丹酚酸B对小鼠脑出血的神经保护作用研究

目的：探讨丹酚酸B(SalB)对小鼠脑出血（ICH）的神经保护作用及机制。方法：C57BL/6J雄性小鼠108只随机分为Sham组，ICH+Vehicle组，ICH+SalB组，每组36只。Ⅶ型胶原酶制备ICH模型，ICH+SalB组术后2 h尾静脉注射SalB 30 mg/kg,Sham组和ICH+Vehicle组尾静脉注射等量生理盐水，连续3 d。术后第3天，采用mNSS和转角实验观察行为学指标；HE染色观察脑组织损伤情况；脑含水量检测评估脑组织水肿；伊文思蓝（EB）外渗试验评估血脑屏障渗透性；Western blot检测ZO-1和Occludin蛋白表达水平评估血脑屏障完整性，检测MMP-9和IL-1β蛋白表达水平评估炎症因子水平；TUNEL染色评估凋亡细胞数量；Iba1和MPO免疫荧光染色评估小胶质细胞活化和中性粒细胞渗出情况。结果：mNSS评分结果显示ICH+SalB组神经功能缺损低于ICH+Vehicle组（P<0.05）；转角实验结果显示ICH+SalB组右转次数低于ICH+Vehicle组（P<0.05）;HE染色结果显示ICH+SalB组脑组织损伤、血肿面...     

中性粒细胞胞外诱捕网在小鼠静脉血栓栓塞形成中的作用及机制

目的探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)与静脉血栓栓塞(VTE)的关系及糖皮质激素(GC)的调节作用。方法将40只KM小鼠随机分为对照组(n=20)和实验组(n=20)。实验组小鼠通过神经血管钳钳夹联合结扎下腔静脉建立小鼠VTE模型,对照组采用假手术法处理。术后7 d,处死小鼠,取肺组织进行病理切片观察,取眼眶静脉血,石蜡切片HE染色检测肺组织病理变化;采用免疫荧光染色法观察肺组织瓜氨酸化的组蛋白H3(Cit H3)与细胞核共定位情况。检测血浆中游离DNA含量,及小鼠外周血髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)、重组人B细胞活化因子(BAFF)的含量。分离并观察外周血中性粒细胞集落形成能力及对体外NETs形成的影响。检测细胞因子白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)及TNF-α的表达及分泌变化,检测细胞活性氧产生情况、脂质过氧化产物产生情况及细胞内NF-κB信号转导激活改变。结果VTE术后,对照组小鼠的肺组织无明显的病理学变化,实验组小鼠的肺组织改变明显。实验组的血浆游离DNA水平较对照组水平明显升高,ELISA检测MPO可见实验组的血浆MPO水平较对照组水平明显升高。免疫荧光标记Cit H3发现对照组小鼠中,Cit H3的阳性信号较少,而在VTE造模实验组的小鼠肺组织中,Cit H3的阳性信号显著增多。实验组的血清TNF-α水平及IL-1β水平较对照组水平明显升高,但是IFN-γ、IL-4和BAFF无显著差异。结论中性粒细胞胞外诱捕网与血栓形成密切相关,其可激活巨噬细胞促进血栓形成。     

血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5在创伤性骨关节炎早期软骨细胞凋亡中作用机制

目的 探究血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5(ADAMTS-5)基因对小鼠创伤性骨关节炎(PTOA)早期软骨细胞凋亡的影响及其具体的作用机制.方法 分别随机选择3只8周龄转基因雌性C57BL/6小鼠(实验组),3只8周龄普通雌性C57BL/6小鼠(对照组),构建小鼠双侧膝关节骨折PTOA模型,术后4周取样.采用番红O染色、Mankin评分评估软骨损伤情况,通过TUNEL染色、免疫荧光染色检测软骨细胞凋亡情况,以明确ADAMTS-5对PTOA早期软骨细胞凋亡的影响.此外,利用ADAMTS-5体外转染ATDC5小鼠成软骨细胞系,通过干扰及过表达慢病毒转染方法构建过表达稳转株组、过表达对照组、干扰稳转株组、干扰对照组.采用MTT法检测软骨细胞增殖情况,通过免疫荧光染色观察ADAMTS-5、Caspase-9蛋白的表达情况,以明确ADAMTS-5影响软骨细胞凋亡的分子机制.结果 番红O染色及Mankin评分显示,相较于对照组,实验组小鼠在骨折部位的软骨损伤较轻;TUNEL染色显示,相较于对照组,实验组绿色荧光染色更弱、数量更少;免疫荧光染色显示,相较于对照组,实验组Caspase蛋白红染更弱、数量更少.MTT法显示,第72 h时,与干扰稳转株组及过表达稳转株组相比,干扰对照组及过表达对照组光密度(OD)值显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色显示,过表达稳转株组与干扰稳转株组的ADAMTS-5及Caspase-9蛋白表达明显高于过表达对照组及干扰对照组,即随着ADAMTS-5基因的表达,Caspase-9蛋白的含量逐渐增加,最终促使软骨细胞发生凋亡.结论 ADAMTS-5对小鼠PTOA早期软骨细胞凋亡具有促进作用,其可通过促进Caspase-9蛋白的生成加速软骨细胞发生凋亡.     

细胞间粘附分子-1表达水平对心肌缺血再灌注损伤的影响及核转录机制的实验研究

目的:研究心肌缺血-再灌注时心肌组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达对中性粒细胞浸润的影响及与核因子-κB活性变化的关系.方法:将新西兰兔152只分为缺血-再灌注组(IR)、吡咯基二硫氨基甲酸酯(PDTC)预处理组(IR+PDTC)和假手术对照组(Sham).每组又分缺血前(0),再灌注后30、60、90、120、240、360 min时相点.用免疫印迹法(western blot)检测心肌组织ICAM-1的表达,凝胶电泳迁移率分析检测心肌组织NF-κB的活性,髓过氧化酶法(MPO)定量测定心肌组织中浸润的中性粒细胞.结果:在心肌缺血-再灌注后早期心肌组织的NF-κB 活性即明显增高并保持在高水平状态;心肌ICAM-1的表达在心肌再灌注120 min开始增高,并与中性粒细胞浸润升高有相关性;而PDTC能抑制NF-κB的活化、心肌ICAM-1的表达及中性粒细胞浸润.结论:心肌缺血-再灌注时心肌组织NF-κB被活化,启动ICAM-1的表达而参与缺血-再灌注损伤的发生过程.     

细胞间粘附分子—l表达水平对心肌缺血再灌注损伤的影响及核转录机制的实验研究

目的：研究心肌缺血-再灌注时心肌组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达对中性粒细胞浸润的影响及与核因子-κB活性交化的关系。方法：将新西兰免152只分为缺血-再灌注组(IR)、吡咯基二硫氨基甲酸酯(PDTC)预处理组(IR PDTC)和假手术对照组(Sham)。每组又分块血前(0)，再灌注后30、60、90、120、240、360min时相点。用免疫印迹法(western blot)检测心肌组织ICAM-1的表达，凝肢电泳迁移率分析检测心肌组织NF-κB的活性，髓过氧化酶法(MPO)定量测定心肌组织中浸润的中性粒细胞。结果：在心肌块血-再灌注后早期心肌组织的NF-κB活性即明显增高并保持在高水平状态；心肌ICAM-1的表达在心肌再灌注120min开始增高、并与中性粒细胞浸润升高有相关性；而PDTC能抑制NF-κB的活化、心肌ICAM-1的表达及中性粒细胞浸润。结论：心肌缺血-再灌注时心肌组织NF-κB被活化，启动ICAM-1的表达而参与缺血-再灌注损伤的发生过程。     

B 和 T 淋巴细胞衰减因子激活在休克／脓毒症诱导的急性肺损伤中的作用

目的：探讨B和T淋巴细胞衰减因子（ B and T lymphocyte attenuator , BTLA）激活在休克／脓毒症诱导的急性肺损伤（ ALI）中的作用。方法24只雄性C57BL／6小鼠随机平均分为三组：对照组、ALI模型组和6A6（BTLA激动性抗体）干预组。采用Western blot 观察对照组和ALI模型组肺组织BTLA蛋白的表达变化,并测定和比较三组小鼠支气管肺泡灌洗液蛋白浓度, ELISA方法测定肺组织促炎症细胞因子、趋化因子水平及肺组织髓过氧化物酶活性,TUNEL染色评估肺组织细胞凋亡情况;肺组织切片HE染色了解肺组织病理学改变。另外45只小鼠随机平均分为如上三组观察10 d生存率。结果 BTLA在ALI模型组肺组织中表达较对照组明显升高。与ALI模型组比较,6A6干预组小鼠支气管肺泡灌洗液蛋白浓度升高,肺部TNF－α和MIP－2、MCP－1水平升高,肺组织MPO活性增加（P均＜0.05）。 TUNEL染色显示,6A6干预组小鼠肺细胞凋亡较ALI模型组增加。 HE染色显示,6A6干预组较ALI模型组小鼠肺组织病理学形态损伤加重。6A6干预组较ALI模型组小鼠死亡率显著升高。结论 BTLA在休克／脓毒症诱导的ALI肺组织中表达升高。 BTLA激活使脓毒症诱导的ALI小鼠肺通透性增高,肺部炎症因子和趋化因子水平升高,肺部中性粒细胞募集增加,肺细胞凋亡增加,肺组织病理学形态损伤加重,导致ALI小鼠死亡率增加。     

白藜芦醇抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B /哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的探讨白藜芦醇抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对大鼠肾缺血再灌注损伤(IRI)的作用及机制。方法将30只6～8周龄雄性SD大鼠采用随机数表法随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、白藜芦醇组, 每组10只。建模成功后, 检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮的水平, 观察各组大鼠的肾组织病理学, 采用Western blot检测各组肾组织PI3K、AKT、mTOR及其磷酸化的表达水平, 以及LC3A/B的表达水平。结果 Model组的血清肌酐、尿素氮水平均高于Sham组和白藜芦醇组, 差异有统计学意义(P<0.001)。与Sham组比较, Model组可见肾外髓质可见肾小管上皮细胞水肿、坏死, 炎症细胞浸润, 白藜芦醇组大鼠肾损伤较Model组减轻。Model组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平高于Sham组, 差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平低于Model组, 差异有统计学意义(P<0.05)。Model组LC3A/B表达低于S...     

特异性敲除Apelin基因对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的影响

目的观察多肽Apelin基因缺失对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的影响,探讨在梗阻性肾病肾纤维化形成中Apelin的作用和可能机制。方法利用CRISPR/Cas9技术构建Apelin基因敲除小鼠(KO)共20只,同时选取野生型小鼠(WT)20只,均为8周龄雄性C57BL/6J种系,采用随机数字表法分为:KO+Sham组、KO+UUO组、WT+Sham组、WT+UUO组,每组各10只。分别对小鼠行单侧输尿管结扎(UUO)或假手术(Sham)。术后2周将小鼠处死,取血浆和手术侧肾脏进行检测。采用Masson染色观察肾脏纤维化程度,免疫组织化学染色检测肾脏基质成分纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-I)的分布和表达情况。采用Western blotting法检测肾小管上皮标志物E-钙黏素(E-cadherin)、间充质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),以及致纤维化细胞因子--转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体TGFβ-R1的蛋白表达量。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血浆肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平。结果KO+UUO组小鼠肾脏可见明显的肾小管萎缩和肾间质纤维化,基质成分FN和Col-I表达量显著升高。WT+UUO组小鼠肾脏的纤维化程度和基质的表达量均低于KO+UUO组,差异具有统计学意义(P<0.05)。KO+Sham组和WT+Sham组肾脏无明显的纤维化改变和基质的沉积。KO+UUO组小鼠,可见显著的肾小管上皮-间充质转分化(EMT)表现,E-cadherin减少,α-SMA增多,TGF-β1和TGFβ-R1受体的表达量也明显升高。与KO+UUO组相比,WT+UUO组肾小管上皮E-cadherin的表达较多,α-SMA、TGF-β1和TGFβ-R1受体的表达均较低,差异具有统计学意义(P<0.05)。而WT+Sham组和KO+Sham组小鼠上述标志物的表达趋于正常水平。KO+UUO组小鼠血浆Cr、BUN的水平最高,WT+UUO组小鼠上述标志物的水平均低于KO+UUO组,差异具有统计学意义(P<0.05)。KO+Sham组小鼠血浆Cr、BUN与WT+Sham组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Apelin在正常状态下对肾功能无明显影响,但在输尿管梗阻状态下其基因缺失可能是引起肾间质纤维化加重的因素。     

NADPH氧化酶在败血症心功能损害中的作用及机制

目的探讨NADPH氧化酶在败血症心功能损害中的作用及机制。方法将C57/BL6小鼠随机分为对照组(Control)、败血症组(Sepsis)、治疗组(DPI),每组8只。建立败血症模型,给予NADPH氧化酶抑制剂DPI,采用Langendorff离体心脏灌流,测定心肌收缩力(dF/dt max)、心率(HR)和心脏做功(HW),观察小鼠心功能变化;并进一步检测小鼠心肌组织中肿瘤坏死因子TNF-α及中性粒细胞标志物髓过氧化物酶(MPO)水平,观察小鼠心肌炎症因子表达及炎症浸润情况。结果败血症组小鼠dF/dt max明显低于对照组(P0.05);而给予NAD-PH氧化酶抑制剂治疗的败血症小鼠dF/dt max虽低于对照组,但比败血症组有明显改善(P0.05);TNF-α检测结果发现,败血症组与治疗组中TNF-α水平均高于对照组(P0.05);治疗组MPO水平虽高于对照组,但较败血症组有明显改善(P0.05)。结论败血症可诱导心肌组织产生并释放TNF-α,从而激活NADPH氧化酶,并通过活性氧族(ROS)等激活一系列信号通路,诱导炎性细胞的浸润及心肌细胞的凋亡、坏死,最终导致心功能下降。     

抗CD14单克隆抗体对脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞内NF-κB(p65)影响的研究

目的探讨抗CD14单克隆抗体在大鼠脓毒症急性肺损伤中对肺泡巨噬细胞内NF-κB(p65)的影响。方法 15只雄性SD大鼠,体重(150±20)g,随机分为3组,Sham组、CLP组和Anti-CD14组,每组5只,选用经典的盲肠结扎穿孔(CLP)法制作急性肺损伤动物模型。造模成功后6 h,应用ELISA检测血浆MIP-2、IL-10浓度,左肺采用Western blot测定肺内NF-κB(p65)蛋白的表达水平,取右肺下叶行HE染色、切片后在光镜下观察肺脏病理形态变化。以Sham组作为对照组。结果 ELISA结果显示:CLP组的血浆MIP-2浓度显著高于Sham组和Anti-CD14组,Anti-CD14组的血浆MIP-2浓度低于CLP组,有统计学差异(P<0.05);三组的血浆IL-10浓度比较无统计学差异(P>0.05);Western blot检测显示:CLP组和Anti-CD14组的NF-κB(p65)表达量高于Sham组(P<0.05),Anti-CD14组的NF-κB(p65)表达量低于CLP组(P<0.05)。HE染色显示:CLP组和Anti-CD14组肺内均出现炎症细胞浸润、肺间质增厚、出血,Anti-CD14组肺组织炎性表现较CLP组显著减轻。结论抗CD14单克隆抗体能同脂多糖竞争性地结合肺泡巨噬细胞膜表面受体CD14分子,阻止肺内NF-κB(p65)的核内移位,减少致炎因子生成和释放,抑制炎症细胞浸润,起到肺保护作用。     

FLT3信号通路介导常规树突状细胞启动和调节急性肺损伤早期炎症反应的机制研究

目的 明确FLT3信号通路依赖的肺常规树突状细胞(cDCs)对急性肺损伤(ALI)早期炎症反应和肺损伤的影响及其调控机制.方法 SPF级C57BL/6小鼠30只按随机数字表法分为正常对照组、ALI组、FLT3L预处理组、来他替尼预处理组和DMSO对照组,分别给予FLT3L、来他替尼预处理5d后采用LPS气道内滴入复制ALI模型,6h及24h后处死小鼠留取肺组织,采用流式细胞术检测CD11c+ CD11b+双阳性细胞比例评价肺cDCs的数量,检测肺cDCs的MHCⅡ及CD80表达比例评价肺cDCs的成熟程度;ELISA检测IL-6、TNF-α评价肺部炎症反应的强度;计算肺湿质量/体质量比(LWW/BW)评价肺水肿程度;肺组织HE染色行组织病理学检查评价肺损伤程度;比色法检测肺MPO活性评价中性粒细胞的浸润;qRT-PCR检测转录因子T-bet及GATA-3mRNA的表达比例评价辅助性T细胞Th1/Th2亚群漂移;ELISA检测IFN-γ及IL-4表达评价Th1/Th2细胞因子的平衡.结果 肺cDCs聚集及成熟程度高峰出现于ALI成模后6h(P＜0.05).FLT3L预处理显著增加肺cDCs的聚集和成熟程度(P＜0.05),上调肺部炎症反应并加重肺损伤,同时肺MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均显著上升(P＜0.05).来他替尼预处理显著抑制肺cDCs的聚集和分化成熟(P＜0.05),下调肺部炎症反应并减轻肺损伤,同时肺MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均显著下降(P＜0.05).结论 肺cDCs可通过FLT3信号通路调节中性粒细胞的浸润和Th1/Th2免疫反应的平衡,进而启动和调节ALI早期炎症反应和肺损伤.     

调控骨桥蛋白介导的中性粒细胞浸润减轻脓毒症小鼠肺损伤的研究

目的探讨骨桥蛋白（OPN）中和抗体处理对脓毒症小鼠生存情况的影响及其加剧急性肺损伤的机制。 方法将80只雄性小鼠分成假手术组（Sham组）、脓毒症组[盲肠结扎穿孔术（CLP）组]、阴性对照组[CLP+免疫球蛋白G（IgG）组]及OPN中和抗体组（CLP+ OPN Ab组）,每组各20只。采用CLP制备脓毒症小鼠模型,Sham组除不结扎和穿刺盲肠外,其余手术步骤相同。建模成功即刻,CLP+ IgG组及CLP+ OPN Ab组小鼠分别经颈内静脉注射IgG和OPN单抗,Sham组和CLP组注射等量磷酸盐缓冲液。每组10只用于观察小鼠活动状态及术后7 d存活情况;另外10只分别于术后24 h采集眼眶血及收集肺组织用于OPN及髓过氧化物酶（MPO）检测。比较4组小鼠血清、肺组织OPN信使RNA（mRNA）水平和肺组织中OPN蛋白水平,外周血丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、白细胞介素6（IL-6）、趋化因子配体2（CXCL-2）和MPO活性。 结果术后第7天,Sham组小鼠10只均存活;CLP组及CLP+ IgG组分别有2只存活,而CLP+ OPN Ab组仍有4只小鼠存活。4组小鼠7 d存活情况比较,差异有统计学意义（χ² = 17.374,P = 0.001）。且与Sham组相比,CLP组、CLP+ IgG组和CLP+ OPN Ab组小鼠存活情况均显著降低（P均< 0.05）;而CLP组、CLP+ IgG组和CLP+ OPN Ab组小鼠存活情况比较,差异均无统计学意义（P均> 0.05）。CLP术后24 h,4组小鼠血清、肺组织OPN mRNA水平和肺组织中OPN蛋白水平,外周血中ALT、AST、LDH、IL-6、CXCL-2、MPO活性比较,差异均有统计学意义（F = 84.227、51.929、41.563、19.558、55.416、75.968、32.824、176.945、119.046,P均< 0.05）。进一步两两比较发现,CLP组、CLP+ IgG组和CLP+ OPN Ab组小鼠血清、肺组织OPN mRNA水平和肺组织中OPN蛋白水平,外周血中ALT、AST、LDH、IL-6、CXCL-2、MPO活性均较Sham组显著增高,且CLP组和CLP+ IgG组更高（P均< 0.05）。 结论OPN单抗中和OPN可调控脓毒症小鼠肺内中性粒细胞浸润,减轻急性损伤,提示OPN可作为脓毒症急性肺损伤的治疗靶点。     

C5a反义肽对脓毒症小鼠心肌中性粒细胞浸润和P－选择素表达的影响

目的：探讨C5a反义肽对脓毒症小鼠心肌中性粒细胞（PMN）浸润的影响。方法盲肠结扎穿孔法（CLP）制备小鼠脓毒症模型,随机分为健康对照组、假手术组、脓毒症组和C5a反义肽治疗组四组。分别在2、4、8、12 h时间点观察心肌组织的病理改变,测心肌组织髓过氧化物酶（ MPO）活性,采用实时定量PCR和免疫印迹法分别检测心肌组织P－选择素mRNA和蛋白表达水平。结果 CLP造模4 h后,脓毒症组心肌病理可见心肌纤维结构疏松,局灶性肌溶解,胞质淡染,间质水肿,伴充血,细胞核肿胀等改变,C5a反义肽治疗组病变程度均较造模组轻;脓毒症组和C5a反义肽治疗组心肌组织MPO活性较对照组明显增高（P＜0．05）,C5a反义肽治疗组低于脓毒症组（P＜0.05）;P－选择素mRNA和蛋白表达量均明显增高（P＜0．05）,且随时间的增加而明显增加（P＜0．05）。与脓毒症组比较,C5a反义肽治疗组各时间点P－选择素mRNA和蛋白表达量明显下降（ P＜0．05）。结论 C5a反义肽可减少脓毒症小鼠心肌组织PMN浸润,C5a反义肽可能是通过减少P－选择素表达来减少PMN浸润的。     

脓毒症急性肺损伤小鼠肠肺菌群结构变化分析

目的探讨脓毒症急性肺损伤小鼠血液、肺组织、粪便肠道微生态结构变化及关联。方法将12只健康雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为盲肠结扎穿孔术(CLP)组和假手术(Sham)组, 每组6只。CLP组采用盲肠结扎穿刺法(cecal ligation punctual, CLP)制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型;Sham组只开腹但不进行盲肠结扎穿孔。术后24 h取各组小鼠眼球血、肺组织、粪便。HE染色观察肺组织形态变化, 16s核糖体RNA测序分析脓毒症小鼠各部位菌群微生态的结构变化并找出其中关联。结果 (1)HE染色显示, CLP组小鼠肺泡腔有渗出、肺组织结构紊乱、伴随大量的炎性细胞浸润, 肺组织病理评分较Sham组增高, 差异有统计学意义(P<0.01)。(2)α多样性分析显示, Sham组与CLP组血液及粪便样本比较无统计学意义, 肺组织样本中Ace指数、Chao指数、Simpson指数具有统计学意义(P<0.05)。(3)β多样性分析:Sham组与CLP组血液及粪便样本比较, 组间差异均大于组内差异, 分析Bray-curtis、Weighted、Unweighted指数...     

辛伐他汀纳米粒通过调节诱导型一氧化氮合酶/内皮型一氧化氮合酶系统对小鼠脓毒症相关急性肺损伤的影响

目的探讨辛伐他汀纳米粒对脓毒症相关急性肺损伤小鼠肺组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）/内皮型一氧化氮合酶（eNOS）平衡的调节以及对脓毒症小鼠预后的影响。 方法将90只C57 / BL6小鼠分为假手术组、脓毒症组、灌胃组、静脉制剂组及纳米粒组,每组各18只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）建立脓毒症小鼠模型;灌胃组小鼠通过灌胃针,给予辛伐他汀口服制剂灌胃治疗后进行CLP术;静脉制剂组及纳米粒制剂组小鼠CLP术后,立即分别通过尾静脉注射预配置好的辛伐他汀静脉制剂和辛伐他汀纳米粒制剂。其中每组12只小鼠用于7 d生存评估,另外6只用于24 h时间点标本采集。每24小时观察小鼠的生存情况,然后记算各组小鼠每日生存情况。采用苏木素-伊红（HE）染色观察5组小鼠病理变化并计算肺损伤病理评分,免疫组织化学法检测5组小鼠肺组织iNOS、eNOS表达水平。 结果Kaplan-Meier生存曲线结果显示,5组小鼠7 d生存情况比较,差异有统计学意义（χ² = 3.780,P < 0.001）。进一步两两比较发现,脓毒症组及灌胃组小鼠的7 d生存情况均较假手术组明显下降（P均< 0.001）,而纳米粒组小鼠的7 d生存情况显著优于脓毒症组（P = 0.001）。HE染色结果显示,假手术组小鼠肺组织未见明显病理征象;脓毒症组小鼠肺组织弥漫性中性粒细胞浸润、肺泡腔变小、肺泡间中隔增厚、肺间质弥漫性水肿、细胞排列紊乱、部分肺组织完整性遭破坏;灌胃组小鼠病理所示与脓毒症组相似;静脉制剂组及纳米粒组小鼠中性粒细胞渗出均较脓毒症组损伤减少、肺泡完整性较好、损伤程度较轻。5组小鼠肺损伤病理评分、iNOS及eNOS表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 889.200、9.633、6.918,P均< 0.05）。进一步两两比较发现,脓毒症组小鼠的肺损伤病理评分、iNOS及eNOS表达水平与假手术组比较,差异均有统计学意义（P均< 0.05）;静脉制剂组及纳米粒组小鼠病理评分、iNOS及eNOS表达水平与脓毒症组比较,差异均有统计学意义（P均< 0.05）,且纳米粒组小鼠的肺损伤病理评分较静脉制剂组显著降低（P < 0.05）。 结论不同的辛伐他汀制剂具有不同的效应,其中纳米粒制剂对于脓毒症相关的肺损伤最具保护价值,建立eNOS与iNOS之间的平衡,可以成为具有保护效应的重要处理位点。     

骨痛灵方通过抑制整合素αvβ3通路缓解肺癌骨转移癌性疼痛

目的：探讨骨痛灵(Gutongling, GTL)方治疗肺癌骨转移疼痛的潜在作用机制。方法：将50只C57BL/6雄性小鼠随机分为5组(n=10)：假手术组（Sham组）、模型组（Model组）、唑来膦酸组（ZA组）、骨痛灵组（GTL组）、骨痛灵+唑来膦酸组（GTL+ZA组）。除Sham组给予接种PBS溶液外,其余各组均予鼠源肺腺癌细胞Lewis-LUC悬液造模。采用von Frey纤维丝测痛仪检测小鼠足底的机械痛阈值,共聚焦显微镜观察破骨细胞伪足小体F-actin环,实时荧光定量PCR法与免疫组化法检测各组小鼠左后肢胫骨骨组织中整合素αvβ3、富含脯氨酸的酪氨酸激酶2 (PyK2)、酪氨酸激酶Src、Casitas B细胞淋巴瘤家族蛋白(Cb1) mRNA及蛋白表达水平。结果：与Sham组比较,Model组小鼠造模后机械痛阈值下降(P <0.05)。造模后第14天：各给药干预组机械痛阈值较Model组升高(P <0.05);ZA组与GTL组机械痛阈值相当;造模后第21天：GTL+ZA组机械痛阈值较各给药组明显升高(P <0.05)。与Sham组比较,Model组F-...     

黄芪总皂苷调节Adora2b/IL-10信号通路抑制肝纤维化的实验研究

目的 探究黄芪总皂苷调节腺苷A2b受体/白介素-10 (Adora2b/IL-10)信号通路阻止肝纤维化进展的作用和机制。方法 通过CCl4低剂量反复染毒的方法制备肝纤维化小鼠模型,给予黄芪总皂苷干预,并设立索拉菲尼阳性对照组,检测血清肝功能,HE染色观察肝组织炎症情况,Masson染色观察肝纤维化进展情况,免疫组化观察Coll蛋白表达情况,Western blot检测Adora2b、IL-10蛋白表达情况。结果 模型组血清谷丙转氨酶(ALT)活性、总胆红素(TBiL)水平较正常组显著上升(P<0.01),黄芪总皂苷干预后能显著降低模型组ALT、TBiL水平(P<0.01)。HE染色和Masson染色显示,正常组小鼠肝组织无炎症和纤维化改变;模型组肝组织炎症细胞浸润明显,同时肝组织出现明显的纤维间隔;黄芪总皂苷干预后能显著改善组织炎症和肝纤维化进展。免疫组化结果显示,模型组小鼠肝组织的Coll蛋白表达较正常组显著增加(P<0.01),黄芪总皂苷干预后均能显著逆转这一变化。Wesemt Blot结果显示,模型组小鼠肝组织Adora2b、IL-10蛋白表达较正常组显著降低...     

雾化吸入细辛脑对哮喘小鼠中白细胞介素25水平的影响

目的观察细辛脑对哮喘小鼠血清、肺泡灌洗液和肺组织中IL-25浓度的影响,初步探讨细辛脑在哮喘小鼠治疗中的作用。方法取40只6~8周龄的雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组、细辛脑组、地塞米松组,每组10只,采用鸡卵白蛋白(chicken ovalbumin)致敏和激发小鼠建立哮喘模型,对照组均以生理盐水代替;HE染色观察小鼠肺组织病理变化;光学显微镜下计数小鼠外周血中嗜酸粒细胞及白细胞总数;用酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-25(IL-25)浓度;用免疫荧光实时定量方法(RT-PCR)检测小鼠肺组织中IL-25 m RNA的表达水平。结果 HE染色可见哮喘组小鼠肺组织炎性浸润,细辛脑及地塞米松组炎性浸润程度较哮喘组轻;哮喘组中嗜酸粒细胞总数高于对照组(P<0.05),而细辛脑组及地塞米松组中嗜酸粒细胞总数均低于哮喘组,且具有统计学差异(P<0.05);哮喘组血清及BALF中IL-25的浓度较对照明显增高(P<0.05),细辛脑组及地塞米松组中IL-25的浓度比哮喘组明显降低(P<0.05);哮喘组小鼠肺组织IL-25 m RNA相对表达量明显高于对照组(P<0.05),而细辛脑组及地塞米松组均低于哮喘组(P<0.05)。结论细辛脑能减少嗜酸粒细胞及IL-25的生成,从而抑制气道炎症,减轻气道炎性反应,对治疗哮喘有一定的作用。     

脂氧素A4对内毒素性肺损伤小鼠的保护作用

目的探讨脂氧素A4对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的影响。方法36只雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组、脂氧素A4组、ZnPP组、内毒素组、脂氧素A4治疗组(LXA4 LPS)和ZnPP 脂氧素A4治疗组(ZnPP LXA4 LPS),每组6只。雾化吸入脂多糖8h后,测定肺泡灌洗液白细胞计数、中性粒细胞计数和TNF-α含量。测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、HO-1的蛋白表达和活性。结果与LPS组比较,脂氧素A4治疗组肺组织中性粒细胞浸润减少,MPO活性、TNF-α浓度均降低(P<0·01),肺组织损伤减轻,而HO-1的蛋白表达和活性明显升高,HO-1抑制剂ZnPP减弱脂氧素A4的保护作用。结论脂氧素A4能减轻内毒素诱导的急性肺损伤。     

NLRP3抑制剂CY-09对小鼠肾缺血再灌注损伤后远隔器官肝脏的保护作用

目的 探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)特异性抑制剂(CY-09)的预处理对小鼠肾缺血再灌注(IR)损伤后远隔器官肝脏功能的保护作用。方法 将32只Bal/C小鼠随机平均分成四组，分别为假手术组(Sham组)、Sham+CY-09预处理组(Sham+CY-09组)、肾缺血再灌注组(IR组)、IR+CY-09组，每组8只。Sham+CY-09组和IR+CY-09组于术前30 min腹腔注射CY-09 50μg/kg, Sham组和IR组注射等体积生理盐水。所有组均切除小鼠右肾，Sham组和Sham+CY-09组充分暴露左肾但不夹闭，IR组和IR+CY-09组暴露左肾并夹闭45 min,建立左肾IR损伤模型并再灌注24 h。检测血肌酐(sCr)、谷丙转氨酶(ALT)浓度变化，采用苏木精-伊红(HE)染色观察肝、肾组织病理学改变，采用细胞凋亡(Tunel)染色检测肝脏组织凋亡，采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白，酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-1β(IL...