LncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-5590-3p调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨LncRNA PTPRG-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 以正常乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR法检测乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中LncRNA PTPRG-AS1和miR-5590-3p表达.分别转染si-LncRNA PTPRG-AS1、miR...     

LncRNA OIP5-AS1靶向miR-511-3p抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的 研究LncRNA OIP5-AS1对肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及作用机制.方法 采用qRT-PCR法检测OIP5-AS1和miR-511-3p的表达量;采用MTT法检测细胞增殖;采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法检测CyclinD1、MMP-2蛋白表达量;双荧光素酶报告实验检...     

沉默lncRNA THAP9-AS1对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默长链非编码RNA THAP9反义RNA1(lncRNA THAP9-AS1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法:选取贵州省肿瘤医院2017年6月至2020年6月25例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p表达水平。将MDA-MB-231细胞随机分为si-THAP9-AS1组、si-NC组、miR-505-3p组、 miR-NC组、si-THAP9-AS1+anti-miR-NC组、si-THAP9-AS1+miR-505-3p inhibitor组。采用四甲基偶氮唑盐比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活性,平板克隆实验检测细胞集落形成数,流式细胞术实验检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移及侵袭,双荧光素酶报告实验检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织相比,乳腺癌组...     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：建立人胚骨髓间充质干细胞(MSCs)分离及培养的方法，探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对MSCs增殖的影响。方法：通过密度梯度离心，贴壁法分离培养人胚MSCs，取第4代MSCs，应用流式细胞术测定细胞周期和CD44、CD34、CD45表达。采用MTT法观察不同含量和不同作用时间的IGF-Ⅰ对MSCs增殖的影响。结果：体外培养的MSCs呈现成纤维细胞形态，流式细胞仪检测结果显示，MSCs阳性表达CD44，阴性表达CD34，CD45。细胞周期分析显示IGF-Ⅰ使S+G2+M期细胞数增加，占细胞总数(29．9&;#177;2.3)％(t=10．4，P&;lt;0.01)。1μg／LIGF-Ⅰ促MSCs增殖作用不明显，10M／LIGF-Ⅰ即可促MSCs增殖，IGF-Ⅰ含量为100μg／L时，其促增殖作用达最大值，吸光度为2．95。而当IGF-Ⅰ含量大于100μg／L时，促细胞增殖作用反而下降；时效关系显示，IGF-Ⅰ第1天发挥促增殖作用，第5天促增殖作用达高峰，维持时间可达7d。结论：外源性IGF-Ⅰ能促进MSCs增殖，为实现MSCs体外快速扩增提供适宜的条件。     

构建含人胰岛素样生长因子基因腺病毒载体及在兔骨髓间充质干细胞的表达

背景:Adeasy腺病毒系统是由T.C.He等改良的基于E1和E3区缺失的重组腺病毒系统.相比传统的在真核细胞中收集和测试重组后的病毒颗粒的方法,其采用了在细菌中通过质粒同源重组的方法获得病毒颗粒,从而简化了腺病毒的构建和测试流程,而且,它能够通过整合入病毒基因组的标记基因GFP实现对转染细胞的荧光追踪,从而在近年来被广泛用作基因转染的载体.目的:用Adeasy系统构建荧光蛋白基因标记的腺病毒载体Ad-hIGF-1,并检测其在靶细胞骨髓间充质干细胞中的表达.设计:重复测量实验.单位:重庆医科大学儿科研究所.方法:实验于2004-11/2005-03在重庆医科大学儿科研究所完成.①重组腺病毒载体的构建:从pcDNA3.1-hIGF-1中扩增出截短的目的基因hIGF-1,按Ad-easy腺病毒系统同源重组的标准步骤获得重组阳性质粒pAd-hIGF-1和重组空白质粒pAd-0,电穿孔转化感受态XL-1细菌,扩增后获得重组腺病毒质粒,去内毒素质粒大抽试剂盒大量抽提质粒备转化HEK293细胞;②腺病毒包装及扩增:Pae Ⅰ酶切线性化pAd-hIGF-1和pAd-0,纯化后转染HEK293细胞,观察GFP的表达,待细胞90%以上漂浮后,冻融法裂解细胞收集第一轮病毒上清即为Ad-hIGF-1(重组目的腺病毒)和Ad-0(重组空白腺病毒),将收集病毒上清重复多次感染293细胞(乒乓交互感染)以提高病毒滴度.③骨髓间充质干细胞的培养及转染!采用通用的标准密度梯度离心法分离纯化兔MSCs于37℃、5%CO2孵箱培养,隔天换液,10 d细胞融合达70%～80%,贴壁紧密,细胞形态均一,呈典型的涡漩状排列,传代至第3代按病毒感染复数分组转染.主要观察指标:①腺病毒载体的构建及鉴定.②目的基因hIGF-1在HEK293的表达及病毒滴度.③目的基因在骨髓间充质干细胞中的表达.结果:①重组腺病毒的鉴定:从质粒pcDNA3.1-hIGF-1中顺利扩增出约400 bp大小的清晰条带,与预期相符;pMDl8-hIGF-1测序结果经Blast2.0比对与公布序列一致性99.9%(281位碱基同义突变,未影响氨基酸翻译:ggffggc-Gly);pAdtraek-CMV空载体和pAdtraek-MGF-1分别双酶切(Kpn Ⅰ和HindⅢ)鉴定正确.质粒pAdEasey-1和Ad-hIGF-1用Pac I酶切鉴定鉴定正确.证实病毒质粒同源重组成功.②荧光表达及滴度测定:重组质粒pAd-hIGF-1经Pac Ⅰ线性化后转化HEK293E细胞,48 h后在荧光显微镜下即可见GFP的表达,72h表达最强.约5-7 d后细胞出现病毒感染的特征性CPE,由此计算出腺病毒滴度为3.0× 109 pfu/mL.⑨靶细胞的感染及表达效率:病毒转染骨髓问充质干细胞24 h后观察到绿色荧光的表达,72 h左右荧光达到最强.免疫细胞化学SP法DAB染色显示在感染的骨髓间充质干细胞胞浆中有棕黄色阳性颗粒出现.SDSPAGE电泳在7.8 KD附近出现明显条带,与实际人胰岛素样生长因子-1分子量7.6 kD相符,证实转染含目的基因的重组腺病毒后的骨髓间充质干细胞中有较高量的人胰岛素样生长因子-1的表达.结论:本实验用Adeasy系统和扩增的截短型外源性基因hlGF-1构建了具有较强感染能力的腺病毒载体pAd-MGF-1,免疫细胞化学和Western Blot等方法检测证实了目的基因在靶细胞骨髓间充质干细胞得到了理想表达.     

转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1与髓核细胞诱导脂肪间充质干细胞向髓核样软骨细胞分化的比较

背景:以往研究脂肪间充质干细胞培养方式多为单层培养,诱导方式主要集中于细胞因子的方法,而椎间盘体内微环境,除细胞因子对细胞影响外,在其三维环境中细胞间的相互作用还值得进一步研究.目的:在体外分别通过髓核细胞和转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1两种条件诱导,观察脂肪间充质干细胞向髓核细胞分化的差异.方法:分别单层培养兔的脂肪间充质干细胞与髓核细胞细胞,脂肪间充质干细胞培养至3代经鉴定后,按5×106个细胞制成微球,置于Transwell培养板中培养,分别通过髓核细胞微球及转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1诱导;于诱导前、诱导7,14 d,观察细胞形态变化,并通过RT-PCR对Ⅱ型胶原、蛋白多糖水平进行测定.结果与结论:在体外诱导7,14 d,两组脂肪间充质干细胞微团体积、形态无明显区别.RT-PCR检测结果显示7 d两组与髓核诱导组均有Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA表达,但转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1组表达更强;诱导14 d髓核诱导组Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA表达明显增高,优于转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1组.结果表明,在体外髓核细胞和转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1对脂肪间充质干细胞进行诱导均有促进其向髓核细胞分化作用,而转化生长因子β1、胰岛素样生长因子1为正常髓核细胞分泌重要因子,说明髓核细胞对脂肪间充质干细胞的诱导之间除细胞因子作用外,尚存在相互促进增殖分化作用.     

miR-133b通过介导TGF-βR1表达下调对食管癌细胞侵袭、迁移的抑制作用

目的 探讨miR-133b通过介导转化生长因子-β受体1(TGF-βR1)表达下调,抑制食管癌细胞侵袭、迁移的作用及机制.方法 采用实时荧光定量PCR检测人正常食管上皮细胞和人食管癌OE19、ECA109细胞中miR-133b的表达;构建miR-133b过表达的人食管癌OE19、ECA109细胞;Transwell小室...     

lncRNA PCAT19靶向miR-769-5p促进口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨lncRNA PCAT19对口腔鳞癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 收集45例口腔鳞癌患者癌组织和癌旁组织,qRT-PCR法检测组织中PCAT19和miR-769-5p表达。体外培养HSC3细胞,转染PCAT19小干扰RNA或miR-769-5p模拟物、或共转染PCAT19小干扰RNA与miR-769-5p抑制剂后,CCK-8法和单克隆实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证PCAT19和miR-769-5p的调控关系。结果 口腔鳞癌组织中PCAT19表达高于癌旁组织,miR-769-5p表达低于癌旁组织（P <0.05）。干扰PCAT19或过表达miR-769-5p后,HSC3细胞OD值、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高（P <0.05）。PCAT19靶向负调控miR-769-5p。下调miR-769-5p逆转了干扰PCAT19对HSC3...     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-221-3p调控血管生成抑制蛋白-1对黑色素瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的 观察miR-221-3p、血管生成抑制蛋白-1(VASH-1)在黑色素瘤组织及黑色素瘤细胞系A375中的表达,探讨miR-221-3p、VASH-1在黑色素瘤细胞侵袭、迁移中的作用。方法 2019年1月—2021年9月新疆医科大学第一附属医院行手术治疗黑色素瘤患者21例,取手术切除的癌组织及癌旁组织。取对数生长期人黑色素瘤A375细胞及正常人表皮黑色素MC细胞。采用实时荧光定量PCR法检测癌组织、癌旁组织及A375、MC细胞miR-221-3p、VASH-1 mRNA相对表达量。取对数生长期A375细胞分为阴性对照组(转染siRNA-NC)、转染组(转染miR-221-3p siRNA),采用CCK-8法检测转染后培养12、24、48、72 h时细胞增殖率;采用Transwell小室实验检测转染24 h时迁移细胞数和侵袭细胞数;采用流式细胞术检测转染48 h时细胞周期;采用Western blot法检测转染48 h时VASH-1、GRB2、ERK1+2、VEGF-D、VEGF-α蛋白相对表达量。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-221-3p与VASH-1的靶向关系。结果 (1)...     

高迁移率族蛋白-1对骨髓间充质干细胞分泌胰岛素样生长因子-1水平及凋亡的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白-1(HMGB1)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平及凋亡的影响。方法:体外分离和培养昆明小鼠BMSCs,用流式细胞术检测第3代BMSCs表面抗原CD34、CD44的表达率。给予不同浓度HMGB1(0、12.5、25、50、100ng/mL)干预后,ELISA法检测上清液中IGF-1的浓度,流式细胞术检测BMSCs的凋亡率。结果:体外培养的第3代贴壁细胞表面抗原CD44表达率为96.7%,CD34表达率为1.1%;24h后上清液中IGF-1的浓度25、50、100ng/mL组与0ng/mL组间差异均有统计学意义(P<0.05)。48h后上清液中IGF-1的浓度12.5、25、100ng/mL组与0ng/mL组间差异均有统计学意义(P<0.05)。72h后各浓度组BMSCs凋亡率:50、100ng/mL组与0ng/mL组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:适当浓度的HMGB1(25ng/mL)可促进BMSCs分泌IGF-1;较高浓度的HMGB1(≥50ng/mL)可明显诱导BMSCs凋亡。     

胰岛素样生长因子1联合骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死大鼠心功能影响的研究

目的 探讨胰岛素样生长因子1(hIGF-1)转染骨髓间充质干细胞(MSCs)对急性心肌梗死大鼠心功能的影响.方法雌性Wistar大鼠30只,建立急性大鼠模型随机分为3组:对照组,冠脉结扎后注射无血清培养液;MSCs组,冠脉结扎后注射MSCs;hIGF-1+MSCs组,冠脉结扎后注射转染hIGF-1的MSCs.细胞移植4周后利用心动超声检测各组大鼠心肌短轴缩短率(FS)及射血分数(EF);利用TUNEL法检测各组的凋亡指数.结果对照组、MSCs组和hIGF-1+MSCs组的FS分别为(0.27±0.03)、(0.36±0.07)和(0.46±0.09),EF分别为(0.47±0.05)、(0.63±0.10)和(0.76±0.13);与对照组相比,MSCs组和hIGF-1+MSCs组的FS和EF差异均有统计学意义(P<0.05);与MSCs组相比,hIGF-1+MSCs组的Fs和EF差异均有统计学意义(P<0.05).TUNEL法检测凋亡指数表明,与对照组相比,MSCs组和hIGF-1+MSC8组差异均有统计学意义(P<0.05).结论hIGF-1联合MSCs移植可以通过抗凋亡明显改善大鼠心功能.     

血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p联合检测对妊娠期糖尿病的诊断价值

目的 探讨血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p对妊娠期糖尿病的诊断价值.方法 选择2018年5—6月该院收治的妊娠期糖尿病患者10例和妊娠24～28周的健康孕妇10例,采用转录组测序技术(RNA-seq)分析血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p的相对表达水平.选择...     

miR-455-5p在乳腺癌组织中表达及对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察miR-455-5p在乳腺癌组织中表达变化及对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,探讨其在乳腺癌进展中的作用及可能的下游调控机制.方法 取30例乳腺癌患者手术切除的癌组织及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-445-5p相对表达量.取对数生长期正常乳腺细胞MCF-10A及乳腺癌MCF-7...     

过表达上皮剪接调控蛋白1抑制胃癌细胞SGC-7901迁移能力的研究

目的探讨上皮剪接调控蛋白1(ESRP1)对胃癌SGC-7901细胞迁移能力的影响及其作用机制。方法利用脂质体介导法转染ESRP1真核表达载体于SGC-7901细胞后,采用划痕实验检测细胞迁移能力的变化;实时荧光定量PCR检测上皮间充质转化(EMT)过程相关标志物E-cadherin、N-cadherin分子的表达情况,采用t检验分析。结果与转染空载体对照组相比,过表达ESRP1后SGC-7901细胞迁移能力下降;伴随ESRP1表达增加,N-cadherin表达下调为对照组0.25倍、E-cadherin表达上调为对照组2.42倍。结论过表达ESRP1可能通过抑制EMT进程降低胃癌细胞SGC-7901的迁移能力。     

胃癌中胰岛素样生长因子结合蛋白-2,胰岛素样生长因子-1和增殖细胞核抗原的表达和临床意义

目的:研究IGFBP-2、IGF-1和PCNA在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌临床病理学特征的关系及意义。方法:用免疫组织化学SP法检测60例胃癌患者肿瘤组织和40例正常胃黏膜组织中IGFBP-2、IGF-1和PCNA的表达水平。结果:(1)IGFBP-2、IGF-1和PCNA在胃癌组织中的表达率显著高于在正常胃黏膜组织中的表达(P<0.01)。(2)IGFBP-2、IGF-1和PCNA在有淋巴结转移胃癌中的表达显著高于无淋巴结转移胃癌(P<0.05)。(3)IGFBP-2和IGF-1在胃癌组织中的表达具有明显正相关(P<0.01)。(4)PCNA的表达率在IGFBP-2和IGF-1阳性胃癌中的表达显著高于C-erbB-2阴性的胃癌(P<0.01)。结论:胃癌组织中IGFBP-2水平的升高可能增强IGF-1的表达,两者通过促进肿瘤细胞的增殖与胃癌的发生发展和浸润转移有关。     

上皮性卵巢癌组织中胰岛素样生长因子1及其相关蛋白的表达分析

目的:探讨胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)及其受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP3)在上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)组织中的表达水平及其临床意义。方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测45例EOC和25例正常卵巢组织标本中IGF-1、IGF-1R、IGFBP3的mRNA表达水平。结果:IGF-1、IGF-1R、IGFBP3在EOC中的表达水平均高于正常卵巢组织,差异均有统计学意义(P0.05),且三者表达的升高程度与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(P0.05),而与年龄、临床分期无关(P0.05)。结论:IGF-1、IGF-1R、IGFBP3的表达升高与EOC的发生发展、分化、转移相关。