脐血间充质干细胞向神经细胞诱导分化的研究进展

脐血间充质干细胞是从胎儿脐带血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为神经细胞的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的研究价值,该文将对脐血间充质干细胞向神经细胞定向分化的诱导方法作一综述。     

肝损伤血清体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为类肝细胞

目的探讨肝损伤血清诱导人骨髓间充质干细胞分化为类肝细胞的可行性。方法分离、纯化hMSCs后用含10％肝损伤血清的培养基诱导培养，倒置显微镜连续观察细胞形态变化，并分别于诱导后7、14、21d行免疫细胞化学、糖原染色检测诱导后细胞的功能。结果①MSCs形态均一，呈长梭形；②实验组MSCs在诱导5—7d后细胞形态开始变为不规则圆形、三角形或多角形；③免疫细胞化学：实验组细胞第7天AFP表达呈阳性，第14天AFP表达消失；Alb第14天开始表达，表达量逐渐增强，可持续至第21天；④PAS染色：实验组在诱导21d时细胞有合成糖原的能力，可见胞浆呈红色。结论肝损伤血清可诱导MSCs向类肝细胞分化，为细胞移植治疗肝衰竭提供新的探索思路。     

体外诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的 探讨体外成骨诱导的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的形态和功能特征.方法 体外培养获取生长状态良好的兔BMSCs,进行成骨诱导,观察并检测成骨细胞的生物学特性.结果 BMSCs可在成骨条件培养液下诱导为成骨细胞.经鉴定,碱性磷酸酶和矿化结节染色阳性,激光共聚焦显微镜下成骨细胞鬼笔环肽显示骨架F-actin为红色荧光.结论 BMSCs在体外可定向诱导为成骨细胞,有希望成为理想的种子细胞应用于临床.     

红景天苷诱导人胎盘间充质干细胞分化为肝细胞样细胞

目的探讨人胎盘间充质干细胞(PMSCs)在红景天苷作用下是否可以转化为肝细胞样细胞。方法分离培养人PMSCs,采用红景天苷和成纤维细胞生长因子4(FGF-4)联合应用对PMSCs进行诱导分化,倒置显微镜下每日观察诱导后细胞形态的变化;在诱导第7、14、21天,收获诱导细胞,免疫荧光染色检测CK18的表达,同时收集培养上清液,ELISA法检测白蛋白(ALB)浓度。结果在红景天苷和细胞因子的作用下,经过21 d的体外培养,PMSCs由长梭形变为多边形、类圆形,并具有肝细胞特异的表型和功能。免疫荧光可检测到诱导后细胞内CK18表达,培养上清液中有ALB的分泌。结论 PMSCs在红景天苷FGF-4作用下在体外能转化为肝细胞样细胞。     

自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞

目的 探讨自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞的可行性.方法 采用自体脑脊液为诱导剂,体外诱导骨髓源性间充质干细胞.从形态学、免疫组化法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对诱导后细胞进行鉴定.结果 自体脑脊液诱导后的间充质干细胞呈现神经干细胞改变,可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并表现相应的特征结构和生物学特性.结论 白体脑脊液能定向诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞转化.     

诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的探讨人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向成骨细胞诱导分化的能力。方法选用不同代次的MSCs,使用条件培养基,观察细胞的形态变化,采用细胞化学和免疫组化的方法检测碱性磷酸酶、钙盐沉积及Ⅰ型胶原的表达。结果MSCs在条件培养基中,15d后可见细胞变为多边形,碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原染色阳性,形成钙结节,表现成骨细胞分化特点。结论在一定培养条件下成功诱导人MSCs向成骨细胞分化。在骨组织工程学方面MSCs作为种子细胞具有潜在的应用价值。     

成人骨髓间充质干细胞体外向视网膜细胞的诱导分化

目的研究取材于成人骨髓的间充质干细胞在一定诱导条件下向视网膜神经细胞的分化。方法成人骨髓经密度梯度离心得到的细胞,根据其高黏附特性体外培养获得间充质干细胞。利用流式细胞仪分析其细胞表型,在体外诱导使其向视网膜神经细胞分化并用免疫荧光法进行鉴定。结果从骨髓中分离培养的细胞具有成纤维细胞样形态,贴壁生长,表型相对均一,表面标志为CD90、CD44、CD147阳性;而CD34、CD38、CD45、CD14、HLA-DR阴性。体外诱导后可以得到表达nestin(神经干细胞标志物)、GFAP(神经胶质细胞标志物)和Rhodopsin(视网膜光感受器细胞标志物)阳性的细胞。结论从人骨髓中分离培养得到的间充质干细胞具有向视网膜神经细胞分化的潜能。     

诱导间充质干细胞向心肌细胞分化方法及分化机制进展

干细胞在体外特定条件下,可特异的向某种组织类型细胞进行分化,其中包括向心肌细胞分化。目前,胚胎干细胞(em-bryonic stem cells,ESCs)虽然具有这方面的功能,且其分化效率较一般成体细胞高,但是由于伦理问题限制了其在临床的应用。而间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)不仅取材方便,且没有伦理争议,是最具希望的再生医学种子细胞,引起了人们的极大关注。目前对于体外诱导不同来源的间充质干细胞向心肌细胞分化方法的实验研究很多,主要包括化学试剂诱导和模拟体内微环境诱导两大类。该文就MSCs向心肌分化的体外诱导方法和分化机制的研究进展作一综述。     

脐血间充质干细胞对系统性红斑狼疮患者细胞因子分泌的影响

目的：体外探讨脐血间充质干细胞（UCB－MSCs）对系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMNCs）细胞因子分泌的影响。方法①UCB－MSCs的分离、扩增及鉴定;②健康志愿者及SLE患者PBMNCs的分离。③UCB－MSCs与植物凝集素（ PHA）刺激的PBMNCs共培养, ELISA法检测共培养前后各组细胞培养上清液中IL－6、IL－10、IL－2、IL－12、IFN－γ的含量。结果①UCB－MSCs呈梭形贴壁生长,能在体外连续传代,均表达CD13、CD44、CD166,不表达 CD34、CD45;②UCB－MSCs能显著下调 SLE患者 PBMNCs中 IL－10、IL－6的分泌而上调 IL－2、IL－12、IFN－γ的分泌。结论 UCB－MSCs在体外能改变SLE患者的Th1／Th2极化状态。     

脐血干细胞与脐带间充质干细胞移植治疗乙型肝炎肝硬化的疗效比较

目的 比较经外周静脉移植脐血干细胞与脐带间充质干细胞治疗乙型肝炎肝硬化患者的临床疗效.方法 乙型肝炎肝硬化患者42例,分为脐血干细胞组20例,给予脐血干细胞治疗;脐带间充质干细胞组22例,给予脐带间充质干细胞治疗,2组均给予内科综合治疗.比较2组移植前及移植后2、4、12、24周生化指标、临床症状的改善情况及不良反应.结果 2组干细胞移植后白蛋白、胆碱酯酶及凝血酶原活动度均较移植前升高(P<0.05),移植后24周总胆红素较移植前降低(P<0.05),丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶移植后各时间点与移植前比较差异无统计学意义(P>0.05).2组间各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05).干细胞移植4周后,2组食欲、乏力、腹胀及腹水情况均较移植前改善,2组间比较无统计学意义(P>0.05).2组患者均未发生严重不良反应和并发症.结论 脐血干细胞与脐带间充质干细胞移植治疗乙型肝炎肝硬化患者安全有效,疗效差异无统计学意义.     

人脐血源性间充质干细胞的体外培养及生物学鉴定

目的 建立体外培养、扩增人脐带血间充质干细胞(MSCs)的方法．初步鉴定其生物学特性。方法 无菌条件下取正常足月剖宫产的脐带血,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞．以偏酸性的Mesencult^TM作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细咆层,测定MSCs的生长曲线．用流式细胞技术分析细胞的表面抗原。结果 来源于脐血的单个核细胞存体外用合适的培养基培养,细胞贴壁后出现破骨样及间充质样的细胞。间充质细胞为成纤维样的细胞形态,并表达MSCs相关的抗原CD29、CD44、CD105。但不表达CD34、CD45、CD106和HLA-DR。这与源于骨髓的MSCs一致。结论 脐带血中含有的MSCs可在体外培养、扩增,能够为实验和临床的应用提供一种新的间充质干细胞来源。     

体外培养人脐带血间充质干细胞向胰岛细胞分化及对糖尿病治疗的实验研究

目的研究人脐带血间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的潜能及其移植后对糖尿病大鼠的治疗效果。方法体外分离培养HUCB-MSCs,在胰岛细胞培养条件下经药物定向诱导其分化;免疫组化对诱导细胞进行胰岛β细胞标记鉴定;双硫腙染色鉴定锌离子表达及检测胰岛样细胞的移植效果。结果 HUCB-MSCs经诱导后,免疫细胞化学染色显示表达人胰岛素;双硫腙染色呈棕红色;移植后2周,胰岛样细胞组血糖浓度明显降低。结论 HUCB-MSCs在体外诱导培养条件下,具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能,这种细胞可能为Ⅰ型糖尿病提供一条新的治疗途径。     

人脐血MSCs的分离培养及向神经的诱导分化

目的探讨人脐血中分离所得到间充质干细胞（MSCs）向神经组织细胞诱导分化的实验条件。方法淋巴细胞分离液分离正常人脐血单个核细胞,利用差速消化法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型。取2至4代的MSCs加入含有维甲酸（RA）与神经生长因子（NGF）的诱导分化培养基将其定向诱导,免疫细胞化学染色检测诱导后的MSCs神经元和神经胶质细胞标志的表达。结果脐血MSCs每传一代,细胞数量增加约2～3倍。流式细胞仪检测,脐血MSCs不表达CD34,表达CD25、CD29、CD105、CD106。诱导后的细胞不仅形态类似神经元和神经胶质细胞,而且表达神经丝蛋白200（NF）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）。结论从人脐血中可以分离得到与骨髓相似的MSCs,并且能够在体外分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞。     

体外诱导人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化

目的 通过体外培养将人脐带间充质干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞.方法 将体外培养的人脐带间充质干细胞分为诱导组和对照组.诱导组先后予以1 mmol·L-12-巯基乙醇培养2 d,10 μg·L-1表皮生长因子、10 μg·L-1碱性成纤维细胞生长因子及2% B27培养7 d,之后添加20 mmol·L-1尼克酰胺及艾塞那肽培养7 d.对照组不添加诱导剂,继续换液培养.通过观察细胞形态变化、RT-PCR体外扩增两组细胞的胰腺-十二指肠同源框-1（PDX-1）基因、放射免疫法测定两组细胞胰岛素分泌量三种方法来鉴定胰岛素分泌细胞.结果 （1）通过形态学观察,诱导组细胞类似胰岛样细胞,对照组细胞则无明显改变;（2）应用RT-PCR方法,诱导组细胞可扩增出PDX-1基因,而对照组则没有.（3）诱导组细胞培养上清液可检测出胰岛素分泌,7 d时胰岛素浓度为（6.32±0.18）mIU·L-1,21 d时增至（34.57±4.54）mIU·L-1,而对照组则未测出.结论成功在体外微环境下将人脐带间充质干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞.     

不同培养基对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

目的观察不同培养基对人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）生物学特性的影响,优化培养方法。方法采用贴壁法从正常足月胎儿脐带中分离出间充质干细胞,细胞贴壁后利用DMEM/F12,Mesen PRORSTM Medium这两种培养体系进行体外扩增,绘制生长曲线,流式细胞仪检测其表面标志。结果从人脐带中分离出的间充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长;细胞表达CD29、CD44,不表达CD34、CD45和HLA-DR。结论加入Mesen PRORSTM Medium培养的细胞增殖速度快,更适合于脐带间充质干细胞的体外扩增。     

人脐带间充质干细胞旁分泌物质的作用及对肝功能衰竭的影响

脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymalstem cell, UC-MSC)是从人脐带华尔通胶(Wharton jelly)中分离出的细胞,它可以表达间充质干细胞的表面标志,其生物学特性与骨髓间充质干细胞相似,可以诱导分化为多种细胞.最近国内外学者对UC-MSC的移植及诱导分化治疗进行了大量研究,如在心肌梗死、肾脏及血液系统疾病中的研究.但对UC-MSC旁分泌物质的研究却不多见.此文就UC-MSC的分泌、分化及免疫调节作用、旁分泌物质的作用及对肝功能衰竭的影响和应用前景作一综述.     

人脐血间充质干/祖细胞诱导为神经样细胞的实验研究

目的探讨人脐血间充质干细胞用于神经细胞再生的可行性与人脐血间充质干/祖细胞最佳的诱导培养条件。寻找一种合适的细胞来源进行移植以代替受损的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞来修复神经损伤。方法将脐血单个核细胞置于低血清(2%)达氏修正依氏培养基中培养,生成贴壁细胞层,依传代方法,用相同培养条件进行扩增,扩增后的贴壁细胞置入细胞培养液(加入新生大鼠神经细胞分离培养上清液)中,并添加表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)进行诱导分化。采用流式细胞术、免疫组织化学法分别检测被诱导的神经样细胞的表面标志及细胞特异性标志、结构,并进行分析。结果脐血间充质干/祖细胞克隆在脐血单个核细胞中出现频率为0.5×10-6,在传20代时,可有效扩增1.5×106倍,诱导后,70%的脐血间充质干/祖细胞分化为神经样细胞。结论采用上述扩增与诱导条件,脐血间充质干/祖细胞可得到有效扩增,并可高效向神经样细胞分化,从而证实脐血是一种细胞替代治疗前景光明的细胞来源。     

人脂肪间充质干细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞的实验研究

目的体外定向诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞的分化。方法人脂肪间充质干细胞分3个阶段进行诱导,第一阶段培养在含适当浓度的2-巯基乙醇的高糖-达氏修正依氏培养基(HG-DMEM)培养2d,第二阶段在含适当浓度的B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)的HG-DMEM培养基中诱导6d,第三阶段在含适当浓度的2-巯基乙醇和B27和尼克酰胺高糖无血清DMEM培养基诱导细胞向胰岛样细胞分化。对照组用HG-DMEM培养。在相差显微镜下观察细胞的形态;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测诱导前后nestin、胰岛素基因的表达;用免疫荧光染色法检测诱导前后nestin、胰岛素的表达;诱导第三阶段进行双硫腙染色鉴定胰岛B样细胞团。结果未经诱导的脂肪间充质干细胞呈长梭形贴壁生长,诱导后细胞逐渐变圆,并聚集成团。诱导8d细胞nestin基因呈阳性表达,诱导14d细胞nestin基因表达量下降,胰岛素基因表达呈阳性。诱导后的细胞团双硫腙染色呈棕红色。结论2-巯基乙醇、EGF、bFGF及尼克酰胺等可在体外诱导人脂肪间充质干细胞分化为具有分泌胰岛素功能的胰岛样细胞。     

脐带间充质干细胞治疗再生障碍性贫血18例临床研究

目的 初步观察脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSC）治疗再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）患者的疗效和安全性.方法 18例AA患者,中位年龄28（7～49）岁,重型AA 10例,非重型AA 8例;7例曾接受免疫抑制治疗,均无效.从正常足月分娩胎儿的脐带分离培养UC-MSC,静脉输注给患者,每次输注细胞数为1×106/kg,每周输注1～2次.观察治疗前、后患者外周血细胞计数、骨髓细胞学、骨髓活检、外周血CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋T淋巴细胞亚群比例及临床症状等,观察治疗相关不良反应.结果 18例患者接受UC-MSC输注中位次数38 （12～96）次,中位治疗时间8（3～16）月,中位随访时间31 （6～36）月.其中3例患者基本治愈,7例缓解,1例明显进步,2例患者贫血和出血症状好转、输血间隔延长,5例无效;总有效率72.2％.7例既往对免疫抑制剂无效的患者中,4例有效.12例患者在治疗前外周血CD4＋/CD8＋细胞比值倒置,治疗后11例不同程度升高（其中7例恢复正常）.所有患者均未出现明显的治疗相关不良反应.结论 UC-MSC治疗有助于改善AA患者的骨髓造血功能,短期观察未发现不良反应,尤其对免疫抑制治疗无效、不适合移植或不能耐受相关副作用的AA患者具有重要的临床价值.