雷帕霉素和3-甲基腺嘌呤对RAW264.7细胞中8种miRNAs表达的影响

目的探究雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)和3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理对RAW264.7细胞中miR-181c,miR-101b和miR-1192等8种自噬相关miRNAs的表达水平,为研究miRNAs在细胞自噬中的功能提供理论基础。方法生物信息学预测分析与细胞自噬相关的miRNAs并构建miRNAs调控细胞自噬的网络图;分别用Rapa和3-MA对RAW264.7细胞做不同条件处理,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测不同条件处理后RAW264.7细胞中miR-181b、miR-181c、miR-101b、miR-1192、miR-362-3p、miR-590-3p、miR-875-5p和miR-335-5p的相对表达量。结果生物信息学预测结果显示8种miRNAs可能分别靶向作用于细胞自噬通路中多个关键蛋白,对细胞自噬起到促进或抑制作用;与正常对照组相比,miR-181c、miR-101b、miR-1192、miR-362-3p、miR-335-5p、miR-875-5p在Rapa处理RAW264.7细胞组中表达显著下调(P0.05),而在3-MA处理组则都显著上调(P0.05);miR-181b在Rapa组表达显著上调,在3-MA组表达下调(P0.05);miR-590-3p在Rapa组和3-MA组都无显著性变化(P0.05)。结论 miR-181c、miR-101b等7种miRNAs可能在RAW264.7巨噬细胞自噬过程中发挥重要调控作用。     

微小RNA-423-5p靶向乙醛脱氢酶2减轻脂多糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤

目的 探讨微小RNA-423-5p(miR-423-5p)对脂多糖（LPS）诱导血管内皮细胞损伤的保护及作用机制。方法 用1 mg/L LPS诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）24 h,Real-time PCR和Western blotting检测细胞中miR-423-5p和乙醛脱氢酶2（ALDH2）的表达。通过转染anti-miR-423-5p和pcDNA-ALDH2下调miR-423-5p和上调ALDH2表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,并用ELISA试剂盒检测LPS诱导后细胞上清液中白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量;双荧光素酶报告系统验证miR-423-5p与ALDH2的调控关系。结果 与对照相比,LPS可诱导HUVECs凋亡和损伤,使HUVECs中miR-423-5p、Bax表达量及IL-6和TNF-α分泌量均显著升高（P<0.05）,ALDH2的mRNA和蛋白表达量及Bcl-2量显著降低（P<0.05）;下调mi-423-5p表达和过表达ALDH2均可减轻LPS诱导的HUVECs损伤并抑制细胞凋亡;miR-423-5p靶向负调控ALDH2的表达;抑制ALDH2表达逆转了下调miR-423-5p表达对LPS诱导的HUVECs损伤的作用。结论 下调miR-423-5p表达可靶向ALDH2减轻LPS对HUVECs的损伤并抑制细胞凋亡。     

LPS对16HBE细胞AQP1、AQP5表达的影响及作用机制

目的 探讨LPS对16HBE细胞AQP1、AQP5表达的影响及作用机制。方法 用1、10、100、500、1 000 ng/ml的LPS干预16HBE细胞24 h,real-time PCR检测AQP1、AQP5 m RNA的表达;用100 ng/ml的LPS分别干预16HBE细胞0、3、6、12、24、48 h,real-time PCR检测AQP1、AQP5 m RNA的表达;以100 ng/ml的LPS分别干预16HBE细胞0、5、15、30、60 min,Western blot检测p38 MAPK信号通路的变化;LPS单独或联合p38 MAPK特异性阻断剂SB203580干预16HBE细胞24 h,real-time PCR和Western blot分别检测AQP1、AQP5的变化及p38 MAPK信号通路的变化。结果 与对照组相比,10、100、500、1 000 ng/ml的LPS均可显著抑制AQP1和AQP5的表达(P<0.01),且具有剂量依赖效应;100 ng/ml的LPS干预16HBE细胞3 h后,AQP1和AQP5 m RNA的表达即发生下降,并于24 h降到最低;LPS能够显著激活p38 MAPK信号通路,其磷酸化水平于30 min达到高峰;与LPS单独干预组相比,LPS+SB203580组AQP1和AQP5的表达水平发生明显上升(P<0.01)。结论 LPS可通过激活p38 MAPK信号通路下调16HBE细胞AQP1和AQP5的表达。     

miR-874-3p靶向结合SDC1抑制胶质瘤血管生成拟态

目的本研究旨在探讨miR-874-3p调控胶质瘤血管生成拟态的潜在分子机制。方法应用实时定量PCR检测miR-874-3p在胶质瘤细胞系U87细胞中的表达水平;应用双荧光素酶报告基因分析系统检测miR-874-3p和SDC1的结合作用;应用CCK-8法、transwell法、体外管形成实验检测miR-874-3p或SDC1表达变化对U87细胞增殖、迁移、侵袭和管形成能力的影响。结果 miR-874-3p在U87细胞中低表达,过表达miR-874-3p显著抑制U87细胞的增殖、迁移、侵袭和管形成能力。SDC1在U87细胞中的表达上调,沉默SDC1显著抑制U87细胞增殖、迁移、侵袭和管形成能力。miR-874-3p靶向SDC1 3'UTR。结论 miR-874-3p通过靶向结合SDC1抑制胶质瘤血管生成拟态。     

microRNA-424-5p对人胃癌细胞SGC-7901自噬的影响及机制

目的研究microRNA-424-5p(miR-424-5p)对人胃癌细胞SGC-7901自噬的影响及可能机制。方法培养人正常胃黏膜上皮细胞GES和人胃癌细胞SGC-7901,应用实时定量PCR方法检测miR-424-5p的表达水平;应用Lipofectamine LTX试剂将化学合成的miR-424-5p agomir和miR-424-5p antagomir转染人胃癌细胞SGC-7901,验证转染效率后应用MTT方法检测细胞活力;应用免疫荧光法检测自噬标记物微管相关蛋白轻链-3(LC3)和自噬降解底物p62/SQSTM1在SGC-7901细胞的分布;应用Western blot方法检测LC3-Ⅱ、p62/SQSTM1和自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平。结果 miR-424-5p在人胃癌细胞SGC-7901中呈低表达,miR-424-5p过表达显著抑制人胃癌细胞SGC-7901的细胞活力,miR-424-5p表达沉默的作用效果与之相反。miR-424-5p过表达后自噬标记物LC3在SGC-7901细胞的胞浆内呈点状分布,荧光表达显著增强,并且LC3-II的蛋白表达水平显著上调,同时伴有自噬降解底物p62/SQSTM1在细胞浆内荧光表达显著减弱,蛋白表达下调,此外,自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平显著上调;miR-424-5p表达沉默的作用效果与之相反。结论 miR-424-5p过表达明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的细胞活力,诱导细胞发生自噬,其机制之一可能与自噬相关蛋白Beclin1上调有关。     

miR-483-5p通过上调IGF2基因转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭

目的:探讨miR-483-5p对人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因P3启动子驱动的m RNA(P3 m RNA)表达的影响及其在肝细胞癌发生发展中的作用。方法:(1)采用real-time PCR检测人肝癌细胞株Huh7、Hep3B、Bel-7402、Hep G2和SMMC-7721,人正常肝细胞株HL-7702,83例人肝细胞癌组织和配对的癌旁组织,22例正常肝组织中miR-483-5p和P3 m RNA的表达水平,并应用Pearson相关分析评估P3 m RNA与miR-483-5p表达水平之间的关系。(2)将IGF2基因P3 m RNA的5’端非翻译区(5’UTR)克隆入p GL3启动子载体,构建P3 m RNA 5’UTR野生型(p GL3-P3-5’UTR-WT)及P3 m RNA 5’UTR突变型(p GL3-P3-5’UTR-MUT)重组萤光素酶报告质粒,将其分别与miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control共转染He La、293T及Huh7细胞,采用双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性。(3)分别将miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control转染Huh7及Hep3B肝癌细胞,应用real-time PCR检测这2种肝癌细胞P3 m RNA表达水平的变化。(4)应用real-time PCR检测肝癌细胞Huh7及Hep3B的细胞核和细胞质中miR-483-5p的表达水平;应用核连缀实验(nuclear run-on assay)分析miR-483-5p对P3 m RNA转录的影响;应用RNA稳定性实验分析miR-483-5p对P3 m RNA稳定性影响。(5)应用体外细胞功能实验研究miR-483-5p对Huh7肝癌细胞生长、凋亡、迁移与侵袭能力的影响。结果:(1)5种肝癌细胞株miR-483-5p及P3 m RNA表达水平均明显高于正常肝细胞株HL-7702(P0.01),肝细胞癌组织中miR-483-5p及P3 m RNA表达水平均明显高于配对的癌旁组织及正常肝组织(P0.01);线性相关分析显示,在5种肝癌细胞株及肝细胞癌组织中,P3 m RNA表达水平均与miR-483-5p水平呈正相关。(2)萤光素酶实验显示,miR-483-5p与P3m RNA 5’UTR的同源位点互补结合可促进P3 m RNA的表达。(3)瞬时转染实验显示,过表达miR-483-5p呈剂量依赖性促进Hep3B和Huh7肝癌细胞P3 m RNA表达水平的增高。(4)miR-483-5p表达实验显示,成熟miR-483-5p存在于肝癌细胞Hep3B和Huh7的细胞质和细胞核中;核连缀实验显示,miR-483-5p诱导Huh7肝癌细胞核中新生P3 m RNA转录;RNA稳定性实验表明,miR-483-5p不改变Huh7肝癌细胞P3 m RNA稳定性。(5)体外细胞功能实验显示,miR-483-5p促进Huh7肝癌细胞增殖,抑制其凋亡,并增强迁移与侵袭能力。结论:miR-483-5p高表达可部分通过上调IGF2基因P3 m RNA转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭,进而参与肝细胞癌发生。     

miR-708-5p通过靶向URGCP抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、转移的研究

目的 探讨miR-708-5p对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与上调基因-4(upregulated gene-4/upregulator of cell proliferation,URG4/URGCP)的靶向关系.方法 选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为Control组(未进行任何处理),NC组(转染随机序列RNA Oligo),miR-708-5p组(转染miR-708-5p mimics).MTT检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell小室实验检测侵袭能力,划痕实验检测迁移能力,Western blot检测URGCP表达水平;实时荧光定量PCR检测miR-708-5p、URGCP基因mRNA表达水平;荧光素酶实验验证miR-708-5p与URGCP的靶向关系.结果 与HLF-1细胞株相比,肺癌细胞株A549细胞miR-708-5p表达水平降低,URGCP-mRNA表达升高(P<0.05),同时,URGCP蛋白水平升高.转染72h后,与Control、NC组比较,miR-708-5p组细胞URGCP基因mRNA明显降低,URGCP蛋白表达量明显降低(P均<0.01).miR-708-5p组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显低于Control、NC组(P<0.05).与WT-URGCP组相比,miR-708-5p+WT-URGCP组细胞荧光素酶活性明显降低(P<0.01).结论 miR-708-5p在非小细胞肺癌A549细胞中低表达,过表达miR-708-5p可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,机制可能与负性调控URGCP有关.     

过表达miR-17-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及可能机制

目的探讨miR-17-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及可能机制。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-17-5p模拟物组、miR-17-5p阴性对照组及空白对照组,将miR-17-5p模拟物转染至miR-17-5p模拟物组细胞,阴性对照组细胞转染无关序列,空白对照组细胞不作任何处理,采用real time PCR方法验证其转染效率,用MTT方法检测转染后各组SKOV3细胞的增殖能力变化。采用双荧光素酶报告基因验证P21是否为miR-17-5p的靶基因,real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞P21m RNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-17-5p模拟物组SKOV3细胞miR-17-5p表达水平显著升高,但细胞增殖能力显著降低。双荧光素酶报告基因分析结果显示,P21为miR-17-5p的靶基因;过表达miR-17-5p后,P21m RNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论 miR-17-5p抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖可能与下调P21的表达相关。     

下调miR-129-5p水平减轻酒精引起的Caco-2人肠上皮细胞屏障功能障碍

目的研究miR-129-5p对酒精诱导的肠上皮细胞屏障功能障碍的作用。方法实时定量PCR检测酒精性肝病患者和健康人乙状结肠活检组织以及酒精诱导的分化的Caco-2细胞中miR-129-5p的表达。然后将分化的Caco-2细胞分成4组:对照组、酒精处理组(50 mmol/L酒精处理1 h)、酒精联合miR-129-5p抑制物处理组(酒精处理前,先转染miR-129-5p抑制物)和酒精联合miR-129-5p抑制物对照组(酒精处理前,先转染miR-129-5p抑制物对照)。酒精处理后使用电阻仪检测跨上皮电阻(TER)值, Western blot法检测紧密连接相关蛋白闭合蛋白(occludin)和闭锁小带蛋白1(ZO-1)表达。结果与健康人相比,酒精性肝病患者乙状结肠活检组织中miR-129-5p的表达升高。酒精诱导后分化的Caco-2细胞中miR-129-5p的表达也上调。与对照组相比,酒精处理组中TER值、 occludin和ZO-1表达均降低;与酒精处理组相比,酒精联合miR-129-5p抑制物处理组中TER值、 occludin和ZO-1表达均升高。结论 miR-129-5p在酒精性肝病患者乙状结肠和酒精诱导的分化的Caco-2细胞中的表达均上调,下调miR-129-5p的表达可减轻酒精诱导的肠上皮细胞屏障功能障碍。     

miR-29b通过调控Bax基因抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡

目的探讨miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的A549细胞分为对照组、LPS组(给予10 mg/L的LPS处理)、LPS+miR-NC组(转染miR-29b mimics阴性对照后给予LPS处理)、LPS+miR-29b组(转染miR-29b mimics后给予LPS处理);用RT-qPCR检测细胞中miR-29b的表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测Bax和miR-29b的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组、LPS+miR-NC组和LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显降低,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显升高,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实Bax是miR-29b的潜在靶基因。结论miR-29b可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控Bax表达有关。     

miR-874-3p靶向GALNT4调控宫颈癌细胞增殖与凋亡的分子机制研究北大核心CSCD

目的:研究miR-874-3p是否通过靶向GALNT4影响宫颈癌细胞增殖和凋亡。方法:qRT-PCR和Western blot检测宫颈癌细胞系miR-874-3p、GALNT4 mRNA和GALNT4蛋白表达。HeLa细胞转染miR-874-3p或si-GALNT4,Western blot检测GALNT4、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、Cleaved-Caspase-3、β-catenin表达,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。starBase预测与双荧光素酶活性检测分析miR-874-3p和GALNT4的靶向关系。共转染miR-874-3p和pcDNA-GALNT4,观察过表达GALNT4对miR-874-3p过表达诱导的HeLa细胞增殖和凋亡的影响。结果:与宫颈上皮永生化细胞H8相比,宫颈癌SiHa、HeLa、Caski细胞miR-874-3p表达降低,GALNT4 mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。过表达miR-874-3p降低HeLa细胞CyclinD1、β-catenin蛋白表达及细胞增殖率,提高Cleaved-Caspase-3蛋白表达和凋亡率(P<0.05)。抑制GALNT4表达降低HeLa细胞CyclinD1蛋白表达及增殖率,提高Cleaved-Caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率(P<0.05)。miR-874-3p靶向调控GALNT4表达。过表达GALNT4可部分反转miR-874-3p过表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、CyclinD1、β-catenin蛋白表达的抑制作用,及对细胞凋亡、Cleaved-Caspase-3蛋白表达的促进作用。结论:miR-874-3p通过靶基因GALNT4调控Wnt/β-catenin信号通路,抑制宫颈癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

miR-133b靶向调节Bcl-w基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-133b及Bcl-w在甲状腺乳头状癌组织中的表达,以及抑制或过表达miR-133b对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测17例患者甲状腺乳头状癌组织及对应的癌旁组织中miR-133b的表达,Western bolt法检测Bcl-w蛋白的表达。将miR-133b inhibitors及miR-133b mimics转染至甲状腺乳头状癌K1细胞株,Western blot方法检测转染后Bcl-w蛋白的表达变化,CCK-8方法和克隆形成实验检测转染后K1细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-133b在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.01),而Bcl-w蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P0.01)。转染miR-133b inhibitors的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内Bcl-w蛋白表达亦明显升高(P0.01)。转染miR-133b mimics的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著降低,细胞内Bcl-w蛋白表达亦明显降低(P0.01)。结论 miR-133b抑制甲状腺乳头状癌K1细胞的增殖和侵袭可能与下调Bcl-w的表达相关。     

miR-203a-5p通过抑制丝裂原活化蛋白激酶1的表达调控人牙周膜干细胞的炎性反应

目的检测炎性人牙周膜干细胞(hPDLSCs)中miR-203a-5p及丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)的表达水平,探讨二者间的靶向关系对牙周炎炎性反应的调控作用。方法分离培养及流式细胞计量术鉴定hPDLSCs;将hPDLSCs分为:对照组、LPS刺激组、miR-203a-5p模拟物转染组及miR-203a-5p抑制剂转染组,用RT-qPCR检测miR-203a-5p及MAPK1 mRNA表达,Western blot检测MAPK1蛋白表达,双荧光报告系统验证miR-203a-5p与MAPK1的靶向关系。结果干细胞表面标志物CD73及CD90阳性;LPS刺激组miR-203a-5p的表达明显上调(P0.05);miR-203a-5p模拟物及LPS使miR-203a-5p的表达明显上调(P0.05),同时MAPK1 mRNA及蛋白的表达下调(P0.05);miR-203a-5p抑制物使miR-203a-5p的表达量下降(P0.05),同时MAPK1 mRNA及蛋白的表达增加(P0.05);miR-203a-5p与MAPK1具有靶向作用。结论 miR-203a-5p通过靶向下调MAPK1基因的表达来调控牙周炎的炎性反应过程。     

miR-199a-3p 通过靶向 CABLES-1 调控流体剪切力介导的成骨细胞增殖

目的 探讨miR-199a-3p在流体剪切力(fluid shear stress, FSS)诱导成骨细胞增殖中的作用及其可能的分子机制。方法 对成骨细胞MC3T3-E1加载1.2 Pa FSS,时间分别为0、15、30、45、60、75、90 min。使用miR-199a-3p模拟物或miR-199a-3p抑制物转染MC3T3-E1细胞。使用将过表达的miR-199a-3p以及其阴性对照分别转染MC3T3-E1细胞,并以1.2 Pa FSS处理45 min。将pcDNA NC、pcDNA-CABLES-1、si RNA NC、si RNA CABLES-1转染至MC3T3-E1细胞中。分别共转染pc DNA-CABLES-1与miR-199a-3p mimic以及si RNA-CABLES-1与miR-199a-3p inhibitor。CCK-8实验检测细胞活性;RT-qPCR检测CABLES-1、 miR-199a-3p、CDK 6、Cyclin D1、PCNA表达水平;荧光素酶报告实验检测CABLES-1和miR-199a-3p的靶向关系。免疫荧光检测CABLES-1蛋白表达。...     

头颈部鳞状细胞癌预后相关的miRNAs的生物信息学分析

目的 利用癌症基因组图谱（TCGA）数据库微小核糖核酸（miRNAs）表达谱数据分析头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）与癌旁正常组织间差异表达的miRNAs,结合临床信息寻找与HNSCC预后相关的miRNAs。方法 从TCGA中下载miRNAs表达数据,包括39例HNSCC患者和39个肿瘤邻近正常组织样本筛选差异表达的miRNAs,应用481例HNSCC患者的miRNAs表达谱和临床信息来评估找到的差异表达miRNAs的预后作用。结果 共筛选出114个差异表达的miRNAs,包括60个上调和54个下调的miRNAs。Kaplan-Meier生存分析显示miR-4652-5p和miR-99a-3p与HNSCC患者预后相关,单因素和多因素Cox回归分析显示,miR-4652-5p和miR-99a-3p是HNSCC的重要预后因素。结论 miR-4652-5p和miR-99a-3p与HNSCC患者预后相关,但miR-4652-5p和miR-99a-3p在头颈鳞状细胞癌发生发展中的分子机制仍需更全面的基础和临床研究进行探讨。     

长链非编码RNA-LINC00485在肺癌中的表达及对细胞增殖和迁移的影响

目的观察长链非编码RNA-LINC00485(LINC00485)在肺癌细胞株及组织中的表达,探讨其对肺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR检测LINC00485在4种肺癌细胞株(H1975、A549、HCC827、H1299)、正常肺泡上皮细胞HPAEPIC和12例肺癌组织及癌旁组织中的差异性表达。通过生物信息学方法预测LINC00485可能结合的微小RNA(miRNA)及靶基因,将靶向沉默LINC00485的小干扰RNA(siRNA)通过脂质体转染至HCC827细胞。应用qRT-PCR检测LINC00485、miR-361-5p、p21活化蛋白激酶2(PAK2) mRNA的表达水平。采用Western blot法检测PAK2蛋白的表达水平。应用MTS法检测细胞增殖能力、细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果与正常肺泡上皮相比,LINC00485在肺癌细胞株中均呈高表达(P 0. 05),其中在HCC827细胞中表达水平最高。LINC00485在肺癌组织中的表达水平高于其癌旁组织(P 0. 01)。下调HCC827细胞LINC00485的表达后,miR-361-5p的表达上调(P 0. 01),PAK2 mRNA和蛋白的表达下调(P 0. 01),HCC827细胞增殖能力降低(P 0. 05),细胞迁移能力下降(P 0. 01)。结论 LINC00485在肺癌细胞株和组织中表达升高,下调LINC00485可通过调控miR-361-5p和PAK2基因的表达,抑制肺癌HCC827细胞的增殖和迁移能力。     

miR-107对人脑微血管内皮细胞增殖、迁移和血管形成能力的影响

目的探讨miR-107对人脑微血管内皮细胞增殖、迁移和血管形成能力的影响。方法miR-107化学模拟物agomir转染人脑微血管内皮细胞,CCK-8细胞活性分析实验和Transwell法分别检测内皮细胞增殖和迁移能力变化,体外血管生成实验检测内皮细胞成管能力的改变。结果内皮细胞转染miR-107化学模拟物agomir显著上调miR-107的表达。与阴性对照组(agomiR-NC组)相比,miR-107过表达组(agomiR-107)内皮细胞增殖和迁移显著减少,体外成管能力显著降低(P0.05)。结论miR-107能够抑制脑微血管内皮细胞增殖、迁移并降低其体外成管能力。     

miR-181b慢病毒载体的构建及其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用

目的构建miR-181b慢病毒过表达载体,探讨其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用。方法分别构建p SicoR-miR-181b及pmiR-Report-MAPK1过表达载体,转染HEK-293T细胞后,用实时荧光定量PCR(RTq PCR)法检测MAPK1 mRNA的表达、用Western blot检测MAPK1蛋白的表达及用双荧光素酶报告基因活性验证miR-181b与MAPK1的靶向调控关系。结果成功构建了p SicoR-miR-181b及pmiR-Report-MAPK1重组质粒,miR-181b过表达明显抑制HEK-293T细胞MAPK1蛋白及mRNA表达水平(P0.05),抑制miR-181b的表达后,MAPK1的蛋白及mRNA的表达水平上调(P0.05)。结论成功构建p SicoR-miR-181b慢病毒载体,并证实通过靶向作用MAPK1-3'UTR的特异序列直接抑制MAPK1基因的表达。     

miR-125b-5p 靶向STAT3 调控血管内皮细胞凋亡

目的:探讨miR-125b-5p靶向STAT3对血管内皮细胞凋亡影响。方法:过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡,qPCR法测定miR-125b-5p表达。血管内皮细胞中转染miR-125b-5p mimics,MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞PCNA和C-caspase-3蛋白水平。靶基因预测软件预测STAT3与miR-125b-5p的靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。血管内皮细胞共转染STAT3过表达载体及miR-125b-5p mimics,检测细胞活力、凋亡及PCNA、C-caspase-3蛋白表达。结果:过氧化氢处理后的血管内皮细胞中miR-125b-5p水平下降,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞PCNA蛋白表达降低,C-caspase-3蛋白表达提高。转染miR-125b-5p mimics可提高过氧化氢条件下血管内皮细胞活力,减少细胞凋亡,提高细胞PCNA蛋白水平,降低细胞C-caspase-3蛋白水平。miR-125b-5p靶向调控STAT3表达。STAT3过表达载体可逆转miR-125b-5p mimics对过氧化氢诱导的血管内皮细胞活力和凋亡的影响。结论:miR-125b-5p靶向STAT3抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡。     

miR-212通过靶向NRP1调节结肠癌SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答北大核心CSCD

目的:探讨miR-212在SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答中的调控作用,并初步分析其调控机制。方法:结肠癌SW480细胞分别转染mimic、miR-NC或miR-212-5p,RT-PCR检测神经纤毛蛋白1(NRP1)和miR-212-5p表达水平并进行相关性分析;TargetScan预测miR-212-5p潜在靶向基因NRP1,荧光素酶实验验证靶向关系;SW480细胞单独或联合转染miR-212-5p和pcDNA-NRP1,RT-PCR检测miR-212-5p和NRP1 mRNA表达水平,Western blot检测NRP1蛋白表达水平;流式细胞术分选干细胞阳性标记(CD44+)比例,Western blot检测性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(LGR5)蛋白表达;ELISA测定SW480细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL-4蛋白含量,RT-PCR检测IL-6和IL-4 mRNA表达水平。结果:与Control组相比,miR-212-5p显著上调SW480肿瘤干细胞miR-212-5p表达(P<0.05),下调NRP1表达(P<0.05),抑制CD44+、SOX2、LFR5表达(P<0.05),促进炎症反应和免疫应答(P<0.05);与NRP1组相比,miR-212-5p明显抑制因NRP1上调的CD44+、SOX2和LGR5表达(P<0.05),促进因NRP1下调的炎症因子表达(P<0.05)。结论:miR-212-5p靶向抑制NRP1表达,调节结肠癌SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答。