A型激酶锚定蛋白在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中的作用

  目的 探讨A型激酶锚定蛋白（AKAPs）在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中的作用。方法 收集生发泡期小鼠卵母细胞,显微注射Ht31或Ht31-P,观察卵母细胞减数分裂恢复情况。结果 在蛋白激酶A持续激活的情况下,Ht31注射组能促进小鼠卵母细胞减数分裂重新启动,解除蛋白激酶A引起的生发泡期阻滞,而Ht31-P对照组不能。结论 AKAPs介导的蛋白激酶A正确锚定对小鼠卵母细胞第一次减数分裂阻滞至关重要。     

Synaptotagmin1影响小鼠卵母细胞纺锤体组装和稳定

目的:确定Synaptotagmin1(Syt1)对小鼠卵细胞纺锤体组装和稳定的影响。方法:免疫荧光法检测Syt1在小鼠卵母细胞发育不同时期的亚细胞定位。用紫杉醇处理小鼠MⅠ期卵母细胞,明确Syt1与微管动力的关系。注射Syt1特定的寡聚核苷酸降调卵母细胞中Syt1的表达,免疫荧光法检测Syt1降调后卵母细胞纺锤体的形态变化、染色体异常以及中心体蛋白γ-tubulin定位变化。结果:Syt1在卵母细胞减数分裂成熟的不同发育阶段都有表达,主要集中分布皮质区和MⅠ和MⅡ期纺锤体的两极。Syt1在MⅠ和MⅡ期与中心体相关蛋白γ-tubulin共定位。紫杉醇实验发现Syt1集中定位于星体和高度集中的微管两极。降调Syt1表达后,染色体排列紊乱,纺锤体组装异常比例升高,且大多数为无极、单极或者多级纺锤体,其次有拉长纺锤体和形态各异纺锤体。并影响微管组织中心相关蛋白γ-tubulin的正确定位。结论:Syt1可能作为一种微管组织中心相关蛋白调节纺锤体的组装稳定。     

Aurora A激酶在软骨肉瘤中的表达及意义

目的 检测Aurora A激酶在软骨肉瘤组织中的表达情况,并进一步探讨其与软骨肉瘤各临床病理特征的关系及将其作为软骨肉瘤新的分子治疗靶点的可能性.方法 采用免疫组化SP法,检测软骨肉瘤（70例）和软骨瘤（40例）组织中Aurora A激酶的表达,评价Aurora A激酶的表达与软骨肉瘤临床病理参数的关系.结果 Aurora A激酶在软骨肉瘤中的阳性表达率明显高于软骨瘤,差异有统计学意义（P＜0.01）;Aurora A激酶在普通型软骨肉瘤低级别组的表达低于中高级别组的表达,差异有统计学意义（P＜0.01）;Aurora A激酶软骨肉瘤复发组和非复发组以及转移组和非转移组中的表达差异有统计相关性（P＜0.05）,与年龄、性别等临床参数无统计相关性（P〉0.05）.结论 Aurora A激酶在软骨肉瘤组织中的表达明显高于在软骨瘤中的表达,可能通过某种机制参与了软骨肉瘤的发生及侵袭和转移的过程,且与临床病理特征有相关性;检测Aurora A激酶的阳性表达有助于判断软骨肉瘤的恶性程度及有可能将其作为软骨肉瘤的分子治疗靶点.     

Aurora A与妇科恶性肿瘤发病关系的研究现状

Aurora A是参与有丝分裂的丝氨酸／苏氨酸激酶新成员,与中心体功能相关,其高表达与中心体异常、非整倍体以及染色体不稳定性之间存在很大程度的相关性,是一种癌基因,在许多肿瘤中均发现有高表达。随着Aurora A过表达可以产生非整倍体以及与肿瘤形成有关,Aurora A已经成为药物设计的一个潜在靶点,Aurora A激酶抑制剂,如VX-680代表了一种新的治疗癌症的方法。该文着重综述Aurora A与妇科恶性肿瘤发病关系的研究现状。     

端粒相关蛋白PinX1和磷酸化激酶Aurora A的相互作用

目的:鉴定端粒相关蛋白PinX1与有丝分裂期极光激酶(Aurora A)的相互作用及其功能,进一步研究PinX1调控参与细胞有丝分裂期的具体机制.方法:以pGBKT7-PinX1为诱饵对人HeLa细胞cDNA文库进行筛选,对筛选到的结果进行测序分析;构建Aurora A原核及真核表达质粒;采用免疫共沉淀及蛋白质体外沉降...     

m6A修饰调控卵母细胞及早期胚胎发育的研究进展

N6-甲基腺苷(m6 A)修饰是广泛存在的一种表观修饰,在有性生殖卵子的发育与早期胚胎成熟中发挥重要作用.m6 A修饰呈现出动态变化,m6 A及相关甲基化酶、去甲基化酶和甲基化识别酶的表达参与各种生理活动,主要在调节转录、调控相关蛋白质翻译、影响mRNA稳定性及降解等方面发挥作用.围绕m6 A修饰在生殖领域的研究大多围...     

三黄煎剂调节Aurora激酶A促进乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的?探讨三黄煎剂对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡的影响及Aurora激酶A（Aurora A）蛋白表达及功能的影响,并探讨其内在机制。方法?采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231增殖的影响。AnnexinV-FITC/PI法检测MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡率。q-PCR法检测MCF-7、MDA-MB-231细胞Aurora A、p53的mRNA表达水平。Western Blot法检测MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白的表达及Aurora A蛋白的表达。结果?三黄煎剂对MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖抑制率呈浓度梯度依赖增长（P<0.05）,给药48?h疗效好于24?h（P<0.05）,与给药72?h无统计学差异（P>0.05）。三黄煎剂能够诱导MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡,并上调c-PARP、c-Caspase 3、Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达,呈浓度梯度依赖。三黄煎剂能够下调Aurora A蛋白及mRNA的表达、上调p53蛋白及mRNA的表达。结论?三黄煎剂能够通过下调Aurora A蛋白及mRNA的表达,抑制Aurora A的生物活性,抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡。      

磷脂酰肌醇-3-激酶信号通路调控炎症介质表达机制的研究进展

炎症性疾病是临床多发常见疾病,如病原体感染引起的感染性疾病,非病原体感染引发的自身免疫性疾病,以及一些肿瘤的流行病学也与长期慢性炎症持续状态关系密切。抗炎与促炎是感染及非感染性炎症性疾病的两个对立面,两者调节的平衡与否推进着疾病的进展,最终影响疾病的结局。因此,研究疾病的促炎与抗炎平衡及其调节机制可为临床疾病的发病机制理清思路,指导疾病的诊断、治疗。     

基于生物信息学研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A基因与宫颈癌的关系及调控机制

目的 采用生物信息学方法分析细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)基因与宫颈癌的关系,并探讨其对宫颈癌潜在的调控机制。方法 从GEO数据库中下载数据集GSE7803、GSE64217和GSE63514,并使用GEO2R软件筛选宫颈癌组织和正常组织之间的差异性表达基因,得到CDKN2A基因在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达情况,并利用GEPIA数据库验证CDKN2A基因在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达水平。通过DAVID在线工具针对差异性表达基因进行通路富集分析;利用STRING数据库和Cytoscape软件筛选与CDKN2A基因编码蛋白相互作用密切的蛋白。利用UALCAN在线工具分析CDKN2A基因表达与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系,以及宫颈癌组织中CDKN2A基因启动子甲基化水平。利用TIMER数据库分析CDKN2A基因表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的相关性。利用ENCORI和mirDIP软件分析与CDKN2A基因有结合靶点的miRNA。结果 共获得347个差异性表达基因,其中CDKN2A基因为上调基因;GEPIA数据库验证结果提示CDKN2A基因在宫颈鳞状细胞癌组织组织中呈高表...     

极光激酶A表达对甲状腺髓样癌切除术后患者生化治愈的影响作用研究

背景 甲状腺髓样癌（MTC）组织中极光激酶A(Aurora A)的表达水平与患者临床病理特征及生化治愈的关系尚不明确。目的 分析MTC组织中Aurora A表达情况与患者临床病理特征的关系,进一步分析生化治愈的危险因素,明确Aurora A表达与生化治愈的相关性。方法 选取2011年2月—2019年7月于天津医科大学肿瘤医院甲状腺头颈部肿瘤科就诊住院并行肿瘤切除的MTC患者90例,收集患者的临床资料,并通过免疫组化检测患者组织Aurora A的表达水平,采用多因素Logistic回归分析MTC患者获得生化治愈的影响因素。结果 纳入患者Aurora A高表达62例,Aurora A低表达28例;40例患者实现生化治愈,18例患者出现复发。Aurora A高表达患者的性别、最大肿瘤长径、T分期、N分期、美国癌症联合委员会第8版分期指南（AJCC8th）临床分期、生化治愈情况、复发情况与Aurora A低表达患者比较,差异有统计学意义（P<0.05）。生化治愈患者的性别、病灶数量、T分期、N分期、AJCC8th临床分期、Aurora A表达情况与未生化治愈的患者比较,差异有统计学意义（...     

Aurora A、PCNA在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的:探讨Aurora A、PCNA在胶质瘤组织中的表达及两者的关系。方法:采用免疫组化SP法检测Aurora A和PCNA在80例手术切除的胶质瘤组织及10例正常脑组织标本中的表达情况。结果:Aurora A在胶质瘤组织中的阳性表达率57.5%(46/80),PCNA在胶质瘤组织中的阳性表达率65.0%(52/80),两者在正常脑组织中均未见表达。Aurora A和PCNA在高级别胶质瘤中的表达水平显著高于低级别组(P<0.01)。胶质瘤中Aurora A和PCNA的表达有显著相关性(P<0.01)。结论:Aurora A、PCNA的表达与胶质瘤的恶性程度密切相关,二者在胶质瘤中的发生、发展中有协同作用,并可以作为评价胶质瘤生物学行为的指标。     

Spatio-Temporal Expression Patterns of Aurora Kinases A,B in Mouse Zygotes during the First Mitosis

Objective To investigate the expression and localization of Aurora kinase A (AURKA) and Aurora kinase B (AURKB) in mouse zygotes during the process of the first mitosis. Methods Quantitative real-time RT-PCR and Western blotting were performed to analyze the expression of AURKA and AURKB. The subcellular location of AURKA and AURKB was studied by confocal microscopy. Results AURKA and AURKB were increasingly expressed from phase G1 and peaked at phase M. After the entrance into mitosis AURKB became the predominant form both in mRNA and protein levels. The proteins of AURKA and AURKB both distributed in the cytoplasm and were associated with nucleus during the first mitosis of mouse zygotes, with some details in different. Conclusion The expression and localization of Aurora kinases A and B was in a cell-cycle regulated manner during the process of the cleavage of mouse zygotes. This discovery will aid in future investigations on their specific roles and molecular mechanisms in the regulation of mammalian early embryonic development.     

Aurora A表达对人前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的 研究Aurora A表达增高对人前列腺癌细胞LNCaP生物学行为的影响,以了解其在人前列腺癌发生发展中的作用.方法 克隆Aurora A全长基因,将其转染入LNCaP细胞中表达,采用四唑盐(MTT)法细胞增殖实验检测Aurora A表达升高的阳性细胞生长情况,采用改良的Transwell侵袭小室方法检测细胞侵袭能力;同时与转染空质粒(pcDNA3.1)细胞和未转染细胞进行比较.结果 成功构建重组质粒pcDNA3.1-Full Length Aurora A.Aurora A高表达的LNCaP细胞增殖速度较空质粒转染细胞和未转染细胞快,培养3 d后LNCaP-Aurora A组细胞较pcDNA3.1质粒转染细胞及未转染的LNCaP细胞增多,差异有统计学意义(P＜0.05).在体外细胞移动实验中,LNCaP-Aurora A组细胞也较另两组细胞表现出更强的穿膜能力(P＜0.01).结论 Aurora A表达增高与人前列腺癌细胞的恶性表型具有密切相关性,Aurora A在人前列腺癌发生发展中可能发挥重要作用.     

Aurora A表达与人前列腺癌细胞对紫杉醇敏感性的相关性研究

目的 探讨前列腺癌细胞中Aurora A表达与细胞对紫杉醇敏感性的相关性,明确Aurora A表达是否影响紫杉醇对前列腺癌的治疗效果.方法 以激素非依赖性前列腺癌细胞Du145为研究对象,通过转染Aurora A全长基因得到稳定高表达Aurora A 的细胞系Du145-Aurora A,细胞用不同浓度紫杉醇处理,用MTT细胞增殖实验检测细胞生长抑制率,用流式细胞仪分析细胞凋亡情况,比较Aurora A表达上调后细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化.同时,用核酶技术使细胞Aurora A表达下调,检测Aurora A表达下调后细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化.结果 Aurora A表达上调使紫杉醇对细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均降低(P＜0.01),而Aurora A表达下调使紫杉醇对细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均增高(P＜0.01).结论 人前列腺癌细胞中Aurora A表达与细胞对紫杉醇敏感性具有相关性,抑制Aurora A可望提高紫杉醇对前列腺癌的治疗效果.     

RNA干扰抑制Aurora A表达对胶质瘤U251细胞化疗敏感性的影响

目的:采用RNA干扰技术抑制人脑胶质瘤U251细胞中Aurora A基因的表达,研究其对U251细胞化疗敏感性的影响。方法:设计并合成特异性针对Aurora A基因的siRNA,转染至U251细胞中,采用RT-PCR和Western blot检测Aurora A mRNA和蛋白表达情况,同时利用MTT试验和流式细胞仪检测在化疗药物尼莫司汀(ACNU)作用下转染Aurora A siRNA前后U251细胞增殖及凋亡情况的变化。结果:转染Aurora A siRNA后,U251细胞Aurora A mRNA表达受到抑制(P<0.01),蛋白表达水平降低。ACNU对转染Aurora A siRNA后U251细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.01),同时在ACNU作用下转染后U251细胞的凋亡率也显著增加(P<0.05)。结论:体外合成的针对Aurora A基因的特异性siRNA成功的抑制了U251细胞中Aurora A基因的表达,并能提高胶质瘤细胞的化疗敏感性。     

人源极光激酶A在毕赤酵母和MCF-7细胞中的表达及纯化

目的：构建人源极光激酶A（AURKA）真核表达载体,检测其在毕赤酵母X33和MCF-7细胞中的表达及纯化。方法：将双酶切PCR扩增的目的基因与真核表达载体连接,构建重组质粒。电转法转染重组质粒,筛选后采用SDS-PAGE和Western blotting法检测AURKA蛋白的表达,Ni-NTA柱法纯化表达的蛋白;放射自显影法检测AURKA的生物活性;细胞计数法检测转染重组质粒后MCF-7细胞增殖情况。结果：2种重组质粒经PCR均扩增出1212 bp目的基因,表明真核表达载体构建成功。重组AURKA蛋白相对分子质量约为50000,且可磷酸化其底物组蛋白H3,表明重组AURKA具有活性。与转染空质粒和野生型MCF-7细胞比较,转染AURKA 24 和48 h后MCF-7活细胞数量明显增加。结论：AURKA在毕赤酵母和MCF-7细胞中成功表达和纯化,且其过表达可促进细胞增殖。     

蛋白激酶A对精子活力的影响

蛋白激酶是一类重要的激酶,在信号转导中主要作用有两个方面:其一是通过磷酸化调节蛋白质的活性;其二是通过蛋白质的逐级磷酸化,使信号逐级放大,引起细胞反应。蛋白激酶种类繁多,本篇重点介绍蛋白激酶A在男性不育方面,特别是对精子活力的影响。