过表达SIRT1基因通过PI3K/AKT信号通路抑制高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧水平

目的:探讨过表达沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧簇(ROS)水平的影响。方法:分别用空载质粒(pcDNA3.1-NC)和SIRT1过表达质粒(pcDNA3.1-SIRT1)转染心肌细胞,并进行高糖诱导。实验分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1-NC组和高糖+pcDNA3.1-SIRT1组,用qPCR和Western blot法分别检测各组心肌H9c2细胞的SIRT1表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA检测细胞内ROS水平,Western blot检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K、AKT和磷酸化AKT的蛋白水平。结果:与对照组相比,高糖诱导的心肌H9c2细胞中SIRT1表达显著降低,细胞活力显著下降,ROS水平和细胞凋亡率增加,PI3K和AKT磷酸化蛋白水平下调(P0.05);过表达SIRT1可诱导高糖刺激的心肌H9c2细胞活力增加,ROS水平和凋亡率降低,PI3K和AKT磷酸化蛋白水平上调(P0.05)。结论:过表达SIRT1可通过调控PI3K/AKT信号通路逆转高糖刺激心肌H9c2细胞活力的降低及凋亡率和氧化应激的增加。     

戊地昔布通过上调ROS诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)在选择性环氧化酶(cyclooxygenase,COX)-2抑制剂戊地昔布诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用。方法噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术和Hoechst33258检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察细胞ROS和线粒体膜电位;Western blot检测蛋白表达。结果 1)戊地昔布可诱导细胞凋亡(P0.01),抑制细胞增殖(P0.05或P0.01)。2)给予戊地昔布后,caspase-3表达先升高,然后降解为cleaved caspase-3,Bcl-2的表达降低,Bax的表达增高,caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO和caspase抑制剂ZVAD-FMK可拮抗戊地昔布的抗肿瘤作用(P0.05或P0.01)。3)戊地昔布可降低线粒体膜电位,明显提高细胞内的ROS水平。抗氧化剂N-乙酰基半胱氨酸(N-Acetyl-L-cystein,NAC)可拮抗戊地昔布的抗肿瘤作用(P0.01)。结论戊地昔布可通过升高细胞内ROS诱导MCF-7细胞凋亡。     

Caveolin-1介导流体剪切应力调控MC3T3-E1成骨细胞增殖和凋亡

背景：流体剪切应力在成骨细胞增殖和凋亡中起着重要作用。然而,Caveolin-1(Cav-1)是否参与成骨细胞中流体剪切应力诱导的增殖与凋亡过程尚不清楚。目的：探讨Cav-1在流体剪切应力调控成骨细胞增殖和凋亡中的作用。方法：选择生长状态良好的MC3T3-E1成骨细胞,加载不同时间(0,30,60,90 min)且强度为1.2 Pa的流体剪切应力,观察Cav-1蛋白的表达,筛选出时间为60 min的条件进行实验。将MC3T3-E1细胞分为：对照组、流体剪切应力组、流体剪切应力+pcDNA 3.1组(对照)、流体剪切应力+pcDNA Cav-1组(过表达质粒),分别采用流体剪切应力和过表达Cav-1等方式干预,通过q RT-PCR和Western blot检测MC3T3-E1细胞内增殖以及凋亡相关分子的表达量;通过CCK-8与Ed U实验检测MC3T3-E1细胞增殖活性;采用Hoechst 33258染色以及流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡情况。结果与结论：加载流体剪切应力后MC3T3-E1细胞中Cav-1的表达显著下调,且加载60 min表达水平最低。过表达Cav-1减弱了流体剪...     

KLF6基因对THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞凋亡的影响

目的:探讨过表达Kruppel样因子6(KLF6)基因对THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞活力、凋亡、活性氧簇(ROS)水平及AKT信号通路的影响。方法:使用佛波酯(PMA)将人单核细胞株THP-1诱导分化为巨噬细胞,将巨噬细胞随机分为pcDNA3.1组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+pcDNA3.1组和ox-LDL+pcDNA3.1-KLF6组,其中pcDNA3.1转染参照Lipofectamine~(TM) 2000试剂盒说明。细胞处理24 h,通过MTT实验、Annexin V-FITC/PI双标细胞凋亡试剂盒和H_2DCF-DA探针分别检测细胞活力、凋亡率和ROS水平的变化;Western blot检测Bcl-2、Bax和p-AKT的蛋白水平。结果:pcDNA3.1-KLF6转染巨噬细胞后,KLF6表达明显升高(P0.05)。ox-LDL可明显抑制巨噬细胞的活力,诱导细胞凋亡,诱导细胞ROS的产生,上调Bax表达,下调Bcl-2和p-AKT的蛋白水平;而过表达KLF6可明显减弱ox-LDL对细胞活力、凋亡、ROS水平及Bcl-2、Bax和p-AKT蛋白水平的影响(P0.05)。结论:KLF6基因可明显降低ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,机制可能与降低细胞ROS水平及激活AKT信号通路有关。     

频率对拉伸应变诱导成骨细胞凋亡的影响

目的考察频率对拉伸应变诱导成骨细胞凋亡的影响。方法采用Flexcell力学加载系统对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1施加1%双轴拉伸应变刺激,频率分别为1、2、3、4、5 Hz,每天加载1 h,间歇性拉伸8 d;通过测定乳酸脱氢酶(LDH)活性检测细胞死亡率;采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术观察细胞凋亡情况;实时PCR检测细胞凋亡标志基因caspase-3、-9以及Bcl-2、Bax基因水平;Western blotting检测caspase-3、-9蛋白表达。结果不同加载频率对成骨细胞LDH活性无影响;不同频率下流式细胞术总体凋亡率无显著性差异,但是2 Hz频率可诱导成骨细胞早期凋亡。2 Hz拉伸应变可明显上调caspase-3、-9基因和蛋白表达,上调Bax/Bcl2蛋白比值。结论 1%双轴拉伸应变刺激下1~5 Hz频率不能引起成骨细胞凋亡和死亡,但2 Hz频率可诱导成骨细胞早期凋亡,且通过上调Bax/Bcl-2表达实现的。     

Dlx2基因过表达与前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中的细胞凋亡和周期调控*****◆

背景：Dlx2基因在颅神经嵴细胞迁徙进入第一鳃弓过程和颅颌面骨骼发育中起重要作用,但Dlx2基因对成骨细胞分化过程中细胞凋亡和细胞周期调控的影响尚未见报道。 目的：观察Dlx2基因过表达对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中细胞凋亡和细胞周期调控的影响。 方法：构建反转录病毒pMSCV-puro-Dlx2并转染矿化诱导液培养下的MC3T3-E1细胞,构建稳定过表达Dlx2基因的细胞系MC3T3-E1-Dlx2。RT-PCR和Western blot验证Dlx2基因过表达细胞系的建立。Annexin V/PI双染色后流式细胞分选检测细胞凋亡,PI/RNase双染色后流式细胞分选检测细胞周期变化。 结果与结论：实验成功构建稳定过表达Dlx2基因的细胞系MC3T3-E1-Dlx2。发现Dlx2基因过表达促进细胞凋亡(P < 0.05),同时阻滞细胞周期于G1/G0期(P < 0.05),减低细胞增殖性,促进细胞分化行使功能。 关键词：成骨细胞分化;Dlx2基因;稳定过表达;细胞凋亡;细胞周期 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.022     

血小板源性生长因子受体α影响过氧化氢诱导的黑素细胞凋亡

目的:探讨血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的黑素细胞凋亡的影响。方法:以黑素细胞PIGI为研究对象,分别用不同浓度的H_2O_2作用后,用MTT法检测细胞活力,并计算半数抑制浓度。经H_2O_2处理的PIGI细胞转染空载体p CMV6或PDGFRα过表达载体p CMV6-PDGFRα,以不做转染的细胞为空白对照,RT-q PCR和Western blot检测转染效率。用半数抑制浓度的H_2O_2作用于过表达PDGFRα的PIGI细胞,MTT法检测细胞活力,绘制细胞生长曲线;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中p38、磷酸化p38(p-p38)和cleaved caspase-3的蛋白水平;二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCDHF-DA)法检测细胞中活性氧簇(ROS)水平。结果:H_2O_2作用后PIGI细胞生长减慢,细胞凋亡率升高,细胞中ROS水平、p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平升高(P0.05),H_2O_2的半数抑制浓度为0.7 mmol/L。PDGFRα过表达载体能够成功上调PIGI细胞中PDGFRα的mRNA和蛋白水平(P0.05)。过表达PDGFRα后经过H_2O_2处理的PIGI细胞存活率升高(P0.05),细胞凋亡率下降(P0.05),细胞中的ROS水平下降(P0.05),p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平降低(P0.05)。结论:PDGFRα能够抑制H_2O_2诱导的黑素细胞凋亡,部分逆转H_2O_2对黑素细胞增殖的抑制作用,降低细胞中的ROS水平,其作用机制可能与p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平的变化有关。     

高糖通过提高ROS水平和钙超载诱导小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡

目的: 探讨钙离子(Ca²⁺)超载在高糖诱导成骨细胞株MC3T3-E1凋亡中的作用以及活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的影响。方法: 培养小鼠颅骨源性成骨细胞株MC3T3-E1,给予高浓度D-葡萄糖诱导细胞凋亡。采用MTT法检测不同浓度D-葡萄糖处理24和48 h后MC3T3-E1细胞的增殖情况; D-葡萄糖(35 mmol/L)处理24 h后,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;Fura-2/AM荧光探针检测细胞内Ca²⁺浓度; DCFH-DA荧光探针检测ROS的生成。结果: MC3T3-E1高糖处理后,细胞增殖明显抑制呈剂量效应关系,早期凋亡率和总死亡率分别增加至(24.16±3.53)%和(63.74±4.32)%。高糖处理后细胞内ROS水平明显增加,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸可以在降低ROS水平的同时抑制高糖所引起的成骨细胞凋亡。细胞内游离Ca²⁺水平也明显增加,并且通过膜通透性Ca²⁺螯合剂BAPTA-AM处理后,细胞内Ca²⁺浓度明显降低,同时成骨细胞凋亡率也明显降低。加入镧离子(La³⁺)离子抑制储量操纵性钙通道(store-operated Ca²⁺ channels,SOCC)可以降低细胞内Ca²⁺浓度,减低高糖所引起的成骨细胞凋亡。在高糖诱导成骨细胞凋亡中,细胞内ROS和Ca²⁺的增加呈相互促进的关系。结论: 高糖可以通过增加细胞内ROS水平,引起钙离子通过SOCC通道释放,造成细胞内Ca²⁺超载,从而诱导成骨细胞凋亡。     

京尼平通过线粒体动力学缓解氧化应激诱导的Neuro-2a细胞凋亡

目的:观察京尼平(genipin)对H2O2诱导Neuro-2a细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:体外培养Neuro-2a细胞,利用400μmol/L H2O2诱导6 h建立Neuro-2a凋亡模型。处于对数生长期的Neuro-2a细胞随机分为对照组、模型组、京尼平组、京尼平预处理后模型组。MTT法测定细胞存活率;倒置相差显微镜观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;DCFH-DA(2,7-二氯荧光素二乙酸酯)染色、流式细胞仪检测细胞内线粒体活性氧(ROS)的产生;qRT-PCR检测UCP2、UCP4、Mfn2、Drp1 mRNA表达;Western blot测定UCP2、UCP4、Mfn2、Drp1蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率增加,ROS生成量升高,同时UCP2、Drp1蛋白及mRNA表达增加,Mfn2蛋白及mRNA表达降低,UCP4及mRNA蛋白表达无明显变化。提前给予京尼平(40μmol/L)干预后,与模型组相比,细胞存活率提高,细胞凋亡率降低,ROS生成量减少,同时UCP2、Drp1蛋白及mRNA表达减少,Mfn2蛋白及mRNA表达升高,但UCP4蛋白及mRNA表达无明显变化。以上指标相比,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:适宜浓度的京尼平能缓解氧化应激诱导的Neuro-2a细胞凋亡,其机制可能与抑制UCP2蛋白表达,促进线粒体融合进而改善线粒体功能有关。     

圣草素促进成骨细胞自噬减轻糖皮质激素诱导的细胞凋亡

背景：糖皮质激素诱导的骨质疏松症是系统性糖皮质激素治疗的常见并发症，主要表现为对成骨细胞的抑制作用。圣草素可抑制破骨细胞分化和卵巢切除术引起的骨质疏松，然而，圣草素是否调节糖皮质激素诱导的成骨细胞凋亡尚不清楚。目的：探究圣草素是否在地塞米松诱导的成骨细胞凋亡中发挥作用，及其潜在的作用机制。方法：采用不同浓度(0,0.5,1,2.5,5,10μmol/L)的圣草素或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(5μmol/L)处理地塞米松预处理的成骨细胞MC3T3-E1，然后用血红素加氧酶1的过表达载体(pcDNA-HMOX1)和空载体(pcDNA vector)转染MC3T3-E1细胞。分别采用CCK-8和流式细胞术检测细胞活力和凋亡；采用ELISA检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性；采用Western blotting检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62、Atg5和Atg12表达，凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达，以及AMP蛋白激活激酶(AMPK)和p-AMPK蛋白表达。结果与结论：(1)低浓度的圣草素对MC3T3-E1细胞无毒性，且促进细胞增殖，并以剂量依赖性的方式促进自噬相关蛋白LC3-...     

miR-491-5p参与调节 人膀胱癌细胞系EJ对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的探讨miR-491-5p对人膀胱癌细胞系EJ 5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)敏感性的影响及初步机制。方法 RT-qPCR检测miR-491-5p在膀胱癌化疗敏感与耐药组织中表达水平。构建5-FU耐药的EJ/5-FU细胞系,并分别用RT-qPCR和Western blot检测miR-491-5p表达和AKT与STAT3磷酸化水平。将miR-491-5p抑制剂转入细胞系EJ或将miR-491-5p模拟物转入EJ/5-FU细胞,并在5-FU存在的条件下分别用CCK-8法、Annexin V-FITC/PI染色法、划痕法、Transwell小室法和Western blot检测细胞活性、凋亡、伤口愈合、迁移、侵袭和AKT与STAT3磷酸化水平。结果 miR-491-5p在化疗耐药组织和EJ/5-FU细胞系中表达显著降低(P0.01)。下调miR-491-5p表达后,5-FU对细胞系EJ的细胞活性、伤口愈合、迁移和侵袭的抑制作用和凋亡的促进作用均显著减弱(P0.01);上调miR-491-5p表达后,5-FU对EJ/5-FU细胞系的细胞活性、伤口愈合、迁移和侵袭的抑制作用和凋亡的促进作用均显著增加(P0.01)。AKT及STAT3磷酸化水平在EJ/5-FU细胞系中显著升高(P0.01);下调miR-491-5p后,细胞系EJ中AKT及STAT3磷酸化水平显著升高(P0.01);上调miR-491-5p后,EJ/5-FU细胞系中AKT及STAT3磷酸化水平显著降低(P0.01)。结论下调miR-491-5p表达降低细胞系EJ对5-FU的敏感性;上调miR-491-5p表达抑制EJ/5-FU细胞系对5-FU耐药性。miR-491-5p调节细胞系EJ 5-FU耐药性的过程中伴随着AKT及STAT3磷酸化的改变。     

天麻素保护过氧化氢诱导的神经元氧化损伤的研究

目的:探究天麻素对过氧化氢引起的神经细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法:培养SH-SY5Y细胞,并分为3组:对照组、氧化损伤组和天麻素处理组。用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞活性氧(ROS)水平,用ELISA检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)表达水平,用蛋白质免疫印迹实验检测细胞内PI3K、AKT磷酸化水平。结果:过氧化氢处理引起细胞凋亡率升高,胞内ROS平上升,SOD表达下调以及PI3K、AKT磷酸化水平下降;天麻素处理后可以显著抑制过氧化氢引起的细胞凋亡、ROS水平上升及SOD表达下调,并缓解氧化损伤对PI3K/AKT磷酸化的抑制作用。结论:天麻素通过激活PI3K/AKT信号通路保护过氧化氢诱导的神经细胞氧化损伤。     

成骨细胞膜脂筏在TNFR1介导信号转导中的作用

目的:初步研究细胞膜脂筏在MC3T3成骨细胞TNFRl介导信号转导中的作用.方法:应用MCD(10 g/L,60 min)消耗细胞膜胆固醇,以TNF-α(10 μg/L)刺激MC313成骨细胞0、5、10、15、30 rain或以TNF-α+CHX(10ms/L)处理4 h诱导凋亡,以SDS-PAGE/Western blot法检测IKBot、ph-AKT、ph-ERK、ph-p38及caspase-3活性片段表达水平的变化,分析膜胆固醇在TNFRI介导信号转导中的作用.结果:MCD(10 g/L)处理60 min可将膜胆固醇水平减少至约35%.降低膜胆固醇水平不影响TNFRI介导的IKBa信号,但显著抑制TNFRl介导的AKT磷酸化激活;不影响TNFRl介导的caspase03活化和细胞凋亡;也不影响TNFRI介导的ERK和p38磷酸化激活.结论:消耗膜胆固醇可破坏脂筏结构,提示成骨细胞膜脂筏在TNFR1介导AKT激活的过程中发挥重要作用,而TNFR1介导的NF-kB和ERK、p38及凋亡信号通路的激活并不依赖脂筏.     

人参皂苷Rg1介导PI3K/AKT/FOXO3通路缓解高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激反应

目的 探究人参皂苷Rg1通过PI3K/AKT/FOXO3通路对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激反应的调控作用。方法 首先将细胞分为对照组、HG组、低浓度Rg1组(HG+20 ng/ml Rg1)、中浓度Rg1组(HG+50 ng/ml Rg1)、高浓度Rg1组(HG+100 ng/ml Rg1),通过MTT法、Hoechst 33258染色和Western blot分别检测Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞存活率、凋亡率和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9表达的调控作用。其次,通过试剂盒检测Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞中氧化应激标志物ROS、MDA、SOD、Gpx浓度的影响。并通过Western blot检测在Rg1作用下,PI3K/AKT/FOXO3通路中各蛋白的磷酸化及表达情况。最后,验证在AKT被抑制的情况下Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞的调控作用。结果 与对照组相比,HG组中细胞存活率、Bcl-2表达量、SOD、Gpx含量显著下降(P0.05),而凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9的表达量、ROS、MDA含量显著上升(P0.05);与HG组相比,低、中、高浓度Rg1组中细胞存活率、Bcl-2表达量、SOD、Gpx含量显著上升(P0.05),而凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9的表达量、ROS、MDA含量显著下降(P0.05)。其次,与HG组相比,低、中、高浓度Rg1组细胞中抑制剂之后,与HG组相比,HG+MK-2206组中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著下降(P0.05),而FOXO3蛋白表达量显著升高(P0.05)。最后,与HG+MK-2206组相比,HG+Rg1+MK-2206组中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著升高(P0.05),而FOXO3蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论 人参皂苷Rg1可以通过活化PI3K/AKT/FOXO3通路缓解高糖对HBZY-1细胞的诱导作用,减少HBZY-1细胞的凋亡,并缓解氧化应激反应。     

碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体构建及对过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡的影响

背景：已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor , bFGF)可抑制血管内皮细胞凋亡。 目的：构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢(H₂O₂)诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。 方法：通过基因亚克隆构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,利用脂质体介导将bFGF 基因导入人脐静脉内皮细胞内,通过荧光观察和RT-PCR检测基因的表达。实验分为3组,对照组(转染pcDNA3.1)、过氧化氢组(转染pcDNA3.1+ H₂O₂)和bFGF转染+过氧化氢组(转染pcDNA3.1-bFGF-GFP+H₂O₂),流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3 P17活性亚单位和Bax蛋白表达。 结果与结论：成功构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,该载体转染人脐静脉内皮细胞后,bFGF mRNA显著增加,并可观察到绿色荧光。与对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量都明显增加(P < 0.01),而bFGF 转染+过氧化氢组的细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量则比过氧化氢组显著降低(P < 0.01)。证实bFGF基因转染能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bax蛋白表达和caspase-3活性有关。     

NR2F2促进小鼠MC3T3-E1前成骨细胞增殖

目的探讨NR2F2基因对小鼠前成骨细胞增殖的影响。方法用实时定量PCR检测mRNA表达量,MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,ELISA-Brdu法检测细胞DNA合成速度。结果在小鼠MC3T3-E1前成骨细胞增殖速度加快时,NR2F2基因的表达增高至对照的4.57±0.30倍(P<0.01)。过表达NR2F2基因促使MC3T3-E1细胞增殖速度加快,细胞数量增加(P<0.01),细胞周期中S期细胞比例明显升高,为对照组的2倍,G2/M期比例也有增加(P<0.05)。过表达NR2F2基因使MC3T3-E1细胞的Brdu掺入率增高,DNA的合成加速(P<0.01)。结论 NR2F2使S期细胞比例增加,促进小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖速度。     

长链非编码RNA H19抑制地塞米松致成骨细胞凋亡的作用

背景：激素性股骨头坏死的发病机制尚不清楚,成骨细胞凋亡与其关系密切。目的：探讨长链非编码RNA H19(long Non-Coding RNA H19,lncRNA H19)在地塞米松促进成骨细胞凋亡中的作用。方法：培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分为对照组(不处理)和地塞米松组(1μmol/L地塞米松处理24 h),采用Western blot检测各组细胞Bax、Bcl-2和细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2/ERK1/2)蛋白的表达,流式细胞术和细胞活力染色检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测lncRNAH19的表达。转染lncRNA H19阴性对照(ad-NC)和lncRNA H19过表达质粒(ad-lncRNA H19)并给予地塞米松干预24 h后,采用细胞活力染色、Western blot和流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡情况;使用MAPK-ERK通路抑制剂PD98059处理MC3T3-E1细胞24 h,Western blot检测各组细胞Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果与结论：(1)与对照组相比,地塞米松组MC3T3-E1细胞凋亡率升高,lncRNA H19相对...     

牛蒡子苷元诱导人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及其作用机制

 目的: 探讨牛蒡子苷元(arctigenin,ARG)对人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的影响及其分子作用机制。方法: 经不同浓度的ARG处理CNE-1细胞后,采用CCK-8法检测ARG对CNE-1细胞活力的影响;caspase-3及caspase-9活性检测法检测CNE-1细胞caspase-3及caspase-9活性的变化;流式细胞术分析CNE-1细胞凋亡率的变化; real-time PCR法检测PI3K/AKT/XIAP信号通路相关分子mRNA表达水平的变化;Western blot法检测PI3K/AKT/XIAP通路蛋白水平的变化。结果: 随浓度和时间的增加,ARG可抑制鼻咽癌CNE-1细胞的活力(P<0.01);caspase-3及caspase-9活性的增加及细胞凋亡率的升高表明ARG可显著促进CNE-1细胞的凋亡;与对照组相比,PI3K/AKT/XIAP信号通路相关分子对mRNA表达均明显下调(P<0.01);ARG可明显下调PI3K/AKT/XIAP各蛋白水平(P<0.05)。结论: ARG可诱导鼻咽癌细胞凋亡,降低PI3K/AKT/XIAP相关分子水平可能是其促进细胞凋亡的机制。     

雷公藤红素通过ROS/JNK途径诱导Saos-2细胞发生caspase依赖的凋亡

目的:探讨雷公藤红素对人骨肉瘤细胞Saos-2的杀伤作用及相关机制。方法:将人骨肉瘤细胞Saos-2用各种不同的浓度的雷公藤红素治疗后,采用MTT法检测雷公藤红素对Saos-2细胞活力的抑制作用;采用流式细胞术检测用雷公藤红素处理后Saos-2细胞的凋亡及活性氧簇(ROS)的产生;Western blot检测雷公藤红素处理后Saos-2细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平。结果:雷公藤红素有显著的体外抗骨肉瘤作用,能显著抑制Saos-2细胞的活力。雷公藤红素可显著诱导Saos-2细胞发生凋亡,产生ROS。雷公藤红素处理后Saos-2细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平均显著上升。结论:雷公藤红素通过ROS/JNK途径诱导人骨肉瘤Saos-2细胞发生caspase依赖的凋亡。     

高糖对成骨细胞MC3T3-E1凋亡和氧化应激的影响

目的评价高糖环境对成骨细胞MC3T3-E1凋亡和氧化应激的影响,为临床治疗糖尿病骨质疏松症提供实验基础。方法在细胞培养瓶中加入不同浓度高糖溶液(0、20、40、80 mmol/L)培养成骨细胞株MC3T3-E1,24 h后分别采用CCK-8测定其细胞存活率、细胞凋亡率,线粒体膜电位试剂盒测定其去极化程度,半胱天冬酶-3(Caspase-3)试剂盒检测其活性,DCFH-DA荧光探针检测ROS的生成。在80 mmol/L高糖环境暴露,MC3T3-E1细胞在抗氧化剂NAC作用下,采用上述方法测其线粒体膜电位和Caspase-3含量。结果与对照组相比,成骨细胞MC3T3-E1在高糖暴露下的存活率和线粒体膜电位下降,细胞凋亡率、细胞活性氧水平和Caspase-3活性增强,且都存在剂量依赖性;抗氧化剂NAC抑制高糖引起MC3T3-E1细胞线粒体膜电位降低和Caspase-3增高。结论高糖环境下,NAC通过抑制高糖引起的氧化应激,降低细胞凋亡率,保护成骨细胞MC3T3-E1。