实验性重症急性胰腺炎Caspase-1激活的细胞因子的表达

目的研究实验性重症急性胰腺炎(SAP)Caspase-1激活的细胞因子的表达.方法SD大鼠32只,随机分4组:正常对照组(HC组)、SAP 6 h组、SAP 12 h组、SAP 18 h组.采用5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发大鼠SAP模型.通过HITACHI-7150型自动生化分析仪检测大鼠血清淀粉酶;采用ELISA法测定血清IL-1β水平;酶化学法测定胰腺MPO活性;半定量RT-PCR检测胰腺Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA的表达;免疫组织化学方法检测胰腺IL-1β蛋白的表达.结果SAP各组血清淀粉酶和IL-1β水平显著升高,并伴有胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)显著增加,与HC组相比,其差异均具有显著性意义(P＜0.01).HC组胰腺组织内可见Caspase-1 mRNA表达,但IL-1β及IL-18 mRNA的表达较弱SAP各组胰腺组织内Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA的表达显著上调(P＜0.01).SAP各组IL-1β蛋白表达显著增强,与HC组比较差异具有显著意义(P＜0.01),而且与SAP严重程度相一致.结论Caspase-1激活的细胞因子IL-1β及IL-18的过度表达在SAP发病机制中发挥重要的作用.     

实验性重症急性胰腺炎Caspase-1激活的细胞因子的表达

目的　研究实验性重症急性胰腺炎 (SAP) Caspase- 1激活的细胞因子的表达。方法　 SD大鼠 32只 ,随机分 4组 :正常对照组 (HC组 )、SAP6 h组、SAP12 h组、SAP18h组。采用 5 %牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发大鼠 SAP模型。通过 HITACHI- 715 0型自动生化分析仪检测大鼠血清淀粉酶 ;采用 EL ISA法测定血清 IL- 1β水平 ;酶化学法测定胰腺 MPO活性 ;半定量 RT- PCR检测胰腺 Caspase-1、IL- 1β及 IL- 18m RNA的表达 ;免疫组织化学方法检测胰腺 IL- 1β蛋白的表达。结果　 SAP各组血清淀粉酶和 IL- 1β水平显著升高 ,并伴有胰腺组织髓过氧化物酶 (MPO)显著增加 ,与 HC组相比 ,其差异均具有显著性意义 (P<0 .0 1)。HC组胰腺组织内可见 Caspase- 1m RNA表达 ,但 IL- 1β及 IL- 18m RNA的表达较弱 ;SAP各组胰腺组织内 Caspase- 1、IL- 1β及 IL- 18m RNA的表达显著上调 (P<0 .0 1)。 SAP各组 IL- 1β蛋白表达显著增强 ,与 HC组比较差异具有显著意义 (P<0 .0 1) ,而且与 SAP严重程度相一致。结论　 Caspase- 1激活的细胞因子 IL- 1β及 IL- 18的过度表达在 SAP发病机制中发挥重要的作用。     

NLRP3炎症小体介导细胞焦亡在急性胰腺炎肺损伤中的作用机制研究

细胞焦亡参与了急性胰腺炎的发生,但其在远隔器官损伤中的作用尚未明确。目的：探讨NLRP3炎症小体依赖性细胞焦亡在急性胰腺炎相关肺损伤中的作用和机制。方法：32只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组：对照组、重症急性胰腺炎（SAP）组、Z-WEHD-FMK(caspase-1抑制剂)组和双硫仑（GSDMD抑制剂）组,后3组以5%牛磺胆酸钠构建SAP模型。检测血清淀粉酶、脂肪酶、降钙素原水平和髓过氧化物酶（MPO）活性;通过组织病理学检查和肺湿/干重比评估胰腺和肺损伤程度;分别以ELISA法和免疫组化染色、蛋白质印迹法检测血清细胞焦亡相关炎症因子水平和肺组织细胞焦亡通路相关蛋白表达。结果：与对照组相比,SAP组血清生化指标、MPO活性、白细胞介素（IL）-1β、IL-18水平显著升高,胰腺和肺组织损伤明显,肺组织NLRP3、caspase-1、GSDMD表达显著上调（P均<0.05）;与SAP组比较,caspase-1抑制剂和GSDMD抑制剂预处理组胰腺和肺损伤程度减轻,血清生化指标、MPO活性降低,细胞焦亡相关炎症因子水平和焦亡通路相关蛋白表达下凋（P均<0.05...     

白细胞介素-18在实验性重症急性胰腺炎肝损伤中的作用

自细胞介素（IL）-18是一种新发现的促炎细胞因子，其血清水平与重症急性胰腺炎（SAP）合并肝损伤明显相关，然而关于其在SAP急性损伤肝组织中的变化和意义鲜有报道。目的：研究IL-18在SAP大鼠肝组织中的表达．探讨IL-18在SAP肝损伤中的作用。方法：以4％牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导大鼠SAP模型。32只大鼠随机分为对照组和SAP6h、12h、18h组。动态测定血清淀粉酶、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平和腹水量；光学显微镜下观察胰腺和肝组织损伤情况；以免疫组化方法检测IL-18在肝组织中的表达和定位：以蛋白质印迹法检测肝组织中IL-18前体和成熟IL-18的表达。结果：SAP组各时间点血清淀粉酶、ALT、AST水平均明显升高，腹水量增多，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01），与胰腺和肝脏的组织病理学改变相一致。造模后IL-18在肝脏Kupffer细胞胞质中呈强阳性表达，阳性Kupffer细胞数增多，成熟IL-18表达明显增加，各时间点与对照组相比差异均有统计学意义，以12h组为著（P〈0．01）。结论：Kupffer细胞是肝脏成熟IL-18的主要来源．成熟IL-18表达上调可能在SAP早期肝损伤中发挥重要作用。     

重症胰腺炎大鼠血清和胰腺组织Ang-Ⅱ、TNF-α、IL-10水平的变化

目的:探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血清和胰腺组织中血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)水平的动态变化及相关性。方法:64只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SO组)和SAP组。利用ELISA法检测1、3、6、12 h血清、胰腺组织匀浆中TNF-α、Ang-Ⅱ、IL-10的水平。结果:SAP组血清、胰腺组织中Ang-Ⅱ水平较SO组明显升高(P0.05)。SAP组胰腺组织TNF-α水平明显升高,3 h达到高峰,而血清TNF-α水平1 h明显升高,6 h达高峰,与SO组比较,各时点差异具有统计学意义(P0.05)。SAP组胰腺组织IL-10水平各时点较SO组明显升高(P0.05);血清IL-10 3 h开始升高,12 h达高峰。结论:Ang-Ⅱ、TNF-α、IL-10在SAP大鼠胰腺组织及血清中平行产生,且均明显升高,表明Ang-Ⅱ参与胰腺炎过程,通过打破促/抗炎失衡,进而加重胰腺炎的炎症反应。     

细胞焦亡相关分子在急性胰腺炎模型小鼠胰腺中的表达

目的 探究3种不同造模方式制备的急性胰腺炎（AP）模型小鼠胰腺中细胞焦亡相关分子的表达水平和意义。方法 选取20只SPF级雄性C57BL/6小鼠,采用随机数表法分为对照组、雨蛙肽组（CAE组）、CAE+脂多糖（LPS）组、L-精氨酸（L-Arg）组,每组5只,后3组分别制备AP模型。观察4组的胰腺组织病理变化并予以评分,检测血清淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-1β、IL-18水平,应用实时荧光定量PCR法检测胰腺组织中凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)、IL-1β的m RNA表达水平,应用蛋白质印迹法和免疫荧光染色法检测胰腺组织中NLRP3、Caspase-1及IL-1β的蛋白表达水平。结果 3组AP模型小鼠的血清淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-1β、IL-18及病理评分均较对照组升高,除CAE组的血清TNF-α和IL-18水平与对照组的差异无统计学意义（P>0.05）外,各组间其余指标的差异均有统计学意义（P均<0.05）。3组AP模型小鼠的胰腺组织中ASC、Caspase-1、G...     

姜黄素在大鼠重症急性胰腺炎中的研究

目的观察姜黄素对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)NF-κB p65蛋白的表达水平,血清淀粉酶、细胞因子及胰腺组织的改变,探讨姜黄素对大鼠重症急性胰腺炎防治的作用。方法通过牛磺胆酸钠诱导大鼠重症急性胰腺炎模型,将54只SD大鼠随机分成3组:假手术对照组(N组)18只,重症急性胰腺炎模型组(M组)18只,姜黄素干预组(C组)18只。3组分别于3h、6h、12h等3个时间点取腹水、血清及胰腺组织。采用全自动生化分析仪检测各组血清淀粉酶(AMY)水平。采用ELISA检测各组血清IL-6和TNF-α的水平。采用HE染色观察胰腺的病理学损伤和评分及免疫组化染色测定NF-κBp65蛋白的表达。结果 M组血清AMY较N组明显升高(P<0.0001);C组血清AMY水平较M组有所下降(P<0.05)。C组的水肿、炎症浸润、出血和Schmidt评分均较M组降低(P<0.05)。M组大鼠各时间点的胰腺组织NFκb的阳性表达水平较N组和C组明显增加(P<0.05),C组各时间点胰腺组织NFκB p65蛋白的阳性表达较M组有所下降(P<0.05)。M组血清IL-6、TNF-α水平比N组明显升高(P<0.05),C组工IL-6、TNF-α水平较M组明显下降(P<0.05)。结论姜黄素能在一定程度上抑制NF-κB信号通路的激活并减轻SAP的病理损伤,从而起到防治作用。     

大鼠重症急性胰腺炎发病机制中p38丝裂原活化蛋白激酶的作用研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)特异性抑制剂SB203580对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的保护作用。方法以胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠建立SD大鼠SAP模型。将45只SD大鼠随机分为3组,假手术组(SO组,n=15);SAP组(SAP组,n=15);SB203580治疗组(SB组,n=15)。术后3、6、12 h处死大鼠并取血。对胰腺进行病理组织学评分,测定大鼠腹水量。检测血清淀粉酶,ELISA法测定血清IL-6和IL-10水平。并采用免疫组化法观察大鼠胰腺组织p38 MAPK下游靶点P-ATF2表达情况。结果 SO组胰腺组织存在P-ATF2弱表达,SAP组各时间点P-ATF2表达水平明显升高(P<0.01),SB组各时间点表达水平较SAP组下降明显(P<0.01)。SAP组6、12 h时间点IL-6水平,3、6 h时间点IL-10水平,血清淀粉酶,腹水量明显高于SB组(P<0.05)。SAP组各时间点胰腺组织病理学积分显著高于SB组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阻断p38 MAPK信号传导通路可以明显缓解大鼠重症急性胰腺炎的病情。预示此信号传导通路可以为SAP的治疗提供一个有价值的标靶。     

白细胞介素17表达与急性胰腺炎相关性研究

[目的]观察不同程度的急性胰腺炎（AP）大鼠血清及胰腺组织中白细胞介素（IL）17的表达,探讨IL-17和AP炎症程度的相关性及地塞米松对血清IL-17表达的影响。[方法]将54只SD大鼠随机分为3组：重症AP（SAP）组、轻型AP（MAP）组和假手术（SO）组。造模成功后3、6和12h分批处死各组大鼠,解剖观察各组大鼠胰腺组织及有无胸腹水,取胰腺组织行病理学评估;用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组大鼠血清和胰腺组织中IL-17的表达水平。另取SD大鼠36只建立SAP模型后,随机分为2组：地塞米松（治疗）组和0.85%氯化钠（对照）组。3、6和12h分批处死大鼠,ELISA法检测各组鼠血清和胰腺组织IL-17表达水平。[结果]①MAP组和SAP组血清及胰腺组织中IL-17表达水平均高于SO组（P〈0.01）;并且SAP大鼠血清及胰腺组织中IL-17表达水平均低于MAP（P〈0.01）。②地塞米松治疗组大鼠血清及组织IL-17表达水平均低于对照组（P〈0.01）。[结论]IL-17的表达水平与AP的严重程度密切相关;地塞米松可以抑制IL-17表达,改善AP的严重程度。     

重症急性胰腺炎大鼠血清白细胞介素-2、-8及-10的表达及临床意义

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血清中白细胞介素(IL)-2、-8、-10的表达及临床意义。方法 45只SD雄性大鼠,按照随机数字表法分为对照组、假手术组、SAP组各15只,SAP组切开大鼠腹部暴露胰腺,按照大鼠体重1 ml/kg剂量胆总管注入50 g/L牛磺胆酸钠制备SAP模型,假手术组手术相同但不注射药物,对照组正常饲养,光镜观察大鼠胰腺组织改变,酶联免疫吸附(ELISA)法在大鼠建模成功后12 h测定IL-2、IL-8及IL-10表达。结果光镜下观察SAP组胰腺组织严重水肿,细胞坏死,具有片状血斑或者胰腺出现局部皂化斑,其中SAP组胰腺组织病理为(9.45±1.45)分,SAP组评分明显高于对照组和假手术组(P0.05)。大鼠建模成功后及对照组12 h后三组IL-2、IL-8及IL-10表达水平差异显著(P0.05),其中SAP组IL-2、IL-8水平高于假手术组和对照组,IL-10水平低于假手术组和对照组(P0.05)。SAP组血清IL-2、IL-8水平与胰腺组织病理学评分呈明显正相关(r=0.567,0.675;P=0.012,0.004),与IL-10呈负相关(r=-0.896,P=0.000)。结论 IL-2、IL-8及IL-10等在SAP早期诊断中起着重要作用,并且可以作为疾病严重程度和治疗效果评价指标。     

白细胞介素－18在实验性重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

背景白细胞介素(interleukin,IL)-18是一种新近发现的促炎症细胞因子,其血清水平与急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)严重程度及合并胰外脏器损伤方面存在相关性,但有关IL-18在重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)合并肺损伤中的作用却鲜有报道.目的观察IL-18在SAP大鼠肺组织中的表达,探讨IL-18在SAP合并肺损伤中的作用.方法 采用4%牛磺胆酸钠逆行注人胰胆管诱发SAP模型.Sprague-Dawley大鼠32只,随机分为对照组(health control,HC)和SAP6h、12 h、18 h组.动态监测血清淀粉酶(AMS)、肺湿干重比率,留取标本在光镜下观察胰腺及肺组织病理学改变,采用免疫组化方法检测IL-18在肺脏中的表达和定位,并用Western blotting方法检测肺内IL-18蛋白的表达.结果 SAP组各时间点血清淀粉酶、肺湿干重比率均显著高于对照组(P＜0.01);SAP各组胰腺和肺组织病理损伤程度随时间明显加重.免疫组化结果显示,SAP组中IL-18在肺泡巨噬细胞胞浆中的表达较HC组明显增多.Westernblotting结果显示,SAP组各时间点IL-18表达明显升高,与HC组相比均具有显著性差异(P＜0.01).结论 SAP时肺组织中IL-18主要由肺巨噬细胞生成,IL-18可能在SAP合并肺损伤中发挥重要作用.     

茵陈蒿汤调控lncRNA PVT1/miRNA-30a-5p信号通路对重症急性胰腺炎大鼠模型的保护作用

目的探讨清热利胆的经典中药方剂——茵陈蒿汤(YCHT)对牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的保护作用及其机制。方法30只SD大鼠随机分成假手术(SO)组、SAP模型组和YCHT(4.0 g/kg)治疗组,每组10只。造模成功24 h后,留取大鼠胰腺组织和血浆待检测。HE染色观察胰腺病理损伤情况;ELISA法检测血浆淀粉酶、TNFα和IL-1β水平;免疫荧光染色检测LC-3蛋白的荧光强度,TUNEL检测细胞凋亡情况。Western Blot检测胰腺组织LC-3、Beclin-1、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、Caspase-3和NF-κB蛋白表达。实时荧光定量PCR检测lncRNA PVT1和miRNA-30a-5p的表达水平。采用单因素方差分析和Tukey’s检验用于分析多个独立样本之间的差异。结果YCHT能明显减轻SAP大鼠胰腺组织水肿、坏死、出血及炎性细胞浸润等病理学损伤。与SO组相比,SAP模型组大鼠血浆淀粉酶、炎性因子TNFα和IL-1β水平显著升高,YCHT治疗后血浆淀粉酶及TNFα和IL-1β水平显著降低(P值均<0.05)。与SO组相比,SAP模型组LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ比值及Beclin-1、XIAP、Caspase-3和NF-κB蛋白表达明显上调,YCHT治疗组LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、XIAP和NF-κB的表达水平较SAP模型组显著降低,Caspase-3水平显著升高(P值均<0.05)。与SO组相比,SAP模型组大鼠胰腺lncRNA PVT1表达显著升高,miRNA-30a-5p表达显著降低(P值均<0.05);与SAP模型组相比,YCHT显著降低了lncRNA PVT1的表达,增加了miRNA-30a-5p的表达(P值均<0.05)。结论lncRNA PVT1/miRNA-30a-5p介导的细胞自噬和凋亡可能是YCHT治疗SAP的一个药物靶点,这为进一步开发中药方剂YCHT治疗SAP提供了实验基础和理论依据。     

实验性重症急性胰腺炎肺内IL-1β及IL-18 mRNA的表达

目的观察实验性重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP) 肺组织内IL-1β及IL-18 mRNA的表达,并探讨其与肺损伤的关系.方法 SD大鼠32只,随机分4组:正常对照组、SAP 6 h组、SAP 12 h组、SAP 18 h组.采用5%牛磺胆酸钠(0.1 ml/100 g)胆胰管内逆行注射诱导大鼠SAP模型.血清淀粉酶采用HITACHI-7150型自动生化分析仪测定;半定量RT-PCR检测肺组织内IL-1β及IL-18 mRNA的表达.结果造模后各时间点血清淀粉酶水平显著升高,12 h达到高峰,与正常对照组相比,均具有显著性差异(P<0.01).正常肺组织内可见IL-1β及IL-18 mRNA表达;SAP各组肺组织内IL-1β及IL-18 mRNA的表达明显增强,与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01). 结论除TNF-α外,肺内生成过多的IL-1β及IL-18在SAP并发急性肺损伤(acute lung injury, ALI)及急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress sysdrome, ARDS)进程中可能发挥重要的作用.     

巯基丙酮酸硫基转移酶调控核因子κB信号介导自噬对重症急性胰腺炎大鼠的影响及机制

目的 研究巯基丙酮酸硫基转移酶(MPST)调控核因子κB(NF-κB)信号介导自噬对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠的影响。方法 将50只SD大鼠随机分为Sham组、SAP组(重症急性胰腺炎造模)、SAP+AAV-NC组(AAV对照病毒注射+SAP造模)、SAP+AAV-MPST OE组(AAV MPST过表达病毒注射+SAP造模)和SAP+AAV-MPST shRNA组(AAV MPST敲除病毒注射+SAP造模)。分别采用HE染色和胰腺组织损伤评分评价胰腺炎病情严重程度;电镜观察胰腺组织自噬泡;比色法检测血清淀粉酶和脂肪酶的活性;ELISA法检测胰腺组织IL-6表达水平;Western blot检测胰腺组织MPST、LC3Ⅱ/I、beclin1、ATG5、p-NF-κB、NF-κB、β-actin蛋白表达水平。结果 与SAP组相比,SAP+AAV-MPST OE组大鼠胰腺损伤评分、自噬泡数量、血清淀粉酶和脂肪酶活性水平、IL-6水平、MPST、LC3Ⅱ/I、beclin1、ATG5和p-NF-κB/NF-κB水平显著升高,而SAP+AAV-MPST shRNA组大鼠这些指标均显著降低(P...     

TNF-α抑制剂对重症急性胰腺炎细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的:研究重症急性胰腺炎(SAP)大鼠细胞凋亡、Caspase-3表达及其与疾病严重程度的关系.方法:40只SD大鼠随机分成对照组(SAP组,胆管逆行性注射牛磺胆酸钠制备SAP模型,n=20),实验组(干预组,SAP模型制作成功后,注射重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白,n=20).测定两组血清淀粉酶和TNF-α亮含量,采用免疫组化法分析Caspase-3的表达,运用TUNEL技术检测胰腺细胞的凋亡,并对胰腺组织进行病理学评分.结果:与SAP组比较,干预组的血清淀粉酶、TNF-α、胰腺组织病理学评分较低(6868.80+595.50 U/L vs 5434.20±481.52 U/L.258.46±38.57 ng/L vs 182.00±19.67 ng/L.15.54±2.30vs 11.06±1.09,均P＜0.05),Caspase-3阳性率和和胰腺细胞的凋亡指数显著升高(20.06±2.17vs 28.52±3.74,10.42±1.27 vs 16.23±2.43,均P＜0.05).结论:SAP时胰腺细胞发生凋亡时伴随Caspase-3的高表达,而炎症反应和胰腺组织病理学评分得到改善.     

清胰Ⅱ号对重症急性胰腺炎大鼠胰腺及肠组织中MCP-1表达的影响

目的探究清胰Ⅱ号对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺及肠组织中单核细胞趋化蛋白(MCP)-1表达及细胞凋亡的影响。方法将36只大鼠随机分为对照组、模型组、模型+清胰Ⅱ号组,每组12只,对照组正常饲养,其余各组采用胆胰管逆行注射牛磺胆酸钠0.1 ml/100 g的方法建立SAP模型,模型+清胰Ⅱ号组造模后给予清胰Ⅱ号10 ml/kg。造模后12、24 h随机选取7只大鼠采样,比较各组腹水量、胰腺和回肠病理学变化,判断造模是否成功。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清MCP-1、白细胞介素(IL)-10、二胺氧化酶(DAO)、血清淀粉酶(AMY)活力。实时定量PCR(qRT-PCR)检测胰腺及肠组织中MCP-1 mRNA表达情况。流式细胞术检测胰腺细胞的凋亡率。结果模型组大鼠腹内血性腹水及胰腺坏死显著高于对照组,表明造模成功。造模后12、24 h,模型+清胰Ⅱ号组大鼠血性腹水、血清MCP-1、IL-10、DAO、AMY活力及胰腺、回肠组织中MCP-1mRNA的表达显著低于模型组(P<0.05);与对照组相比,模型组及模型+清胰Ⅱ号组胰腺细胞的凋亡率显著增加,且模型+清胰Ⅱ号组SAP显著高于模型组(P<0.05)。结论清胰Ⅱ号可下调炎症因子MCP-1、IL-10表达,降低DAO、AMY活力,促进胰腺细胞凋亡,对重症急性胰腺炎大鼠胰腺及肠组织具有良好的修复和保护作用。     

SB203580对SAP大鼠胰腺组织MPO、TNF-α、IL-6和IL-8表达的影响

目的观察p38丝裂原蛋白（p38MAPK）信号传导通路阻断剂SB203580对急性重症胰腺炎（SAP）大鼠胰腺组织髓过氧化物酶（MPO）及促炎因子TNF-α、IL-6和IL-8表达的影响。方法 46只健康雄性SD大鼠,随机分为观察组22只和SAP组24只。采用3.5%牛磺胆酸钠溶液胰胆管注射法制作SAP动物模型。观察组大鼠制模前半小时股静脉注射SB203580。造模后0.5、6、24 h取两组大鼠胰腺组织,用紫外分光光度法检测MPO活性,用放射免疫法检测TNF-α、IL-6和IL-8。结果造模后6、24 h观察组大鼠胰腺组织中MPO、TNF-α、IL-6、IL-8均低于SAP组（P均〈0.05）。结论 SB203580可以降低大鼠胰腺组织中MPO、TNF-α、IL-6、IL-8的表达。     

塞来昔布对大鼠重症急性胰腺炎的治疗作用

目的:探讨塞来昔布对大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)治疗效果及机制.方法:SD大鼠共135只,其中75只随机平均分为SAP组,低剂量及高剂量塞来昔布组,观察其生存率;60只SD大鼠随机平均分为对照组(假手术组),SAP组,低剂量及高剂量塞来昔布组.胆胰管内注射牛磺胆酸钠溶液造模,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-6的表达;RT-PCR检测胰腺组织COX-2 mRNA的表达;HE染色、胰腺组织半定量积分评价胰腺病理学改变.结果:塞来昔布可降低大鼠SAP的病理损害积分,高剂量组在造模后的24 h可显著减低组织水肿(2.28±0.30 vs 2.73±0.22,P<0.05);在12和24 h均可显著降低腺泡坏死(2.03±0.15vs 2.48±0.24,2.09±0.10 vs 2.65±0.25,均p<0.05)及炎性细胞浸润(1.80±0.22 vs 2.51±0.17,1.57±0.26 vs 2.20±0.22,均p<0.05).造模后COX-2 mRNA表达及TNF-α、IL-1β及IL-6产生增加.塞来昔布治疗组上述检测指标明显低于SAP组(均P<0.05),且随塞来昔布剂量的增加其抑制作用逐渐增强.塞来昔布高剂量治疗组可显著提高大鼠SAP的生存率(16%vs 52%,P<0.05).结论:塞来昔布可能通过抑制TNF-α、IL-1β及IL-6的表达,改善胰腺局部病理改变及预后.     

高糖通过白介素1β促进1型糖尿病大鼠原代主动脉平滑肌细胞迁移参与内膜新生的研究

目的探讨在动脉损伤后内膜新生中高糖促进血管平滑肌迁移的机制。方法采用组织块贴壁法分离大鼠原代主动脉平滑肌细胞,免疫荧光染色法进行细胞鉴定。大鼠原代主动脉平滑肌细胞分为正常对照组(Con)、高糖组(HG)、HG+半胱氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)抑制剂组(HG+VX-765)、Con+Caspase-1抑制剂组(VX-765)。大鼠随机分别为假手术组(C)、正常颈动脉球囊损伤组(I)、糖尿病假手术组(DM)、糖尿病球囊损伤组(DMI)。RT-PCR检测含NLR家族pyrin域蛋白3(NLRP3)、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1βmRNA水平表达。术后24 h并2周后免疫荧光染色法检测IL-1β表达,HE染色检测血管损伤后内膜新生情况,ELISA法检测IL-1β水平,划痕实验测定平滑肌细胞迁移能力。结果分离的细胞经免疫荧光染色确定为大鼠原代主动脉平滑细胞。与Con组比较,HG组IL-1β水平、细胞迁移率、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1βmRNA表达水平升高(P0.05或P0.01)。与HG组比较,HG+VX-765组IL-1β水平、细胞迁移率降低(P0.05或P0.01)。24 h和2周后,与C组比较,DM组IL-1β表达水平、内膜面积/中膜面积升高(P0.05或P0.01);与I组比较,DMI组IL-1β表达升高(P0.01)。结论高糖诱导细胞焦亡分泌的IL-1β促进大鼠原代主动脉平滑肌细胞迁移,参与动脉损伤后的内膜新生过程。     

PI3K抑制剂对急性胰腺炎细胞因子和组织病理学评分的影响

目的:研究磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylino-sitol 3-kinase,P13K)/丝/苏氨酸激酶(ser-ine threonine kinase,Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠细胞因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6]转录和表达以及胰腺组织病理评分的影响,探讨其对SAP大鼠的保护作用.方法:将60只SD大鼠随机分为重症急性胰腺炎组(S组)、假手术组(C组)、生理盐水组(NS组)、溶剂(DMSO)对照组(R组)、PI3K/Akt抑制剂wortmannin组(W组).采用改良的Aho法制作SAP模型,分别在造模3、6h后抽血并处死大鼠,收集胰腺组织.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达.Real-time PCR方法检测胰腺组织细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)mRNA转录水平变化,并常规HE染色进行胰腺组织病理评分,同时观察各组腹水量、血清及腹水淀粉酶的变化.结果:S组和R组大鼠术后3、6h的腹水量、血清及腹水淀粉酶水平、胰腺组织病理评分较C组和NS组差异有统计学意义(P<0.05);W组的腹水量、血清及腹水淀粉酶水平、胰腺组织病理评分较同时段的S组和R组有所降低,差异有统计学意义(P<0.05).与C组和NS组相比,S组和R组大鼠术后3、6h的血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平和胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA转录水平差异有统计学意义(P<0.05);W组的上述指标均低于S组和R组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:PI3K抑制剂wortmanin通过抑制PI3K/Akt信号转导通路下调SAP大鼠细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的转录和表达水平,减轻胰腺组织的病理损伤,对SAP大鼠具有保护作用.