miR-760对胃癌细胞系MGC-803增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-760对胃癌细胞系MGC-803增殖、迁移和侵袭的影响。方法 Real-time PCR分析50例胃癌组织(C)及其癌旁(N)中miR-760的表达水平;用pc DNA3.1载体构建过表达miR-760的重组质粒(pc DNA-miR-760),实现miR-760在MGC-803细胞中的过表达;分别用CCK-8法、Transwell和划痕实验检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果与癌旁对照组相比,36例(72%)胃癌组织中出现miR-760的表达下调;过表达miR-760能显著抑制MGC-803细胞的迁移和侵袭能力(P0.05),但对其增殖影响不大。结论 miR-760的表达下调可能与胃癌的进展有关,过表达miR-760可以抑制胃癌MGC-803细胞的迁移和侵袭。     

hsa-miR-21-5p/ZNF367分子轴通过PI3K/Akt通路影响胃癌细胞的增殖和迁移

目的探讨ZNF367通过PI3K/Akt通路抑制胃癌(GC)细胞的增殖和迁移,并初步探讨其作用分子机制。方法收集2015年8月–2018年10月上海市第八人民医院普外科手术切除的GC组织(非坏死部分)和相邻癌旁组织(距肿瘤组织3 cm)标本46例,同时选取正常人胃黏膜上皮细胞GES1及GC细胞系MGC-803和MKN-45。采用qRT-PCR、Western blot实验检测ZNF367和hsa-miR-21-5p(mi R-21-5p)在组织和细胞系中的表达情况,进行Kaplan-Meier生存分析得出总生存期;利用脂质体LipofectamineTM 2000转染寡核苷酸片段mi RNA-NC、miR-21-5pmimic和miR-21-5pinhibitor至MGC-803细胞,通过CCK8法和划痕实验检测细胞的增殖和迁移能力;采用双荧光素酶报告载体系统验证ZNF367和miR-21-5p的作用靶点,采用qRT-PCR、 Westernblot实验检测miR-21-5pmimic和miR-21-5pinhibitor转染MGC-803细胞中ZNF367、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin以及PI3K/Akt通路中p-PI3K和p-Akt的表达情况。结果 ZNF367在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达水平分别显著低于癌旁组织和GES-1细胞(P0.01),且在MGC-803细胞中表达水平最低,而miR-21-5p的表达正相反;在MGC-803细胞中,OE-ZNF367和miR-21-5p inhibitor转染组的细胞增殖和迁移能力显著低于对照组,而si RNA-ZNF367和miR-21-5pmimic转染组的细胞增殖和迁移能力显著高于对照组;生物信息学和荧光素酶活性实验结果表明ZNF367与miR-21-5p具有直接靶向关系;qRT-PCR、Western blot实验结果表明在miR-21-5p inhibitor转染组中,E-cadherin的表达是显著提高的(P 0.01),而N-cadherin、Vimentin、p-PI3K和p-Akt的表达是显著下降的(P0.01);在miR-21-5pmimic转染组中,结果相反(P 0.01)。结论 hsa-miR-21-5p/ZNF367分子轴通过调控PI3K/Akt通路抑制EMT过程,从而影响胃癌细胞MGC-803的增殖和迁移。     

DADS通过miR-222抑制人胃癌细胞系的增殖与侵袭

目的通过miRNA途径研究二烯丙基二硫(DADS)的抑瘤机制,以进一步阐明DADS抑制胃癌细胞增殖与转移的分子机制。方法将胃癌细胞系MGC-803细胞分为DADS处理组、miR-222模拟物组、miR-222抑制物组和阴性对照组;分别采用0、25、50、100、200和400μmol/L DADS处理MGC-803细胞;分别将miR-222模拟物、miR-222抑制物和scramble转染MGC-803细胞。qRT-PCR检测MGC-803细胞中miR-222表达;MTT法和Transwell侵袭实验检测MGC-803细胞增殖与侵袭能力;蛋白质印迹试验检测MGC-803细胞中TIMP3蛋白表达。结果 DADS可呈剂量依赖性下调MGC-803细胞中miR-222表达(P0.05);DADS能抑制MGC-803细胞的增殖与侵袭,外源高表达miR-222能促进MGC-803细胞的增殖与侵袭,而miR-222抑制物与DADS共同处理,MGC-803细胞的增殖与侵袭抑制作用最为显著(P0.05);DADS可下调MGC-803细胞中TIMP3蛋白的表达,外源高表达miR-222能上调MGC-803细胞中TIMP3蛋白的表达,而miR-222抑制物与DADS共同处理,MGC-803细胞中TIMP3蛋白的表达下调最为显著(P0.05)。结论 DADS通过下调miR-222的表达,靶向TIMP3抑制胃癌细胞的增殖与侵袭。     

FTO在胃癌组织中的表达降低及其对细胞系MGC-803功能的影响

目的探讨RNA甲基化相关蛋白FTO在胃癌中的表达变化情况,及其对胃癌细胞功能的影响。方法用realtime PCR检测54例胃癌组织及对应癌旁组织中FTO的表达;用质粒(p CMV6-FTO)实现FTO在胃癌细胞系MGC-803中的过表达;通过增殖实验、划痕试验和Transwell实验,检测FTO对MGC-803细胞功能的影响。结果 FTO mRNA在胃癌组织的表达水平显著低于癌旁组织(P0.05),且其表达与胃癌样本的临床分期密切相关(P0.05);在MGC-803细胞系中过表达FTO,可抑制胃癌细胞增殖(P0.05)、抑制细胞迁移(P0.05)和侵袭(P0.05)。结论 FTO在胃癌组织中低表达,并且抑制胃癌细胞系的增殖、迁移和侵袭,可能与胃癌发生发展密切相关。     

miR-33a-5p 靶向SMAD7 对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外 基质降解的影响

目的:探究miR-33a-5p靶向SMAD7对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外基质降解的影响。方法:生物信息学预测靶向关系,荧光素实验进一步验证靶向关系,RT-PCR检测miR-33a-5p和SMAD7的表达,CCK-8法检测VSMC的增殖,流式检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、 Caspase-9、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结果:PDGF-bb处理能够增强血管平滑肌细胞增殖,抑制miR-33的表达;miR-33a-5p与SMAD7在3′UTR区存在结合位点,miR-33a-5p直接靶向作用于SMAD7,且miR-33a-5p过表达抑制SMAD7的表达;miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb诱导的血管平滑肌细胞增殖、下调增殖标记蛋白PCNA和Ki67表达,促进细胞凋亡、上调凋亡标记蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达,降低伤口愈合率、抑制细胞迁移,下调MMP-2和MMP-9的表达(P0.01)。结论:miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质的降解,并促进凋亡。     

miR-551b-3p在胃癌组织中低表达并抑制胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-551b-3p在胃癌中的表达变化情况,及其对胃癌细胞功能的影响。方法用real-time PCR的方法检测60例胃癌组织及其对应的癌旁组织中miR-551b-3p的表达量,使用miR-551b-3p模拟物(miR-551b-3p mimic)转染胃癌细胞系HGC-27,CCK-8法检测细胞增殖;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell法检测细胞侵袭。结果 1)miR-551b-3p在胃癌癌症组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.05)。2)过表达miR-551b-3p mimic可以明显减弱胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭能力。结论 miR-551b-3p在胃癌组织中低表达,并且抑制胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭,可能与胃癌发生发展密切相关。     

circAGFG1/miR-487a-3p轴调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的实验研究

目的 探讨circAGFG1对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响和作用机制。方法 RT-qPCR检测31例卵巢癌患者的癌组织和对应的癌旁组织中circAGFG1和miR-487a-3p表达。体外培养SKOV3细胞,分别转染circAGFG1小干扰RNA、miR-487a-3p模拟物或抑制剂后,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell法对细胞迁移和侵袭进行检测,Western blot对细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9、Vimentin和E-cadherin蛋白表达进行检测。双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1和miR-487a-3p调控关系。结果 circAGFG1在卵巢癌组织中表达升高,miR-487a-3p表达降低。下调circAGFG1或上调miR-487a-3p阻碍SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT。circAGFG1在SKOV3细胞中靶向负调控miR-487a-3p表达。敲减miR-487a-3p逆转下调circAGFG1对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的影响。结论 下调circAGFG1可能通过靶向上调miR-...     

miR-99a-5p通过靶向mTOR抑制前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长

目的 探讨miR-99a-5p靶向mTOR对前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。方法 CCK-8法检测miR-99a-5p对DU-145细胞增殖的影响;miR-99a-5p mimics转染前列腺癌DU-145细胞,通过实时定量PCR检测miR-99a-5p和mTOR mRNA表达,Western blot检测miR-99a-5p过表达后DU-145细胞mTOR蛋白的表达;通过生物信息学网站预测mTOR是否为miR-99a-5p潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证,CCK-8和肿瘤异种移植裸鼠模型验证miR-99a-5p通过靶向mTOR对前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。结果 转染miR-99a-5p mimics抑制DU-145细胞体外增殖活性,降低mTOR mRNA和蛋白的表达,miR-99a-5p结合mTOR mRNA 3’UTR区域,且miR-99a-5p通过靶向mTOR抑制前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长。结论 miR-99a-5p通过靶向调控mTOR抑制前列腺癌细胞的增殖及肿瘤生长。     

MicroRNA-125b在胃癌组织中的高表达并促进胃癌细胞系HGC-27和MGC-803的增殖

 目的 探讨microRNA-125b (miR-125b)基因在胃癌患者组织中的表达改变情况,及其对胃癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法 使用real-time PCR方法检测miR-125b在40例临床诊断为胃癌患者的癌组织与癌旁对照组织中的表达情况。随后使用miR-125b mimic转染胃癌细胞系HGC-27和MGC-803,确认过表达成功后,分别使用CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测过表达miR-125b对细胞增殖和凋亡的影响。结果 证实在胃癌患者组织中miR-125b的表达水平显著高于癌旁对照组（P<0.01）。在胃癌细胞系HGC-27和MGC-803中过表达miR-125b后,细胞增殖明显增加：转染72h,HGC-27（scramble组：1.632±0.09,mimic组：2.473±0.08）,MGC-803（scramble组：1.603±0.05,mimic组：2.554±0.07））,同时细胞凋亡也受到抑制。结论 miR-125b可能作为癌基因在胃癌中发挥作用,并对细胞增殖和凋亡具有显著影响。     

胃癌中MCU的表达及对胃癌细胞转移的作用

目的探讨线粒体钙单向转运蛋白(mitochondrial calcium uniporter, MCU)在胃癌组织中的表达以及对胃癌细胞转移的影响。方法采用免疫组化SP法检测60例原发性胃癌和癌旁组织中MCU的表达;采用免疫荧光法和Western blot法检测20例新鲜胃癌组织及癌旁组织中MCU的表达。采用CCK-8实验检测MCU诱导剂(Spermine)对人胃癌细胞(MGC-803)增殖的影响。应用Transwell和细胞划痕实验检测对照组、Spermine组、siRNA MCU组对MGC-803细胞侵袭和迁移能力的影响。根据不同分组,干预48 h,通过线粒体膜电位检测钙离子,Western blot法检测MCU蛋白的表达水平。结果胃癌组织中MCU表达水平显著高于癌旁组织。细胞实验结果显示,Spermine对MGC-803细胞增殖的影响呈剂量依赖性。Spermine显著增加MGC-803细胞迁移和侵袭能力,siRNA MCU组显著降低细胞侵袭和迁移的细胞数量。线粒体膜电位结果表明,MCU调控胃癌细胞线粒体膜电位钙离子的水平。siRNA MCU组显著降低HIF-1α、TGF-β和增加E-cadherin蛋白的表达。结论 MCU在胃癌组织中高表达并促进胃癌细胞侵袭和迁移,对HIF-1α和TGF-β表达具有调控作用。     

微小RNA-181a-5p靶向PTEN对人白血病HL-60细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-181a-5p对白血病HL-60细胞增殖和侵袭的影响,并初步分析其机制。方法体外培养人白血病HL-60细胞,将miR-181a-5p抑制物转染白血病HL-60细胞,MTT法检测各组HL-60细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组HL-60细胞的侵袭能力。实时定量PCR和Western blot检测各组细胞miR-181a-5p和PTEN的表达,双荧光素酶报告基因实验分析miR-181a-5p和PTEN的靶向关系。结果 MTT和Transwell实验结果显示,转染miR-181a-5p抑制物后,HL-60细胞的增殖和侵袭能力下降（P<0.05）,miR-181a-5p的表达下降,PTEN的表达上升（P<0.05）。双荧光素酶实验表明PTEN是miR-181a-5p的靶基因。结论 抑制miR-181a-5p使白血病细胞HL-60的增殖和侵袭能力下降,其机制可能与上调PTEN表达有关。     

miR-216a-5p通过JAK2靶向抑制肝癌细胞的增殖和侵袭

目的明确miR-216a-5p在调控肝细胞癌(HCC)中的生物学作用及其可能机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测92例HCC患者的肿瘤组织及对应癌旁组织中miR-216a-5p的表达情况。并采用CCK8和Transwell试验检测miR-216a-5p对HCC细胞增殖和侵袭能力的影响。采用荧光素酶、蛋白质印迹和qRT-PCR检测肝细胞癌中miR-216a-5p的表达与JAK2表达的相关性。结果发现miR-216a-5p在HCC中的表达显著降低,并与多种临床病理特征(肿瘤多样性、组织学分化、巴塞罗那分期)相关。低表达miR-216a-5p的HCC患者预后不良。双荧光素报告系统分析证实JAK2是miR-216a-5p的直接下游靶基因。并且过表达JAK2抵消了miR-216a-5p对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制能力。结论 miR-216a-5p可能是一种新的潜在的肝癌治疗靶点。     

miR-133a-3p 通过抑制氧化还原因子1 抑制肝癌细胞恶性生物学行为

目的:通过多种实验途径探讨miR-133a-3p通过调节氧化还原因子1(Ref-1)对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:收集2017年2月～2018年12月来本院就诊的肝癌手术患者的癌组织和癌旁相邻正常组织标本,用qRT-PCR检测miR-133a-3p在癌组织和癌旁相邻正常组织中以及在肝癌细胞系HepG2、Huh-7、SK-Hep1、SMMC-7721和肝正常细胞Hep-3B中的表达;构建miR-133a-3p-mimics(miR-mimics组、miR-NC转染质粒组和正常对照组(Control),qRT-PCR检测转染前后miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验检测HepG2细胞转染前后增殖能力变化;细胞划痕和Transwell实验分别检测转染前后HepG2细胞的迁移和侵袭能力变化;RNA转录组测序检测HepG2细胞转染前后转录组RNA表达差异并作通路富集分析;qRT-PCR检测筛选RNA-seq中RNA表达差异较大的基因;qRT-PCR和Western blot检测Ref-1在HepG2细胞转染前后中的表达。免疫组化和qRT-PCR分别检测Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中表达;最后HepG2细胞同时转染了miR-mimics和Ref-1 miR-inhibitors,进行联合干预,随后CCK-8、细胞划痕和Transwell分别检测了联合干预后细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。结果:miR-133a-3p在肝癌患者癌组织中的表达显著低于癌旁组织,同时其在肝癌细胞HepG2中的表达最低;qRT-PCR结果表明miR-mimics可有效促进miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验结果显示miR-133a-3p过表达后可以显著抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为;RNA-seq结果显示HepG2转染前后Ref-1的表达差异最大;qRT-PCR和Western blot结果显示HepG2转染成功后,Ref-1表达随miR-133a-3p的过表达而降低。免疫组化和qRT-PCR结果显示Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达均显著高于阴性对照组;联合干预后HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学抑制作用更加强烈。结论:miR-133a-3p可能通过抑制Ref-1表达从而抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。     

miR-149-5p/PANX1轴对垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探究miR-149-5p对垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用及可能机制。方法 qRT-PCR检测垂体瘤组织及正常垂体组织中miR-149-5p表达;将miR-149-5p模拟物转染垂体瘤细胞,Edu实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;生物信息学分析PANX1 mRNA 3′UTR上miR-149-5p的潜在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证;qRT-PCR和Western blot检测转染miR-149-5p模拟物后垂体瘤细胞PANX1表达;转染miR-149-5p模拟物后,Edu实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果 miR-149-5p在垂体瘤组织中下调;过表达miR-149-5p抑制垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭;miR-149-5p靶向结合PANX1并抑制其表达;过表达PANX1逆转了过表达miR-149-5p对垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-149-5p抑制PA细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向抑制PANX1表达有关。     

特殊富含AT 序列结合蛋白1 在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

目的:研究特殊富含AT序列结合蛋白1(SATB1)在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响。方法:免疫组化法检测30例胃癌组织、淋巴结组织及癌旁组织中SATB1的表达; RT-PCR及Western blot检测胃癌细胞株MGC-803和正常胃黏膜永生化细胞GES-1中SATB1的mRNA和蛋白的含量;电转染技术将真核表达质粒pc DNA3. 1-His-SATB1(HisSATB1)、载体质粒pc DNA3. 1(His-N)、沉默质粒p PLK+Puro-SATB1 shRNA(sh-SATB1)、沉默载体质粒p PLK+Puro(sh-N)转染入MGC-803细胞,24 h后Western blot检测各组细胞中SATB1、AKT、p-AKT的表达; CCK8检测细胞增殖活性。结果:SATB1在胃癌组织、转移淋巴结组织及MGC-803细胞中的表达水平显著升高(P0. 05)。sh-SATB1组MGC-803细胞中SATB1的蛋白表达显著降低,细胞增殖活性、AKT、p-AKT蛋白表达均显著降低(P0. 05); His-SATB1组MGC-803细胞中SATB1蛋白表达水平显著升高,细胞增殖活性增强,AKT、p-AKT蛋白表达均显著升高(P0. 05)。结论:SATB1在胃癌组织及细胞中高表达,SATB1可促进胃癌细胞的增殖,该效应可能是通过调控AKT合成及激活PI3K/AKT信号通路实现的。     

miR-130a-3p 通过调控 PDK1 影响肝癌细胞糖代谢的研究

目的 探讨 miR-130a-3p 通过靶向糖代谢关键酶 PDK1 对肝癌细胞糖代谢以及增殖迁移的影响, 为肝癌的诊断及治疗提供新的方向。 方法 qRT-PCR 技术检测肝癌的临床组织和细胞中 miR-130a-3p 的表 达, 克隆形成、 CCK-8、 Transwell 和细胞划痕实验检测细胞的增殖和迁移; Western 印迹检测相关蛋白的表 达; 乳酸检测试剂盒, ATP 检测试剂盒和 PDH 活性检测试剂盒分别检测细胞中乳酸的生成、 ATP 的生成和 PDH 的活性; 双荧光素酶报告基因实验验证 miR-130a-3p 与 PDK1 3′UTR 靶向结合。 结果 在肝癌组织和 细胞中 miR-130a-3p 呈低表达, 并与患者肿瘤组织的大小和 TNM 分期有关; 过表达 miR-130a-3p 能够增强 肝癌细胞中 PDH 活性, 抑制乳酸和 ATP 的生成, 从而抑制肝癌细胞的增殖和迁移; miR-130a-3p 可以靶向 调控 PDK1; 抑制 PDK1 的表达, 能够逆转 miR-130a-3p 过表达对细胞增殖和迁移能力的增强, 此外对 PDH 活 性、 乳酸和 ATP 的影响也被逆转。 结论 miR-130a-3p 通过靶向调控 PDK1 影响肝癌细胞糖酵解及恶性进展。     

miR-205-5p抑制体外胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-205-5p靶向RAS致癌家族基因2B(RAP2B)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 RT-qPCR和Western blot检测胃癌细胞AGS、MGC803、MKN-28、SGC-7901和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-205-5p和RAS致癌家族基因2B的表达。分别构建过表达miR-205-5p和抑制RAP2B表达的AGS细胞株,采用MTT法检测细胞活力;Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测RAP2B、cyclin D1、MMP-2、MMP-9、GSK-3β和β-catenin蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p对RAP2B的靶向作用。结果与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中miR-205-5p的表达显著降低,RAP2B的表达显著升高(P0.05)。过表达miR-205-5p或抑制RAP2B表达均可显著抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达(P0.05)。miR-205-5p可负性调控RAP2B的表达。结论 miR-205-5p通过靶向RAP2B抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-363-3p在胃癌组织中的表达及其对细胞系HGC-27增殖、迁移与侵袭功能的影响

目的探讨miR-363-3p在胃癌及癌旁样本中的表达差异,并分析其在胃癌细胞系中的功能。方法使用realtime PCR检测59例胃癌组织及对应癌旁组织中miR-363-3p的表达差异;使用miR-363-3p模拟物(miR-363-3pmimic)实现miRNA在胃癌细胞系HGC-27中的过表达,经增殖实验、划痕实验和Transwell实验,检测miR-363-3p对HGC-27细胞功能的影响。结果 miR-363-3p抑制胃癌细胞系HGC-27细胞增殖(P0.05,P0.01),抑制胃癌细胞系HGC-27细胞迁移(P0.001),miR-363-3p对抑制胃癌细胞系细胞的侵袭(P0.05)。结论 miR-363-3p在胃癌发生中可能起到抑癌作用,并有可能成为对胃癌治疗的一个新靶点。     

miR-129-5p靶向HMGB1对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制

为探讨miR-129-5p对卵巢癌(ovarian cancer,OC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制,qRT-PCR检测不同OC细胞株和正常人卵巢上皮细胞株中miR-129-5p的表达水平;在SKOV3细胞中分别转染miR-129-5p模拟物或无关序列,qRT-PCR检测转染后细胞中miR-129-5p的表达情况。生物信息学软件TargetScan预测miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein, HMGB1)基因靶向结合位点,qRT-PCR、Western blotting和双荧光素酶报告基因实验分析miR-129-5p对HMGB1的靶向调控作用。分别采用MTT和Transwell实验检测SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移能力。将miR-129-5p模拟物和HMGB1 siRNA或siRNA Control共转染至SKOV3细胞,MTT和Transwell实验检测其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果显示,SKOV3细胞中miR-129-5p的表达量显著低于正常人卵巢上皮细胞(P0.05)。在SKOV3细胞中转染miR-129-5p模拟物可显著提高miR-129-5p的表达量(P0.05)。miR-129-5p与HMGB1 3’非翻译区存在靶向结合位点,且过表达miR-129-5p可抑制HMGB1的表达,miR-129-5p模拟物转染后相对荧光素酶活性显著下降(P0.05)。过表达miR-129-5p后,SKOV3细胞增殖能力明显减弱,侵袭和迁移能力明显受到抑制(P0.05)。而转染HMGB1 siRNA后,miR-129-5p模拟物对SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用明显减弱(P0.05)。以上结果表明miR-129-5p通过靶向调控HMGB1的表达抑制SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移。     

RNA甲基化相关蛋白Mettl-14在胃癌中的表达及对胃癌细胞功能的影响

目的探讨RNA甲基化相关蛋白Mettl-14在胃癌样本及癌旁组织中的表达差异,并分析其对胃癌细胞系功能的调节作用。方法用实时定量PCR方法检测83例分化程度不同胃癌及对应癌旁组织中Mettl-14 mRNA水平的表达;使用RNA干扰方法敲低Mettl-14在胃癌细胞系MGC-803中的表达,通过细胞增殖实验、细胞周期实验、划痕实验和Transwell实验检测Mettl-14敲低后对MGC-803细胞功能的影响。结果与癌旁组织相比Mettl-14 mRNA的表达水平在胃癌组织显著降低;且Mettl-14 mRNA的低表达与肿瘤分级相关(P0.05);在MGC-803细胞系中敲低Mettl-14,可促进细胞增殖、细胞周期运行、细胞迁移和侵袭。结论 Mettl-14可能在胃癌发生发展中发挥抑癌基因作用,并有可能成为胃癌诊断标志物及治疗靶点。