn多态性及内含子4TaqI基因多态性。结果（1）高血压组与对照组ET-1的基因型和等位基因频率分布无明显差异（2）高血压组的吸烟人群中，ET-1外显子SLys198Asn位点的GT基因型人数比不吸烟组高，存在显著性差异。结论（1）内皮素-1外显子5Lys198Asn多态性及内含子4TaqI基因多态性与高血压的发病无显著相关；（2）ET-1外显子5Lys198Asn位点的T基因携带者可能对吸烟有较高反应性，增加高血压的患病率。     

酪氨酸激酶基因单核苷酸多态与2型糖尿病关系的研究

目的通过对酪氨酸激酶（TEK）基因进行单核苷酸多态（sNP）的检测，并对该基因外显子的SNP进行基因分型，研究TEK基因与2型糖尿病（T2DM）的相关性。方法使用PCR方法对TEK基因的外显子及临近的内含子进行测序以确定该基因的SNP，对外显子的高频SNP，在华东地区汉族T2DM人群与正常人群中进行基因分型。结果共发现TEK基因有23个SNP，高频19个，低频4个。其中TEKE14（A775A）、TEKEZ3／129两个SNP在T2DM人群与正常人群中差异有统计学意义（P〈0．05）。结论TEK基因SNP可能与华东地区T2DM的发病有关。     

2型糖尿病与簇蛋白基因关联的初步研究

目的探讨2型糖尿病（T2DM）与簇蛋白（Glu）基因多态性的关联。方法聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）和DNA测序技术分析62例T2DM患者及60例正常对照者的Glu基因外显子2和外显子5基因多态性。结果Glu基因外显子2发现1个多态位点：1963（＋A）;外显子5发现3个多态位点：（1）7476（-A）,（2）7534（-C）,（3）7521C→T。结论Glu基因外显子2和外显子5多态性在2型糖尿病组和正常对照组多态性位点基因频率分布差异有统计学意义。因此,Clu基因外显子2和外显子5多态性可能与T2DM易感性有关联。     

一个2型糖尿病家系ATP敏感性钾通道基因突变分析

目的了解ATP敏感性钾通道（KATP）基因突变在一个2型糖尿病（T2DM）家系中的发生情况。方法提取家系成员的外周血DNA，用PCR扩增磺酰脲类受体1（SUR-1）基因第16、18、31外显子和KIR 6.2基因，用单链构象多态性分析（SSCP）检测PCR产物，对SSCP电泳结果异常者进行DNA序列分析。结果（1）在17名家系成员中，未检测到SUR-1基因第18号外显子ACC→ACT和第31外显子AGG→AGA突变；（2）SUR-1基因第16号外显子-3C→T的T等位基因频率为65％，比普通T2DM人群高8％；（3）KIR 6.2基因E23K的K等位基因频率38％，比普通T2DM人群低3％。结论SUR-1基因第16号外显子-3C→T多态性可能与饮食、环境等因素共同作用，参与该家系T2DM的发生和发展。     

北京市汉族人群MEF2A基因第7号外显子突变的检测及其意义

目的 检测我国汉族人群中MEF2A基因第7号外显子的突变，探讨这一突变的临床意义。方法 用PCR-单链构象多态性（SSCP）和（或）PCR产物直接测序法对500例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者、157例经冠状动脉造影证实无冠状动脉堵塞者为非冠心病组及242例健康体检者的MEF2A基因第7号外显子进行基因突变的检测。结果 对参与研究的899例受试者MEF2A基因第7号外显子基因突变的检测结果表明，在MEF2A第7号外显子中未发现任何类型的基因突变。结论 MEF2A第7号外显子的突变可能不是我国汉族人群冠状动脉粥样硬化性心脏病的遗传易感因素。与国外研究比较，在MEF2A第7号外显子突变的临床意义上，我国汉族人群与白种人群间存在明显的地域和种族差异。     

动脉粥样硬化相关基因的研究进展

动脉粥样硬化(AS)是缺血性脑血管病的重要病理基础，防治AS是防治缺血性脑血管病的基本措施。近10多年来，关于AS发生机制的研究进展很快。特别是分子生物学理论和技术的发展，对AS病因及病理学的研究起到了巨的大推动作用，使人们对AS形成的机制有了进一步的认识。现将AS形成过程涉及的多种蛋白和基因，     

胰岛素基因突变与特殊类型糖尿病

编码人胰岛素的胰岛素基因（INS）位于11p15．5，全长1355bp，含3个外显子。其中，第1号外显子编码成熟mRNA上的核糖体结合位点，第2号外显子编码起始密码子、信号肽、B链和C肽，第3号外显子编码A链。正常胰岛素由A、B两个肽链共16种、51个氨基酸组成。     

脊髓性肌萎缩症的基因研究

目的 研究我国Ⅰ～Ⅳ型脊髓性肌萎缩症（SMA）患者运动神经元生存基因（SMN）及神经细胞凋亡抑制蛋白（NAIP）基因外显子的缺失情况,以探讨此两种基因与SMA表型之间的关系。方法 应用PCR法检测45例Ⅰ～Ⅳ型SMA患者、30例表型正常的SMA直系亲属及30例正常对照的SMIN基因第7、8号外显子和NAIP基因第5、6号外显子缺失情况。结论 7例Ⅰ型和Ⅱ型SMA患者中6例纯合缺失SMN基因外显子7和8,1例纯合缺失外显子7而保留外显子8;8例Ⅲ型SMA患者仅1例缺失外显子7和8,余7例均无SMN基因的缺失;成人型（Ⅳ型）SMA未检测到SMN基因缺失;45例Ⅰ～Ⅳ型SMA患者均未检测到NAIP基因外显子5和（或）6的缺失。结论 Ⅰ型、Ⅱ型SMA可通过SMN基因第7、8号外显子的检测进行确诊,Ⅲ型SMA患者SMN基因缺失率低,故通过检测SMN基因7、8外显子进行基因诊断尚需谨慎,Ⅳ型SMA未检测到SMN基因缺失,发病可能与SMN基因缺失无关;NAIP基因在SMA发病中的作用尚不清楚。     

动脉粥样硬化易感基因挖掘与生物信息学分析

目的挖掘动脉粥样硬化(AS)易感基因,为寻找AS正确的诊断和治疗方法提供线索和数据支撑。方法从Pub Med、OMIM和GEO数据库检索AS相关数据,利用SMD在线工具对AS易感基因进行染色体定位,并通过DAVID和STRING10.0软件进行基因功能注释和蛋白互作分析。结果共获得AS易感基因454个,其染色体定位分布不均匀,以1、11、2和4号分布较多,Y染色体多于X染色体上的分布;AS易感基因富集在24个生物学功能注释单元中,其中44个编码蛋白存在互作关系,涉及多种生物学过程和分子功能。结论 AS易感基因的控掘与生物信息分析为AS的分子水平机制研究提供了数据平台,为多基因复杂疾病的基因挖掘提供了有效方法。     

高血压肾损害与肾实质性高血压胰岛素受体基因第17外显子多态性研究

目的探讨原发性高血压（EH）肾损害及肾实质性高血压胰岛素受体（INSR）基因第17外显子多态性，从遗传学角度寻求其病因。方法应用多聚酶链反应和单链构象多态性分析（SSCP）等技术，对原发性高血压肾功能正常（EH-NRF组）、高血压肾损害肾功能衰竭（EH-CRF组）、肾实质性高血压肾功能正常（RH-NRF组）、肾实质性高血压肾功能衰竭（RH-CRF组）及正常血压（NC组）的全血INSR基因第17外显子多态性进行研究。结果四组患者与正常对照组INSR基因第17外显子SSCP均显示三种不同的带型，分别称为带型Ⅰ（野生型）、带型Ⅰ（突变型）、带型Ⅱ（突变型）。EH-NRF组及EH-CRF组突变频率（带型Ⅱ＋带型Ⅲ）明显高于RH-NR组、RH-CRF组及NC组（P〈0．05）。各带型在RH-NRF组、RH-CRF组及NC组间出现的频率无显著性差异。结论①INSR基因第17外显子多态性与中国人EH有关，EH患者突变率明显高于RH患者。INSR基因第17外显子多态性改变与EH是否并发肾损害无关。②肾实质性高血压患者无论是否并发肾功能衰竭，均未发现INSR基因第17外显子多态性改变。     

糖尿病肾病与肾素-血管紧张素系统基因多态性的关系

本文就近年来与糖尿病肾病有关的RAS基因多态性方面的研究进展作一综述。 1 血管紧张素原（AGT）基因 人类的血管紧张素原（AngiotensinogenAGT）基因位于1q42—43，是13kb的单拷贝基因，由5个外显子和4个内含子组成。AGT基因有两个多态位点，AGT-M235T和AGT—T174M，前者位于外显子2第704位核苷酸的T或C变异，致AGT第235个氨基酸残基为甲硫氨酸（M）或苏氨酸（T）；     

树突状细胞表面特异性非整联蛋白外显子4在中国裔丙型肝炎患者中的遗传多态性

目的探讨树突状细胞表面特异性非整联蛋白（DC—SIGN）及其同源物（DC-SIGNR）外显子4遗传多态性在中国裔丙型肝炎患者中是否存在遗传易感性。方法采用PCR结合DNA测序对300例丙型肝炎患者和520名健康人的DC-SIGN和DC-SIGNR外显子4重复序列多态性进行基因分型和测序分析。结果DC—SIGN外显子4基因型与等位基因频率在丙型肝炎患者和健康人群间差异无统计学意义（P〉0．05）。DC-SIGNR外显子4等位基因的频率差异也无统计学意义（P〉0．05）；但9／5基因型分布频率在丙型肝炎患者和健康人群间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DC-SIGN外显子4遗传多态性与HCV感染易感性无明显相关性；9／5基因型DC-SIGNR外显子4在丙型肝炎患者中的分布频率较高，可能与HCV感染的易感性相关，值得进一步研究。     

强直性脊柱炎患者蛋白酶体基因表达的研究

目的：分析比较强直性脊柱炎（AS）患者与正常对照者之间蛋白酶体（proteasome)的基因表达及生物学功能的差异。方法：用快速蛋白质液相色谱法（FPLC法）分别从10个HLA－B27阳性家族中的AS患者及正常对照者（同一级亲属）的B淋巴细胞系中制备和纯化蛋白酶体，用反转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）测定蛋白酶体基因的表达。用三氯乙酸（TCA）沉淀法测定不同的蛋白酶体对125I标记的HLA－B27的降解程度。结果：B27阳性家族中，AS患者与非AS对照者的B细胞内蛋白酶体亚单位LMP2 mRNA的表达差异无显著性，而LPM7和MECL1 mRNA的表达AS患者明显高于非AS对照者（P均＜0．0001），经干扰素（IFN）－γ刺激培养后，非AS对照者的LMP2－LMP7和MECL1mRNA的表达均显著增加（P值分别为0．007，＜0．0001和＜0．0001），而AS组这三种亚单位基因的表达增加均不明显，因此，在INF－γ刺激下AS与非AS组蛋白酶体基因的表达差异无显著性。免疫印迹分析表明AS患者LMP7及MECL1蛋白水平的表达也明显高于非AS对照者，LMP2蛋白的表达两组无明显差别，AS患者蛋白酶体的糜蛋白酶样活性明显增强，对B27的降解作用明显强于非AS的蛋白酶体，孵育4h时的平均降解率为81．8％，而非AS对照者的蛋白酶体的平均降解率为41．9％（P＜0．0001），结论：结果提示蛋白酶体亚单位基因的过度表达及生物学功能的亢进可能是导致HLA－B27阳性者AS发生和发展的重要因素之一。