苓桂术甘汤含药血清通过PI3K/Akt信号通路保护H2O2诱导的H9c2细胞损伤

目的 研究苓桂术甘汤含药血清对H₂O₂诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路的关系。方法 采用血清药理学方法，制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞，分为空白组、H₂O₂组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组，给予相应药物处理12 h，再加入100 μmol·L^-1 H₂O₂继续培养6 h后进行检测。采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测20%苓桂术甘汤含药血清对H₂O₂诱导的H9c2细胞增殖活性的影响，荧光探针法检测线粒体活性氧（ROS）水平，比色法检测氧化应激标志物丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt mRNA水平，流式细胞术检测细胞凋亡率。加入PI3K抑制剂LY294002后对线粒体ROS、LDH、GSH-Px水平，PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达及细胞凋亡率进行检测。结果 与空白组比较，H₂O₂诱导后细胞活力显著降低（P<0.01），线粒体ROS、MDA及LDH水平显著增加（P<0.01），CAT、GSH-Px水平则显著下降（P<0.01），PI3K、Akt蛋白的磷酸化及mRNA水平明显降低（P<0.05，P<0.01），细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。与H₂O₂组比较，苓桂术甘汤含药血清能够提高H9c2细胞活力，显著降低线粒体ROS、MDA及LDH水平（P<0.01），并显著提高CAT、GSH-Px水平（P<0.01），促进PI3K、Akt的磷酸化及mRNA的表达（P<0.05，P<0.01），显著减少细胞凋亡率（P<0.01）。苓桂术甘汤含药血清与抑制剂LY294002联用后，逆转了苓桂术甘汤含药血清对H9c2细胞的上述作用（P<0.05，P<0.01）。结论 苓桂术甘汤含药血清保护H₂O₂诱导的H9c2细胞损伤可能与调控PI3K/Akt信号通路减轻氧化应激及细胞凋亡有关。     

柴胡疏肝散对功能性消化不良大鼠胃组织线粒体功能及线粒体自噬的影响

目的 观察柴胡疏肝散对功能性消化不良（FD）模型大鼠胃动力、胃组织线粒体功能及线粒体自噬的影响,揭示柴胡疏肝散防治FD的作用机制。方法 将32只SPF级SD大鼠适应性喂养1周后随机分为正常组、模型组、柴胡疏肝散组（4.8 g·kg^-1）,多潘立酮组（4.5 mg·kg^-1）,每组8只。除正常组外,其余3组均采用改良夹尾刺激法复制FD大鼠模型。4周后,采用营养性半固体糊法观察FD大鼠胃排空率,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清柠檬酸合成酶（CS）,胃动素（MTL）,胃泌素（GAS）含量,苏木素-伊红（HE）染色观察胃组织病理变化,透射电镜观察线粒体特征,免疫荧光共定位法观察胃组织微管相关蛋白1轻链3（LC3）与电压依赖性阴离子通道蛋白1（VDAC1）表达,提取新鲜胃组织线粒体,生化试剂盒检测线粒体活性氧（ROS）,丙二醛（MDA）水平,超氧化物歧化酶（SOD）含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测线粒体LC3,自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）,p62蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠胃排空率显著降低（P<0.01）,血清CS,MTL,GAS含量显著降低（P<0.01）,HE染色可见各组大鼠胃组织未见糜烂、溃疡等病理改变,透射电镜观察胃组织线粒体肿胀、扩张,出现空泡病变,LC3和VDAC1免疫荧光共定位表达显著增加（P<0.01）,线粒体ROS,MDA含量显著升高（P<0.01）,SOD含量显著降低（P<0.01）,LC3,Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,p62蛋白表达水平明显下降（P<0.05）;与模型组比较,柴胡疏肝散组和多潘立酮组大鼠胃排空率均明显升高（P<0.05）,血清CS,MTL,GAS含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,透射电镜观察胃组织线粒体核膜完整,内部嵴形态清晰,嵴密度较高,部分存在线粒体分裂融合现象,LC3和VDAC1共定位表达显著减少（P<0.01）,线粒体ROS,MDA含量均明显降低（P<0.05,P<0.01）,SOD含量明显升高（P<0.05）,LC3,Beclin1蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,p62蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论 柴胡疏肝散防治FD的作用机制可能与改善胃组织线粒体功能、抑制线粒体自噬有关。     

芹菜素通过PI3K/Akt和MAPK信号通路诱导人大肠癌CL187细胞凋亡

目的 观察芹菜素对人大肠癌CL187细胞增殖和凋亡的作用及相关机制。方法 选择人大肠癌CL187细胞，利用芹菜素（0、30、45、60 mg·L^-1）进行干预后，采用噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验检测芹菜素对CL187细胞的增殖作用；Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测芹菜素对CL187细胞胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）观察芹菜素对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中Akt、磷酸化（p）-Akt及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响。结果 与空白组比较，芹菜素组细胞存活率显著降低，细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01）；与空白组比较，芹菜素组细胞克隆数和克隆形成率显著降低，克隆形成抑制率显著升高（P<0.01）；不同浓度芹菜素干预CL187细胞48 h，与空白组比较，在荧光显微镜下可观察到细胞核固缩，染色质凝聚，细胞荧光反应增强等典型的细胞凋亡特征；与空白组比较，芹菜素组（45、60 mg·L^-1）抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平显著降低（P<0.01），芹菜素组促凋亡基因Bax和Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，芹菜素组促凋亡蛋白Caspase-3蛋白表达水平明显上调（P<0.05，P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）促凋亡蛋白Bax蛋白表达显著上调（P<0.01），芹菜素组抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显下调（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，芹菜素组（60 mg·L^-1）Akt蛋白表达显著下调（P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著下调（P<0.01），芹菜素组JNK、p-JNK蛋白表达明显上调（P<0.05，P<0.01），芹菜素组（60 mg·L^-1） p38 MAPK蛋白表达明显上调（P<0.05），芹菜素组p-p38 MAPK蛋白表达显著上调（P<0.01），芹菜素组p-Akt/Akt明显降低（P<0.05，P<0.01），芹菜素组p-ERK1/2/ERK1/2显著降低（P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-JNK/JNK明显升高（P<0.05，P<0.01），芹菜素组p-p38 MAPK/p38 MAPK显著升高（P<0.05，P<0.01）。结论 芹菜素可抑制大肠癌CL187细胞增殖并促进细胞凋亡，其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和调控MAPK信号通路相关蛋白的表达有关。     

六味地黄丸通过PI3K/Akt/FoxO3a通路调控自噬对SAMP8小鼠记忆功能的影响

目的 探讨六味地黄丸通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/叉头框转录因子O3a（FoxO3a）通路调控自噬对快速老化小鼠8型（SAMP8）小鼠记忆功能的影响。方法 6月龄SPF级抗快速老化亚系小鼠（SAMR1）雄性小鼠6只设为正常组，6月龄SPF级SAMP8雄性小鼠24只随机均分为模型组、多奈哌齐组（0.747 mg·kg^-1）、六味地黄丸高、低剂量组（2.700、1.350 g·kg^-1），灌胃给药2个月。Morris水迷宫法检测各组小鼠学习和记忆能力；尼氏染色观察小鼠皮层、海马神经元；免疫组化（IHC）检测皮层、海马微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）阳性表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠皮层自噬关键分子酵母ATG6同系物（Beclin1）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、自噬相关基因5（ATG5）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、Caspase-9、Akt、p-Akt、FoxO3a、p-FoxO3a的蛋白表达水平。结果 与正常组小鼠比较，模型组小鼠逃避潜伏期明显延长（P<0.05，P<0.01），穿越平台次数、目标象限停留时间显著减少（P<0.01）；皮层、海马神经细胞数量明显减少、体积缩小，分布疏散，LC3B阳性表达显著增多（P<0.01）；皮层Beclin1、ATG5表达显著升高（P<0.01），Bcl-2表达水平降低（P<0.01），Caspase-3、Caspase-9表达水平显著升高（P<0.01），p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a表达水平显著降低（P<0.01）。与模型组比较，多奈哌齐组及六味地黄丸高、低剂量组小，3 d逃避潜伏期明显缩短（P<0.05，P<0.01）；穿越平台次数显著增加（P<0.01）；目标象限停留时间显著增加（P<0.01）；多奈哌齐组皮层海马神经元神经细胞数量增多，六味地黄丸高、低剂量组小鼠神经元数目及尼氏体明显增加且分布致密，细胞损伤程度较低；多奈哌齐组及六味地黄丸高、低剂量组皮层、海马LC3B阳性表达显著降低（P<0.01）；六味地黄丸高、低剂量组Beclin1表达显著降低（P<0.01），多奈哌齐组和六味地黄丸低剂量组ATG5表达显著降低（P<0.01），多奈哌齐组及六味地黄丸高、低剂量组皮层Bcl-2表达水平显著升高（P<0.01），Caspase-3表达水平显著降低（P<0.01），Caspase-9表达明显降低（P<0.05，P<0.01），p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a表达水平显著升高（P<0.01）。结论 六味地黄丸有效改善了快速老化SAMP8 AD模型小鼠的学习记忆能力，保护神经元，其机制可能与调控PI3K/Akt/FoxO3a信号通路，下调自噬相关因子ATG5、Beclin1和LC3B表达和减少凋亡有关。     

基于Pink1/Parkin通路探讨肝豆汤对Wilson病TX模型小鼠的线粒体自噬的影响

目的 观察肝豆汤（GDD）对Wilson病毒奶小鼠（TX）模型海马神经元细胞的线粒体自噬影响，并通过研究PTEN诱导激酶1（Pink1）/E3泛素连接酶（Parkin）介导的线粒体自噬通路，探讨肝豆汤对神经元细胞损伤的保护机制。方法 60只小鼠分为空白组、模型组、肝豆汤低、中、高剂量组（5.5、11、22 g·kg^-1）和青霉胺组（0.09 g·kg^-1），予以相应灌胃8周。采用Morris水迷宫、悬挂实验及爬杆实验检测行为学；苏木素-伊红（HE）染色结合透射电镜观测细胞凋亡、超微结构、细胞自噬及线粒体结构。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测超氧化物歧化酶（SOD）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）水平，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测神经元细胞Pink1、Parkin、自噬标记蛋白（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、p62的mRNA表达水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Pink1、Parkin、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白的表达。结果 与空白组比较，模型组小鼠定位巡航时间延长，穿越平台次数减少，悬挂得分降低，爬杆时间显著延长（P<0.01）；与模型组比较，肝豆汤中、高剂量及青霉胺组小鼠定位巡航时间缩短，穿越平台次数增多，悬挂得分上升，爬杆时间缩短（P<0.01）。与空白组比较，模型组神经元细胞损伤显著，自噬体增多；与模型组比较，肝豆汤中、高剂量组及青霉胺组神经元细胞损伤改善显著，自噬体减少。与空白组比较，模型组MDA、ROS水平升高，SOD水平下降（P<0.01）；与模型组比较，肝豆汤低、中、高剂量组MDA、ROS下降，SOD水平显著上升（P<0.01）。与空白组比较，模型组Pink1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin-1的蛋白及mRNA表达水平上升，p62表达水平下降（P<0.05）；与模型组比较，肝豆汤中、高剂量组Pink1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白及mRNA表达水平下降，p62明显上升（P<0.05，P<0.01）。结论 肝豆汤显著的抑制TX小鼠海马神经元线粒体过度自噬，保护神经元细胞的损伤，其机制考虑可能为通过调控Pink1/Parkin通路而实现。     

四逆散对抑郁大鼠BDNF/TrkB，5-HT/5-HT1AR及HPA轴的影响

目的 观察四逆散对抑郁大鼠脑神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶受体B（TrkB），5-羟色胺（5-HT）/5-HT1A受体（5-HT1AR）及下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴的影响，探讨四逆散基于BDNF/TrKB，5-HT/5-HT1AR及HPA轴的抗抑郁作用机制。方法 120只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、四逆散低、中、高剂量组和氟西汀组，每组20只。除正常组外，其余5组连续21 d采用孤养结合慢性温和不可预知性刺激法（CUMS）制备抑郁大鼠模型。四逆散低、中、高剂量组分别灌胃（ig）四逆散（1.25，2.5，5）g·kg^-1，氟西汀组ig盐酸氟西汀0.01 g·kg^-1，正常组和模型组ig等体积生理盐水，每日1次，持续干预21 d。干预期间，各造模组大鼠均继续给予刺激。通过糖水偏好和旷场实验评估CUMS模型大鼠抑郁状态；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血浆促肾上腺皮质激素释放激素（CRH），促肾上腺皮质激素（ACTH），皮质酮（CORT）及海马匀浆中BDNF，5-HT水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马TrKB，5-HT1AR，糖皮质激素受体（GR）和盐皮质激素受体（MR）mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马TrKB，5-HT1AR，GR，MR蛋白表达水平；苏木素-伊红（HE）染色观察海马组织形态学变化。结果 与正常组比较，模型组大鼠糖水偏好率显著下降（P<0.01），旷场实验中水平得分和垂直得分显著降低（P<0.01），血浆CRH，ACTH，CORT含量显著升高（P<0.01），海马BDNF，5-HT含量显著降低（P<0.01），海马TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.01），MR mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01），HE染色结果显示海马神经元结构损伤。与模型组比较，四逆散低、中、高剂量组和氟西汀组糖水偏好率显著升高（P<0.01），旷场实验中水平得分和垂直得分明显升高（P<0.05，P<0.01），血浆CRH，ACTH，CORT含量明显降低（P<0.05，P<0.01），海马BDNF，5-HT含量明显升高（P<0.05，P<0.01），海马TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01），MR mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01），HE染色结果显示海马神经元结构明显复原。结论 四逆散具有显著的抗抑郁作用，其机制可能与升高大鼠海马BDNF，5-HT含量，上调TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平，下调MR mRNA及蛋白表达水平，抑制HPA轴亢进，增强海马组织神经元的再生和修复相关。     

益心泰对慢性心力衰竭大鼠线粒体分裂蛋白Fis1、Mff的影响

目的 研究益心泰对慢性心力衰竭大鼠线粒体分裂蛋白的干预作用及其机制。方法 60只SD大鼠随机抽取10只作为假手术组，剩余50只采用结扎左冠状动脉前降支法制备心肌梗死后心力衰竭大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、益心泰低、中、高剂量组（1.4、2.8、5.6 g·kg^-1）、曲美他嗪组（10 mg·kg^-1），各给药组予相应剂量药物灌胃，模型组和假手术组给予等体积的生理盐水灌胃，连续给药28 d。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清氨基末端B型利钠肽（NT-pro BNP）、B型利钠肽（BNP）、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）含量；彩色多普勒超声成像仪检测心功能指标；苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色法观察心脏病理形态学改变，使用Image J软件计算胶原容积分数（CVF）；透射电镜观察心肌细胞超微结构变化；原位末端标记法（TUNEL）染色检测心肌组织细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织线粒体外膜线粒体分裂蛋白1（Fis1）、线粒体分裂因子（Mff）表达。结果 与假手术组比较，模型组血清NT-pro BNP、BNP含量显著升高（P<0.01），ATP含量显著降低（P<0.01），左心室射血分数（LVEF）及左心室短轴缩短率（LVFS）下降（P<0.01），左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）升高（P<0.01），心肌细胞排列紊乱、炎性细胞浸润、胶原纤维增多、CVF上升（P<0.01），心肌及线粒体出现损伤，心肌细胞凋亡指数升高（P<0.01），心肌组织线粒体分裂蛋白Fis1、Mff表达上调（P<0.01）；与模型组比较，益心泰低、中、高剂量组及曲美他嗪组血清NT-pro BNP、BNP含量降低（P<0.05），ATP含量升高（P<0.05），益心泰低、中、高剂量组及曲美他嗪组LVEF、LVFS升高（P<0.01），LVIDd、LVIDs均降低（P<0.01），各剂量益心泰治疗组及曲美他嗪组心肌炎症损伤减轻、纤维化得到改善，CVF降低（P<0.01），各剂量益心泰治疗组及曲美他嗪组心肌线粒体结构得到改善，各剂量益心泰治疗组及曲美他嗪组心肌细胞凋亡指数下降（P<0.01）；益心泰中、高剂量组及曲美他嗪组心肌组织Fis1、Mff蛋白表达下调（P<0.05）。结论 益心泰可改善线粒体结构、减轻心肌细胞凋亡、提升心功能，其作用机制可能与抑制心肌组织线粒体分裂蛋白Fis1、Mff表达有关。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马NLRP3通路的免疫调节作用

目的 探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体通路的作用及其机制。方法 60只雄性SD大鼠随机平均分为6组，分别为正常组、模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组，NLRP3抑制剂（MCC950）组。除正常组外，其余采用孤养联合慢性不可预见性应激（CUMS） 21 d，制备抑郁大鼠模型。柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低组分别灌胃13，6.5，3.25 g·kg^-1柴胡加龙骨牡蛎汤溶液，MCC950组腹腔注射1 mg·kg^-1，正常组、模型组灌胃等体积生理盐水，给药21 d期间持续追加造模。采用糖水偏好实验（SPT）和新奇摄食实验评价大鼠的抑郁行为，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测海马组织匀浆中白细胞介素-1β（IL-1β）和IL-18含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠海马中NLRP3，凋亡相关微粒蛋白（ASC）及半胱氨酸天门冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组糖水偏好率显著降低（P<0.01），新奇摄食时间显著延长（P<0.01）；海马组织中NLRP3，ASC，Caspase-1蛋白表达显著增强（P<0.01），IL-1β和IL-18水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，柴胡加龙骨牡蛎汤高、中组糖水偏好率显著提高（P<0.01），新奇摄食时间显著缩短（P<0.01）；海马中NLRP3，ASC，Caspase-1蛋白表达明显减弱（P<0.05，P<0.01），IL-1β和IL-18水平显著降低（P<0.01）。结论 柴胡加龙骨牡蛎汤可减轻CUMS诱导的抑郁行为，其机制可能与抑制NLRP3炎症小体通路有关。     

乌头赤石脂丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤自噬及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响

目的 探究乌头赤石脂丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）自噬及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）信号通路的影响及其作用机制。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物组（曲美他嗪组）、乌头赤石脂丸低、中、高剂量组，每组10只。正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃，曲美他嗪组给予5.4 mg·kg^-1剂量灌胃，中药乌头赤石脂丸低、中、高剂量组分别给予1.63、4.9、14.7 g·kg^-1剂量灌胃。除正常组外，其他组均采用冠状动脉左前降支结扎法制备模型。心电图检测ST段以评价造模情况；苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织损伤情况；比色法测定天冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酸激酶（CK）含量，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肌钙蛋白T（cTnT）、肌红蛋白（MYO）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测微管相关蛋白1轻链3（LC3）、自噬相关基因（Beclin-1）、PI3K、Akt、GSK-3β、磷酸化（p）-GSK-3β、p-Akt的蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组血清AST、CK、cTnT、MYO水平均明显升高（P<0.01），HE显示大鼠心肌细胞排列紊乱、细胞核散乱无序、心肌纤维扭曲断裂，LC3Ⅱ/Ⅰ及Beclin-1蛋白表达显著升高（P<0.01），PI3K、p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达均显著降低（P<0.01）。与模型组比较，乌头赤石脂丸低、中、高剂量组与曲美他嗪组血清中AST、CK、cTnT、MYO活性均显著降低（P<0.01）；乌头赤石脂丸低、中、高剂量组与曲美他嗪组心肌细胞结构完整、坏死程度减轻、肌纤维排列整齐；乌头赤石脂丸低、中、高剂量组LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低（P<0.05，P<0.01），乌头赤石脂丸低、中、高剂量组及曲美他嗪组Beclin-1表达显著降低（P<0.01），乌头赤石脂丸低、中、高剂量组及曲美他嗪组PI3K、p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达均显著增高（P<0.01）。与曲美他嗪组比较，乌头赤石脂丸低剂量组血清AST含量明显升高（P<0.05），乌头赤石脂丸高剂量组血清AST含量显著降低（P<0.01），乌头赤石脂丸中剂量组Beclin-1蛋白表达显著降低（P<0.01），乌头赤石脂丸中、高剂量组LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），乌头赤石脂丸低、中、高剂量组PI3K蛋白表达显著降低（P<0.01），乌头赤石脂丸低、中剂量组p-Akt蛋白表达显著升高（P<0.01），乌头赤石脂丸中剂量组p-GSK-3β蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 该研究表明，不同剂量的乌头赤石脂丸皆可干预MIRI，且低、中剂量效果低于高剂量组，高剂量效果最佳。乌头赤石脂丸可以降低心肌损伤标志物AST、CK、cTnT、MYO的水平，减轻心肌组织病理性损伤，下调Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达，上调PI3K、p-Akt及p-GSK-3β的表达，可能通过抑制过度自噬的发生，调控PI3K/Akt/GSK-3β信号通路，对MIRI大鼠起到保护作用。     

双氢青蒿素对HepG2细胞氧化损伤和能量代谢的影响及其与索拉非尼的协同作用

目的 探讨双氢青蒿素（DHA）对HepG2细胞的增殖抑制作用，通过细胞氧化损伤及能量代谢交互通路的影响阐明其作用机制；并通过与索拉非尼（Sora）联用，探讨其联合用药的可能性。方法 选用HepG2细胞和SW480细胞，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法分别得到DHA与Sora的半数抑制浓度（IC₅₀）；Chou-Talalay法分析DHA与Sora联用的联用指数（CI）。选用HepG2细胞，分为正常组，DHA单用组（10 μmol·L^-1），Sora单用组（5 μmol·L^-1）和DHA与Sora联用组（DHA 10 μmol·L^-1，Sora 5 μmol·L^-1），药物孵育8~12 h后，糖酵解速率试剂盒检测细胞糖酵解功能，线粒体压力试剂盒检测线粒体氧化磷酸化功能；DCFH-DA活性氧（ROS）探针检测细胞内ROS水平变化；脂质过氧化物丙二醛（MDA）检测试剂盒检测细胞内MDA水平变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞内血红素氧合酶1（HO-1）和谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基（GCLC）蛋白的水平变化。结果 与正常组比较，DHA单用组能够显著抑制HepG2细胞的线粒体氧化磷酸化ATP合成能力和糖酵解速率（P<0.01），升高细胞内ROS和MDA水平（P<0.05），降低HO-1，GCLC水平（P<0.05）；DHA与Sora联用在HepG2和SW480细胞中均具有较好的协同抑制细胞增殖作用，其CI值<0.9；与DHA单用组比较，DHA与Sora联用组对HepG2细胞的线粒体氧化磷酸化ATP合成和糖酵解的抑制程度均显著增强（P<0.01）；细胞内的ROS和MDA水平均显著升高（P<0.01）；细胞内抗氧化相关蛋白HO-1，GCLC水平均显著降低（P<0.01）。结论 DHA可能通过降低HepG2细胞内的HO-1，GCLC水平，升高ROS使MDA水平增加，并造成细胞线粒体氧化损伤，抑制细胞糖酵解能力以及氧化磷酸化能力，从而抑制HepG2细胞增殖；DHA与Sora联用具有协同抑制HepG2细胞增殖的作用，其机制可能与协同造成细胞氧化损伤从而影响线粒体电子传递链，抑制细胞能量代谢有关。