逆转录病毒介导的小鼠IL-23基因在小鼠结肠癌细胞中的表达及其抗肿瘤活性

目的：获得表达小鼠IL-23(mIL-23)基因的小鼠结肠癌细胞株。方法：应用逆转录病毒载体，将mIL-23基因导入小鼠结肠癌细胞株Colon26，经G418筛选后获得表达mIL-23的阳性细胞克隆(Colon26／IL-23)。用PCR和RT—PCR检测目的基因的表达，用ELISA法检测mIL-23的产生及mIL-23诱导的小鼠脾细胞IFN-γ的产生，用MTT比色法检测Colon26／IL-23细胞和Colon26细胞的体外增殖，将Colon26／IL-23细胞接种于BALB／c小鼠的右侧背部皮下，观察其致瘤性结果：建立了可表达mIL-23基因的小鼠结肠癌细胞株。分泌至培养上清中的IL-23，可诱导小鼠脾细胞产生IFN-γ在体外Colon26／IL-23细胞的生长与Colon26细胞无明显不同，但其在体内的致瘤性下降，具有抗瘤作用。结论：Colon6／IL-23细胞可分泌IL-23并证明其具有抗瘤活性。     

IL-27基因修饰Eca109细胞的体外体内凋亡作用的研究

目的 研究IL-27基因转染人食管癌Eca109细胞株后在体外和体内对细胞凋亡的影响,从而探讨其抗肿瘤作用及其机制.方法 基因转染的方法 建立稳定表达IL-27基因的人食管癌细胞株(Eca109/IL-27),观察Eca109/IL-27细胞生长情况、移植瘤的生长情况及生存期,用流式细胞技术检测体外和体内的细胞凋亡率和Fas的表达,采用Western blot检测Survivin 的表达.结果 成功建立稳定转染的Eca109/IL-27细胞株,RT-PCR示Eca109/IL-27细胞中有mIL-27 p28和EBI3亚基基因表达,而Eca109/LXSN和Eca109细胞中未见表达(P＜0.01),IL-27基因转染不影响人食管癌细胞株的体外生长和细胞凋亡,Fas和Survivin的表达无变化(P＞0.05);但体内Eca109/IL-27移植瘤生长较Eca109和Eca109/LXSN滞后,生存时间延长(P＜0.05),肿瘤组织细胞凋亡率增高(P＜0.05),细胞表面Fas的表达增加(P＜0.05),Survivin表达降低(P＜0.05).结论 IL-27在体外不影响细胞凋亡,体内可能通过降低Survivin的表达,上调Fas的表达,诱导细胞凋亡产生抗肿瘤作用.     

新型细胞因子IL-24真核表达载体的构建、表达及其对肿瘤的抑制作用

目的：构建IL-24真核表达质粒，并研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法：采用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-C1-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体外转染HIC细胞，再经激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察其表达，用MTT法检测HIC细胞的体外增殖能力，用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡。小鼠皮下接种转染IL-24真核表达质粒或空载的B16细胞观察其体内致瘤性的变化。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的生长抑制作用。结果：pEGF-C1-IL-24转染HIC细胞后，LSCM可观察到其表达。IL-24基因转染的HIC细胞体外增殖能力明显受到抑制．G2-M期细胞比例增高，细胞被阻滞在G2-M期。转染IL-24的B16细胞体外致瘤率降低。与对照组相比．IL-24基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制（P〈0.05）。结论：IL-24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。瘤内注射pEGFP-C1-IL-24可抑制肿瘤生长，具有明显的抗肿瘤作用。     

IL-18基因转染对小鼠卵巢癌OVHM体外增殖及体内成瘤的影响

目的:分析转染IL-18基因后,对小鼠卵巢癌OVHM细胞体外增殖、凋亡及体内成瘤的影响,初步探讨IL-18基因转染治疗卵巢癌的应用价值.方法:将逆转录病毒携带的小鼠IL-18基因成功转染至OVHM(OVHM/IL-18),以空载体转染的OVHM(OVHM/LXSN)和野生型(OVHM)作为对照.分别采用MTT、FCM检测体外培养细胞的增殖、凋亡及周期分布.于裸鼠皮下分别接种细胞,观察各组种植瘤生长情况,计算成瘤率;RT-PCR检测瘤组织中IL-18 mRNA表达;FCM和电镜分析肿瘤细胞增殖、凋亡状况.结果:3组细胞的体外增殖未见明显差异,均无明显凋亡现象,增殖指数、细胞周期分布均无明显差异(均P>0.05).接种后,3组裸鼠的成瘤率相同,但OVHM/IL-18组成瘤时间较晚,随瘤龄增长肿瘤生长缓慢,瘤组织中IL-18 mRNA阳性表达.OVHM/IL-18组裸鼠种植瘤细胞可见典型的凋亡现象,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,增殖指数明显降低,凋亡指数明显增高(P<0.01).结论:IL-18基因成功转染后,虽对体外卵巢癌细胞无直接毒性,但可能在体内借助非直接杀伤的其他途径,通过阻断细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡等抑制体内成瘤.     

小鼠白细胞介素12基因转染及其在黑色素瘤细胞B16F10中的表达

目的:探索小鼠白细胞介素12(mIL-12)基因在小鼠黑色素瘤B16F10细胞中的表达。方法:应用DNA重组技术将mIL-12基因插入pcDNA3.1真核表达载体中, 通过电穿孔转染B16F10细胞, 筛选出阳性细胞克隆后, 应用PCR、RT-PCR及Westernblot技术检测mIL-12基因在B16F10细胞中的整合及表达。结果:在DNA、mRNA及蛋白质3个水平均证实mIL-12基因已转染到B16F10细胞中并表达。结论:mIL-12基因可成功地转染体外培养的B16F10细胞并表达, 为进一步研究IL-12基因修饰的肿瘤细胞的基因瘤苗奠定了基础。     

转染IL-27基因的食管癌细胞在裸鼠体内的抗肿瘤作用

目的将小鼠IL-27基因转染人食管癌细胞株,研究其在裸鼠体内的抗肿瘤活性.方法以逆转录病毒为载体,将IL-27基因转染人食管癌细胞株Eca109,获得表达IL-27的阳性细胞克隆(Eca109/IL-27),用ELISA法检测细胞IL-27的分泌.将Eca109/IL-27移植裸鼠腹腔,观察瘤细胞的成瘤性和裸鼠的生存期.用RT-PCR检测IL-27基因在裸鼠体内瘤组织中的表达,用流式细胞仪检测CD204表达、细胞周期和细胞凋亡变化.结果成功建立了表达IL-27基因的人食管癌细胞株Eca109/IL-27,该细胞培养上清中IL-27含量为(137.73±7.00)pg/ml,而Eca109/LXSN和Eca109细胞培养上清中未检出IL-27(P＜0.01),但Eca109/IL-27与Eca109/LXSN和Eca109细胞周期和细胞凋亡率无明显差异(P＞0.05).将Eca109/IL-27、Eca109/LXSN 和Eca109细胞分别接种裸鼠腹腔15天后,各组裸鼠均于腹腔形成多数瘤结节,Eca109/IL-27组明显少于Eca109/LXSN 和Eca109细胞组(P＜0.05);Eca109/IL-27组裸鼠的生存期(35天时均无死亡)明显长于Eca109/LXSN 和Eca109细胞组[分别为(23.33±1.52)、(24.00±1.37)天](P＜0.01);Eca109/IL-27组肿瘤组织中有p28和EBI3亚基基因表达,而Eca109/LXSN 和Eca109细胞组瘤组织中未见表达(P＜0.01);其CD204表达水平、细胞凋亡率也明显高于接种Eca109/LXSN与Eca109细胞组(P＜0.05);G0/G1和G2/M期细胞增多,S期细胞明显减少,与接种Eca109/LXSN和Eca109细胞组比较均有显著差异(P＜0.05).结论IL-27可于体内促进肿瘤细胞凋亡,阻滞细胞周期发展,提高CD204的表达,延长生存期,发挥抗肿瘤免疫活性.     

小鼠白细胞介素21 cDNA的克隆及真核表达质粒的构建

目的：克隆小鼠自细胞介素2l(IL-21)基因，构建真核表达质粒，用以进行肿瘤的基因治疗。方法：用RT-PCR法。从ConA活化的小鼠T细胞中扩增IL-21 cDNA。克隆人哺乳动物细胞高效表达质粒pcDNA3．1中，构建重组mIL-21真核表达质粒。重组体用载体上的通用引物和PCR下游引物为测序引物，鉴定克隆的正确性。将已鉴定的重组质粒用脂质体法转染Sp2／0细胞，用RT-PCR法鉴定转染细胞中IL-21基因的表达，用MTT比色法检测表达的mIL-21诱导的NK细胞杀伤活性的增强。结果：正确构建了重组真核表达质粒pcDNA3．1／mIL-21，并在转染的细胞中检测出IL-2l的表达，表达的mIL-21可在体外增强NK细胞的杀伤活性：结论：成功地构建了重组真核表达质粒pcDNA3．1／mIL-21，为进一步在肿瘤动物模型中进行IL-21基因治疗及疗效观察奠定了基础.     

转染IL-17基因的小鼠结肠癌细胞体内抗肿瘤机制研究

目的:研究IL-17体内抗肿瘤的作用及其机制,为IL-17基因疫苗进入临床提供实验依据。方法:利用已建立的稳定转染小鼠IL-17全长基因的小鼠结肠癌细胞(C26/pc DNA3.1-IL-17)及相应的对照细胞(C26/pc DNA3.1、C26)建立荷瘤动物模型,观察小鼠的成瘤性、肿瘤生长情况及小鼠生存期的变化,检测各组小鼠脾细胞增殖情况、脾NK细胞杀伤活性;及脾淋巴细胞中Th1、Th2、Th17、Treg细胞特征性细胞因子和/或转录因子的表达;检测各组小鼠肿瘤浸润的淋巴细胞(TIL)的增殖反应情况;及肿瘤浸润巨噬细胞中M1特征性细胞因子IL-10和M2特征性细胞因子IL-12的表达。结果:将C26/pc DNA3.1-IL-17细胞接种小鼠体内后,荷瘤小鼠的肿瘤生长速度、体积均明显小于C26/pc DNA3.1细胞组及C26细胞组(P0.05),接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的雄性小鼠移植瘤明显小于雌性小鼠移植瘤体积(P0.05),各组小鼠生存时间没有明显区别(P0.05);接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠脾细胞较接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠脾细胞增殖能力强(P0.05),与正常小鼠脾细胞增殖能力比较无明显统计学差异(P0.05),接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠脾细胞增殖能力较正常小鼠脾细胞增殖能力降低(P0.05);在效靶比为40∶1和20∶1时,接种三种细胞的小鼠NK杀伤率较正常小鼠均降低(P0.05),在效靶比40∶1时,接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞比接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠的脾淋巴细胞的NK杀伤率明显增强(P0.05),效靶比10∶1时,各组之间没有明显统计学差异(P0.05);接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠脾淋巴细胞较接种C26、C26/pc DNA3.1的小鼠脾淋巴细胞表达更高水平的IFN-γ(Th1的特征性细胞因子)、IL-4(Th2特征性细胞因子)、GATA-3(Th2特征性转录因子)、ROR-γt(Th17特征性转录因子)、IL-10(Treg特征性细胞因子)mRNA(P0.05);接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠TIL较接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠TIL增殖能力强(P0.05),接种三种细胞的小鼠TIL增殖能力较正常组小鼠均降低(P0.05);各组荷瘤小鼠肿瘤浸润巨噬细胞中IL-10和IL-12 mRNA表达在各组荷瘤小鼠之间均无统计学差异(P0.05)。结论:IL-17在小鼠体内具有明显的抗肿瘤作用,其抗肿瘤作用与增强机体免疫应答有关。     

小鼠白介素18与白介素1β转化酶共表达载体的构建及真核表达

为了制备白介素18前体(proIL-18)和白介素1β转化酶(ICE)共表达肿瘤疫苗,从小鼠脾细胞克隆proIL-18和ICE基因,构建小鼠proIL-18和ICE共表达质粒(pIRES-proIL-18-ICE),经测序证实序列正确后,脂质体法转染小鼠淋巴细胞白血病细胞系L1210,筛选稳定表达细胞株。转染细胞RT-PCR及转染细胞培养上清IL-18ELISA检测结果表明,肿瘤细胞可以表达并分泌成熟的IL-18。培养上清的IL-18可显著诱导ConA刺激的小鼠脾细胞产生IFN-γ,表明其具有功能活性。生长曲线和细胞周期实验证实与未转染的肿瘤细胞相比,转染空载体pIRES、pIRES-proIL-18、pIRES-ICE、pIRES-proIL-18-ICE基因对肿瘤细胞生长增殖无明显影响。IL-18白血病瘤苗的成功制备表明,利用pIRES载体在同一肿瘤细胞中共表达的proIL-18和ICE能够完全模拟生理过程,在真核细胞内有效酶切,分泌出成熟并有功能活性的IL-18;构建的IL-18瘤苗为进一步评价其在小鼠体内的抗白血病效果奠定基础。     

稳定转染小鼠IL-17全长基因的结肠癌细胞株的建立及基因转染对C26细胞的影响

目的建立稳定转染小鼠IL-17基因全长的小鼠结肠癌C26细胞株并进行鉴定。方法脂质体法将携带小鼠IL-17基因全长的真核表达载体pc DNA3.1转染小鼠结肠癌细胞C26,经G418筛选出稳定表达IL-17的细胞株,镜下观察细胞形态,RTPCR法、免疫荧光法检测目的基因和蛋白的表达;划痕修复实验检测细胞的迁移能力,MTS法检测细胞体外增殖能力。结果获得1株稳定表达IL-17的C26细胞,C26/IL-17细胞高表达IL-17基因及蛋白,证明该细胞可表达IL-17;IL-17高表达可以增强C26细胞的迁移能力,减弱该细胞的体外增殖能力。结论成功建立了稳定转染IL-17基因的小鼠结肠癌细胞株。     

IL-21基因治疗小鼠H22细胞皮下移植肝癌模型的效果评价

用已构建的mIL-21/pcDNA3.1重组质粒对H22细胞建立的小鼠肝癌模型进行基因治疗,观察IL-21对小鼠体内抗肿瘤免疫应答的影响及对小鼠生存的影响。采用BALB/c小鼠左腋皮下注射腹水型肝癌细胞株H22细胞建立小鼠移植肝癌模型,给荷瘤小鼠瘤体内注射mIL-21/pcDNA3.1进行基因治疗,MTT比色法检测IL-21对荷瘤小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性的影响,观察治疗后荷瘤小鼠生存情况及肿瘤生长情况的改变。病理检测结果显示,成功建立了小鼠移植型肝癌模型,MTT比色法显示基因治疗后小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性显著升高,荷瘤小鼠肿瘤生长速度减慢,生存期显著延长。IL-21基因治疗肝癌荷瘤小鼠可显著提高荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫应答水平,抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠生存期。     

Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达鼠IL-4受体拮抗体蛋白的研究

目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达鼠IL-4受体拮抗体 (mIL-4RA)蛋白.方法 PCR方法扩增小鼠IL-4 C118截断型基因,定向克隆入转移质粒pFastBacHTB中,转化感受态DH10Bac细胞,在DH10Bac细胞内重组pFastBacHTB与杆粒发生转座.筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染sf9昆虫细胞株,获取完整重组杆状病毒.反复感染sf9细胞,扩增病毒同时表达目的 蛋白;用ELISA方法进行蛋白鉴定并初步定量.结果 经核苷酸序列测定及PCR方法,鉴定成功获得含mIL-4RA基因的重组杆粒;通过杆粒转染后sf9细胞所表现出来的细胞病变,推断成功转染并获得重组杆状病毒;最后ELISA方法初步定量sf9细胞培养上清中mIL-4RA蛋白表达量为(1.15±0.12) ng/mL.结论 本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达mIL-4RA蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础,同时亦为其他蛋白质的真核表达提供了方法学的参考.     

小鼠分泌型IL-1β真核表达载体的构建及其表达

目的:构建小鼠经典分泌途径IL-1β真核表达载体,转染至Hepa1-6细胞,并测定其分泌表达水平.方法:引物延伸获得小鼠AFP信号肽序列(sAFP),RT-PCR扩增获得小鼠IL-1β成熟蛋白基因序列(mIL-1β),SOE方法将两段序列拼接形成融合基因,与pIRES2-EGFP质粒重组构建分泌型真核表达载体pIRES2-EGFP-smIL-1β,并将其转染至Hepa1-6细胞,RT-PCR检测融合基因的表达水平,'Western blot检测细胞内mIL-1β蛋白的表达,ELISA法测定培养上清及细胞裂解液中mIL-1β水平.结果:经SOE法拼接获得的融合基因与CenBank中登录的序列一致,RT-PCR检测显示该载体能够在Hepal-6细胞中表达融合基因mRNA,细胞培养上清中mIL-1β的分泌水平明显上升,而胞质中的mIL-1β无明显变化.结论:成功地构建了经典途径分泌的mIL-1β重组表达载体,该载体可以在Hepa1-6细胞培养上清中有效分泌具有生物活性的mIL-1β.     

逆转录病毒介导IL-27基因对胰腺癌细胞在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制

目的:探讨IL-27基因在人胰腺癌Aspc1细胞中的抗肿瘤作用及免疫机制。方法:以逆转录病毒为载体,采用基因转染的方法用G418梯度筛选法建立转染IL-27基因的Aspc1细胞,用RT-PCR检测其基因导入,ELISA法检测IL-27的分泌。将Aspc1/IL-27、Aspc1/LXSN和Aspc1细胞接种于裸鼠皮下,观察成瘤性、移植瘤的生长情况。10天时取3组裸鼠脾脏,用ELISA法检测3组小鼠脾细胞在Aspc1诱导下IFN-γ、TNF-α和IL-12的产生情况,乳酸脱氢酶法检测脾细胞杀伤活性。结果:成功建立稳定转染的Aspc1/IL-27细胞株,ELISA检测Aspc1/IL-27细胞培养上清中IL-27的分泌量为(121.56±6.29)pg/ml,而在Aspc1/LXSN细胞和Aspc1细胞的培养上清中未检出IL-27。IL-27基因转染组裸鼠皮下结节生长速度明显慢于接种空载体转染组及未转染组;接种Aspc1/IL-27细胞的裸鼠脾细胞可产生较水平的IFN-γ、TNF-α和IL-12等细胞因子,与接种Aspc1/LXSN细胞和Aspc1细胞组裸鼠的脾细胞相比明显增高(P0.01),接种Aspc1/IL-27细胞的裸鼠脾细胞杀伤活性显著性升高(P0.01)。结论:转染IL-27基因的裸鼠胰腺癌细胞所分泌的IL-27具有生物学活性,通过增强细胞免疫功能在裸鼠体内发挥抗肿瘤作用。     

B7-H4基因对SKOV3细胞生长功能的影响

目的： 初步探讨B7-H4基因对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长和致瘤性的影响。方法：RT-PCR法扩增编码基因, 构建真核表达载体PEGFP-N1/B7-H4,以脂质体为载体将重组质粒PEGFP-N1和PEGFP-N1/B7-H4分别导入SKOV3细胞中,筛选建立高表达的细胞株。MTT法绘制体外培养细胞生长曲线,将转染前后的肿瘤细胞分别接种于SCID小鼠的腹部皮下观察其致瘤性。结果：成功构建了人B7-H4真核表达载体,SKOV3/B7-H4细胞高表达B7-H4,转染后肿瘤细胞体外生长速度明显增快。SKOV3/B7-H4细胞在小鼠体内的致瘤性较SKOV3/neo细胞和野生型SKOV3细胞明显升高。结论： B7-H4基因导入细胞后在体外和体内具有明显加快肿瘤生长的作用,可作为肿瘤基因治疗的靶向基因。     

pVAX1-IL-4/SYN-B融合质粒的构建及表达

目的构建含人白介素4(human IL-4,hIL-4)基因与人α-突触核蛋白(humanα-synuclein,hα-syn)B细胞表位基因的真核表达质粒,并研究其在COS-7细胞内的表达。方法RT-PCR扩增人IL-4基因后,通过基因重组技术将其与α-synuclein蛋白B细胞表位基因融合,在两者之间引入柔性短肽(GSGGGSG)。将融合产物克隆到真核表达载体PVAX1上,利用电泳和测序鉴定融合质粒的大小、方向和序列。采用脂质体转染法,将融合质粒转入COS-7细胞中,用Western blotting技术检测其表达。结果电泳和测序结果与预期一致,并命名为PVAX1-IL-4/SYN-B;质粒转染COS-7细胞株成功,并且能在细胞内高效表达。结论成功构建PVAX1-IL-4/SYN-B融合质粒,并在哺乳动物COS-7细胞中高效表达,为研究融合质粒在帕金森病动物模型中的免疫效果奠定了基础。     

AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组载体的构建及其在肝癌H22细胞中的表达

目的:构建小鼠甲胎蛋白(AFP)启动子调控的小鼠IL-1β(mIL-1β)重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 并检测其在真核细胞内的表达.方法:重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)获得含小鼠AFP最小启动子及巨细胞病毒(CMV)增强子区(ECMV)的嵌合基因, 将其克隆至pIRES2-EGFP载体, 构建肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP.RT-PCR扩增小鼠IL-1β基因, 克隆至pafpIRES2-EGFP, 进行酶谱分析及DNA序列测定.利用jetPEI法将其分别转染H22细胞和YAC-1细胞, 倒置相差荧光显微镜下观察, RT-PCR分析mIL-1β表达水平的变化.结果:SOE-PCR方法获得长度为537 bp的AFP和ECMV嵌合基因, 克隆后经限制性酶切和DNA序列分析确认成功构建了小鼠肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP.PCR扩增小鼠IL-1β基因后将其克隆至pafpIRES2-EGFP, 获得AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 细胞转染分析证实, 该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性高效表达, RT-PCR检测可见转染细胞中mIL-1β水平明显升高.结论:成功构建真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达IL-1β.     

小鼠白介素-12基因转染对EL细胞在小鼠体内成瘤性的抑制作用

目的探讨逆转录病毒(RV)载体介导的小鼠白介素12(mIL-12)融合基因转染,对低免疫原性的小鼠T细胞淋巴瘤细胞EL4体内生长的影响.方法用共培养法导入基因,以PCR法检测基因的导入.以脾细胞增殖法测定mIL-12的生物学活性.观察导入mIL-12基因的肿瘤细胞EL4/12于小鼠皮下接种后的成瘤性.对预先接种野生型肿瘤细胞EL4的小鼠,用60Co照射的肿瘤疫苗EL4/12接种于瘤周,观察瘤苗的抗肿瘤作用等.结果在EL4/12细胞中,用PCR可特异地检测到mIL-12p35和P40亚基的cDNA片段.5×105EL4/12细胞48h表达的mIL-12达(10.2±3.2)ng.EL4/12细胞在小鼠体内的成瘤性明显下降.EL4/12瘤苗治疗组约50%的小鼠可长期无瘤生存,而对照组小鼠则在短期内全部成瘤死亡.部分长期生存的小鼠产生了有效的抗肿瘤免疫,能耐受野生型肿瘤细胞的二次攻击.与对照组相比较,疫苗治疗组中其余小鼠的成瘤时间延迟(P＜0.01),小鼠存活时间延长(P＜0.01);死亡时肿瘤体积小(P＜0.05),形成的肿瘤有完整包膜,瘤周和肿瘤内部有较多的淋巴细胞和浆细胞浸润等.结论转染mIL-12基因能抑制EL4肿瘤细胞的成瘤性.mIL-12基因修饰的肿瘤疫苗对野生型肿瘤细胞具有治疗作用.     

小鼠白介素—12基因转染对EL4细胞在小鼠体内成瘤性的抑制作用

目的探讨逆转录病毒(RV)载体介导的小鼠白介素12(mIL-12)融合基因转染,对低免疫原性的小鼠T细胞淋巴瘤细胞EL4体内生长的影响。方法用共培养法导入基因,以PCR法检测基因的导入。以脾细胞增殖法测定mIL-12的生物学活性。观察导入mIL-12基因的肿瘤细胞EL4/12于小鼠皮下接种后的成瘤性。对预先接种野生型肿瘤细胞EL4的小鼠,用60Co照射的肿瘤疫苗EL4/12接种于瘤周,观察瘤苗的抗肿瘤作用等。结果在EL4/12细胞中,用PCR可特异地检测到mIL-12p35和p40亚基的cDNA片段。5×105EL4/12细胞48h表达的mIL-12达(10.2±3.2)ng。EL4/12细胞在小鼠体内的成瘤性明显下降。EL4/12瘤苗治疗组约50%的小鼠可长期无瘤生存,而对照组小鼠则在短期内全部成瘤死亡。部分长期生存的小鼠产生了有效的抗肿瘤免疫,能耐受野生型肿瘤细胞的二次攻击。与对照组相比较,疫苗治疗组中其余小鼠的成瘤时间延迟(P∨0.01),小鼠存活时间延长(P∨0.01);死亡时肿瘤体积小(P∨0.05),形成的肿瘤有完整包膜,瘤周和肿瘤内部有较多的淋巴细胞和浆细胞浸润等。结论转染mIL-12基因能抑制EL4肿瘤细胞的成瘤性。mIL-12基因修饰的肿瘤疫苗对野生型肿瘤细胞具有治疗作用。     

IL-2基因修饰的肿瘤细胞对小鼠体内巨噬细胞数量和功能的影响

目的探讨IL-2基因修饰的肿瘤细胞对小鼠体内巨噬细胞(Mφ)数量和功能的影响.方法应用腺病毒载体介导的小鼠IL-2基因(Ad-mIL-2)修饰CT26小鼠结肠腺癌细胞(CT26-mIL-2)后皮下接种小鼠,计数小鼠腹腔Mφ的数量,观察其吞噬功能,混合淋巴细胞反应法(MLR)测定其抗原提呈能力,MTT法检测其杀伤活性.结果 mIL-2基因修饰的CT26细胞(CT26-mIL-2细胞)皮下接种后,小鼠腹腔Mφ数量显著增加,吞噬能力明显增强,抗原提呈能力提高,并具有较强的杀伤活性.结论 CT26-mIL-2细胞分泌的IL-2能有效地激活Mφ,这可能是CT26-mIL-2细胞体内致瘤性下降的原因之一.