高糖对大鼠腹膜间皮细胞HMGB-1/RAGE信号通路表达的影响

目的探讨在体外高糖对大鼠腹膜间皮细胞(PMC)高迁移率族蛋白B-1(HMGB-1)、糖基化终产物受体(RAGE)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法胰蛋白酶消化法用于PMC的原代培养和传代,经鉴定第三代细胞用于实验并随机分组:正常对照组;不同浓度葡萄糖组(1.5%、2.5%、4.25%);不同时间组:2.5%LPS作用于PMC 24、36、48 h。用RT-PCR法检测RAGE mRNA的表达,Western印迹法检测RAGE蛋白的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养上清液中HMGB-1和TGF-β1的蛋白表达。结果 1高浓度葡萄糖能显著上调PMC RAGE mRNA和蛋白的表达(P0.05),且呈时间浓度依赖,RAGE表达增加;2高浓度葡萄糖刺激PMC HMGB-1、TGF-β1蛋白表达显著高于正常对照组(P0.05),且随刺激时间延长,均表达增加,与RAGE表达趋势一致;3HMGB-1及其配体RAGE可能参与诱导PMC TGF-β1的表达。结论 HMGB-1/RAGE信号通路参与了高糖所致腹膜损伤的病理生理过程,并可能通过上调TGF-β1参与腹膜纤维化的发生。     

高糖和抗生素对大鼠腹膜间皮细胞表达PAI和TGF—βmRNA的影响

为探讨腹膜硬化的发生机制，采用腹膜间皮细胞培养、纤维蛋白平板方法和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术观察了不同浓度葡萄糖和抗生素庆大霉素与头孢唑啉钠对大鼠腹膜间皮细胞纤溶酶原激活物抑制物（ＰＡＩ）产生和转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ表达的影响。结果表明腹膜间皮细胞可表达ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ和产生活性ＰＡＩ；培养１２小时，１１．２ｍｍｏｌ／Ｌ的高渗葡萄糖、庆大霉素和头孢唑啉钠可增强腹膜间皮细胞ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ的表达和增加活性ＰＡＩ的分泌；培养至２４小时，１１．２ｍｍｏｌ／Ｌ的高渗葡萄糖继续诱导腹膜间皮细胞产生活性ＰＡＩ增加，庆大霉素既可以继续引起ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ表达增加，而且还可以使腹膜间皮细胞活性ＰＡＩ产生增加。同时在培养２４小时，１１．２ｍｍｏｌ／Ｌ的高渗葡萄糖和庆大霉素与头孢唑啉钠均可引起腹膜间皮细胞ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达增加。结果提示：１１．２ｍｍｏｌ／Ｌ的高渗葡萄糖和庆大霉素与头孢唑啉钠可以导致间皮细胞表达ＰＡＩ和ＴＧＦ－β上调，在腹膜硬化发生机制中起着重要作用。     

高糖与活性氧对人腹膜间皮细胞p21^Wafl表达的影响

目的：研究不同浓度葡萄糖、活性氧（过氧化氢）、抗氧化剂（丙酮酸等）对体外培养人腹膜间皮细胞（HPMC）细胞周期的影响及其机制。方法：以体外培养的HPMC作为研究对象，分别给予不同浓度的葡萄糖、过氧化氢、丙酮酸作为刺激因素，观察细胞形态，用流式细胞仪检测细胞周期改变，测定C1期细胞比例。用半定量逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）检测细胞周期调控蛋白kp21^Wafl mRNA水平，用细胞免疫组化方法检测p21^Wafl蛋白水平，分析细胞周期改变机制。结果：高糖、过氧化氢可以引起细胞形态呈肥大、衰老改变，细胞周期分析提示G1期细胞比例升高，即细胞停滞于G1期；加入抗氧化剂（丙酮酸）后，G1期细胞比例下降。高糖、外源性过氧化氢可以使p21表达增加（基因与蛋白水平），在高糖培养液中加入抗氧化剂，可以使p21表达下降。结论：高糖、外源性过氧化氢皆可使细胞周期发生停滞，且高糖增加外源性过氧化氢的毒性作用；高糖的这种作用与内源性活性氧致p21^Walf的表达增加有关，使用抗氧化剂可使之减轻。     

高糖与活性氧对人腹膜间皮细胞p21Waf1表达的影响

目的 :研究不同浓度葡萄糖、活性氧 (过氧化氢 )、抗氧化剂 (丙酮酸等 )对体外培养人腹膜间皮细胞(HPMC)细胞周期的影响及其机制。　 方法 :以体外培养的HPMC作为研究对象 ,分别给予不同浓度的葡萄糖、过氧化氢、丙酮酸作为刺激因素 ,观察细胞形态 ,用流式细胞仪检测细胞周期改变 ,测定G1期细胞比例。用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测细胞周期调控蛋白p2 1Waf1mRNA水平 ,用细胞免疫组化方法检测p2 1Waf1蛋白水平 ,分析细胞周期改变机制。　 结果 :高糖、过氧化氢可以引起细胞形态呈肥大、衰老改变 ,细胞周期分析提示G1期细胞比例升高 ,即细胞停滞于G1期 ;加入抗氧化剂 (丙酮酸 )后 ,G1期细胞比例下降。高糖、外源性过氧化氢可以使p2 1表达增加 (基因与蛋白水平 ) ,在高糖培养液中加入抗氧化剂 ,可以使p2 1表达下降。　 结论 :高糖、外源性过氧化氢皆可使细胞周期发生停滞 ,且高糖增加外源性过氧化氢的毒性作用 ;高糖的这种作用与内源性活性氧致p2 1Waf1的表达增加有关 ,使用抗氧化剂可使之减弱     

高糖对人腹膜间皮细胞间粘合连接复合体的影响

目的 :研究高糖对人腹膜间皮细胞 (HPMC)间粘合连接复合体表达的影响 ,探讨腹膜透析 (PD)中腹膜间皮层完整性损伤的机制。　 方法 :采用人腹膜间皮细胞株HMrSV 5为研究对象。细胞分为 3组 :①正常对照组 (含 5 5mmol/LD 葡萄糖 ) ;②高糖组 (含 140mmol/LD 葡萄糖 ) ;③高渗组 (含 5 5mmol/LD 葡萄糖及 134 5mmol/L甘露醇 ) ,各组分别于 6、12、2 4、48h进行实验。采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblot及免疫荧光等方法检测粘合连接复合体主要成分E Cadherin、β Catenin基因及蛋白水平表达 ,采用免疫荧光技术观察高糖对细胞Actin微丝骨架的影响。　 结果 :①高糖致细胞脱落呈时间依赖效应 ;②高糖引起E Cadherin、β CateninmRNA及蛋白表达下降 ,免疫荧光显示二者在HPMC细胞膜上的表达明显减低 ,呈不连续分布 ;③高糖使Actin微丝骨架解体 ;④高渗透压组未见上述效应。　 结论 :高糖使HPMCE Cadherin、β Catenin基因及蛋白表达下降 ,微丝骨架解体 ,从而损害细胞间粘合连接复合体的形成 ,造成腹膜间皮完整性的损害。     

腹膜透析液对大鼠腹膜间皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的观察不同浓度葡萄糖腹膜透析液(dextrose)、艾考糊精腹膜透析液(icodextrin)对大鼠腹膜间皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR1、VEGFR2、sF lt-1合成的影响。方法分离、培养SD雄性大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs),第二代细胞用于实验研究。实验分为5组,分别以不同腹膜透析液[1.50%dextrose(低糖组)、2.50%dextrose(中糖组)、4.25%dextrose(高糖组)、7.50%icodextrin组(糊精组)]进行刺激培养,无血清DMEM为阴性对照(对照组)。RT-PCR法检测VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2、sFlt-1 mRNA表达,Western印迹法检测RPMCs的VEGFR1、VEGFR2蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中VEGF及sFlt-1表达。结果各组均见VEGFR1、VEGFR2、sFlt-1 mRNA和蛋白表达。在核酸和蛋白水平,中糖组、高糖组VEGFR1表达明显高于低糖组、糊精组及对照组(P0.01,P0.05);中糖组、高糖组VEGFR2表达显著低于低糖组、糊精组及对照组(均P0.01);低糖组VEGFR2蛋白表达显著低于对照组(P0.01)。在核酸水平,中糖组、高糖组VEGF、sFlt-1表达明显高于对照组(P0.01);RPMCs培养上清液中,VEGF、sFlt-1蛋白表达强弱趋势与RT-PCR一致。结论正常培养的RPMCs表达VEGFR1、VEGFR2及sFlt-1。腹膜透析液,尤其是高浓度dextrose,能明显上调VEGF、VEGFR1及sFlt-1的表达,但下调VEGFR2的表达,提示其可通过调节VEGF受体从而调节VEGF系统,这可能是导致长期腹膜透析过程中腹膜血管增生的机制之一。icodextrin的生物相容性可能优于高浓度dextrose。     

法舒地尔对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响

目的:观察Rho激酶(Rho-kinase)抑制剂法舒地尔对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响.方法:通过每日腹腔注射4.25％腹膜透析液建立腹膜透析大鼠模型.大鼠随机分为4组:正常对照组;腹膜透析模型组;法舒地尔5 mg组;法舒地尔10 mg组.4周后杀检大鼠,取脏层腹膜组织,分别用RT-PCR、Western杂交或免疫荧光方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,同时用Western杂交检测Rho-kinase活性. 结果:法舒地尔呈剂量依赖模式显著抑制Rho-kinase活性.与正常组比较,腹膜透析模型组TGF-β1蛋白及mRNA表达显著上调,转分化指标α-SMA蛋白及mRNA表达明显上调(P＜0.01),E-cadherin蛋白及mRNA显著下调(P＜0.01),腹膜超滤量显著降低.法舒地尔干预后,TGF-β1蛋白及mRNA表达呈剂量依赖模式下调,α-SMA蛋白及mRNA表达呈剂量依赖模式下调,E-cadherin蛋白及mRNA表达呈剂量依赖模式上调,腹膜超滤量显著改善. 结论:Rho-kinase激活在腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化中起重要作用.法舒地尔可通过抑制TGF-β1信号通路,阻止腹膜间皮细胞转分化,从而改善腹膜透析大鼠模型腹膜结构和功能.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠腹膜间皮细胞表达纤维连接蛋白的影响及其作用机制

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠腹膜间皮细胞（RPMCs）纤维连接蛋白（FN）表达的影响，以及有丝分裂原活化蛋白激酶通路（mitogen—activated protein kinases，MAPKs）在AngⅡ诱导FN表达中所起的作用。方法：酶消化法于大鼠大网膜中分离间皮细胞，以AngⅡ刺激后，分别应用realtime．PCR及Western印迹法检测FN的表达情况。应用Western印迹法观察AngⅡ（1μmol／L）对MAPK通路的主要信号传导蛋白ERK1／2、p38MAPK和JNK活化的影响，并分别应用ERK1／2、p38MAPK和JNK的抑制剂以及AngⅡ的Ⅰ型受体（AT1）阻断剂进行干预，Western印迹法观察上述抑制剂对AngⅡ诱导FN表达的影响。结果：AngⅡ促进RPMCs表达FN，活化ERK1／2和p38MAPK信号传导通路，而不影响JNK通路的活化。ERK1／2通路抑制剂PD98059及AT1受体阻断剂（losartan）可明显抑制AngⅡ诱导的FN表达增加，而p38MAPK和JNK抑制剂对FN的表达无影响。结论：AngⅡ促进RPMCs合成FN增多。AT1受体和ERK1／2通路介导了AngⅡ诱导RPMCs表达FN。     

高糖波动对单核细胞表达细胞因子的影响及机制

观察血糖波动条件下,单核细胞表达NF-KB的变化,用抗氧化剂α-硫辛酸研究单核细胞损伤机制.结果显示波动性高血糖较恒定性高血糖对人外周血单核细胞具有更强的损伤效应,其机制可能是由于氧化应激水平增高引起NF-KB含量升高,NF-KB上调细胞趋化蛋白1水平,后者可能会介导单核细胞沉积于血管内壁引起血管病变.     

脂多糖对原代大鼠腹膜间皮细胞IL-1β和IL-6表达的影响

目的研究原代腹膜间皮细胞(PMCs)对不同浓度脂多糖(LPS)刺激的反应效果,探讨术后腹腔粘连体外细胞最佳造模方法。方法运用不同浓度LPS于不同时间点刺激PMCs,ELISA法检测各组细胞上清液中白介素(IL)-1β、IL-6蛋白含量,qRT-PCR检测IL-1β、IL-6 mRNA水平,扫描电镜观察LPS刺激前后PMCs的活性变化情况。结果 ELISA测得各组大鼠PMCs培养上清液IL-1β和IL-6浓度随着培养时间推移和LPS浓度增加而表现出明显差异(P0.01),尤其以24 h、10μg/ml为LPS最佳刺激时间和最佳刺激浓度;qRT-PCR实验中LPS最佳刺激时间为24 h,但是最佳刺激浓度为5μg/ml;正常PMCs扫描电镜下表面被丰富的微绒毛覆盖;LPS刺激后PMCs剥脱、肿胀明显,具有细胞间隙,偶见基底膜。结论LPS能够刺激大鼠PMCs诱发炎症损伤,进一步放大炎症反应,模拟术后腹腔粘连微环境,作为术后腹腔粘连体外细胞模型。     

硫化氢对高糖腹膜透析液诱导大鼠腹膜结构和功能损伤的影响

目的:观察硫化氢(H_2S)对高糖腹膜透析液诱导大鼠腹膜结构和功能损伤的影响。方法:SD大鼠随机分为四组(对照组、单独H_2S组、模型组及治疗组)。第28天行腹膜平衡试验;取壁层腹膜组织观察腹膜结构变化,检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达情况。检测大鼠腹膜间皮细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、α-SMA、E-钙黏素(E-cadherin)和TGF-β1 mRNA表达情况。结果:与对照组相比,模型组腹膜增厚伴血管增生、炎症细胞浸润增加,且间皮下α-SMA、Col-Ⅲ及TGF-β1表达显著增加(P0.05);与模型组相比,治疗组腹膜形态明显改善,α-SMA、Col-Ⅲ及TGF-β1表达显著减少(P0.05)。与对照组相比,模型组超滤量显著减少,腹膜通透性显著升高,治疗组大鼠腹膜转运功能显著改善(P0.05)。2.5%葡萄糖透析液刺激腹膜间皮细胞12h使肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA表达显著增加、上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达显著减少,同时MCP-1、IL-6、ICAM-1和TGF-β1 mRNA表达显著增加(P0.01);透析液中加入100μmol/L、300μmol/L NaHS可显著抑制上述炎症因子及纤维化因子表达(P0.01)。结论:在腹膜透析液中加入外源性H_2S可显著改善腹膜结构及功能损伤,并可部分逆转腹膜间皮细胞转分化,进而减少炎症因子和纤维化因子合成。     

乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞功能的影响

目的研究乳酸盐腹膜透析液(L-PDF)对人腹膜间皮细胞(HPMC)功能的影响.方法分离HPMC作体外培养,以MTT试验测定HPMC增殖程度;采用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素-8(IL-8)和纤维连接蛋白(FN)的蛋白质水平;逆转录多聚酶链反应检测IL-8mRNA的表达;用Lowry方法检测细胞培养液内总蛋白.结果L-PDF抑制HPMC的增殖,且呈时间依赖关系.L-PDF刺激HPMC后,培养液中IL-8和FN蛋白质水平明显增高,并上调IL-8mRNA的表达.在恢复培养期间,若加用脂多糖(10mg/L)、金黄色葡萄球菌肠毒素(10mg/L)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α,10×10     

普罗布考对大鼠心脏微血管内皮细胞RAGE表达的影响

目的 观察普罗布考对大鼠心脏微血管内皮细胞糖基化终末产物（AGEs）受体（RAGE）表达的影响.方法 体外原代培养心脏微血管内皮细胞.空白组加无血清培养液培养,AGEs组加AGEs（100 mg/L）孵育,普罗布考（5、10 μmol/L）组用普罗布考（5、10 μmol/L）分别作用细胞30 min后,加入AGEs（100 mg/L）再孵育24 h.各组分别作用于心脏微血管内皮细胞24h,免疫组化法和Western blot法检测RAGE蛋白表达.结果 AGEs组与空白组RAGE蛋白表达比较,P＜0.05;普罗布考10μmol/L组与AGEs组比较,P＜0.05.结论 普罗布考能够抑制AGEs诱发的心脏微血管内皮细胞RAGE的表达,从而抑制氧化应激的发生.     

腹膜透析液对小鼠腹膜间皮细胞超微结构影响的比较研究

作者通过模拟ＣＡＰＤ动物实验，应用扫描电镜观察比较了不同的腹透液对正常小鼠腹膜超微结构的影响，实验结果发现，随着注药时间延长，实验小鼠腹膜间皮细胞游离面微绒毛与间皮细胞的损害逐渐加重；三组腹透液对腹膜间皮影响是不相同的，Ｂａｘｔｅｒ腹透液对腹膜间皮损伤较严重，其中又以醋酸盐腹膜液为甚，注药后２１ｄ，乳酸盐和醋酸盐组均可见轻至中度的纤维素性粘连形成，停止注药后１０ｄ，腹膜间皮损伤基本恢复正常。本文结     

法舒地尔对高糖培养人腹膜间皮细胞RhoA/Rock1、ROS、GSH-Px及TGF-β1表达的影响

目的:探讨法舒地尔(FAS)对高糖培养的人腹膜间皮细胞(HMrSV)RhoA/Rock1、活性氧(ROS)、GSH-Px及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:将人腹膜间皮细胞株HMrSV分为对照组(葡萄糖浓度为0)、高糖组(葡萄糖浓度分别为1.5%、2.5%和4.25%)和FSA干预组(2.5%葡萄糖+FAS 12.5、25和50μmol/L)。检测方法:Q-PCR法和Western印迹法检测RhoA和Rock1的表达;化学荧光法检测ROS的含量;ELISA法检测GSHPx和TGF-β1的含量。结果:与对照组相比,高糖组可呈浓度依赖方式上调RhoA、Rock1、ROS及TGF-β1的表达,下调GSH-Px的表达;与2.5%高塘组相比,FAS干预可明显下调RhoA、Rock1、ROS及TGF-β1的表达,上调GSH-Px的表达。结论:FAS可能通过抑制Rho激酶活性抑制高糖培养的人腹膜间皮细胞发生氧化应激反应。     

间皮细胞在腹膜抗菌防御中的作用

目的探讨间皮细胞在腹膜抗菌防御中的作用。方法采用体外细胞培养模型，以间接免疫荧光技术和细胞瑞氏染色方法，观察了细菌脂多糖（ＬＰＳ）、金葡菌肠毒素和白细胞介素－１（ＩＬ－１）诱导大鼠腹膜间皮细胞粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的表达，及其对金葡菌粘附和单核细胞表面吞噬作用的影响。结果腹膜间皮细胞表达ＩＣＡＭ－１粘附分子，用ＬＰＳ、金葡菌肠毒素和ＩＬ－１刺激培养６小时可增加间皮细胞ＩＣＡＭ－１的表达，同时可增加细菌对间皮细胞的粘附率。单核细胞对粘附间皮细胞表面的调理与未调理细菌均能很好地吞噬，两者吞噬率比较无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结论炎症介质和炎性细胞因子通过刺激间皮细胞ＩＣＡＭ－１的表达增加，增强间皮细胞对细菌的粘附，为单核细胞吞噬粘附其表面的细菌提供一个适宜的环境     

红菇对高糖高脂大鼠肝功能的影响

目的探讨红菇对高糖高脂大鼠肝功能的影响。方法将60只大鼠随机分为A、B、C、D、E、F组各10只。A组仅饲喂基础饲料,连续6周;其余5组则饲喂高糖高脂饲料3周建立高糖高脂大鼠模型,其后B组饲喂基础饲料,C组继续饲喂高糖高脂饲料3周,D、E、F组则分别饲喂含红菇粉0．3、0．4、0．5g／kg的高糖高脂饲料3周。6周后以心脏取血法采血检测各组肝功能各项指标。结果高糖高脂模型大鼠肝功能指标与A组比较均明显异常;饲喂红菇粉3周的D、E、F组肝功能明显改善,与C组有显著差异（P〈0．01）。结论红菇粉能有效减轻肝损伤,改善肝功能。