lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平；CCK8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达；ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平；双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较，肝癌细胞HepG2、S...     

ESCC组织SNHG17表达及转染si-SNHG17质粒的人食管鳞癌细胞株增殖、凋亡、放射敏感性观察

目的 观察食管鳞癌（ESCC）组织小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)表达情况及转染si-SNHG17质粒的人ESCC细胞株ECA109增殖、凋亡、放射敏感性。方法 取ESCC肿瘤组织与癌旁组织标本各89例份;另取ECA109细胞,并随机分为对照组（Control组,空白培养基处理）、si NC组（转染si NC质粒）、si-SNHG17组（转染siSNHG17质粒）、si-SNHG17+inhibitor NC组（si-SNHG17与inhibitor NC共转染）、si-SNHG17+miR-375 inhibitor组（si-SNHG17与miR-375 inhibitor共转染）;采用RT-qPCR法检测ESCC组织、癌旁组织和各组细胞SNHG17、miR-375、USP14 mRNA,CCK-8法检测各组细胞增殖能力（OD值）,流式细胞术及Western blot法检测各组细胞凋亡能力[凋亡率及凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Caspase3、USP14蛋白）],克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性。双荧光素酶报告基因实验分别验证SNHG17、miR-375及miR-37...     

长链非编码RNA SNHG6促进肺癌细胞增殖及机制的研究

目的研究长链非编码RNAs (Long non-coding RNAs, LncRNAs) SNHG6在肺癌组织及细胞系中的表达水平,并探讨其对肺癌细胞增殖的影响及作用机制。方法 qRT-PCR检测SNHG6在40例肺癌组织和其配对的癌旁组织中,并分析其与临床病例特征的关系,及检测SNHG6在肺癌细胞系和正常支气管上皮细胞系中的表达;经脂质体分别转染SNHG6 siRNA(si-SNHG6)和对照(si-NC)48h后,MTS检测抑制SNHG6表达对细胞增殖的影响,流式检测抑制SNHG6表达对细胞周期的影响,Western-blot检测抑制SNHG6表达对细胞中cyclinD1、CDK4/6和p16蛋白的影响。结果 qRT-PCR结果显示SNHG6在肺癌组织中的表达显著高于其配对的癌旁组织,其高表达与肿瘤大小T分期显著相关(P值均0.05),SNHG6在肺癌细胞系中的表达均显著高于正常支气管上皮细胞系BEAS-2B,其中SPC-A-1细胞中SNHG6的表达最高(P0.05);转染SNHG6 siRNA后,SPC-A-1细胞增殖抑制、G1期细胞增多、cyclinD1和CDK4/6蛋白的表达减少,p16蛋白的表达增加(P值均0.05)。结论 SNHG6在肺癌组织和细胞系中高表达,SNHG6可能通过作用于细胞周期相关蛋白促进细胞的增殖。     

HOXC9在肝细胞癌组织中的表达以及对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

[目的]探讨HOXC9在肝细胞癌(HCC)组织中的表达以及对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.[方法]收集2015～2019年于我院接受手术治疗的65例HCC患者的癌组织及相应癌旁组织,通过免疫组化检测HOXC9在癌组织及癌旁组织中的表达情况,通过RT-qPCR检测HOXC9在肝上皮细胞THLE-3、HCC细胞系HepG2...     

原发性肝癌中LncRNA OSER1-AS1与miR-612表达的相关性及生物学意义

目的 研究原发性肝细胞癌（HCC）中LncRNA OSER1-AS1与miR-612表达的相关性及生物学意义。方法 收集2017年3月-2020年3月华北理工大学附属医院手术切除并保存的HCC组织及对应的癌旁组织,培养HCC细胞株SMMC-7721、HepG2、BEL-7402及正常肝细胞株HL-7702,检测LncRNA OSER1-AS1、miR-612的表达水平。HepG2细胞分组并转染阴性对照（NC） siRNA、LncRNA OSER1-AS1 siRNA、NC miR、miR-612模拟物、miR-612抑制物,检测存活率、凋亡率及LncRNA OSER1-AS1、miR-612、叉头框转录因子M1(FOXM1)表达水平。结果 HCC组织中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于癌旁组织、miR-612的表达水平低于癌旁组织且LncRNA OSER1-AS1与miR-612呈负相关;肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2、BEL-7402中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于正常肝细胞株HL-7702、miR-612的表达水平低于正常肝细胞株HL-7702...     

微小RNA-126在食管癌组织中的表达及其对食管癌EC109细胞增殖和迁移的影响

目的探讨微小RNA(mi RNA)-126在食管癌组织中的表达及其对食管癌EC109细胞增殖和迁移的影响。方法收集该院胸外科手术切除且保存完整的食管癌及相应癌旁组织标本30例,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测癌组织和癌旁组织中mi RNA-126 m RNA表达;mi RNA-126 mimi和control转染EC109细胞,设置阴性对照组(转染mi RNA mimic control)、转染组、空白对照组(仅转染试剂),PCR检测转染EC109细胞mi RNA-126表达,转染细胞培养1、3、5 d后MTT检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞迁移活力。结果癌组织中mi R-126 m RNA低于癌旁组织(P0.05);转染EC109细胞后mi RNA-126在阴性对照组和空白对照组表达量均低于转染组(P0.05);三组转染EC109细胞随着培养时间延长,细胞OD值均逐渐升高(P0.05),培养第3、5天细胞OD值组间差异显著(P0.05),其中转染组EC109细胞OD值均低于阴性对照组和空白对照组(P0.05);转染EC109细胞迁移活力检测结果显示,转染组OD值低于阴性对照组和空白对照组(P0.05)。结论食管癌组织中mi RNA-126低表达,并且对食管癌EC109细胞增殖和迁移具有一定抑制作用。     

DEK基因在肝癌中的表达及靶向抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨DEK基因在肝癌中的表达及RNA干扰抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人正常肝细胞HL-7702作为对照,RT-PCR检测人肝癌HepG2、Huh-7、SMMC-7721、SNU-475细胞中DEK mRNA表达;DEK-siRNA转染HepG2细胞,同时转染阴性对照和空白对照,转染48 h后Western blotting检测各组细胞中DEK、Cleaved caspase 3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果各个肝癌细胞中DEK mRNA表达均显著高于正常细胞,差异有统计学意义(P0.01);DEK基因在HepG2细胞中表达最高,选择作为后续研究对象;转染DEK-siRNA后DEK蛋白表达显著降低;DEK-siRNA组细胞存活率及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白表达显著高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论抑制肝癌HepG2细胞中DEK基因可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关。     

TRB3对人肝癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨假性蛋白激酶毛球族同源蛋白3（TRB3）在肝癌（HCC）细胞增殖、凋亡和迁移中的调控作用及机制。方法:免疫组织化学及蛋白质印迹法（Western blot）检测HCC患者癌组织及癌旁组织TRB3的表达;体外检测肝癌细胞系HepG2和Huh7细胞中TRB3的表达,同时设计小干扰RNA靶向抑制TRB3后：CCK8...     

细胞周期激酶亚单位1对肝细胞癌细胞增殖能力的影响

目的观察细胞周期激酶亚单位1(CKS1)在肝细胞癌及正常肝组织中的表达以及其对人肝细胞癌细胞BEL-7405的增殖能力的影响。方法应用免疫组织化学检测65对手术肝细胞癌组织及癌旁正常组织CKS1的表达水平。应用Western印迹检测肝癌细胞系与正常肝脏细胞中CKS1表达量的差异。应用小干扰RNA(siRNA)技术转染肝细胞癌BEL-7405细胞,Western印迹检测CKS1 siRNA对CKS1蛋白的干扰效果,同时应用细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆增殖实验检测CKS1对BEL-7405细胞增殖能力的影响。结果免疫组织化学染色结果显示,CKS1在正常肝组织中表达量较肝细胞癌组织中表达量低,且差异有统计学意义(P0.05)。Western印迹检测表明CKS1在7种肝细胞癌细胞系表达量显著高于正常肝细胞株,且CKS1的表达量在肝细胞癌BEL-7405细胞株显著高于其他肝癌细胞株。CCK-8法检测CKS1的siRNA转染BEL-7405细胞与阴性对照组和空白对照组相比明显抑制细胞增殖,在48、72和96 h A值分别降低了0.376、0.566、0.972(P0.05);平板克隆增殖形成实验表明,CKS1的siRNA转染BEL-7405细胞后肿瘤细胞形成的克隆增殖集落明显少于阴性对照组和空白组,干扰组与空白、阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 CKS1在肝细胞癌组织中表达量显著高于正常肝组织,在肝癌细胞中表达量显著高于正常肝细胞,CKS1在肝细胞癌细胞BEL-7405的增殖中扮演了重要的角色,CKS1可能成为针对肝细胞癌基因治疗的新兴靶点。     

siRNA干扰MDM2基因对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的将靶向MDM2的siRNA转染人肝癌HepG2细胞,观察转染后细胞内p21基因的表达变化及其对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法将人工合成的针对MDM2基因的siRNA片段通过LipofectamineTM 2000转染人肝癌细胞HepG2。实验分为MDM2 siRNA转染组、阴性对照组、脂质体组、正常对照组。分别用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中MDM2、p21的mRNA和蛋白质的表达量,并用MTT法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化。结果与其他3组比较,siRNA转染组细胞中MDM2 mRNA及蛋白表达减少（P〈0.01）,而p21 mRNA及蛋白表达增高（P〈0.01）。HepG2转染MDM2 siRNA后,增殖能力减弱,凋亡显著。结论 MDM2基因可能通过影响p21控制肝癌细胞的生长。     

环状RNA hsa_circ_0091579对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA(circRNA)hsa_circ_0091579在肝细胞癌(HCC)细胞系中的表达及其对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养人肝癌细胞系SMMC-7721、HuH-7、MHCC-97H、HepG2和人正常肝细胞系HL-7702。从细胞中提取RNA,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa_circ_0091579在HCC细胞系及人正常肝细胞系中的表达,并进行对比。针对hsa_circ_0091579的环化拼接位点设计siRNA,在体外HepG2和HuH-7细胞中转染hsa_circ_0091579 siRNA,并用qRT-PCR验证其有效性。实验分为siRNA组(hsa_circ_0091579 siRNA)和NC组(negative control siRNA),并在HepG2和HuH-7细胞中用CCK8实验、流式细胞术、划痕实验以及Transwell实验分别研究hsa_circ_0091579对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。使用双荧光素酶报告基因实验对预测的靶点进行验证。计量资料两组间比较采用t检验。结果与hsa_circ_0091579在人正常肝细胞系HL-7702中的表达水平相比,其在HCC细胞系SMMC-7721、HuH-7、MHCC-97H、HepG2中的表达水平均明显升高(t值分别为14.27、36.34、26.70、36.16,P值均0.001)。与NC组相比,hsa_circ_0091579 siRNA可在HepG2和HuH-7细胞中有效沉默hsa_circ_0091579(t值分别为14.22、27.20,P值分别为0.005、0.001)。CCK8实验和流式细胞术结果显示,与NC组相比,siRNA组HepG2和HuH-7细胞的增殖活性明显降低,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P值均0.05);划痕实验和Transwell实验显示,与NC组相比,siRNA组HepG2和HuH-7细胞的迁移和侵袭能力明显减弱(t值分别为19.63、13.61、20.75、18.45,P值分别为0.003、0.005、0.002、0.003)。荧光素酶报告基因实验结果显示,与NC组相比,miR-149、miR-490-5p和miR-502-5p均能明显降低野生型荧光素酶质粒的活性(t值分别为10.01、9.13、61.49,P值分别为0.010、0.012、0.001)。结论 hsa_circ_0091579在HCC细胞系中高表达,可能通过抑制miR-149、miR-490-5p和miR-502-5p发挥其癌基因的作用。     

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因3在肺腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨肺腺癌组织中长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因3(lncRNA SNHG3)的表达及临床意义。方法收集120例肺腺癌患者术后癌组织及癌旁组织作为样本,检测样本中SNHG3的表达并分析其与患者临床特征的相关性,利用RNA干扰技术对SNHG3的表达进行干扰,通过噻唑蓝(MTT)实验及Transwell实验记录肺腺癌细胞的生长及侵袭情况。结果肺腺癌组织样本中lncRNA SNHG3的相对表达量(126.83±13.49)明显高于癌旁组织(69.15±9.43),差异具有统计学意义(t=38.389,P0.001)。发生淋巴结转移、临床分期高、肿瘤直径≥5 cm的肺腺癌组织中lncRNA SNHG3的相对表达量越高(P0.05)。转染siRNA后SNHG3的表达量明显低于未干扰组(P0.05)。MTT实验结果显示:与对照组比较,肺腺癌GLC-82细胞增殖能力明显降低(P0.05)。Transwell实验结果显示,与对照组比较,肺腺癌GLC-82细胞侵袭能力明显降低(P0.05)。结论肺腺癌组织中lncRNA SNHG3呈高表达,其可能参与了肺腺癌的发生进展。     

lncRNA SNHG8负调控miR-411-5p影响神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)、小核仁RNA宿主基因子8(SNHG8)对神经母细胞瘤(NB)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测31例NB病人NB组织和瘤旁组织中SNHG8和miR-411-5p表达水平。体外培养NB细胞系SK-N-SH,双荧光素酶报告基因实验验证SNHG8和miR-411-5p调控关系。将SK-N-SH细胞分为对照组、si-NC组、si-SNHG8组、si-SNHG8+anti-miR-NC组和si-SNHG8+anti-miR-411-5p组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测Ki67、活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspases-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:与瘤旁组织比较,NB组织中SNHG8表达水平升高(P<0.05),miR-411-5p表达水平降低(P<0.05)。SNHG8在S...     

靶向cyclinE小干扰RNA对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:以cyclinE基因编码区为靶位,构建表达小干扰RNA(siRNA)的质粒载体,观察转染后对HepG2细胞的影响.方法:针对cyclinE基因序列构建表达siRNA的真核表达载体pSilencer3.1-H1hygro,利用脂质体Metafectene转染CyclinE基因高表达的肝癌细胞株HepG2.流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR和Western blot法观察转染后细胞cyclinE基因表达.结果:成功构建了表达siRNA的真核质粒载体,转染后cyclinE基因mRNA及蛋白表达水平分别下降了79%和65%.结论:靶向cyclinE基因的siRNA可有效沉默HepG2细胞高表达的cyclinE基因,从而抑制肝癌细胞的增殖并促进凋亡.     

SNHG20对CIK细胞共培养的宫颈癌细胞Hela的杀伤作用

目的 探讨SNHG20是否通过靶向微小RNA(miR)-217影响细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞对宫颈癌细胞Hela的杀伤作用。方法 应用流式细胞仪分析诱导的CIK细胞表型。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CIK细胞共培养前后Hela中lncRNA小核仁RNA宿主基因(SNHG)20表达。在Hela中转染si-SNHG20或转染pcDNA-SNHG20并与CIK细胞共培养。四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测Hela细胞活性，克隆形成实验测定Hela细胞克隆形成，流式细胞仪评估Hela细胞凋亡，Western印迹检测凋亡蛋白pro-caspase-3、Cleaved-caspase-3表达。双荧光素酶报告实验检测SNHG20和miR-217的靶向关系。结果 CIK细胞诱导14 d时，CD3⁺CD56⁺比例达到最高。CIK细胞与Hela细胞共培养24、48、72 h降低SNHG20表达水平，差异有统计学意义(P<0.01)。CIK细胞与Hela细胞共培养或转染si-SNHG20降低Hela细胞24、48、72 h细胞活性、克隆...     

靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体构建及体外抑制作用

目的: 构建靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体并在体外检测其对VEGF基因表达的抑制作用.方法: 设计合成靶向HepG2细胞VEGF基因的siRNA cDNA序列并与pSUPER载体连接, 构建VEGF siRNA表达载体, 经酶切鉴定和测序确认后, 脂质体2000介导VEGF siRNA转染HepG2细胞. RT-PCR及Western blot检测VEGFsiRNA表达载体转染的HepG2细胞中VEGF基因表达.结果: 通过双酶切鉴定和测序分析, 成功构建了靶向HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体. RT-PCR和Western blot法检测转染VEGFsiRNA表达载体的HepG2细胞VEGF mRNA及VEGF165表达下调, 其抑制率分别为65%和74%. 实验组中的HepG2中VEGF mRNA表达较阴性对照组、空载体组表达量显著下降(0.304±0.062 vs 0.896±0.061, 0.884±0.074,P<0.05).结论: 成功构建了靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体, 且该载体在体外能有效抑制HepG2细胞VEGF基因表达.     

HBsAg与结核杆菌热休克蛋白70融合质粒在真核细胞中的表达

目的 探讨HBsAg与结核杆菌热休克蛋白（70（Mt.HSP70)融合表达质粒在真核细胞中的表达。方法 用真核表达质粒pCI-neo作为载体构建HBsAg及其与Mt.HSP70的融合表达质粒（pCI-S,pCI-S-HSP70)；用脂质体介导的转染法将重组质粒转染HepG2细胞，48h后，采用RT－PCR，免疫细胞化学和ELISA检测重组质粒在HepG2细胞中的表达。结果 质粒pCI-S和pCI-S－HSP70转染的HepG2细胞总RNA用RT－PCR可检测到目的基因mRNA的表达；pCI-S和pCI-S－HSP70转染的HepG2细胞用免疫细胞化学检测，结果显示在胞浆及核周有大量的阳性颗粒；ELISA检测pCI-S转染的细胞培养上精液HBsAg为阳性，而pCI-S－HSP70转染的细胞培养上清液HBsAg为阴性；在细胞裂解液中，二者转染的细胞均为阳性。结论 HBsAg与Mt.HSP70的融合表达质粒可在HepG2细胞中表达，但表达的融合蛋白不分泌出细胞外。     

MACC1在卵巢癌组织中表达及对卵巢癌细胞生物学特性的影响

目的探讨结肠癌转移相关基因(MACC)1在卵巢癌组织中的表达及对卵巢癌细胞生物学特性的影响。方法收集卵巢癌组织及对应的癌旁组织,Western印迹检测组织中MACC1表达水平。以卵巢癌细胞A2780为研究对象,细胞转染MACC1小干扰RNA(MACC1 siRNA)、siRNA对照(siRNA control),细胞分为未转染组(只加入转染试剂)、siRNA control组(转染siRNA control)、MACC1 siRNA组(转染MACC1 siRNA)。培养24 h后,Western印迹检测细胞中MACC1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果卵巢癌组织中MACC1表达水平高于癌旁组织。siRNA control组细胞中MACC1、MMP-2、MMP-9表达水平及细胞存活率、迁移率、侵袭细胞数目与未转染组相比均没有差异,MACC1 siRNA组细胞中MACC1、MMP-2、MMP-9表达水平及细胞存活率、迁移率、侵袭细胞数目均明显低于未转染组。结论 MACC1在卵巢癌组织中过度表达。干扰MACC1能够抑制卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭能力,作用机制可能与抑制MMP-2、MMP-9表达有关。     

siRNA干扰沉默EZH2基因对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的探讨小分子RNA(siRNA)干扰沉默靶基因EZH2对人肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法取对数生长期的HepG2细胞,分为转染组、阴性对照组及空白对照组,转染组与阴性对照组按照Lipofectamine2000使用说明分别瞬时转染EZH2 siRNA、荧光物FAM,对照组不予任何干预。分别采用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期;qRealtime-PCR和Western blot方法检测EZH2 mRNA和蛋白表达。结果与阴性对照组相比,转染组细胞增殖明显受抑;与阴性对照组及空白对照组比较,转染组细胞凋亡率明显升高,G0/G1期细胞明显增多,S期明显细胞减少;转染组EZH2 mRNA和蛋白表达明显下调,P均<0.05。结论 EZH2 siRNA可抑制人肝癌细胞增殖活性,是一种潜在基因治疗新方法。     

miR-138在肝细胞癌中的表达及其对MHCC97H细胞侵袭、迁移能力的影响

目的 观察miR-138在肝细胞癌(HCC)组织、细胞中的表达变化,并探讨miR-138对MHCC97H细胞侵袭、迁移能力及上皮间质转化(EMT)的影响.方法 采用qRT-PCR检测HCC组织及癌旁组织、MHCC97H、MHCC97L、HepG2及正常肝细胞系L02细胞中的miR-138.转染miR-138 mimic...