miRNA-141通过调节TLR4信号通路抑制大鼠血栓形成

目的 研究微小RNA(miR)-141对血栓模型大鼠血栓形成、血小板聚集及血浆中一氧化氮(NO)、环磷酸鸟苷(cGMP)和前列环素(PGI2)的影响.方法 90只SD雄性大鼠随机进行分组,10只为正常对照组;模型组使用5 g/L的CMC-Na建立大鼠动静脉旁路血栓模型(20只);治疗组在CMC-Na基础上分别静脉注射1...     

miR-34a靶向调控SOX7表达抑制垂体腺瘤细胞增殖

探讨miR-34a通过靶向调控SOX7表达对垂体腺瘤细胞增殖的影响。结果显示,miR-34a mimics转染组和siRNA-SOX7组细胞活力、S期、G2期分别低于NC-miR-34a转染组和NC-SOX7转染组,细胞凋亡率和G1期分别高于NC-miR-34a转染组和NC-SOX7转染组。miR-34a mimics转染组SOX7 mRNA、SOX7蛋白的相对表达量低于NC-miR-34a转染组。结果表明,miR-34a可以通过靶向抑制SOX7表达抑制垂体腺瘤细胞增殖。     

miRNA-24靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用

目的 探讨miRNA-24(miR-24)靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用。方法 体外培养乳腺癌(BC)细胞系MCF-7、MDA-MB-231细胞以及非肿瘤性人乳房上皮细胞系H184B5F5/M10细胞,采用qPCR方法检测各细胞中miR-24的表达水平。将MCF-7细胞分为正常组、miRNA阴性对照组(miR-24-NC组)和miR-24抑制剂组,采用CCK8、伤口愈合试验和TUNEL检测细胞活力、迁移和凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和MEK/ERK通路相关蛋白的表达水平。结果 miR-24在MCF-7和MDA-MB-231细胞中的表达水平显著高于H184B5F5/M10细胞(P<0.05)。与miR-24-NC组相比,miR-24抑制剂组抑制了细胞的活力和迁移(P<0.05),促进了细胞的凋亡(P<0.05);其凋亡蛋白Bcl-2显著降低(P<0.05),Bax、caspase-3和caspase-9显著升高(P<0.05);同时降低了MEK/ERK信号通路的表达(P<0.05)。结论 乳腺癌细胞中miR-24表达...     

miR-34a通过Notch信号通路影响乳腺癌细胞的生物学行为

目的探讨miR-34a通过Notch信号通路影响乳腺癌细胞的生物学行为。方法乳腺癌细胞MCF-7分为miR-34a及Control组,分别利用脂质体转染miR-34a mimics及miR-34a NC,RT-PCR法检测细胞中miR-34a表达,MTT、Hoechst染色及transwell法分别检测细胞活力、凋亡及侵袭情况;western blot检测细胞中Notch1,Notch2,Dll1及Jagged-1蛋白表达情况。结果与Control组比较,miR-34 mimics组中miR-34a表达量上调,细胞皱缩,变圆变亮,细胞活力降低(P0.01),细胞凋亡率显著提高(P0.01),细胞侵袭数目减少(P0.01),Notch1,Notch2,Dll1及Jagged-1蛋白表达量都显著降低(P0.01)。结论 miR-34a mimics通过抑制Notch信号通路进而诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡并抑制其侵袭。     

LRRC4通过MAPK信号通路阻滞U251细胞于G0/G1期

目的:探讨脑胶质瘤抑瘤基因LRRC4通过MAPK信号通路阻滞U251细胞于G0/G1的机制.方法:通过脂质体转染法将LRRC4基因转染至U251细胞,G418筛选构建稳定转染的LRRC4/U251细胞株并验证LRRC4的阳性表达;通过Western-blot检测LRRC4对MAPK信号通路的关键分子ERK,JNK及P38的表达影响;流式细胞仪、荧光素酶活性检测分析LRRC4对U251细胞周期及细胞周期素(cyclin D1)的影响.结果:LRRC4能够下调磷酸化ERK的表达,上调总蛋白JNK2和磷酸化c-Jun的表达.LRRC4下调了U251细胞中突变型P53的表达,以及cyclin D1的启动子活性和它的表达.LRRC4的重表达将U251细胞阻滞于G0/G1期.结论:LRRC4主要通过MAPK通路的关键分子JNK2上调磷酸化的c-Jun,抑制突变型的P53的表达,进而下调cyclin D1的启动子活性和cyclin D1的表达,将U251细胞阻滞于G0/G1期.     

OPN通过p38MAPK信号通路调控肺动脉平滑肌细胞自噬

目的 探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖、自噬的影响及其机制.方法 采用免疫细胞化学法鉴定原代分离的PASMCs后,将PASMCs分为四组:空白对照组(OPN:Ong/mL)、OPN低剂量组(...     

miRNA-34a靶向Bcl-2对肝癌细胞HepG2的生长和迁移能力的影响

通过过表达miRNA-34a检测Bcl-2的表达及对肝癌细胞的生长和迁移能力的影响,为肝癌的治疗提供新靶点。方法 通过生物信息学方法预测miRNA-34a的潜在作用靶点;采用双荧光素酶报告实验检测miRNA-34a与Bcl-2的靶向调控关系;体外培养肝癌细胞,将肝癌细胞分为对照组（转染miRNA-34a阴性对照物mimic NC）及miRNA-34a转染组（转染miRNA-34a模拟物）。分别转染miR-34a模拟物和阴性对照,转染36 h后,CCK8检测细胞增殖,Trans-well检测细胞迁移能力,q-PCR和Western blot方法检测miRNA-34a对肝癌细胞中Bcl-2表达量的影响。结果 miRNA-34a对肝癌HepG2细胞的活力和迁移能力具有抑制作用（P＜0.01）;miRNA-34a可以直接靶向下调Bcl-2（P＜0.01）的表达。结论 miRNA-34a可靶向并负向调控Bcl-2,降低肝癌细胞HepG2的活力和迁移能力。     

氯胺酮通过p38 MAPK信号通路对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨氯胺酮通过p38 MAPK信号通路对乳腺癌细胞增殖、侵袭与迁移的影响.方法:以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,根据细胞培养基添加氯胺酮和p38 MAPK抑制剂(SB203580)分为4组:control组(无氯胺酮和SB203580)、氯胺酮组(10μg/mL)、SB203580组(20μmol/L...     

双氢青蒿素通过调控MAPK/PI3K/Akt信号通路抗结直肠癌作用研究

目的：探讨双氢青蒿素（DHA）在体内对人结直肠癌（RKO）细胞的抗癌活性及体外机制。方法：将40只SPF级雄性裸鼠建立RKO荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、顺铂组及DHA高剂量（200 mg/kg）、低剂量（100 mg/kg）组,每组10只;对比各组裸鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、血清肿瘤坏死因子（TNF-α）水平等;苏木素-伊红（HE）染色观察各组裸鼠肿瘤组织病理学变化;噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度（25、50、100μmol/L）DHA干预0、24、48、72 h内对RKO细胞增殖的影响;流式细胞仪、Hoechst 33258检测（0、50、95、150μmol/L）DHA干预48 h后对RKO细胞周期和细胞凋亡的影响;划痕实验观察95μmol/L DHA干预对细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测DHA对细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax） mRNA表达水平的影响;蛋白质印迹法（Western blot）检测DHA对细胞内Caspase-3、C...     

MiR-34a介导mTOR/4E-BPmir信号通路对食管癌细胞凋亡作用机制研究

目的:探究MiR-34a介导mTOR/4E-BP1信号通路对食管癌细胞凋亡作用机制研究。方法:在ATCC细胞库购买食管癌细胞株,随机分为3组,第一组,miR-34a组(miR-34a组):通过转染方法将miR-34a mimics转染到食管癌细胞中;第二组,食管癌组(EC组):单纯食管癌细胞株不做其他处理,正常培养;第三组,空转组(ID组):将miR-34a阴性对照转染到食管癌细胞株中。通过qRT-PCR法、TUNEL法、cck-8法、Westernblot法检测食管癌细胞中miR-34a mRNA的表达含量、凋亡情况、增殖情况、mTOR/4E-BP1的蛋白含量的差异性来探究MiR-34a介导mTOR/4E-BP1信号通路对食管癌细胞凋亡作用机制研究。结果:qRT-PCR检测结果显示,EC组食管癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最低,miR-34a组食管癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最高,miR-34a组与ID组、EC组相比较miR-34a mRNA含量显著上升,说明转染成功(P<0.05)。TUNEL检测结果显示EC组食管癌细胞凋亡数量最少,miR-34a组食管癌细胞大量凋亡,miR-34a组与EC组、ID组相比较细胞凋亡率显著升高(P<0.05),EC组与ID组细胞凋亡无显著差异。ID组、EC组细胞增殖OD值比miR-34a组高,组间比较具有明显差异(P<0.05),EC组食管癌细胞的增殖数量最多,miR-34a组食管癌细胞的增殖数量最少,ID组食管癌细胞的增殖情况比EC组相比无明显差异(P>0.05)。通过Western blot法,对EC组、ID组、miR-34a组食管癌细胞内的mTOR/4E-BP1蛋白进行免疫印迹,灰度显示,EC组的mTOR/4E-BP1蛋白含量最高,EC组与ID组相比较,蛋白含量相近,无显著性(P>0.05),miR-34a组蛋白含量最低,miR-34a组和EC组、ID组相比较,食管癌细胞中蛋白含量降低(P<0.05)。结论:MiR-34a可能通过抑制mTOR/4E-BP1信号通路的表达来促进食管癌细胞的凋亡。     

噻托溴铵调控MAPK/NF-κB信号通路对气道平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的 探究噻托溴铵通过MAPK/NF-κB信号通路对哮喘的影响及其潜在的机制。方法 用10 ng·mL^-1血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor, PDGF)-BB和不同浓度(0、5、10、20、50μmol·L^-1)噻托溴铵处理气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells, ASMCs),并通过CCK-8实验、克隆形成实验、划痕愈合实验和Transwell法分析ASMCs细胞增殖、迁移和侵袭;Western blot分析MMP2、MMP9、calponin和α-SMA的蛋白水平;Western blot检测MAPK/NF-κB信号通路的水平。结果 噻托溴铵抑制PDGF-BB诱导的ASMCs的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。噻托溴铵调节ASMCs的表型转变(P<0.05)。噻托溴铵可以抑制PDGF-BB诱导的MAPK/NF-κB信号通路激活,降低p-38、p-JNK、p-ERK、p-p65、p-NF-κB的表达(P<0.05)。结论 噻托溴铵可以通过阻断MA...     

乳岩宁方联合依西美坦对乳腺癌荷瘤裸鼠 JNK/MAPK信号通路的影响*

目的观察乳岩宁方联合依西美坦对MDA-MB-435乳腺癌细胞荷瘤裸鼠JNK/MAPK信号通路相关蛋白表达的影响,探讨乳岩宁方联合依西美坦治疗绝经后难治性（HER-2/neu高表达）乳腺癌的作用机制。方法造MDA-MB-435乳腺癌细胞荷瘤去势裸鼠移植模型,分为4组：空白对照组、乳岩宁方组、依西美坦组、联合组（乳岩宁方+依西美坦）,分别每日1次灌胃给药,21 d后处死裸鼠,取材瘤体。采用Western blot及RT-PCR法检测瘤组织中JNK/MAPK信号通路JNK蛋白及其下游相关蛋白STAT3、Bcl-2、p53、caspase8的表达。结果乳岩宁方组、依西美坦组、联合组的抑瘤率分别为37.53%、60.83%、66.09%。与空白对照组相比,乳岩宁方组、依西美坦组和联合组的JNK、STAT3、Bcl-2的蛋白表达均明显下降,有统计学意义（P<0.05）。其中JNK蛋白的表达,联合组较乳岩宁方组、依西美坦组明显下降,有统计学意义（P<0.05）;STAT3蛋白的表达,乳岩宁方组较依西美坦组和联合组明显下降,有统计学意义（P<0.05）;Bcl-2蛋白的表达乳岩宁方组、依西美坦组、联合组之间无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组相比,乳岩宁方组、依西美坦组和联合组p53、Caspase8的基因表达均明显升高,有统计学意义（P<0.05）。联合组p53、Caspase8的基因表达较乳岩宁方组、依西美坦组明显升高,有统计学意义（P<0.05）。结论乳岩宁方联合依西美坦可能对JNK/MAPK信号通路有双向调节作用,一方面下调JNK蛋白表达及其下游蛋白STAT3、Bcl-2表达起到抑制乳腺癌细胞增殖的作用;另一面能上调p53、Caspase8基因表达,起到促进乳腺癌细胞凋亡的作用,最终起到抗肿瘤的作用。中药复方联合内分泌治疗将成为激素受体阳性乳腺癌在后芳香化酶抑制剂时代（AI+）治疗的新模式。     

欧前胡素调节ERK/MAPK信号通路对肺结核大鼠炎症反应的影响

目的 探讨欧前胡素（Imp）调节细胞外调节蛋白激酶（ERK）/有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号通路对肺结核大鼠炎症反应的影响。方法 64只大鼠随机分为对照组12只及造模组52只,造模组大鼠通过尾部注射结核杆菌方法建立肺结核大鼠模型,之后随机分为模型组、Imp低（Imp-L,25 mg/kg）、中（Imp-M,50 mg/kg）、高剂量（Imp-H,100 mg/kg）组、Imp-H+ERK特异性激活剂（EGF,100 mg/kg Imp+25 mg/kg EGF）组。干预结束后,主动脉采血,ELISA检测各组大鼠血清中白细胞介素-6（IL-6）、γ干扰素（IFN-γ）、环氧化酶-2（COX-2）水平;分离肺组织,HE、Tunel分别检测大鼠肺组织病理学变化及细胞凋亡情况;统计肺组织中结核杆菌菌落数;Western blot检测p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达水平。结果 与对照组相比,模型组肺组织严重病变,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达均显著增加（P＜0.05）;与模型组相比,Imp-L组、Imp-M组、Imp-H组病理损伤得到缓解,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达显著降低,以Imp-H组变化最为显著（P＜0.05）;与Imp-H组相比,Imp-H+EGF组病理损伤进一步加重,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达显著增加（P＜0.05）。结论 Imp可降低肺结核炎症反应,与抑制ERK/MAPK信号通路的激活有关     

miR-34b-5p上调抑制弥漫大B细胞淋巴瘤的侵袭及RhoA/ROCK信号通路

目的 研究miR-34b-5p过表达对弥漫大B细胞淋巴瘤的生长和运动以及RhoA/ROCK信号通路的影响.方法 选择弥漫大B细胞淋巴瘤系中SU-DHL-4细胞进行研究.建立空白对照组、空载体转染组、miR-34b-5p转染组,采用qRT-PCR检测miR-34b-5p的表达量,采用菌落形成实验、流式细胞术和Transw...     

片仔癀通过抑制TLR4/MAPK信号通路减轻LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症损伤研究

目的:研究片仔癀(PZH)对脂多糖(LPS)诱导的BV2 小胶质细胞神经炎症损伤的保护作用及机制.方法:将BV2 小胶质细胞培养于含有10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素的RPMI-1640 完全培养基中,并置于5％CO2,37℃培养箱中常规培养.将BV2 小胶质细胞以5×104 个/m L 的密度接种于96 孔板,LP...     

血府逐瘀汤联合替莫唑胺对脑胶质瘤大鼠ERK/MAPK信号通路的调节作用

目的 探讨血府逐瘀汤联合替莫唑胺对脑胶质瘤大鼠ERK/MAPK信号通路的调节作用.方法 将60只大鼠随机分为空白对照组、脑胶质瘤组、血府逐瘀汤组、替莫唑胺组及联合给药组,每组各12只,除空白对照组,其余各组大鼠采用颅内注射胶质瘤C6细胞的方法建立脑胶质瘤大鼠模型,血府逐瘀汤组按照20g/kg灌胃给予血府逐瘀汤,替莫唑胺...     

miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控及其对非小细胞肺癌预后的影响

miRNA-21是miRNA家族中十分重要的一个基因,在多种恶性肿瘤中高表达。研究表明,miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控可影响相关靶点的表达情况,因此,miRNA-21可能为非小细胞肺癌临床诊断和疾病治疗提供新靶标。本文对miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控及其对非小细胞肺癌预后的影响作一综述。     

miR-34a通过靶向抑制Notch信号通路减轻糖尿病肾病小鼠的足细胞损伤

目的 探讨miR-34a介导Notch信号通路对糖尿病肾病（DN）足细胞损伤及凋亡的影响。方法 体外实验：通过RT-PCR法检测高糖（30 mmol/L）环境下足细胞中miR-34a表达水平,构建miR-34a过表达足细胞系（miR-34a组）及其阴性对照（miR-NC组）,使用荧光素酶实验验证miR-34a与Notch 1的靶向关系,构建Notch 1过表达足细胞系（Notch 1组）和miR-34a、Notch 1均表达升高细胞系（miR-34+Notch 1组）;采用CCK-8法检测足细胞存活情况,流式细胞法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡关蛋白水平。体内实验：通过高脂饮食和链脲佐菌素建立DN小鼠模型并分为模型组、miR-34a组（n=15/组）,另选15只不做干预小鼠为对照组,miR-34a组和模型组小鼠分别尾静脉注射agomir-34a[80 mg/(kg·d)]、agomir-NC[80 mg/(kg·d)],连续注射3 d,4周后,HE染色、TUNEL法分别观察肾组织病理、凋亡情况,Western blot检测肾组织凋亡相关蛋白和Notch 1蛋白...     

骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠RANKL/OPG平衡及MAPK信号通路的影响

目的 观察骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)表达及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响.方法 选用雌性大鼠45只,分为假手术组(15只)和手术组(30只),手术组行双侧卵巢切除术,造模12周时测定BMD,确认OP复制成功后,将手术组大鼠又随机分为模型组和骨碎补总黄酮给药组,每组均15只;给药组大鼠给予骨碎补总黄酮灌胃,持续时间为12周,模型组和假手术组同时给予等量生理盐水灌胃;实验结束后测定大鼠的BMD,ELISA法检测大鼠血清RANKL、OPG含量, RT-PCR检测大鼠骨组织RANKL、OPG mRNA表达,Western blot法检测骨组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38MAPK (p38)、细胞外调节激酶(ERK)的磷酸化水平及c-Fos表达.结果 干预治疗12周后:(1)与假手术组相比,模型组大鼠左、右股骨BMD降低(P<0.05),血清RANKL含量增加、OPG含量降低、RANKL-OPG比值增大(P均<0.05),骨组织RANKL mRNA表达增加、OPGmRNA表达减少(P均<0.05).(2)与模型组比较,假手术组和骨碎补总黄酮治疗组左、右股骨BMD均增加(P均<0.05),血清RANKL含量降低、OPG含量增加、RANKL-OPG比值减小(P均<0.05),骨组织RANKL mRNA表达减少、OPG mRNA表达增加(P均<0.05),且假手术组和骨碎补总黄酮治疗组之间比较差异有统计学意义(P<0.05);(3)与模型组比较,假手术组和骨碎补总黄酮治疗组大鼠骨组织P-JNK、c-Fos表达降低(P均<0.05),但这两组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 骨碎补总黄酮可增加去卵巢大鼠骨密度,其途径可能是通过调节RANKL-OPG平衡、抑制JNK磷酸化及c-Fos表达实现的.