白细胞介素-6对胰腺癌荷瘤小鼠移植瘤生长及Caspase-3/Bax/Bcl-2信号通路的影响

目的 探讨白细胞介素（IL)-6促进胰腺癌MPC-83细胞荷瘤小鼠移植瘤生长的Caspase-3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路的作用机制。 方法 取40只小鼠,腋部皮下注射小鼠胰腺癌MPC-83细胞制作胰腺癌荷瘤动物模型,随机分为空白对照组（A组）,腹腔注射PBS 10 ml/kg;IL-6组（B组）,腹腔注射重组小鼠IL-6 200 μg/kg;IL-6受体阻断剂组（C组）,腹腔注射托珠单克隆抗体100 mg/kg;IL-6+IL-6受体阻断剂组（D组）,腹腔注射托珠单抗 100 mg/kg,30 min后再注射重组小鼠IL-6 200 μg/kg,每组10只。各组小鼠每3 d给药1次,持续至28 d。于实验开始后第0、7、14、21及28天,记录瘤体积变化;采用ELISA法检测瘤组织生存素（survivin）和细胞色素C（Cyt-C）含量;采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法检测瘤组织Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结果 与A组比较,B组荷瘤小鼠瘤组织第7、14、21及28天生长较快,瘤组织生存素含量升高,细胞色素C含量下降,Caspase-3和Bax mRNA和蛋白表达水平下调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调（P<0.05,P<0.01）;与B组比较,C组与D组荷瘤小鼠瘤组织第14、21及28天生长缓慢,瘤组织生存素含量降低,细胞色素C含量升高,Caspase-3、Bax mRNA和蛋白表达水平升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05,P<0.01）;C组与D组比较,各检测指标差异无显著性（P> 0.05）。结论 IL-6促进胰腺癌生长增殖的作用与其调控Caspase-3/Bax/Bcl-2细胞凋亡信号通路相关。     

重组新城疫病毒rl-RVG抑制A549荷瘤鼠的瘤体生长

目的 探讨稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒疫苗对人肺腺癌A549细胞荷瘤鼠的生长抑制及其可能促凋亡机制.方法 将rl-RVG感染到成功建立的A549荷瘤鼠瘤体内,检测对瘤体生长抑制率;RT-PCR检测NDV HN基因及RVG基因的表达;TUNEL检测肿瘤细胞的凋亡;蛋白印迹法测caspase系列、Bax、Bcl-2表达;NDV及PBS作为对照.结果 与对照组相比,rl-RVG组荷瘤鼠瘤体增长明显缓慢;RVG及NDV基因表达;rl-RVG组肿瘤细胞凋亡明显增加(P＜0.05);rl-RVG组caspase-3,8和9高表达(P＜0.01),Bax/Bcl-2比值明显高于对照组(P＜0.01).结论 rl-RVG成功感染至A549荷瘤鼠,其对A549荷瘤鼠瘤体生长有着明显的抑制作用,且可能与rl-RVG激活机体的Bcl-2和caspase家族诱导凋亡相关.     

沉默生物钟基因Timeless对卵巢癌SKOV3细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的:探讨沉默生物钟基因Timeless(TIM)对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡和侵袭能力的影响。方法:免疫组化法检测卵巢癌组织及正常卵巢组织中TIM蛋白表达,分析TIM表达与卵巢癌病理特征的相关性。选取卵巢癌SKOV3细胞,随机分为空白对照组、siRNA对照组和TIM沉默(TIM siRNA)组。采用Western blot检测TIM、Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、caspase-3和caspase-9蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果:TIM蛋白在正常卵巢组织中呈阴性表达,在卵巢癌组织中呈阳性表达。卵巢癌组织中TIM阳性表达率(84.0%)显著高于正常卵巢组织(10.0%;P0.01)。TIM表达与卵巢癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P0.05),而与年龄和病理类型无关(P0.05)。TIM siRNA组中TIM、MMP-2、MMP-9和Bcl-2的蛋白表达显著低于空白对照组和siRNA对照组(P0.01),而Bax、caspase-3和caspase-9的蛋白表达显著高于空白对照组和siRNA对照组(P0.01);空白对照组和siRNA对照组之间TIM、MMP-2、MMP-9、Bcl-2、Bax、 caspase-3和caspase-9蛋白表达的差异无统计学显著性(P0.05)。TIMsiRNA组的细胞凋亡率显著高于空白对照组和siRNA对照组(P0.01);空白对照组和siRNA对照组之间细胞凋亡率的比较差异无统计学显著性(P0.05)。TIM siRNA组的细胞穿膜数显著低于空白对照组和siRNA对照组(P0.01);空白对照组和siRNA对照组之间细胞穿膜数的差异无统计学显著性(P0.05)。结论:利用siRNA沉默卵巢癌SKOV3细胞中TIM表达,可促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭。     

紫草素对卵巢癌细胞SKOV3/DDP顺铂耐药的逆转作用

目的:探讨紫草素是否逆转卵巢癌细胞SKOV3/DDP的顺铂耐药效应及其作用机制。方法:采用CCK-8法确定紫草素和顺铂的最佳作用条件,流式细胞术检测细胞的周期分布及凋亡率;Western blot检测周期及凋亡相关调控因子细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、P18、p-Rb、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:CCK-8实验结果显示,相较于单用顺铂,联合使用紫草素对顺铂耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP的生长抑制作用较为显著。此外,联用紫草素和顺铂可显著抑制细胞周期G_1/S转化,并增加细胞早期凋亡率。Western blot结果显示,相较于顺铂处理组,紫草素和顺铂联用组的cyclin D1、CDK2、p-Rb及Bcl-2的蛋白水平显著降低,而P18、Bax及cleaved caspase-3的蛋白表达显著增加。结论:紫草素可逆转卵巢癌SKOV3/DDP细胞的顺铂耐药效应,其作用机制可能与影响细胞周期及凋亡相关因子的表达,进而抑制细胞活力促进细胞凋亡相关。     

pcEgr-hp53稳定转染联合X射线诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及相关凋亡蛋白表达变化

目的：探讨辐射诱导表达载体pcEgr-hp53体外稳定转染人肺腺癌A549细胞后联合X射线照射,诱导细胞凋亡的作用及相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达的变化。方法：以脂质体介导携有外源野生型p53基因的辐射诱导表达载体pcEgr-hp53和pcDNA3.1,体外转染A549细胞,筛选稳定转染的细胞克隆并扩增培养,所表达的A549-hp53和A549-vect分别接受0、0.5、2和5Gy X射线照射,即8个实验组,采用TUNEL法和流式细胞术检测稳定转染联合辐射对细胞凋亡和Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达变化的影响。结果：A549-hp53组加不同剂量照射与0 Gy组比较,其百分数均明显增加（0.5-5Gy,P〈0.05-P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达在0.5-5Gy时明显下降,而Bax蛋白明显增加（P〈0.05-P〈0.01）,caspase-3蛋白表达在2-5Gy时明显增加（P〈0.01）;A549-hp53照射组不同剂量照射,与A549-vect相应照射剂量组比较,其百分数在0.5Gy时无明显差异,在2-5 Gy时为（P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达明显下降（0.5Gy,P〈0.01;2-5Gy,P〈0.05）,Bax和caspase-3蛋白表达0.5-5Gy时明显增加（P〈0.05-P〈0.01）。结论：体外p53基因转染联合X射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bax、caspase-3表达上调,具有显著的肿瘤抑制作用。     

抗HER-2抗体诱导人卵巢癌裸小鼠移植瘤细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨Herceptin对高表达HER-2的人卵巢癌SKOV-3裸小鼠移植瘤细胞的凋亡诱导作用及其可能的分子机制。方法建立动物模型,随机分为生理盐水(NS)组和Herceptin组。给药6周后,取肿瘤组织,HE染色和电镜观察细胞凋亡;并利用组织芯片为平台,TUNEL技术检测凋亡指数,进一步应用免疫组化技术结合显微图像分析技术检测肿瘤组织中的bc l-2/bax、Fas和caspase-3的表达。结果Herceptin组肿瘤细胞凋亡指数(7.96±3.04)显著高于NS组(2.58±1.49),其bax、Fas和caspase-3的表达增加,bc l-2和NF-κB的表达及bc l-2/bax比值下降。结论Herceptin可诱导人卵巢癌SKOV-3裸小鼠移植瘤细胞凋亡,其可能的机制是上调bax、Fas和caspase-3以及抑制bc l-2和NF-κB的表达。     

氯喹对S_(180)荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制

目的探讨氯喹(CQ)对小鼠移植性肉瘤S_(180)的抑瘤作用及其可能机制。方法采用40只S_(180)荷瘤小鼠分为模型组,氯喹低剂量组,氯喹中剂量组,氯喹高剂量组进行体内抑瘤实验,观察不同浓度氯喹对小鼠肉瘤S_(180)的抑制作用;透射电子显微镜观察氯喹作用下荷瘤鼠肿瘤细胞超微结构的变化;流式细胞术检测氯喹诱导荷瘤鼠S_(180)细胞凋亡的情况;免疫组织化学方法检测相关凋亡因子Bcl-2、细胞色素C和Cle-Caspase-3的表达情况;Western blotting检测荷瘤组织Bcl-2和Cle-Caspase-3蛋白表达水平的变化以及线粒体和细胞质中细胞色素C蛋白含量的变化。结果与模型组相比较,氯喹处理组小鼠移植肉瘤S_(180)生长速度显著减慢,肿瘤体积和瘤质量明显减小(P0.05);透射电子显微镜观察发现,与模型组比较氯喹处理组肿瘤细胞形态出现明显凋亡损伤改变,凋亡小体形成;各剂量组氯喹均可诱导荷瘤鼠S_(180)细胞凋亡,使抗凋亡因子Bcl-2表达下调,凋亡因子Cle-Caspase-3表达上调(P0.05);并且氯喹能够降低线粒体内细胞色素C蛋白的表达,提高细胞质细胞色素C蛋白的表达(P0.05),促使线粒体内细胞色素C向细胞质内释放。结论氯喹能够抑制小鼠S_(180)肉瘤的生长,可能是通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,从而发挥抑瘤的作用。     

叶黄素抑制叔丁基过氧化氢诱导的视网膜神经节细胞凋亡

目的:观察叶黄素(lutein)对叔丁基过氧化氢(t-BHP)处理的视网膜神经节细胞(RGC-5细胞系)的保护效应并探讨其作用机制。方法:用免疫荧光染色检测视网膜神经节特异性蛋白Brn-3和神经微管结合蛋白MAP-2的表达来鉴定RGC-5细胞;将RGC-5细胞随机分为对照组、t-BHP处理组、t-BHP和lutein共同处理组、lutein处理组,培养24 h,MTT实验检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学技术检测caspase-3蛋白的活化情况;Western blot检测Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3、JNK和c-Jun蛋白的变化。结果:MTT实验和流式细胞检测结果显示,lutein能提高t-BHP处理的RGC-5细胞的活力,并降低t-BHP诱导的RGC-5细胞凋亡;免疫荧光结果显示lutein能抑制t-BHP诱导的caspase-3的活化;与对照组比较,t-BHP处理后RGC-5细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P0.05),Bax/Bcl-2比率升高,cleaved caspase-3表达上调(P0.05),JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平增加(P0.05),t-BHP的上述作用可被lutein部分逆转。结论:Lutein能够降低t-BHP诱导的RGC-5细胞凋亡,其机制与其上调Bcl-2的表达、抑制caspase-3的活化并降低JNK和c-Jun蛋白的磷酸化有关。     

利拉鲁肽通过调节microRNA-375对胰岛细胞凋亡的影响

目的:观察利拉鲁肽通过微小RNA-375(microRNA-375,miR-375)对db/db小鼠胰岛细胞凋亡的影响,探讨其可能作用机制,为临床应用提供药效学依据。方法:20只8周龄雄性db/m小鼠为正常对照组,皮下注射等量的生理盐水。40只8周龄雄性db/db小鼠随机分为2组,每组20只:糖尿病对照组的db/db小鼠皮下注射等量生理盐水;利拉鲁肽组的db/db小鼠皮下注射利拉鲁肽300μg·kg~(-1)·d~(-1)。给药8周后,检测各组小鼠体重(BW)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,并进行腹腔注射葡萄糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐量实验(ITT);苏木精-伊红(HE)染色检测胰岛组织病理学变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测胰岛凋亡情况;Western blot法检测胰岛凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平;实时荧光定量PCR检测胰岛miR-375的表达水平。小鼠胰岛β细胞系MIN-6分为对照组(等量溶媒孵育)、miRNA-375 mimic组和miRNA-375 mimic+利拉鲁肽组,MTT实验检测细胞活力,Western blot法检测各组细胞caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平。结果:整体实验中,与对照组相比,利拉鲁肽组BW、FBG、FINS、TC、TG及LDL-C含量明显降低(P0.05);胰岛数量较模型组增多,体积较大,细胞结构明显改善;胰岛细胞凋亡减少;利拉鲁肽组的Bcl-2表达明显增高,caspase-3和Bax的表达显著下降(P0.05);胰岛组织miR-375的水平显著降低(P0.01)。细胞实验中,经miRNA-375 mimic处理24 h后,MIN-6细胞活力显著降低,Bcl-2表达减少,而caspase-3和Bax的蛋白水平显著增加(P0.05),给予利拉鲁肽组治疗后,MIN-6细胞活力明显上升,Bcl-2表达明显增高,caspase-3和Bax的蛋白水平显著下降(P0.05)。结论:利拉鲁肽可以抑制糖尿病胰岛β细胞的凋亡,其机制可能与调控胰岛组织中miR-375的表达有关。     

川楝素与γδ T细胞协同抗结直肠癌的作用及机制研究

目的:探讨γδT细胞对结直肠癌细胞的杀伤活性,并研究川楝素对γδT细胞的协同效应。方法:体外培养人γδT细胞并用流式细胞术进行鉴定。乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测γδT细胞和川楝素对人结直肠癌SW480细胞的杀伤活性。Western blot实验检测川楝素对SW480细胞中Bcl-2、Bcl-x L和MCL-1表达水平的影响。ELISA实验检测川楝素是否影响γδT细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和Fas配体(Fas L)的分泌。流式细胞术检测川楝素和γδT细胞处理后SW480细胞的线粒体膜电位和凋亡情况。Western blot实验检测川楝素和γδT细胞处理后SW480细胞caspase-9和caspase-3的活化。结果:体外培养的γδT细胞高表达CD3和γδT细胞受体(TCR)。川楝素处理能显著增强γδT细胞对SW480的杀伤活性。川楝素不影响γδT细胞TRAIL和Fas L的表达。川楝素不影响SW480细胞中Bcl-2和Bcl-x L的蛋白水平但显著抑制MCL-1的表达。转染MCL-1质粒能显著抑制川楝素对γδT细胞的协同效应。川楝素通过抑制MCL-1的表达促进γδT细胞对SW480细胞线粒体膜电位的损伤和凋亡的诱导。川楝素通过抑制SW480细胞MCL-1的表达促进γδT细胞对SW480细胞caspase-9和caspase-3的活化。结论:川楝素通过抑制MCL-1的表达发挥对γδT细胞的协同抗结直肠癌作用。     

芍药苷对APP/PS1小鼠的神经细胞保护作用及机制研究

目的:探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)通过抑制细胞凋亡通路而产生神经细胞保护作用的机制。方法:分别选用15只5月龄雄性APP/PS1非显性小鼠作为正常对照组,15只5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠为模型组和15只5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠为给药组(5 mg/kg的PF腹腔注射)。采用水迷宫实验检测各组小鼠的学习和记忆能力。采用TUNEL荧光染色法检测脑内神经细胞凋亡情况。采用Western Blot检测脑内皮层及海马区PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平,并用免疫组化分析caspase-3和caspase-9的蛋白表达水平及分布情况。结果:(1)与正常对照组相比,APP/PS1模型组小鼠的学习和记忆能力明显下降;与APP/PS1模型组相比,PF明显改善小鼠的学习和记忆能力。(2)与正常对照组相比,APP/PS1模型组小鼠脑内神经细胞凋亡明显增多,分布区域较广,而PF给药组小鼠凋亡细胞明显减少。(3)与APP/PS1模型组相比,PF给药组能显著下调促凋亡因子caspase-3、caspase-9和Bax的表达水平(P0.05),同时上调抑凋亡因子pPI3K、p-Akt和Bcl-2的表达水平(P0.05)。结论:PF可能通过激活PI3K/Akt通路而上调Bcl-2,下调caspase-9、caspase-3和Bax的蛋白表达水平,从而抑制神经细胞凋亡和保护神经细胞,以治疗神经退行性疾病。     

P53在急性肾损伤小鼠肾脏的表达及其与细胞凋亡的关系

 目的：探讨缺血再灌注致急性肾损伤（AKI）小鼠肾脏不同部位P53的表达及其与细胞凋亡的关系。方法：采用随机对照动物实验方法,将18只小鼠随机分为假手术组、AKI组及P53抑制剂pifithrin-alpha（PFT-α）组,每组6只。采用双侧肾蒂夹闭45 min后松开动脉夹的方法建立小鼠AKI模型,PFT-α组于建模前5 min腹腔注射PFT-α  2.2 mg/kg,并于建模后48 h采血检测尿素氮和肌酐,取肾脏组织行HE染色观察肾组织病理学变化,采用Western blotting法测定P53蛋白含量,免疫荧光法确定肾脏不同部位P53的表达,TUNEL法检测肾脏细胞凋亡,免疫组化方法检测肿瘤坏死因子受体（TNFR）、caspase-3及Bcl-2蛋白水平 。结果：（1）PFT-α组和AKI组小鼠血尿素氮和肌酐水平均明显高于假手术组,而PFT-α组与AKI组比较血尿素氮和肌酐水平明显降低（P<0.05）;肾组织HE染色显示假手术组肾组织细胞形态完整,排列整齐,无明显病理改变,AKI组肾小管上皮细胞刷状缘脱落、空泡及滴状变性,皮髓质间有明显淤血带;PFT-α组肾小管上皮部分刷状缘脱落消失,空泡及滴状变性减轻,皮髓质间无明显淤血带;（2）假手术组小鼠肾脏有少量P53表达且未检测到凋亡细胞,而AKI组小鼠缺血再灌注48 h后P53蛋白水平及凋亡细胞明显增加（P<0.05）,并且均主要定位在肾皮质,PFT-α组较AKI组小鼠肾脏P53蛋白含量及凋亡细胞指数均减少（P<0.05）;（3）与假手术组相比,AKI组小鼠肾脏TNFR蛋白及caspase-3蛋白水平升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白水平下降（P<0.05）,PFT-α组较AKI组小鼠肾脏TNFR蛋白及caspase-3蛋白水平降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白水平升高（P<0.05）。结论：急性肾损伤时,肾组织P53表达增加,主要定位于皮质,通过调控凋亡蛋白Bcl-2和TNFR的水平,促进caspase-3的释放,从而介导细胞凋亡。     

加味脑泰方对去势脑缺血大鼠海马ATF4/CHOP/Puma通路的影响

目的:研究加味脑泰方对去卵巢脑缺血大鼠海马活化转录因子4 (ATF4)/C/EBP同源蛋白(CHOP)/p53上调凋亡调控因子(Puma)通路的影响。方法:将雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、加味脑泰方组和阳性对照组,除假手术组外,其它大鼠均行去卵巢术;术后11 d,阳性对照组和加味脑泰方组给予相应药物灌胃,连续灌胃3 d后行脑缺血术。术后24 h进行行为学评价,取海马组织行RT-qPCR检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA表达,Western blot检测各组大鼠海马组织中Bax、Bcl-2、caspase-3、ATF4、CHOP和Puma蛋白表达。结果:与假手术组比较,各组的海马神经功能评分明显增高;与模型组比较,加味脑泰方组与阳性对照组的神经功能评分明显降低(P 0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马Bax、caspase-3、ATF4、CHOP和Puma的蛋白表达及Bax和caspase-3的mRNA表达明显升高,而Bcl-2的mRNA和蛋白表达明显降低(P 0.05);与模型组比较,加味脑泰方明显降低Bax、caspase-3、ATF4、CHOP和Puma表达,提高Bcl-2表达(P 0.05)。结论:加味脑泰方可能通过抑制ATF4/CHOP/Puma通路相关mRNA及蛋白的表达而减轻脑缺血损伤。     

人参皂苷Rh2对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的影响,并初步探讨可能的分子机制。方法:采用流式细胞术Annexin V-PI双染法和MTT法检测MG-63细胞的凋亡变化;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、Cyt C和激活型caspase-3的蛋白水平。结果:流式细胞术和MTT法结果显示人参皂苷Rh2呈浓度依赖性促进MG-63细胞的凋亡。免疫印迹法结果表明,与空白对照组相比,给药组细胞Bax的蛋白表达显著增加,Bcl-2的蛋白表达显著减少,Bcl-2/Bax比值减少;线粒体中Cyt C蛋白表达显著减少,而胞浆中表达显著增加;激活型caspase-3蛋白水平显著增加(P0.05)。结论:人参皂苷Rh2呈浓度依赖性促进MG-63细胞的凋亡,其凋亡过程可能与调控线粒体凋亡通路相关蛋白有关。     

27nt-miRNA对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨27nt-miRNA(27nt-miR)对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响及分子机制。方法:体外培养HUVECs,分为正常对照组、Ox-LDL组、27nt-miR+Ox-LDL组、anti-27nt-miR+Ox-LDL组和阴性对照+Ox-LDL组。正常对照组给予正常培养;Ox-LDL组用40 mg/L Ox-LDL作用48 h诱导细胞凋亡;27nt-miR+Ox-LDL组、anti-27nt-miR+Ox-LDL组及阴性对照+Ox-LDL组分别以相同的操作方法转染相应慢病毒质粒后用40 mg/L Ox-LDL作用48 h诱导细胞凋亡。采用CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞的迁移能力,caspase-3活性试剂盒检测细胞内caspase-3活性,RT-qPCR法和Western blot法检测细胞内Bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA及蛋白的表达情况。结果:与阴性对照+Ox-LDL组相比,27nt-miR+Ox-LDL组HUVECs的27ntmiR高表达可显著降低细胞活力和迁移能力(P0.05),显著增加Ox-LDL所致的caspase-3活性和细胞凋亡(P0.05),亦可显著上调Ox-LDL所致的Bax和caspase-3 mRNA和蛋白表达(P0.05),下调Bcl-2的mRNA和蛋白表达(P0.05);而anti-27nt-miR+Ox-LDL组,上述所测指标均表现出相反趋势。结论:27nt-miR可能通过调控Bax、caspase-3和Bcl-2凋亡/抗凋亡蛋白的表达促进Ox-LDL体外诱导的HUVECs凋亡进而抑制HUVECs活力和迁移。     

抗菌肽merecidin诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡

目的探讨抗菌肽merecidin对人肺癌细胞系A549的作用及其机制。方法实验分为对照组(Ctrl)、顺铂干预组(cisplatin 40μmol/L)、merecidin干预组(merecidin 25/35μmol/L)、caspase抑制剂组(z-VAD-fmk)、caspase抑制剂+merecidin干预组(z-VAD-fmk+merecidin 25/35μmol/L)。MTT法检测细胞增殖,annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3、8、9、激活型caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果抗菌肽merecidin明显抑制A549细胞增殖(P0.05),merecidin处理24 h后的IC_(50)值为34.8μmol/L。与Ctrl组相比,merecidin干预组的凋亡率显著升高(P0.05);与merecidin干预组相比,caspase抑制剂+merecidin干预组的凋亡率并没有下降。caspase-3、8、9蛋白表达无显著变化且未检测到激活型caspase-3蛋白表达。Bcl-2蛋白表达下调(P0.05)及Bax蛋白表达增多(P0.05)。结论抗菌肽merecidin可以抑制人肺腺癌细胞A549的增殖并诱导其凋亡。     

靶向TRIM29基因的siRNA通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的:探讨沉默TRIM29基因表达对鼻咽癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:将人鼻咽癌5-8F细胞分为空白组、阴性对照(NC)组(转染阴性对照siRNA)和si-TRIM29组(转染TRIM29的特异性siRNA),通过CCK-8法检测si-TRIM29转染5-8F细胞0～96 h的细胞活力。通过流式细胞术及Western blot分别检测si-TRIM29转染5-8F细胞48 h的细胞凋亡率及TRIM29、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bcl-2、Bax、t-AKT和p-AKT的蛋白水平。10μmol/L的PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002及si-TRIM29单独或联用处理细胞,细胞分为空白组、LY294002组和LY294002+si-TRIM29组,流式细胞术检测3组细胞凋亡率。结果:转染TRIM29 siRNA的5-8F细胞TRIM29蛋白表达明显低于空白组(P0.05)。和空白组比较,si-TRIM29组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白的水平明显升高,Bcl-2和p-AKT蛋白的水平明显降低(P0.05)。LY294002组的细胞凋亡率高于空白组,而LY294002+si-TRIM29组的细胞凋亡率高于LY294002组(P0.05)。结论:沉默TRIM29基因表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导鼻咽癌细胞凋亡。     

硼替佐米促进霍奇金淋巴瘤细胞系L428的凋亡

目的探究硼替佐米对霍奇金淋巴瘤细胞系L428凋亡的影响及可能的机制。方法不同浓度的硼替佐米(0、10、30与50 nmol/L)培养L428细胞后,用倒置显微镜观察L428细胞形态;Hoechst33258染核观察细胞核;MTT法检测细胞活力;TUNEL染色试剂盒和Annexin V-FITC双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2的表达。结果与对照组相比,硼替佐米促使L428细胞出现拉丝、稀疏现象;细胞核出现核固缩和凋亡小体;硼替佐米浓度依赖性抑制L428细胞活力(P0.05),诱导细胞凋亡(P0.05);浓度依赖性下调Bcl-2蛋白水平(P0.05);浓度依赖性上调cleaved caspase-3和Bax蛋白水平(P0.05)。结论硼替佐米可能通过影响凋亡蛋白的表达促进霍奇金淋巴瘤细胞系L428凋亡。     

紫草素减轻低氧-复氧致大鼠心肌细胞系H9c2损伤

目的探索紫草素对低氧-复氧(H/R)损害的H9c2心肌细胞的保护作用。方法将心肌细胞系H9c2分为对照组、H/R组、紫草素(0.1、1和10μmol/L)干预组,每组3个平行孔;MTT法检测紫草素对H9c2细胞毒性;流式细胞计量术检测细胞凋亡和周期;DCFH-DA检测细胞活性氧水平;生化检测细胞中MDA、8-OHdG和GSH含量;qPCR检测细胞γ-GCS、HO-1和NQO1 mRNA表达;Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、Keap1和Nrf2蛋白表达;免疫荧光检测细胞Nrf2蛋白进核情况。结果紫草素呈浓度-时间依赖性抑制H9c2细胞增殖(P<0.05);H/R诱导H9c2细胞凋亡、细胞周期阻滞及促进Bax及cleaved caspase-3蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达(P<0.05),紫草素呈浓度依赖性抑制细胞凋亡、解除细胞周期阻滞及cleaved caspase-3和Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达;紫草素可降低H/R所致活性氧水平、MDA及8-OHdG升高,增高H/R所致GSH含量以及γ-GCS、HO-1和NQO1 mRNA的表达下调,导致Nrf2蛋白的升高及Keap1下调,并促进Nrf2蛋白进核(P<0.05)。结论紫草素减轻低氧-复氧致H9c2心肌细胞的损伤。     

白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:探索白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其调控机制。方法:实时定量PCR (qRT-PCR)检测血清中单核细胞趋化蛋白鄄1 (MCP1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和白细胞介素18(IL-18)的mRNA 水平;HE 染 色和Masson 染色评价心肌纤维化水平;流式细胞术分析细胞凋亡;蛋白印迹检测Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、B 淋巴 瘤2 蛋白(Bcl-2)、Bcl-2 相关蛋白X(Bax)、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白表达。结果:白藜芦醇可降低STZ 诱导的糖尿病大 鼠血清MCP-1、MIF 和IL-18 的mRNA 水平并改善心肌纤维化加剧。STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。与STZ 诱导糖尿病组相比,STZ+白藜芦醇组血管平滑肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。而且,白藜芦醇可抑 制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9 和Bax 蛋白表达,提高Bcl-2 表达(P<0.05)。 与对照组相比,STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞中p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显降低(P<0.05)。STZ+白藜芦醇组 血管平滑肌细胞p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显高于STZ 诱导糖尿病组(P<0.05)。结论:白藜芦醇可通过激活PI3K/ AKT 信号通路抑制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡。