奥贝胆酸对非酒精性脂肪肝大鼠法尼醇X受体及细胞色素P450家族成员7A1基因表达的影响

目的探讨奥贝胆酸对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠法尼醇X受体(FXR)蛋白、细胞色素P450家族成员7A1(CYP 7A1)蛋白及其基因表达的影响,及保肝作用。方法雄性SD大鼠52只通过高脂饲料喂养建立大鼠非酒精性脂肪肝模型;设置对照组11只,模型组、奥低组、奥中组和奥高组共41只,给药4周后,取大鼠相同部位肝脏,免疫组织化学法测定FXR蛋白表达、RT-PCR检测FXR mRNA,Western blotting法检测CYP 7A1蛋白、RTPCR检测CYP 7A1 mRNA的表达水平;通过大鼠肝指数,外周血谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的浓度,及肝脏组织切片观察,评估肝功能。结果高脂饲料喂养10周后,大鼠具有典型的NAFLD特征,模型建立成功。模型组的FXR蛋白和FXR mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),奥低组和奥中组的FXR蛋白和FXR mRNA表达水平与模型组相比,差异无统计学意义(P>0.05),奥高组的FXR蛋白和FXR mRNA表达水平显著高于模型组(P<0.05);模型组、奥低组和奥中组的吸光度值显著低于对照组(P<0.05),奥高组显著升高,与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。模型组的CYP 7A1蛋白和CYP 7A1 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05),奥低组和奥中组的CYP 7A1蛋白和CYP 7A1 mRNA的表达水平与模型组相比,差异无统计学意义(P>0.05),奥高组的CYP 7A1蛋白和CYP 7A1 mRNA表达水平显著低于模型组(P<0.05)。与对照组相比,模型组的肝指数(%)显著增大(P<0.05);奥低组和奥中组的肝指数(%)与模型组相比,差异无统计学意义(P>0.05),奥高组肝指数(%)显著低于模型组(P<0.05)。与对照组相比,模型组的ALT、AST和ALP的浓度显著升高(P<0.05);奥贝胆酸组的ALT、AST和ALP浓度显著低于模型组(P<0.05),且随着奥贝胆酸给药量的增加,ALT、AST和ALP的浓度逐渐降低;肝组织切片观察结果显示,奥贝胆酸呈剂量依赖性改善大鼠肝组织。结论奥贝胆酸高剂量能显著上调FXR蛋白及其基因的表达,并抑制CYP 7A1蛋白及其基因的表达,显著改善大鼠肝功能及肝组织病理状态。     

原发性胆汁性肝硬化基因易感性的研究进展

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种由自身免疫机制介导的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病。近年来，其发病率逐年增长，研究表明谷胱甘肽S转换酶（GST）、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）、血管内皮细胞一氧化氮合成酶（eNOS）、人类白细胞分化抗原（HLA）、IL-10、细胞角蛋白19（CK19）、甘露糖结合凝集素（MBL）、IL-1、TNF-α基因以及x染色体关联的基因等可能与PBC相关。我对与PBC易感性相关的基因的研究进展进行综述，为今后的研究提供一定的依据。     

奥贝胆酸对高脂喂养的C57BL/6J小鼠糖脂稳态的影响

目的 研究奥贝胆酸(OCA)对高脂喂养C57BL/6J小鼠糖脂代谢的影响。方法 给C57BL/6J小鼠喂高脂饮食(HFD)12周后,将其随机分为模型组(model)和OCA干预组(10 mg/kg,连续灌胃6周),每组10只。喂12周正常饲料的C57BL/6J小鼠作为对照组(control),模型组和对照组灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。实验期间开展口服葡萄糖耐量和胰岛素耐量实验。实验结束后,测定血清中肝功能相关指标,记录肝脏质量,测定肝脏中脂质相关指标,并对肝脏进行苏木精-伊红(HE)染色;RT-qPCR检测肝脏中脂质代谢相关基因表达。结果 糖负荷和注射胰岛素后,模型组各个时间点血糖和曲线下面积(AUC)明显高于对照组(P<0.01),OCA干预组能缓解模型组小鼠糖耐量异常(P<0.05),提高胰岛素敏感性(P<0.05);模型组血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白总胆固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平明显高于对照组(P<0.01),高密度脂蛋白总胆固醇(HD...     

IL-27介导的炎症反应在原发性胆汁性肝硬化中的作用

目的 探讨IL-27介导的免疫炎症性反应在原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)发病中的作用.方法 荧光定量PCR、流式细胞术、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化等方法检测PBC患者IL-27的表达;生化常规测定PBC患者和健康对照者的谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、谷氨酰基转移酶(GGT)水平,分析IL-27与它们之间的相关性.结果 PBC患者外周血IL-27/P28亚基mRNA的表达显著高于慢性乙型肝炎组和健康对照组(P＜0.05),IL-27/EBI3 mRNA未有明显改变;免疫组化结果显示IL-27在PBC患者肝脏呈阳性表达;流式细胞仪检测结果表明IL-27在PBC患者的CD4+T细胞表达率(72.40%±6.22%)较慢性乙型肝炎组(59.40%±7.03%,P＜0.01)和健康对照组(1.70%±0.55%,P＜0.01)明显升高,而IL-27在各研究组的CD8+T细胞、单核细胞、B细胞中的表达无明显变化;PBC患者外周血血清IL-27的表达[(126.25±36.00)pg/ml]显著高于慢性乙型肝炎组[(51.81±23.30)pg/ml,P＜0.01)和健康对照组[(34.19±9.70)pg/ml,P＜0.01],PBC患者IL-27的血清蛋白表达水平与GGT(r=0.554,P＜0.01)和TBIL(r=0.559,P＜0.01)水平呈显著正相关,与ALT、AST和ALP无相关性.结论 IL-27在PBC中表达升高,与PBC的发生发展存在一定的相关性,可能参与了PBC的发病机制.     

原发性胆汁性肝硬化发病机制研究进展

原发性胆汁性肝硬化（Pimary biliary　crrhosis,PBC）以破坏肝内小及中等大小胆管为主的器官特异性自身免疫性肝病,表现为肝门脉区炎症导致纤维化,肝硬化甚至功能性衰竭。PBC患者90％以上为女性,年龄一般为30至65岁之间。自身免疫病可见少儿患者,但PBC是唯一例外,随年龄增长期发病率呈上升趋势。     

甘胆酸检测的临床应用

甘胆酸是肝脏以胆固醇为原料合成的胆酸再与甘氨酸结合而成。当肝细胞受损伤、肝有病变或胆汁淤积时，就可引起甘胆酸代谢和循环紊乱，血清中的甘胆酸量就增加。材料与方法（１）检测对象为本院住院肝病患者，共５９例，年龄１７～６８岁。其中急性肝炎２１例，轻度慢肝４...     

慢性肝病患者外周血Ghrelin与炎性细胞因子的水平检测及其相关性研究

目的:探讨外周血Ghrelin与炎性细胞因子TNF-α、IL-1及IL-6表达水平与慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、非酒精性脂肪性肝病肝脏损害程度的相关关系.方法:慢性肝病患者组和健康对照组血浆中Ghrelin、TNF-α、IL-1及IL-6表达水平检测采用酶联免疫吸附实验(ELISA).结果:慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者外周血Ghrelin表达明显升高,与正常对照组比较差异显著(P＜0.05,P＜0.01),失代偿期肝硬化(B、C级)患者外周血Ghrelin水平明显高于慢性乙型肝炎组(P＜0.05);Ghrelin在非酒精性脂肪肝病患者组外周血明显降低,与正常对照组比较差异显著(P＜0.01);慢性肝炎、肝炎肝硬化患者外周血Ghrelin表达与炎性细胞因子TNF-α、IL-1及IL-6呈正相关(慢性肝炎组r值分别为0.587、0.995、0.985,肝硬化组r值分别为0.730、0.966、0.979),而在NAFLD疾病组则呈负相关(r值分别为-0.660、-0.873、-0.894).结论:Ghrelin在慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者组外周血高表达,而在非酒精性脂肪性肝病患者组外周血低表达,Ghrelin表达水平与慢性肝病的发生发展过程相关.     

重建外周免疫耐受抑制原发性胆汁性肝硬化的实验研究

目的 以原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)自身抗原诱导PBC小鼠重建外周免疫耐受,探索PBC免疫治疗的新途径.方法 将M2蛋白与新生小鼠的脾淋巴细胞及交联剂1-乙基-3(3-二甲基氨阿基)碳化二亚胺(ECDI)共培养,形成抗原负载的淋巴细胞,随后通过尾静脉注入小鼠体内诱导免疫系统对PBC自身抗原的免疫耐受,同时注射聚肌苷酸胞苷酸(polyI:C)诱导PBC病变,对照组注射与牛血清白蛋白(BSA)共培养的脾细胞,16周后观察小鼠的各项实验室指标,分析重建PBC小鼠外周免疫耐受是否能够有效地阻止病变产生或缓解病程.结果 抗线粒体抗体(AMA):免疫耐受组与BSA对照组、模型对照组相比阳性率显著降低,差异有统计学意义(P=0.007,P=0.003);BSA对照组和模型对照组间无明显差异(P=0.74);免疫耐受组、BSA对照组、模型对照组的碱性磷酸酶(AKP)水平分别为(80.5±9.8)U/L、(93.8±15.7)U/L、(92.5±17.7)U/L;其中BSA组和模型组差异无统计学意义(P=0.83),而免疫耐受组低于BSA组(P=0.0095)和模型对照组(P=0.029);免疫耐受组、BSA对照组、模型对照组的胆管阳性浸润率分别为42.67%±12.30%、57.07%±11.35%、51.53%±9.96%;其中免疫耐受组阳性浸润率低于模型对照组,差异有统计学意义(P=0.039),同时显著低于BSA对照组(P=0.0024),而且BSA对照组和模型对照组比较差异无统计学意义(P=0.167).结论 本实验通过重建外周免疫耐受,在一定程度上抑制了PBC小鼠的病变程度,为今后进一步研究PBC的免疫治疗提供思路.

Abstract：

Objective To investigate a new therapeutic pathway for primary biliary cirrhosis (PBC) by immune tolerance reestablishment in a PBC mouse model. Methods Spleenic cells from naive mice were incubated with M2 in the presence of ECDI and the ceils were injected into caudal vein of the mice which would be used for development of PBC model. Spleenic cells incubated with bovine serum albumin (BSA) were injected as controls. 16 weeks later, anti-mitoehondrial antibody (AMA) , alkaline phosphatase(AKP) and portal inflammation were assayed for evaluating the prevention effect. Results AMA positive rate in tolerance group was lower than that in BSA and PBC groups ( P = 0. 007, P = 0. 003 ). The difference between BSA and PBC was not significantly. Serum AKP levels in tolerance, BSA and PBC group were (80.5 ±9.8) U/L, (93.8 ±15.7) U/L and (92.5 ±17.7) U/L, separately. The level in tolerance group was lower than that in BSA and PBC groups (P =0.0095, P =0.029). The rates of portal areas with cell infiltration were 42. 67% ± 12. 30% , 57. 07% ± 11. 35% and 51. 53% ± 9. 96% , separately. The number of infiltrated portal tracts in tolerance group was less than that in PBC group (P = 0.039) and BSA group (P = 0. 0024). Conclusion PBC was prevented to some extent by reestablishing immune tolerance to M2 autoantigen. This provides clues for finding a better treatment proposal.     

血清抗线粒体抗体亚型检测对PBC患者的诊断价值

目的:探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者出现的抗线粒体抗体（AMA）亚型与PBC患者肝功能、免疫检查的相关性。方法:应用间接免疫荧光法检测47例PBC患者血清中AMA抗体,用免疫印迹法检测AMA-M₂、M₄、M₉抗体。应用全自动生化分析仪检测ALT等生化指标。结果::①47例PBC患者AMA与AMA-M₂阳性率100%,M₂+M₄阳性率43.8%,M₂+M₉阳性率16.7%,M₂+M₄+M₉阳性率13.5%。②PBC患者ALP、γ-GT、GLB等生化指标发生明显变化（P<0.05）。③M₄阳性与M₄阴性PBC患者比较ALT、AST、GLB等指标明显升高（P<0.05）。M₉阳性与M₉阴性PBC患者比较ALT、AST、GLB等指标明显降低（P<0.05）。结论:AMA-M₂亚型抗体检测对PBC有诊断价值,生化、免疫等实验室检查有助于诊断PBC。M₄、M₉抗体的检测,对于PBC的病情判断有意义。     

原发性胆汁性胆管炎熊去氧胆酸治疗应答不佳的差异基因及免疫细胞浸润生物信息学分析

目的 分析熊去氧胆酸(UDCA)治疗应答不佳的差异表达基因,为原发性胆汁性胆管炎(PBC)的治疗提供理论依据.方法 通过检索基因表达数据集(GEO)数据库获得UDCA应答相关基因芯片数据集,筛选差异表达基因(DEG),构建蛋白相互作用网络图,利用注释、可视化和集成发现数据库DAVID进行生物学功能和信号通路的富集分析,...     

妊娠期肝内胆汁郁积症患者血清甘胆酸检测的临床价值

妊娠期肝内胆汁郁积症(ICP)是发生于妊娠中、晚期的疾病,该病对围产儿影响较大.为进一步探讨血清甘胆酸(CG)对ICP的临床诊断价值,用放射免疫法对孕妇、ICP患者检测了血清CG值,并与丙氨酸转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)进行了对比分析,结果是:ICP组CG值明显高于妊娠组,差异非常显著(P＜0.01),其阳性率为100%;ICP组ALT阳性率为80%,ALP阳性率为40%.因此,血清CG是目前诊断ICP最敏感的血清学指标.     

甘胆酸化学发光定量免疫分析方法的建立

目的 建立甘胆酸（CG）化学发光免疫检测方法.方法 采用竞争法,固相微孔L板包被技术,通过与参比试剂盒临床结果相关性的比较,保证其具有同等的临床诊断价值.结果 本试剂盒的线性范围为0.25～ 40 μg/mL,灵敏度为0.05μg/mL,批内精密度分别为7.1％和7.4％;批间精密度为11.3％和15.74％;样品的回收率在85％～115％之间.与透明质酸、Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原氨端肽、层粘连蛋白、胆酸以及鹅脱氧胆酸的交叉反应率在0.010％～1.480％之间,均不会对CG的正常测定构成干扰.通过临床样品正常值的测定确定了正常值范围,与有关文献报道基本一致.同时,与北京北方生物技术研究所的放免药盒临床结果进行科学比较,两组结果的相关系数r为0.947.结论 该试剂盒与参比试剂盒的测定结果具有较高的符合率,应用于临床,可为慢性肝炎复发、轻度肝硬变、肝癌、肝胆胃肠消化系统疾病的研究诊断提供可靠的指标.同时,肝胆酸与血清Ⅳ型胶原、透明质酸和前白蛋白（PA）动态联检对于肝硬化的诊断、疗效及预后判断具有重要的临床意义.     

免疫细胞在非酒精性脂肪肝炎中作用的研究进展

非酒精性脂肪肝炎(NASH)是一种代谢性肝病,其在肝细胞脂肪变性基础上进一步诱发炎症反应、变性坏死及肝纤维化.近年来,许多新的研究发现免疫细胞在NASH的发病中发挥重要的作用.在NASH发病过程中参与免疫反应的细胞很多,包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞、自然杀伤(NK)细胞、NKT细胞、调节性T细胞(Treg)和Th17细胞等.     

IL-18与非酒精性脂肪肝的研究进展

白介素18（IL-18）是一种前炎症性细胞因子,具有重要的免疫调节和损伤肝细胞的作用,可能在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）中起着重要作用。现就IL-18的来源、生物学效用以及其与NAFLD的发生、发展及预后关系的研究进展作一综述。     

CCN蛋白对肥胖症和非酒精性脂肪肝防治机制的研究进展

<正>CCN由富半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich protein 61,CYR61)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和肾母细胞瘤过表达蛋白(nephroblastoma overexpressed protein,NOV)的首字母缩写而来。CCN家族是一类具有半胱氨酸富集特性的基质细胞蛋白(matricellular proteins),包括CCN1～6等家族成员(其中CCN1即CYR61,CCN2即CTGF,CCN3即NOV),具有广泛的生物学功能。     

新型的抗线粒体抗体M2亚型IgG和IgA抗体的检测方法在原发性胆汁性肝硬化诊断中的价值

目的: 评价以新型天然M2抗原和BPO融合蛋白M2-3E(BPO)为靶抗原的 ELISA法(抗-M2-3E ELISA)检测抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)IgG和IgA抗体在原发性胆汁化肝硬化(PBC)诊断中的敏感性、特异性。 方法: 分别用间接免疫荧光法(IFL)、以丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)为靶抗原的ELISA法(抗- PDC ELISA)、抗-M2-3E ELISA法检测107例PBC、31例自身免疫肝炎(AIH)、10例原发性硬化性胆管炎(PSC)、17例丙型病毒性肝炎(HCV)、29例乙型病毒性肝炎(HBV)患者和26例健康体检者。 结果: (1)107例PBC患者用IFL、抗-PDC ELISA和抗-M2-3E ELISA 3种方法检测AMA-M2 IgG的检出率分别为:87/107(81.3%)、78/107(72.9%)、97/107(90.6%)。特异性分别为98.1%、97.2%、98.3%。抗-M2-3E ELISA法AMA-M2 IgG的检出率(90.6%)显著高于IFL法(81.3%)和抗-PDC ELISA法(72.9%)(均P<0.01)。用抗-M2-3E ELISA法检测AMA-M2 IgA的检出率为59/107(55.1%),特异性为97.2%。而总体AMA-M2 IgG和/或IgA的检出率99/107(92.5%),特异性为95.2%。(2)IFL 和 抗-M2-3E ELISA的重叠度为85%,抗-M2-3E ELISA可以在超过一半的IFL阴性的患者中检出AMA-M2 IgG和/或IgA。 结论: 抗-M2-3E ELISA法具有比IFL和抗-PDC ELISA法更高的敏感性、特异性。但是,AMA-M2 IgG和IgA都不可以单独用于诊断PBC的标记。     

T细胞与原发性胆汁性肝硬化

原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）是一种原因不明的、以肝内小胆管特异性破坏、汇管区淋巴细胞浸润为特征的自身免疫性肝病.尽管PBC的病因和发病机制还不十分清楚,但越来越多的证据表明T细胞参与PBC发病,并对胆管和肝细胞破坏起主要作用.本文从T细胞的自身耐受崩溃、与胆管损伤关系以及自身抗原表位等方面综述了近年来相关的研究进展.     

25 羟维生素D 在原发性胆汁性肝硬化中的诊断价值

目的:初步探讨25-羟维生素D[25-(OH)D]在原发性胆汁性肝硬化(PBC)中的诊断价值。方法:收集宁夏医科大学总院2013 年12 月到2015 年6 月期间住院的44 例确诊为PBC 的患者,随机收集确诊为乙肝肝硬化患者41 例及我院体检健康人群110 例作为对照组,分析患者组和对照组的生化指标及血清25-羟维生素D 含量,并对PBC 患者血清中25-羟维生素D 绘制ROC 曲线进行统计分析。结果:生化指标TBIL、DBIL、IBIL、GLB、AST、ALT、ALP、-GT 在PBC 组中均显著高于正常对照组和乙肝肝硬化组,差异有统计学意义。25-羟维生素D 含量在PBC 患者中显著低于正常对照组和乙肝肝硬化组,差异有统计学意义。PBC 患者血清中25-羟维生素D 绘制ROC 曲线下的面积(AUC)为0.926,筛选其最佳截断点:当25-(OH)D=17.275 ng/ ml 时,敏感性为92.8%,特异性为84.1%。结论:25 羟维生素D 在PBC 患者血清中的含量明显下降,对PBC 的诊断具有一定的价值,25-(OH)D=17.275 ng/ ml 可能是一个诊断的界值。     

熊脱氧胆酸护肝作用机制的研究进展

本文介绍了熊脱氧胆酸护肝作用的机制，包括其稀释、利胆、抑制内源性胆汁酸重吸收、直接保护作用和免疫调节作用。     

血清甘胆酸测定对于早期诊断妊娠期肝内胆汁瘀积症的临床意义

我院于1994年1月至1995年12月，采用放射免疫测定法（PIA）检测了846例孕妇血清甘胆酸（CG）浓度，其中58例确诊为妊娠期肝内胆汁瘀积症（ICP），CG正常值上限为3400／μg／L，ICP患者平均浓度为26031．8μg／L。阳性检出率达100％，发病率占同期住院分娩的4．9％（58：1182）。测定血清中CG和ALT是诊断ICP的主要实验室依据，血中CG值的升高先于瘙痒症的出现和ALT的升高。因此，CGRIA可以作为早期诊断ICP的指标，在CG异常组中动态观察临床和实验室各项指标的变化，加强产前、产时的胎儿监护，选择适当的分娩方式，降低围产儿死亡率。