咽拭子和外周血EB病毒核酸检测结果分析

目的：用荧光定量PCR法分别检测咽拭子和外周血标本EB病毒核酸,将结果进行统计对比,探讨其结果是否一致。方法采用实时荧光PCR法同时检测疑似感染患者和正常人的外周血和咽拭子EB病毒DNA拷贝数,将结果进行对比。结果疑似感染患者咽拭子EB病毒阳性率49.4%远高于正常人咽拭子13.3%阳性率,差异有统计学意义(P<0.05);疑似感染患者外周血EB病毒阳性率19.1%高于正常人外周血阳性率7.2%,差异有统计学意义(P<0.05);同一个患者同时取咽拭子检测EB病毒阳性率51.6%高于外周血阳性率18.3%,差异有统计学意义(P<0.05),且同一患者的咽拭子检测病毒载量(1.0×102～3.17×107)也高于外周血检测病毒载量(4.5×102～2.84×105),差异有统计学意义(P<0.05)。结论用荧光定量PCR法检测咽拭子标本阳性率较外周血阳性率更高,更能及时准确的监测EB病毒在体内的实际复制情况,且标本采集方便,值得在临床推广应用。     

儿童外周血EB病毒DNA检测的临床意义

目的探讨Epstein-Barr病毒(EB病毒)DNA检测的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应病毒核酸扩增方法,定量检测儿科以发热为主诉的患儿外周血EB病毒DNA载量。阳性病例进行临床分析和抗病毒治疗观察。结果检测522例间断和/或持续发热患儿,阳性(病毒载量≥50拷贝/ml)102例,阳性率19.5%。病毒载量最高4.44×106拷贝/ml,最低4.3×102拷贝/ml。阳性病例疾病病种较多。部分阳性病例抗病毒治疗显效。结论静脉血EB病毒DNA检测是可行的实验室诊断方法;儿科以发热为主诉的患儿可能有19.5%左右存在EB病毒感染或隐性感染。EB病毒DNA检测阳性患儿应适当抗病毒治疗并随访。     

1284例肺炎支原体快速鉴定培养及耐药性分析

目的探讨肺炎支原体(MP)快速鉴定培养和药敏试验对儿童肺炎感染早期的鉴别诊断及耐药特征,为临床合理使用抗生素提供依据。方法采用MP快速鉴定培养药敏试剂盒对1 284例急性呼吸道感染的患儿咽拭子标本进行MP快速鉴定培养与药敏试验。结果 1 284例咽拭子标本MP培养阳性294例,阳性率22.90%;其中男性患儿阳性率22.26%,女性患儿阳性率23.33%,男、女比较差异无统计学意义(P>0.05)。一年中,10～12月阳性率最高(27.97%),其次为1～3月(25.83%);MP对阿奇霉素、左氧氟沙星、加替沙星和司帕沙星的敏感率高;对罗红霉素的耐药率最高。结论 MP快速鉴定培养药敏试剂盒检测肺炎支原体感染具有检出率高、操作简便快速等优点,可作为一般实验室诊断MP感染的首选试验,为临床尽快诊断肺炎支原体感染和指导临床用药具有重要的意义。     

两种方法检测HCV-RNA的结果分析

目的比较两种方法检测丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)的结果。方法逆转录套式定性PCR(RT-nestedPCR)和荧光定量PCR对288例抗-HCV阳性的丙型肝炎患者血清标本进行HCV-RNA检测。结果288例抗-HCV阳性血清标本有248例RT-nested-PCR结果阳性,阳性率为86.1%(248/288);226例荧光定量PCR检测HCV-RNA>103拷贝/ml,检出率为78.5%(226/288),两种检测结果的阳性符合率为85.9%(219/255)。同时,29例标本定性结果阳性,定量结果<103拷贝/ml;7例标本定性结果阴性,定量结果>103拷贝/ml,差异具有统计学意义(χ2=12.25,P<0.01)。结论两种方法检测HCV-RNA,可以提高检测的灵敏度,为临床治疗提供依据。     

肺炎支原体PCR定量检测在肺炎支原体肺炎中的应用

目的 探讨肺炎支原体(MP)荧光定量PCR检测在儿童肺炎支原体肺炎(MPP)中的临床应用价值.方法 选择支原体肺炎患儿108例,分别于入院当天、治疗后7 d、14 d、21 d留取呼吸道分泌物(咽拭子或鼻咽拭子)两份,一份采用MP荧光定量PCR法检测其咽试子标本中MP DNA水平,另一份用特异性的MP快速液体培养基进行培养.结果 肺炎支原体感染早期MP培养与MP-DNA阳性率分别为86.11%和89.81%,差异无统计学意义(P>0.05),两种方法 的符合率为95.4%.用药后,MP培养的阳性率明显降低.结论 荧光定量PCR动态监测肺炎支原体病原体含量,可作为MP早期诊断和疗效观察的良好指标,作为治愈停药的可靠指标.     

实验室检查在早期诊断肺炎支原体感染中的应用350例分析

目的探讨早期诊断肺炎支原体感染的方法。方法对350例14岁以下的疑似肺炎支原体上呼吸道感染的患者进行血清金标渗滤法检测肺炎支原体抗体,同时用咽拭子标本进行肺炎支原体（MP）核酸扩增（PCR）荧光定量检测法检测标本中的肺炎支原体病原体（DNA）。结果金标渗滤法检测350例上呼吸道感染MP-IgM 76例阳性,阳性率为21.7%。MP-IgG有56例阳性,阳性率为16%。PCR法检测结果MP-DNA有150例阳性,阳性率是42.9%。结论荧光定量PCR法检测在早期诊断肺炎支原体感染优于金标渗滤法,是早期诊断肺炎支原体感染的金标准。     

小儿喘息性疾病肺炎支原体的抗体测定分析

目的：探讨肺炎支原体（MP）感染与小儿喘息性疾病的关系。方法：采用肺炎支原体（MP）核酸扩增（PCR）荧光定量检测法，检测174例喘息性疾病患儿咽拭子标本中肺炎支原体DNA。同时设无喘息症状的呼吸道感染患儿162例为对照组。结果：喘息组MP-PCR阳性51例，阳性率为29．3％，对照组阳性17例，阳性率为10．5％，两者差异有显著性（P〈0．01）。结论：小儿喘息性疾病肺炎支原体感染率高于其他呼吸道感染，对反复喘息患儿一定要注意到MP感染的可能，及时做MP-PCR检测及用大环内酯类抗生素治疗。     

咽拭子和肛拭子标本核酸检测对新型冠状病毒肺炎检测效果的比较

目的分析咽拭子和肛拭子标本核酸检测对新型冠状病毒肺炎检测效果的应用价值。方法选取2020年3月至2021年1月安阳地区医院收治的新型冠状病毒肺炎患者82例,收集患者咽拭子标本、肛拭子标本,均行核酸检测。比较不同标本的检出率,同一患者、同一时间、不同标本检测结果,咽拭子检出患者病毒核酸扩增循环阈值(Ct值)情况变化。结果肛拭子阳性检出率(24.39%,40/164)较咽拭子阳性检出率(38.41%,63/164)低,差异有统计学意义(χ^(2)=7.487,P<0.05)。同一患者、同一时间肛拭子阳性检出率(17.07%,28/82)较咽拭子(9.76%,16/82)高(χ^(2)=4.473,P<0.05)。检出组ORFlab基因、N基因与未检出组比较,差异未见统计学意义(P>0.05)。结论咽拭子和肛拭子标本核酸检测对新型冠状病毒肺炎病毒核酸扩增Ct值无明显影响,咽拭子阳性率高,但同一患者同一时间肛拭子阳性率高,临床可结合实际情况联合应用两种检测方法,以提高检验结果准确性。     

1379例儿童肺炎支原体快速培养鉴定结果分析

目的探讨肺炎支原体(MP)快速鉴定培养在儿童MP感染早期的临床诊断价值。方法采用MP快速鉴定培养基对本院2008年1月至2009年12月患急性呼吸道感染的1379例患儿咽拭子标本进行MP培养检测。结果 1 379例急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本MP培养阳性494例,总阳性率35.82%;其中男性阳性率36.48%,女性阳性率35.11%,男、女比较差异无统计学意义(P0.05)。在各年龄组中,4～8岁组阳性率最高(45.72%),2岁组最低(17.23%),两组间比较差异有统计学意义(P0.05)。1年中,11月至次年1月阳性率最高(42.62%),5～7月阳性率最低(23.74%),两组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 MP快速鉴定培养基检测肺炎支原体感染总检出率较高,结果准确、简便、快速,为临床尽快诊断肺炎支原体感染具有重要的参考价值,可作为一般实验室诊断MP感染的首选试验。     

一种快速核酸提取试剂在流感病毒检测中的应用评价

目的 探讨一种快速核酸提取试剂在流感病毒检测中的适用性及有效性。方法 选取流感病毒H3亚型、乙型Yamagata系细胞株和甲型H1N1型鸡胚株各1株,对其倍比稀释液及2015年北京市流感病原学监测阳性的67份咽拭子样本,同时采用快速提取法及离心柱提取法提取病毒核酸,经实时荧光PCR法进行定性、定量检测,检测结果采用SPSS 19.0软件进行统计分析。结果 快速提取法提取细胞培养液、鸡胚培养液中流感病毒核酸的最低检测限高于离心柱法10倍,咽拭子样本则高100倍;快速提取法提取核酸后检测到的病毒载量均低于离心柱法,其中对含有病毒量较高的毒株检测到的病毒载量低于离心柱法10倍,而对病毒量较少的咽拭子样本,则低100倍;快速提取法稳定性优于离心柱法;提取后的核酸-80℃保存10 d后冻融复测,快速提取法核酸损失量大于离心柱法。67份离心柱提取法检测阳性咽拭子样本使用快速提取法提取核酸后检测,两种方法阳性符合率总计为92.54%,其中10～102拷贝/ml组,阳性符合率为76.92%,102～103拷贝/ml组,阳性符合率为92.59%,103拷贝/ml组,阳性符合率为100%。结论 快速提取法具有稳定性高、易于操作、不易污染的优势,适用于细胞培养液、鸡胚培养液等病毒含量较高的大量样本中流感病毒核酸提取,适于检测样本量大、人手不足、设备欠缺的基层实验室使用;但-80℃冻融后核酸损失量较大,不宜反复冻融后使用;传统的离心柱法对于病毒含量较少的咽拭子样本及核酸需被反复冻融使用时具有优势。     

三种HBV DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果影响的比较

目的 研究3种核酸提取方法对黄疸、溶血和脂血标本HBV DNA荧光定量结果的影响,为进一步提高临床检验质最和改进检测技术提供理论依据.方法 采用目前临床常用的多聚糖病毒沉淀浓缩法(PEG法)、碱液直接裂解和微量核酸释放剂(Micro-Nucleic-Releaser,MNR)等3种核酸提取方法,对含有HBV的黄疸、溶血和脂血标本进行荧光定量PCR检测,研究不同标本对荧光PCR定量结果和扩增效率的影响.选择酚一氯仿提纯法作为核酸提取对照方法.结果 黄疸、溶血和脂血标本,对3种不同核酸提取方法的荧光PCR定量结果和扩增效率都产生不同程度的影响,其中完全溶血的标本对PCR扩增效率的影响最大,如定量值为4×103拷贝/ml的低拷贝完全溶血标本,MNR法测定结果为2.21×103拷贝/ml,PEG法为1.02×103拷贝/ml,碱性直接裂解法的定量值为阴性,临床自然溶血较重的标本对荧光定量检测影响较小,脂血和黄疸标本对荧光定量PCR扩增效率有明显抑制作用,但对实际定最值无明显影响;其中,MNR法在不同标本的定量重复性和荧光PCR扩增效率最好,碱液直接裂解法较差.酚.氯仿提纯法虽然获得较高的扩增效率,但存在大约有1个数量级的核酸丢失.结论 基于MNR核酸提取方法的荧光定量PCR检测,对不同的临床标本均可获得较好的扩增效率、敏感性和重复性,操作简便、快速且无核酸丢失和污染,适合临床检验应用.     

RT-PCR检测在疑似肺炎支原体感染患者中的应用研究

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肺炎支原体(MP)DNA在疑似MP感染患者中的应用价值。方法采用RT-PCR对疑似MP感染患者血清、痰、胸腔积液、鼻咽拭子、肺泡灌洗液、支气管灌洗液标本进行MP-DNA检测。结果 1 402例标本MP-DNA检测总阳性率为12.20%,血清标本检测阳性率最低,仅为2.36%,痰、肺泡灌洗液及支气管灌洗液检测阳性率较高,依次为62.96%、77.08%和88.71%。结论 RT-PCR法适用于多种类型标本MP-DNA检测,是诊断MP感染的有效方法之一。     

乙肝五项指标与荧光定量PCR检测血清HBV-DNA含量联合运用

目的 用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术定量检测血清中乙型肝炎病毒含量,并探讨其与乙肝五项(乙型肝炎病毒标志物)之间的关系.方法 现有450例血清标本,采用FQ-PCR检测(HBV-DNA)含量,再用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其乙肝五项,进行相关性分析.结果 450例血清标本中,156例HBsAg (+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)的标本,HBV-DNA的阳性为148例,阳性率为94.9％(148/156),平均病毒量为4.51×107拷贝/ml,75例HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)的标本,48例HBV-DNA阳性,阳性率为64％(48/75),平均病毒量为2.42×105拷贝/ml.12例HBsAg(+)/HBcAb(+)的标本,HBV-DNA阳性为7例,阳性率为58.0％(7/12),平均病毒量为4.26× 104拷贝/ml;20例HBsAb(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)的标本,HBV-DNA阳性为1例,阳性率为5％(1/20),平均病毒量为6.34× 103拷贝/ml;98例HBcAb(+)的标本,HBV-DNA阳性为1例,阳性率为5％(1/20),阳性率为1.2％(1/98),病毒含量为1.35×103拷贝/ml,89例乙肝五项全阴的标本,HBV-DNA阳性为1例,阳性率为1.1％(1/89),病毒含量为8.37×103拷贝/ml,测定结果表明,HBV-DNA的阳性率及平均病毒量在乙肝五项不同组合有明显差异.结论 应用FQ-PCR定量检测HBV-DNA能准确地反映体内的HBV真实感染和复制情况.     

核酸浓缩提取法实时荧光定量PCR检测血浆EBV DNA载量的性能评价

目的评价核酸浓缩提取法实时荧光定量PCR检测血浆EBV DNA载量的方法学性能。方法分析该检测系统的灵敏度、线性范围、精密度、与其他商品化的PCR检测系统相关性,并对132份临床标本进行检测分析。结果检测灵敏度为2.0×102Copies/ml;最低检测界限5.00×102Copies/ml。结果在5×102～5×106Copies/ml范围内呈线性,回归方程为y=0.245+0.945 x,r=0.998。批内CV 4.3%～7.6%,批间CV 8.9%～11.8%,总CV 9.9%～14.0%。与其他商品试剂对比检测,两者相关性良好(y=0.332+0.941x,r=0.952),结果相差在0.5 log以内。2组病例中,EB病毒急性感染组的血浆EBV DNA平均载量为8.2×104Copies/ml,EB病毒急性感染组与EB病毒既往感染组的血浆EBV DNA阳性率存在显著差异(P0.01),健康对照组未检测出血浆EBV DNA。结论核酸浓缩提取法实时荧光定量PCR检测血浆EBV DNA载量,具有准确、快速、简便的优点,适合临床实验室常规开展。     

成人社区获得性肺炎肺炎支原体感染率和耐药率的调查

目的了解北京地区成人住院社区获得性肺炎(CAP)患者肺炎支原体(MP)感染、耐药情况及健康成人的MP携带率。方法入选2014年1月至2014年12月就诊于首都医科大学附属北京友谊医院呼吸内科病房的CAP患者109例及同期同科室无呼吸道症状健康医护人员18例,采集咽拭子标本进行巢氏PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳,记录CAP患者病史、吸烟史、饮酒史、采样前是否应用喹诺酮或大环内酯类药物。结果 1住院CAP患者咽拭子标本MP阳性率为52.3%(57/109),耐药率为57.9%(33/57);无呼吸道症状健康医护人员MP阳性率为33.3%(6/18),耐药率为0;住院CAP患者与无呼吸道症状健康医护人员的MP阳性率无显著差异(χ~2=2.222,P=0.136),住院CAP患者MP耐药率明显高于无呼吸道症状健康医护人员(P=0.009)。2CAP患者MP阳性率春季高于其它季节(χ~2=15.576,P=0.001),在性别、年龄方面无明显差异。3是否有呼吸系统基础疾病、吸烟、饮酒,采样前是否应用喹诺酮类和/或大环内酯类药物对CAP患者MP阳性率和耐药率无显著影响(所有P0.05)。结论成人对MP普遍易感,北京地区成人住院CAP患者MP感染率和耐药率不容忽视,合理应用抗生素至关重要。健康成人MP携带率需进一步研究。     

580例儿童肺炎支原体早期感染咽拭子培养结果分析

目的探讨肺炎支原体(MP)快速鉴定培养基在儿童MP早期感染的临床价值。方法采用MP快速鉴定培养基对580例急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本进行MP培养。结果 580例急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本MP培养阳性199例,总阳性率34.3%;男、女比较差异无统计学意义(P>0.05)。在各年龄组中,2~4岁组、5~8岁组与小于2岁组间比较差异有统计学意义(P<0.01),9~14组与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05);每年1季度阳性率(39.2%)最高,2季度阳性率(23.1%)最低,2季度与其他组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MP快速鉴定培养基检测MP结果准确、简便、快速,可作为一般实验室诊断MP感染的首选试验。     

427例下呼吸道感染住院患儿肺炎支原体感染分析

目的 分析我院下呼吸道感染住院患儿肺炎支原体(MP)感染状况.探讨近年来MP感染在下呼吸道感染儿童中的流行规律.方法 采用实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测427例下呼吸道感染患儿呼吸道鼻咽深部分泌物、肺泡灌洗液及咽拭子MP DNA含量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清MP IgM.结果 427例下呼吸道感染患儿中MP DNA阳性206例(48.2%),MP DNA含量5.01×102～3.66×107copies/ml.≤3岁(211例)、>3～6岁(73例)和>6岁(143例)组MP感染阳性分别为55例(26.1%)、43例(58.9%)和108例(75.5%);MP DNA阳性患儿中肺炎患儿94.2%(194/206).MP全年每月阳性率>29.2%,秋冬季感染呈现高峰(阳性率>60.0%).实时定量PCR与ELISA检测法结果一致性良好(Kappa=0.798.P<0.05).结论 MP是近年来住院惠儿呼吸道感染的主要病原体,下呼吸道感染尤其是肺炎中感染率较高;随年龄增长阳性检出率逐渐上升;感染与季节密切相关.     

中国厦门地区献血者细小病毒B19感染情况研究

目的:了解中国厦门地区献血者细小病毒B19感染情况。方法:对中国厦门地区部分献血者标本进行细小病毒B19核酸检测和抗体检测,对核酸检测阳性标本进行序列测定和基因型分析。结果:在总共10 452人份献血者标本中检出6例B19核酸阳性,阳性率0.06%,阳性标本的DNA定量结果为3.59×10~2-1.07×10~4IU/ml;6例核酸阳性标本测序分析结果均为基因I型。B19-Ig M抗体阳性率为4.64%(50/1078),B19-Ig G阳性率16.79%(181/1078);B19-Ig G阳性率随年龄增加而升高(χ~2=7.964,P0.05),与性别差异无关。结论:中国厦门地区献血者细小病毒的总体感染率较其他地区偏低,但也存在一定比例的病毒血症,在今后的输血保障工作中应引起重视。     

高病毒载量慢性丙型肝炎快速病毒学应答的预测因素分析

目的探讨高病毒载量慢性丙型肝炎抗病毒治疗的快速病毒学应答(RVR)预测因素。方法对55例高病毒载量(HCVRNA>1×105拷贝/ml)慢性丙型肝炎使用聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林进行抗病毒治疗者进行前瞻性研究,聚乙二醇干扰素α-2a135μg或180μg/次,皮下注射,每周1次,利巴韦林900～1200mg/d口服,于治疗前及治疗第4周检测HCVRNA定量,4周血清HCVRNA检测不到为获得RVR。采用Logistic多元回归分析RVR的影响因素,并比较治疗前不同病毒载量患者RVR的比例。结果 RVR与基线病毒载量呈负相关(B=-1.292)。基线HCVRNA≥1×105拷贝/ml且<1×107拷贝/ml者快速应答率为86.49%(32/37),基线HCVRNA≥1×107拷贝/ml者快速应答率为61.11%(11/18),两组比较有统计学差异(χ2=4.571,P=0.043)。结论基线HCVRNA水平可作为高病毒载量慢性丙型肝炎患者聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗过程中RVR的预测因素,治疗前HCVRNA<1×107拷贝/ml者疗效较好。     

血液筛查中1例低浓度HIV窗口期标本的检测

目的采用血清学和分子生物学方法,确认1例低浓度HIV RNA窗口期献血者的感染状态。方法对血清学ELISA检测结果合格的献血者标本进行核酸检测,发现1例低浓度HIV窗口期标本,利用定性、定量核酸检测(NAT)方法,对该献血者不同时期的血液标本进行HIV病毒载量检测。结果献血者首次献血标本检测结果为血清学ELISA检测阴性,核酸定性试验为反应性,随后进行的核酸定量试验小于20拷贝/ml;对随访后采集的标本进行血清学和核酸检测,最终确认为血清学转阳。结论该献血者是1例病毒载量极低的HIV窗口期献血者,NAT与ELISA检测结合能进一步保障临床用血的安全。