敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞药物敏感性及侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨通过小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)技术敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞活力、药物敏感性、凋亡、细胞周期及侵袭和迁移能力的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine 3000将NOB1 siRNA转染至SW480细胞,采用real-time PCR和Western blot检测转染后SW480细胞中NOB1 mRNA和蛋白表达的变化;采用MTT法检测敲减NOB1基因表达后SW480细胞活力及其对不同化疗药物(顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨)敏感性的变化;流式细胞术检测敲减NOB1基因表达对SW480细胞凋亡和周期的影响;Transwell方法检测敲减NOB1基因表达对结肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:转染NOB1 siRNA后,SW480细胞中NOB1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);与对照组和阴性对照siRNA组相比,NOB1 siRNA转染组的SW480细胞在24～72 h的细胞活力显著降低,顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨对该细胞的半数抑制浓度均显著降低,细胞凋亡率显著增加,细胞周期受到阻滞,细胞侵袭和迁移能力显著降低(P0.05)。结论:NOB1 siRNA转染能够抑制结肠癌SW480细胞活力及侵袭和转移能力,并增强细胞对药物的敏感性,促进细胞凋亡。NOB1能够成为结肠癌诊断和治疗的新靶点。     

miR-105靶向负调控KIFC1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力

目的:研究微小RNA-105(miR-105)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用RT-qPCR法检测非小细胞肺癌组织及癌旁组织和细胞中miR-105和驱动蛋白家族成员C1(KIFC1) mRNA的表达;用Western blot检测非小细胞肺癌组织及癌旁正常组织和细胞中KIFC1蛋白的表达。将细胞分为miR-105组(转染miR-105 mimics)、miR-NC组(转染mimics阴性对照序列)、inhibitor-NC组(转染inhibitor阴性对照序列)、inhibitor-miR-105组(转染miR-105 inhibitor)、si-NC组(转染阴性对照siRNA)、si-KIFC1组(转染KIFC1 siRNA)、miR-105+vector组(miR-105 mimics和pcDNA 3.1共转染)和miR-105+KIFC1组(miR-105 mimics和pcDNA 3.1-KIFC1共转染),均以脂质体法转染至非小细胞肺癌H460细胞;MTT法检测各组细胞活力;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭能力;双萤光素酶报告基因检测实验检测各组细胞萤光素酶相对活性。结果:与癌旁组织相比,非小细胞肺癌组织中的miR-105表达显著降低,KIFC1的表达显著升高(P0.05);与人正常胚肺成纤维细胞MRC-5相比,H460细胞中的miR-105表达显著降低,KIFC1的表达显著升高(P0.05);miR-105可降低野生型KIFC1的H460细胞萤光素酶相对活性,且负向调控KIFC1的蛋白表达。过表达miR-105或敲减KIFC1表达均可显著抑制H460细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且过表达KIFC1可逆转miR-105对细胞活力、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论:miR-105可抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制与靶向负调控KIFC1的表达有关。     

lncRNA MALAT1靶向调控miR-146b-5p影响膀胱癌细胞侵袭和迁移

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)靶向微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)影响膀胱癌细胞侵袭和迁移的机制。方法:在膀胱癌BIU-87细胞中转染MALAT1 siRNA,以real-time PCR方法测定转染效果,Transwell法测定侵袭及迁移能力,Western blot法检测细胞中上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(vimentin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的变化。生物信息学软件预测MALAT1与miR-146b-5p有靶向互补位点,利用双萤光素酶报告系统鉴定靶向关系。用real-time PCR方法检测下调MALAT1后BIU-87细胞中miR-146b-5p表达的变化。将MALAT1 siRNA和miR-146b-5p inhibitor共转染至BIU-87细胞中,用上述方法分析细胞侵袭、迁移及vimentin、E-cadherin和MMP-2蛋白表达的变化。结果:转染MALAT1 siRNA可明显下调BIU-87细胞中MALAT1的表达水平(P<0.05)。敲减MALAT1表达后,BIU-87细胞的侵袭和迁移能力下降,细胞中vimentin和MMP-2蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平升高。MALAT1靶向调控miR-146b-5p的表达,敲减MALAT1的表达可以提高BIU-87细胞中miR-146b-5p的水平。miR-146b-5p inhibitor可以明显逆转敲减MALAT1的表达对BIU-87细胞侵袭、迁移能力和vimentin、E-cadherin、MMP-2蛋白表达的影响。结论:下调MALAT1可靶向促进miR-146b-5p表达,抑制膀胱癌细胞侵袭、迁移能力和EMT。     

MicroRNA在建立DJ-1基因敲减细胞模型中的应用

 目的 与传统的siRNA方法建立基因敲减模型不同,探讨合成microRNA(miRNA)在DJ-1基因敲减细胞模型中的应用。方法 构建针对DJ-1基因的合成miRNA载体,合成DJ-1基因的siRNA干扰片断。在脂质体介导下,将上述两种小干扰RNA载体或片断分别转染MN9D细胞系,应用real-time PCR和Western blots检测目的基因DJ-1的mRNA和蛋白表达。结果 与Control组相比,转染合成microRNA的MN9D细胞中,DJ-1的mRNA水平下调90%（p<0.05）,蛋白水平下调70%~85%(p<0.05);而转染siRNA的MN9D细胞中,DJ-1的mRNA水平下调50%~70%（p<0.05）,蛋白水平下调20%~50%（p<0.05）。结论 microRNA与siRNA均可作为基因敲减的重要研究手段。与传统的siRNA相比,合成microRNA对目的DJ-1的干扰效率更为显著。     

胰腺癌中Legumain的表达及其对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨Legumain(LGMN)在胰腺癌组织和细胞中的表达、意义及其下调对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和迁移的影响。方法采用免疫组化SP法检测LGMN蛋白在67例胰腺癌组织及61例癌旁组织中的表达;分析LGMN表达与胰腺癌临床病理特征的关系。采用RT-PCR和Western blot法检测胰腺细胞系中LGMN的表达。通过慢病毒感染下调AsPC-1细胞中LGMN的表达,以未干预的细胞作为空白对照组,转染空白载体细胞为阴性对照组,LGMN敲低细胞为实验组;采用CCK-8法、Transwell实验、Western blot法检测下调LGMN对细胞增殖、迁移以及凋亡相关蛋白的影响。结果与癌旁组织相比,胰腺癌组织中LGMN高表达率更高,差异有统计学意义(P0.01);LGMN表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(P0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小等无关(P0.05)。AsPC-1细胞中LGMN mRNA及蛋白表达量均显著高于胰腺正常上皮细胞HPNE,差异有统计学意义(P0.01);转染慢病毒后,与对照组相比,实验组的吸光度值、细胞迁移数量、BCL-2蛋白表达、BCL-2/Bax的比值降低(P0.05),Bax升高差异不明显(P0.05)。结论 LGMN在胰腺癌中呈高表达,体外敲低LGMN后能够抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移能力,并通过BCL-2/Bax激活凋亡通路诱导细胞凋亡。     

miR-18a通过靶向调节SEMA5A影响喉癌Hep-2细胞的增殖与迁移

目的探讨miR-18a对喉癌HEP-2细胞增殖及迁移能力的影响及可能机制。方法 Real-time PCR法检测喉癌组织与癌旁组织miR-124的表达,免疫组织化学方法检测SEMA5A蛋白的表达。Lipofectamine2000将miR-18a抑制剂与miR-18a模拟物分别转染喉癌HEP-2细胞,real-time PCR法验证转染效率,采用CCK8法检测miR-18a对喉癌HEP-2细胞增殖的影响,采用Transwell迁移实验检测转染后HEP-2细胞的迁移能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测转染后SEMA5A mRNA和蛋白表达的变化。结果 miR-18a在喉癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P0.01),但SEMA5A蛋白在喉癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织(P0.01)。miR-18a抑制剂或miR-18a模拟物转染后,喉癌HEP-2细胞miR-18a的表达显著降低或升高,转染成功。转染miR-18a抑制剂能够显著降低喉癌HEP-2细胞增殖及迁移能力,并上调喉癌HEP-2细胞SEMA5A蛋白的表达;转染miR-18a模拟物后,作用则相反。结论 miR-18a在喉癌组织中表达上调,靶向调节SEMA5A的表达可能是其促进喉癌HEP-2细胞增殖和迁移的机制之一。     

宫颈癌组织及细胞株中长链非编码RNA CCAT1 的表达水平及意义

目的:研究宫颈癌组织及细胞株中长链非编码RNA肠癌相关转录因子1(CCAT1)的表达水平及意义。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测2015年1月至2017年6月接受宫颈癌根治术的48例宫颈癌患者的癌组织、对应癌旁正常组织(距癌3 cm)以及人正常宫颈鳞状细胞系ECT1/E6E7、宫颈癌细胞系Hela、C33A中CCAT1的表达,并分析其临床意义;应用小分子RNA(siRNA)分别转染人宫颈癌细胞系Hela、C33A,构建CCAT1低表达细胞系,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测CCAT1对人宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测各组细胞周期,蛋白印迹(Western blot)法检测CCAT1对人宫颈癌细胞中RAS相关区域家族1A蛋白(RASSF1A)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。结果:与癌旁正常组织相比,人宫颈癌组织中CCAT1的表达显著升高(P0.05);与正常宫颈细胞ECT1/E6E7相比,宫颈癌细胞系Hela、C33A中CCAT1的表达显著升高(P0.05);TMN分期较晚、肿瘤大、有淋巴结转移的宫颈癌患者宫颈癌组织中CCAT1相对表达量更高(P0.05);不同年龄、分化程度患者中CCAT1的表达无显著性差异(P0.05);与siRNA-NC组相比,转染siRNA-CCAT1的Hela、C33A细胞中CCAT1、细胞增殖活性、cyclin D1蛋白的表达显著降低,RASSF1A蛋白的表达显著升高。结论:CCAT1的表达上调与宫颈癌发生发展密切相关,沉默CCAT1的表达会抑制宫颈癌细胞的增殖,可能与上调RASSF1A的表达、下调cyclin D1的表达有关。     

miR-195抑制舌鳞癌细胞系CAL27增殖、迁移和侵袭

目的研究miR-195对舌鳞癌CAL27细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法用RT-qPCR检测舌鳞癌组织及癌旁正常组织中miR-195 mRNA的表达; CAL27细胞的分组及处理:miR-195组(转染miR-195 mimics)、miR-con组(转染miR-NC)、si-con组(转染si-con)、si-激酶12抑制剂SUZ12组(转染si-SUZ12)、miR-195+Ctrl组(miR-195 mimics和pc DNA 3. 1共转染)、miR-195+SUZ12组(miR-195 mimics和pc DNA 3. 1-SUZ12共转染); MTT法检测细胞增殖; Transwell检测细胞迁移和侵袭; Western blot检测细胞SUZ12蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测细胞荧光活性。结果舌鳞癌组织中miR-195 mRNA表达与癌旁正常组织及与健康口腔角质细胞NHOK相比显著降低(P0. 05);过表达miR-195及敲减SUZ12均可显著抑制CAL27细胞增殖、迁移及侵袭(P0. 05);过表达SUZ12可逆转miR-195对CAL27细胞增殖、迁移和侵袭的抑制。结论 miR-195可抑制CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向SUZ12有关。     

miRNA-10b靶向调控Twist促进骨肉瘤细胞增殖与侵袭的研究

目的探讨microRNA-10b对骨肉瘤细胞MG-63增殖与侵袭能力的影响及潜在作用机制。方法应用实时荧光定量PCR检测人骨肉瘤组织和癌旁正常骨组织中miR-10b的表达差异。将miR-10b mimic和Twist特异性的siRNA (Twist siRNA)分别通过脂质体转染法转染入骨肉瘤细胞系MG-63,应用RT-PCR检测细胞中miR-10b和Twist mRNA的表达,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Twist及内参β-actin蛋白表达水平,采用MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63增殖能力的影响;采用Transwell侵袭实验检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭能力的影响。结果与正常癌旁骨组织相比,miR-10b在骨肉瘤组织中呈现明显高表达,差异具有极显著性统计学意义(P0.01); miR-10b mimic可使Twist mRNA和蛋白表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05),同时可显著增强MG-63细胞的增殖与侵袭能力(P0.05),而转染miR-10b mimic和Twist siRNA的MG-63细胞的增殖与侵袭能力较仅转染miR-10b mimic的MG-63细胞显著减弱(P0.05)。结论人骨肉瘤细胞系MG-63中miR-10b的表达上调,可能通过靶向激活Twist信号通路促进骨肉瘤细胞的异常增殖与远处侵袭。     

BCL6共抑制因子样蛋白1(BCORL1)在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的观察BCL6共抑制因子样蛋白1(BCORL1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,并通过下调肺癌A549细胞中BCORL1的水平观察对A549细胞侵袭和迁移能力的影响。方法收集68例NSCLC组织及对应的癌旁组织,应用免疫组织化学染色分析BCORL1和E钙黏素(E-cadherin)在NSCLC及对应癌旁组织中的表达;采用小干涉RNA(siRNA)下调肺癌A549细胞中BCORL1的水平,TranswellTM小室法检测A549肺癌细胞迁移和侵袭能力。结果 BCORL1蛋白在NSCLC组织中表达水平显著高于对应癌旁组织,而E-cadherin蛋白在NSCLC组织中表达水平则显著低于对应癌旁组织;相关性分析证实BCORL1蛋白与E-cadherin蛋白在NSCLC组织中的表达呈显著负相关;临床相关分析发现BCORL1蛋白表达与淋巴结转移和TNM分期具有显著的相关性;特异性siRNA下调BCORL1水平后,E-cadherin蛋白上调;敲低BCORL1后,明显抑制A549肺癌细胞侵袭和迁移。结论 BCORL1在NSCLC组织中高表达且与E-cadherin表达呈显著负相关,其高表达与NSCLC恶性临床病理特征相关。敲低BCORL1,上调E-cadherin表达并抑制肺癌细胞侵袭和迁移能力。     

IGF-1R-Stat3信号通路通过激活中期因子表达促进肝癌细胞活力、迁移和侵袭

目的:探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)-信号转导及转录激活蛋白3(Stat3)信号通路和中期因子(midkine)在肝细胞癌中的作用以及IGF-1R-Stat3信号通路与midkine表达之间的关系。方法:(1)采用RTqPCR检测人肝癌细胞株Huh7和Hep3B、人正常肝细胞株HL-7702、人肝细胞癌组织(n=32)、配对的癌旁组织(n=32)及正常成人肝组织(n=13)中IGF-1R、Stat3和midkine的mRNA表达水平,并应用Pearson相关分析评估肝细胞癌组织中三者表达水平之间的关系。(2)以Huh7细胞作为空白对照,在瞬时上调IGF-1R表达、稳定敲减IGF-1R表达及稳定敲减IGF-1R表达+瞬时上调Stat3表达的Huh7细胞中,采用RT-qPCR及Western blot检测Stat3和midkine mRNA表达水平及Stat3、磷酸化Stat3和midkine蛋白水平;以Huh7细胞作为空白对照,在瞬时上调或瞬时敲减Stat3表达的Huh7细胞中,采用RT-qPCR及Western blot分别检测midkine mRNA和蛋白表达水平。(3)采用MTT法和Transwell实验检测IGF-1R-Stat3信号通路和midkine表达变化对Huh7细胞活力、迁移和侵袭的影响。结果:分别与正常肝细胞和癌旁组织/正常肝组织相比,肝癌细胞株和肝细胞癌组织中IGF-1R、Stat3和midkine的mRNA表达水平显著升高(P0. 01);肝细胞癌组织中Stat3和midkine的mRNA表达水平均与IGF-1R的mRNA表达水平呈正相关(r=0. 716和r=0. 681,P0. 01),midkine mRNA表达水平与Stat3 mRNA表达水平也呈正相关(r=0. 657,P0. 01)。在Huh7细胞中,IGF-1R通过上调Stat3表达并增加其磷酸化水平而促进midkine表达(P0. 01);而且IGF-1R通过激活Stat3、上调midkine表达而增强细胞活力、迁移能力和侵袭能力(P0. 01)。结论:IGF-1R-Stat3信号通路通过激活midkine表达增强肝癌细胞活力,促进细胞迁移和侵袭。     

miR-98在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其对ACC-M细胞增殖、迁移的影响

目的探讨miR-98在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其对腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖以及迁移能力的影响。方法通过实时PCR检测5例涎腺腺样囊性涎组织及癌旁正常组织miR-98的表达水平;将miR-98模拟物瞬时转入高转移腺样囊性癌细胞系(ACC-M)使miR-98过表达,并通过实时PCR方法验证;流式细胞仪分析转染后ACC-M细胞周期的改变,甲基噻唑基四唑比色法检测转染后ACC-M细胞的增殖,划痕实验检测转染后ACC-M细胞的迁移能力,免疫印迹法检测转染后ACC-M细胞细胞周期蛋白CyclinB与CDC2的表达变化。结果 miR-98在涎腺腺样囊性癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常组织,P0.01。转染miR-98模拟物能够显著上调ACC-M细胞miR-98的表达水平,ACC-M细胞的S期比例明显下降,而G 0/G 1期的细胞明显增多,增殖受到明显抑制,迁移能力下降,显著降低ACC-M细胞CyclinB与CDC2的蛋白表达水平。结论过表达miR-98能够抑制涎腺腺样囊性癌细胞的增殖与迁移能力。     

miR-181通过Prox1促进人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖并抑制凋亡

目的观察miR-181、同源异型盒转录因子(Prox-1)对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响,探讨miR-181及Prox-1在乳腺癌发生发展中的作用。方法荧光定量PCR检测癌旁乳腺组织、导管内癌组织、浸润性导管癌组织中miR-181的表达;pRFP-miR-181-inhibitor质粒转染乳腺癌细胞系MCF-7,荧光定量PCR和Western blot检测Prox1 mRNA及蛋白水平;EdU检测细胞增殖;TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。结果与癌旁乳腺组织比较,导管内癌组织、浸润性导管癌组织内miR-181 mRNA表达上调(P0.01);抑制MCF-7细胞内的miR-181的表达,Prox1在蛋白水平明显上调(P0.05);MCF-7细胞的增殖能力减弱(P0.05)而凋亡增强(P0.05)。结论 miR-181可能通过抑制Prox1促进细胞的增殖、抑制细胞的凋亡,参与了乳腺癌的发生。     

miR-429在食管鳞癌中的表达及对细胞增殖迁移的影响

目的探讨微小RNA-429(miR-429)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对细胞增殖及迁移的影响。方法选取本院45例ESCC患者手术切除的癌组织(ESCC组)及癌旁组织(正常组)标本为研究对象,并采用实时荧光定量(q RT-PCR)检测两组miR-429表达水平。体外培养ESCC癌细胞株系ECa109及人正常食管上皮细胞株Het-1A,将转染试剂、miR-429阴性对照质粒、miR-429mimic质粒分别转染ECa109细胞,命名为空白组、阴性转染组、miR-429过表达组,同时应用生物信息学工具预测miR-429的靶基因为CTl0激酶调节子样蛋白(CRKL),荧光素酶活性检测miR-429与CRKL的靶向调控关系。采用qRT-PCR法检测细胞中miR-429与CRKLmRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测细胞中CRKL蛋白表达。MTT法检测细胞增殖情况,Transwell检测细胞迁移能力。结果与正常组相比,ESCC组miR-429表达水平显著降低(P0.05);荧光素酶活性测定显示3'UTR-Wt细胞中miR-429过表达组荧光素酶活性显著低于阴性对照组(P 0.05),3'UTR-Mut细胞中miR-429阴性转染组与过表达组比较差异无统计学意义(P 0.05);与Het-1A细胞相比,ECa109细胞中miR-429表达水平显著降低(P0.05),而CRKL mRNA及蛋白表达水平显著升高(P 0.05);与空白组、阴性转染组相比,miR-429过表达组miR-429表达水平显著升高(P 0.05),而CRKL mRNA及蛋白表达水平显著降低(P 0.05);与空白组、阴性转染组相比,miR-429过表达组细胞增殖率及迁移数量均显著降低(P 0.05)。结论 ESCC中miR-429呈低表达,其可通过下调CRKL表达进而抑制ESCC细胞增殖及迁移。     

CNTN-1促进人食管癌EC9706细胞侵袭和迁移

目的探讨接触蛋白-1(CNTN-1)在食管癌转移中的作用。方法 q PCR和Western blot检测食管癌细胞系EC9706中CNTN-1的表达;RNA干扰和CNTN-1过表达质粒转染调整EC9706细胞CNTN-1的表达,并将细胞分为空白对照组、scrambled siRNA组、CNTN-1 siRNA组、pcDNA3.1-vector组和pcDNA3.1-CNTN-1组;Brd U和Transwell实验分别检测EC9706细胞增殖、侵袭和迁移能力;qPCR和Western blot检测基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达。结果 CNTN-1在食管癌细胞EC9706中mRNA和蛋白水平较与正常食管上皮细胞显著上调(P0.05);转染CNTN-1siRNA后,EC9706细胞CNTN-1表达水平显著降低(P0.05),细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降(P0.05),同时细胞中侵袭转移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达明显下降(P0.05);CNTN-1过表达质粒转染细胞后,EC9706细胞内CNTN-1表达水平上调(P0.05),细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高,同时MMP-2和MMP-9表达明显升高(P0.05)。结论 CNTN-1可能通过调节MMP-2和MMP-9表达促进食管癌细胞的侵袭转移。     

下调EZH2表达促进卵巢癌细胞衰老的机制研究

目的:探讨下调EZH2表达促进卵巢癌细胞衰老的分子机制。方法:采用real-time PCR、Western blot及免疫组化检测卵巢癌组织和正常组织及4种卵巢癌细胞和人正常卵巢上皮细胞IOSE80中EZH2的表达水平;运用脂质体2000转染法将EZH2小干扰RNA转染,或将GSK126作用于卵巢癌细胞和IOSE80细胞,siRNA转染的IOSE80细胞经5 Gy电离辐射照射,以阴性对照siRNA为对照。MTT法、集落形成实验、流式细胞术和SA-β-Gal染色法检测细胞增殖、凋亡率和细胞衰老情况;Western blot检测EZH2、p53、p21、p16、caspase-3、cleaved caspase-3、PARP、cleaved PARP、H3K27me3、H3K27me2和H3K27me1的蛋白水平。结果:EZH2在卵巢癌组织和4种卵巢癌细胞中的表达水平均显著高于正常组织和IOSE80细胞(P0.01);敲减EZH2表达显著抑制卵巢癌细胞的增殖,促进电离辐射诱导的细胞衰老,其作用与GSK126处理的细胞表型相一致。Western blot检测发现敲减EZH2表达明显抑制H3K27me3的表达,促进p53、p21和p16的表达(P0.01),但对细胞凋亡通路关键蛋白的水平无影响。结论:EZH2在卵巢癌组织和卵巢癌细胞中高表达。敲减EZH2表达通过降低H3K27me3水平促进卵巢癌细胞衰老,从而抑制细胞增殖。     

敲减Rab1A表达通过抑制AKT的磷酸化抑制乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究Rab1A基因表达的改变对乳腺癌细胞MDA-MB-231恶性生物学行为的影响。方法:Western blot检测Rab1A在乳腺癌组织及癌旁正常组织的表达和Rab1A在乳腺正常上皮及不同乳腺癌细胞系中的基础表达。设计并构建靶向Rab1A的小干扰RNA(siRNA),Western blot法验证敲减效果;分别采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术和Western blot观察Rab1A基因表达改变对乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响和相关蛋白表达的改变。结果:Rab1A在乳腺正常组织和细胞中低表达,在癌组织及癌细胞中高表达(P0.05);与对照组相比,干扰Rab1A的表达可以显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的活力(P0.05),诱导凋亡增加(P0.05),G_2/M期细胞比例增加(P0.05),迁移与侵袭能力减弱(P0.05),p53、Bax、cleaved caspase-3和PTEN的蛋白水平升高(P0.05),Bcl-2、cyclin D1、cyclin B1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、p-AKT和mTOR的蛋白水平降低(P0.05)。结论:Rab1A具有调控乳腺癌细胞生长、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡的能力,并调控增殖、周期和凋亡相关蛋白的表达。干扰Rab1A可通过抑制AKT通路的磷酸化从而抑制乳腺癌的演进与发展;Rab1A可能是基因治疗乳腺癌的一个潜在靶点。     

lncRNA TDRG1通过调节miR-101-3p促进结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:研究长链非编码RNA(lncRNA)睾丸发育相关基因1(TDRG1)对结直肠癌(CRC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其作用机制是否与微小RNA-1010-3p(miR-101-3p)相互作用有关。方法:收集40对CRC组织及相应的癌旁组织。采用RT-qPCR方法检测TDRG1和miR-101-3p在CRC组织及CRC细胞系中的表达。采用CCK-8法、集落形成实验和Transwell法评价TDRG1的体外功能。采用生物信息学和双萤光素酶报告分析方法探讨TDRG1和miR-101-3p之间关系。将shRNA和miRNA抑制剂转染CRC细胞,探讨其作用机制。结果:与匹配的癌旁组织相比,在CRC组织中观察到TDRG1的表达水平显著增加(P0.05),而miR-101-3p的表达水平显著降低(P0.05)。Pearson相关分析显示,CRC组织中TDRG1与miR-101-3p呈负相关(r=0.624,P0.01)。使用萤光素酶测定法确认了miR-101-3p作为TDRG1的靶点结合。与人正常结肠细胞NCM460相比,TDRG1在CRC细胞系(HT-29、SW480和LoVo)中明显上调(P0.05)。敲减TDRG1的表达抑制了SW480细胞的活力和集落能力(P0.05),并且迁移和侵袭细胞数量显著减少(P0.05),而转染miR-101-3p抑制剂可减轻敲减TDRG1表达引起的改变。结论:TDRG1通过调节miR-101-3p促进CRC细胞的增殖、侵袭和迁移,提示TDRG1可能是CRC治疗的一个潜在靶点。     

PIK3CA基因对人非小细胞肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响

目的探讨PIK3CA基因对非小细胞肺癌侵袭及迁移能力的影响及可能机制。方法实时荧光定量PCR检测非小细胞肺癌组织、癌旁组织、非小细胞肺癌A549细胞与人支气管上皮细胞PIK3CA mRNA的表达,构建靶向PIK3CA基因的si RNA质粒,并转染至非小细胞肺癌A549细胞,实时荧光定量PCR技术与Westem blot方法分别检测PIK3CA mRNA与蛋白表达的变化,利用Transwell实验检测转染后细胞侵袭和转移能力的变化,Westem blot方法检测转染后A549细胞p-Akt蛋白表达变化。结果与癌旁正常组织比较,PIK3CA mRNA和蛋白表达水平在非小细胞肺癌组织显著上升(P0.05),A549细胞中PIK3CA mRNA和蛋白表达水平明显高于人支气管上皮细胞(P0.05)。PIK3CA基因沉默6h,A549细胞PIK3CA mRNA和蛋白表达水明显下降(P0.05);PIK3CA基因沉默48h,A549细胞侵袭和转移能力显著降低,p-Akt蛋白表达显著降低(P0.05)。结论 PIK3CA基因能够降低非小细胞肺癌侵袭及迁移能力,其作用机制可能与调控p-Akt蛋白表达有关。