腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞的体外生物学特性

目的： 〖HT5"SS〗探讨腺病毒介导乙型肝炎病毒表面抗原（AdVHBsAg）基因修饰树突状细胞（dendritic cell,DC）瘤苗体外生物学活性。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗：将腺病毒表达载体AdVHBsAg转染人单个核细胞来源的DC,构建AdVHBsAgDC肝癌瘤苗,采用Western blotting法鉴定转染基因表达,FACS检测表面分子和内吞功能,3HTdR法检测T细胞增殖反应的能力,MTT法检测CTL活性。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗：HBsAg基因转染后,Western blotting法检测结果示HBsAg基因表达于转染的DC,表明腺病毒介导的HBsAg基因转染的有效性。AdVHBsAgDC可高表达CD1a、CD11c、 CD83、CD86和HLADR,但内吞功能较DC组降低(P<0.05)。AdVHBsAg DC刺激自体T细胞增殖功能均明显高于DC对照组和AdVLacZDC组(P<0.05)。AdVHBsAg DC体外诱导CTL对HepG2215肿瘤细胞的杀伤作用具有特异性。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗：肝癌相关基因HBsAg可作为乙型肝炎病毒相关性肝癌的切入点,该研究为HBV相关肝癌DC体内免疫治疗提供了实验依据。     

几种免疫辅助治疗对晚期复治肺癌疗效的对比

目的:〖HT5"SS〗 探讨几种以免疫为主的非手术治疗方法对晚期复治肺癌的疗效及其临床意义。〖HT5W〗方法: 〖HT5"SS〗102例晚期复治肺癌患者按主要治疗方法分单纯免疫治疗(A)、介入化疗(B)、雾化吸入免疫治疗(C)及热化疗(D)4组,观察4组的肿瘤缓解有效率、患者中位生存期及生存率。〖HT5W〗结果: 〖HT5"SS〗A、B、C、D 4组的肿瘤缓解有效率分别为：18.8%、45.4%、23.1%、20.0%;中位生存期分别为：6.09、7.35、5.46、10.24个月,B组及D组较高; ２年以上生存率A组及D组较高,但4组间无统计差异。 〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗单纯性全身免疫疗法肿瘤缓解率较低,微创介入化疗有较高的肿瘤缓解率,但并非一定可延长生存率。局部吸入性免疫疗法及热化疗有积极意义。     

碳纳米管-树形分子载体递送 Survivin 反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖的作用

目的〖HT5"SS〗： 探讨碳纳米管(CNT)树形分子递送Survivin反义寡核苷酸(ASOND)进入肝癌细胞HepG2的效率及其对肝癌细胞增殖的影响。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 制备碳纳米管与PAMAM树形分子复合物,与Survivin反义寡核苷酸组装后,用原子力显微镜(AFM)与凝胶电泳观察碳纳米管树形分子反义核苷酸复合物的形态结构;然后将复合物与人肝癌HepG2细胞共培养,同时设立对照,采用透射电镜观察碳纳米管树形分子反义核苷酸复合物在细胞中的定位,采用MTT法检测复合物对癌细胞生长的抑制作用。〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗AFM与凝胶电泳分析证实碳纳米管树形分子反义核苷酸复合物被成功制备。透射电镜观察证实碳纳米管树形分子反义核苷酸复合物位于细胞质。MTT法检测表明,CNTPAMAMASODN浓度为1.0 μmol/L时,即可抑制(4597±4.28)%的HepG2细胞增殖,而ASODN组和CNTPAMAM组在此浓度条件下对HepG2细胞的抑制率则分别为(933±0.85)%和(6.37±0.69)%; 当CNTPAMAMASODN达到1.50 μmol/L时,细胞抑制率为(70.22±7.25)%,而且抑制作用随培养时间的延长与浓度的增加而增强,实验组与对照组之间细胞抑制率存在显著性差异(P<0.01)。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗： 碳纳米管树形分子复合物是一种高效的基因递送载体,能够携带Survivin反义寡核苷酸进入肝癌细胞,并高效抑制HepG2细胞的增殖,显著增强反义寡核苷酸的作用效果。     

重组p53腺病毒联合中药治疗小鼠腹水瘤的疗效

目的： 〖HT5"SS〗探讨p53腺病毒（简称Adp53）注射液联合中药得力生及消癌平治疗小鼠腹水瘤的协同作用。〖HT5W〗方法：〖HT5"SS〗建立昆明小鼠H22肝癌腹水瘤模型,建模48 h后分组分别给予Adp53、中药得力生和消癌平或两药联用。用药1周后检测体重、腹围、腹水量、腹水瘤细胞计数,流式细胞仪测定瘤细胞凋亡百分率以及细胞周期情况。〖HT5W〗结果：〖HT5"SS〗 Adp53、得力生、消癌平单药治疗组,除体重以外的上述指标与对照组比较均有统计学差异（P＜0.05）,Adp53+得力生和Adp53＋消癌平组的腹围增长率、腹水量、瘤细胞计数、晚期细胞凋亡率均明显少于各单药治疗组（P＜0.05）。 〖HT5W〗结论： 〖HT5"SS〗腹腔注射Adp53、得力生和消癌平均可抑制H22细胞生长并减少腹水形成,Adp53与中药得力生、消癌平联合腹腔内给药对治疗腹水瘤有协同作用。     

树突状细胞免疫治疗辅助放射治疗抑制小鼠肾癌移植瘤的生长

目的〖HT5"SS〗： 研究树突状细胞免疫治疗联合放射治疗对小鼠肾癌移植瘤的作用。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： BALB/c小鼠右腋皮下注射 25× 106 Renca肾癌细胞制作移植瘤模型,分为无治疗对照组、单纯放疗组、单纯DC治疗组和DC联合放疗组4组进行治疗。皮下荷瘤的BALB/c小鼠,在第12～16天连续5 d接受肿瘤局部放射治疗,6脉伏电子线,7 Gy/次,并于第11、15、19和22天分别4次在肿瘤部位直接注射未负载肿瘤抗原的DC细胞(1×106/次),第28天处死小鼠。检测各组肿瘤生长速度和瘤体重量,ELISA检测小鼠脾细胞IL2、IFNγ、IL4和IL10分泌水平。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗: 与单纯治疗组比较,DC联合放疗组小鼠的肿瘤生长明显缓慢,体积明显减小,脾细胞分泌的IL2 、IFNγ和IL4的能力显著提高,与其它各组比较均有非常显著性差异(P<001)。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗: 瘤内DC注射免疫治疗联合放疗能够有效地抑制BALB/c小鼠肾癌移植瘤生长,其效果明显好于单一方法治疗。     

PTEN基因转染联合奥沙利对胆管癌细胞生长的影响

目的: 〖HT5"SS〗观察脂质体介导PTEN基因转染人胆管癌细胞（QBC939）,联合化疗药物奥沙利铂（LOHP）对胆管癌细胞生长的影响,探索人类胆管癌的生物治疗方法。〖HT5W〗方法: 〖HT5"SS〗将携带PTEN基因的真核表达载体pBPPTEN和不含该基因的空载体转染胆管癌QBC939细胞,嘌呤霉素抗性筛选克隆、扩增培养,SP免疫组化法检测转染前后PTEN阳性表达率。实验分组为QBC939、QBC+LOHP、PTENQBC和PTEN+LOHP 4组,以MTT法检测癌细胞生长活性,透射电镜扫描观察转染前后及联合奥沙利铂后细胞的超微结构变化,流式细胞仪分析转染前后细胞周期变化和凋亡情况,体外细胞侵袭力抑制试验观察转染及用药前后细胞侵袭力的变化。〖HT5W〗结果: 〖HT5"SS〗PTEN基因转染后QBC939细胞稳定表达、PTEN阳性表达率升高(P<0.05);基因转染后肿瘤细胞活性下降(P<0.05);细胞周期G1～S期抑制、细胞凋亡率增加(P<0.01);透射电镜下显示细胞较成熟、分化好、线粒体增多;细胞侵袭力明显抑制(P<0.05),其中以PTEN+LOHP抑制作用最强,LOHP抑制作用次之。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗PTEN基因转染生物治疗联合奥沙利铂化疗对人胆管癌细胞生长具有显著的抑制作用。     

抑制端粒酶活性对As2O3诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的： 〖HT5"SS〗观察端粒酶反义寡核苷酸、As2O3对肝癌细胞生长的影响,寻找低剂量、低毒、高效、安全的抗肝癌新疗法。〖HT5W〗方法：〖HT5"SS〗 自行设计合成靶向端粒酶模板区的20 nt硫代反义寡核苷酸,观察端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞端粒酶活性的影响及两者协同对肝癌细胞生长的影响,采用HE染色、流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳观察端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞的凋亡诱导作用,以流式细胞术检测肝癌细胞的Fas、FasL、bcl2蛋白的表达。〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗5 μmol/L的端粒酶反义寡核苷酸作用24h可显著抑制肝癌细胞端粒酶活性（P<0.01）;肝癌细胞端粒酶活性被抑制后对As2O3诱导凋亡的敏感性显著增加,表现为低浓度、短时间即可诱导肝癌细胞凋亡（P<0.01）,端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞的凋亡诱导作用是通过Fas、FasL途径实现的。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗抑制肝癌细胞端粒酶活性可显著增强其对As2O3诱导凋亡的敏感性,减少砷剂用量,两者协同有潜在的临床应用前景。     

腺病毒介导HSV-TK基因血管靶向治疗裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤

目的:〖HT5"SS〗 探讨重组腺病毒介导胸苷激酶系统通过血管靶向治疗裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤的疗效及作用机制。〖HT5W〗方法〖HT5”SS〗：　32只BALB/c鼠皮下接种建立裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤模型,当瘤体达100 mm3时随机分成4组,分别为更昔洛韦(GCV)组(Ⅰ)、空载体病毒组(Ⅱ)、重组腺病毒CMVTK组(Ⅲ)及重组腺病毒AdKDRTK组(Ⅳ)。各治疗组瘤内分别注入重组腺病毒液及空载体病毒液,重组腺病毒治疗组在病毒给予24 h后分别在腹腔内注射GCV,连续10 d;对照组腹腔内注入GCV。观察各组瘤体生长情况及免疫组化法测定肿瘤微血管密度(MVD)。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗： 与对照组比较,第Ⅲ、 Ⅳ组经治疗后肿瘤的生长均受到了明显的抑制,其抑瘤率分别为12.3%和24.5%（两者比较,P<0.05）。肿瘤组织内的MVD,Ⅰ组为（37.4±86）个/mm2、Ⅱ组为(30.6±7.8)个/mm2、Ⅲ组为(27.6±7.1)个/mm2、Ⅳ组为(10.7±4.1)个/mm2,其中Ⅲ组与Ⅱ组(P <005)、Ⅳ组与Ⅱ组(P<0.01)、Ⅳ组与Ⅲ组(P<0.01)之间的肿瘤内MVD比较均有统计学差异。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗： 重组腺病毒介导以KDR为启动子的胸苷激酶系统能够通过血管靶向性地有效抑制肿瘤的生长。     

白血病细胞周期蛋白G 基因mRNA的表达及其临床意义

目的〖HT5"SS〗： 探讨细胞周期蛋白G基因（Cyclin G）mRNA在白血病患者中的表达及其临床意义。〖HT5W〗方法：〖HT5"SS〗采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)对129例白血病患者和10例正常人白细胞的Cyclin G mRNA表达进行分析。〖HT5W〗结果：〖HT5"SS〗(1)急性白血病（AL）组和慢性白血病（CL）组Cyclin G mRNA的表达值明显高于正常对照组（P<0.05）。但AL组和CL组的差异无显著性（P>005）。(2)AL、AML、     

RNA干扰对Aurora-A在人卵巢癌细胞中表达及细胞增殖的影响

目的： 〖HT5"SS〗探讨应用RNA干扰技术沉默AuroraA基因表达,研究其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 设计合成两对特异性针对AuroraA基因的Oligo siRNA,转染至SKOV3细胞中,采用RTPCR和Western blot检测AuroraA mRNA和蛋白表达情况,同时利用MTT试验和流式细胞仪观察转染后细胞增殖抑制和凋亡情况。〖HT5W〗结果：〖HT5"SS〗转染Oligo siRNA后,SKOV3细胞AuroraA mRNA表达受抑制(P<0.01),蛋白表达水平降低;细胞增殖的抑制率和细胞凋亡率明显增高(P<005, P<0.01)。〖HT5W〗结论： 〖HT5"SS〗体外合成的特异性针对AuroraA基因的Oligo siRNA对卵巢癌细胞株SKOV3中AuroraA基因表达和细胞增殖均有明显抑制作用,为进一步研究Auroraa基因的功能提供了实验基础。