丙型肝炎病毒非结构蛋白4B研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白4B（NS4B）是至今为止功能尚不明确的HCV非结构蛋白，近年来的研究表明其定位于内质网膜，与细胞内膜结构的功能有关，在体外实验中。它和NS4A一起可以抑制宿主细胞的翻译；在一定程度上可以减弱机体对抗病毒药物干扰素-α（INF-α）的反应，同时使病毒可以逃避宿主对病毒的免疫；在HCV病毒的致瘤性方面亦有重要作用。可以与NS3，NS4A，NS5A，NS5B等相互作用。对其它非结构蛋白的功能起协同，促进甚或是下调作用。     

柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒的构建

目的：构建柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。方法：用RT-PCR技术，从柯萨奇B4病毒中钓取非结构蛋白P2C cDNA片段，克隆入PUCan-T载体，转化大肠杆菌DH5α，构建重组质粒。结果：以柯萨奇B4病毒的总RNA为模板，扩增出987bp大小的片段，克隆入PUCan-T载体，用BamHⅠ、HindⅢ双酶切鉴定，与非结构蛋白P2C的PCR扩增产物片段大小一致。结论：成功地构建了柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。     

周期蛋白E在细胞周期调节中的作用

ｃｙｃｌｉｎ Ｅ是Ｇ１期的周期蛋白,基因定位于１９ｑ１２－１３,参与细胞周期的调节及肿瘤的发生。ｃｙｃｌｉｎ Ｅ与ＣＤＫ２结合在Ｇ１期末发挥作用,促进细胞进入Ｓ期。ｃｙｃｌｉｎ Ｅ的过量表达通过对ｐＲＢ及其它低物的磷酸化、释放出转录因子进而启动ＤＮＡ的合成,加速细胞的Ｇ１期进程。ｐ２１、ｐ２７及ＴＧＦ－β通过对ｃｙｃｌｉｎ Ｅ－ＣＤＫ２活性的抑制而减缓Ｇ１期的进程。ｃｙｃｌｉｎ Ｅ是周期进程的基本     

丙肝病毒NS5A蛋白对NS5B的RdRP活性影响的研究

丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus,HCV )非结构蛋白 (Nonstructural,NS) 5 A在 HCV基因组复制中的作用目前尚不清楚。本文研究 His- NS5 A对 NS5 B的 RNA依赖性 RNA酶 (Rd RP)活性的影响 ,以了解 NS5 A在HCV RNA复制中的作用。采用变性 -复性方法 ,纯化大肠杆菌表达的重组组氨酸 NS5 A融合蛋白。 GST结合洗脱实验 (GST pull- down assay)研究 NS5 A和 NS5 B是否结合。以不同的摩尔浓度比 ,将纯化的 NS5 B和 NS5 A蛋白混合 ,检测 NS5 A对 NS5 B的 Rd RP活性的影响。获得高得率的纯化 His- NS5 A蛋白。重组 NS5 A蛋白可在体外与NS5 B结合并抑制后者的 Rd RP活性。本研究报道了纯化重组 His- NS5 A蛋白的变性 -复性方法 ,结果显示纯化的重组 NS5 A在体外可与 NS5 B相互结合 ,并明显抑制 NS5 B Rd RP活性。提示了 HCV NS5 A在病毒复制中的可能作用。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A抗原模拟表位的筛选和鉴定

目的：筛选丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV)非结构蛋白NS4A（HCV NS4A)特异性噬菌体模拟表位，为抗HCV的疫苗研究探索新途径。方法：以抗HCV NS4A的单克隆抗体作为固相筛选分子，对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程，随机挑取45个克隆，经噬菌体酶联免疫吸附法（ELISA）鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验，最后对所选克隆进行DNA序列分析，以确定HCV NS4A抗原的模拟表位。结果：经噬菌体富集后，从随机筛选的45个克隆中得到13个阳性克隆，确定氨基酸序列XXRXXMXPXXXI为HCV NS4A的模拟表位。结论：用噬菌体12肽库成功筛选得到HCV NS4A的模拟表位，为开展用HCV模拟表位探索HCV的防治研究创造了条件。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3的研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成,具有线氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶（NTPase）和螺旋酶（Helicase）的功能,在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用。非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性,是检测HCV感染的主要抗原之一。近年的研究发现NS3内部的裂解产物更具有致癌潜能。此外,NS53蛋白还参与NS5A的超磷酸化修饰过程等。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B肝细胞结合蛋白基因的筛选与克隆

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HCVNS4B基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和Xα半乳糖(Xαgal)上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠埃希菌,接种在氨苄西林LB平板上,选择生长菌落,提取质粒酶切鉴定,测序并在GenBank中进行生物信息学分析。结果成功克隆出HCVNS4B基因并在酵母细胞中表达,与肝文库配合后选出既能在4缺(SD/TrpLeuAdeHis)培养基又能在铺有Xαgal的4缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落5个,序列分析显示,筛选到的肝细胞蛋白编码基因参与细胞代谢、生物氧化、生长调节等多种生物学过程。结论成功克隆出HCVNS4B蛋白与肝细胞相互作用蛋白,为进一步研究NS4B蛋白的功能,阐明HCV致病的分子生物学机制提供了新线索。     

细胞周期调节蛋白在胃癌中的表达异常及其意义

一、材料与方法１．标本来源：４０例原发性胃癌标本选自上海第二医科大学瑞金医院普外科１９９８年５月～１０月间手术切除并经病理检查证实的组织。患者中男性２７例，女性１３例，年龄３１～８２岁，中位年龄６０．１岁。按国际统一的ＴＮＭ分期法，Ⅰ期８例，Ⅱ期８例，Ⅲ期２１例，Ⅳ期３例。２．免疫组化：采用ＡＢＣ法免疫组化染色，微波抗原修复，切片经多聚赖氨酸（Ｓｉｇｍａ公司）预处理以防脱片。即用型ＳＡＢＣ试剂盒购自武汉博士德试剂公司，兔抗人ｐ１６多抗、兔抗人Ｒｂ多抗为ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品，即用型鼠抗人细胞…     

一个Ⅱ型神经纤维瘤病家系的临床表现和NF2基因突变分析

目的 报告1个Ⅱ型神经纤维瘤病家系NF2基因的剪接突变(IVS3+3A＞C),并探讨基因型与表型的关系.方法 先证者有听神经瘤家族史,2年前因听神经瘤已经伽玛刀治疗.提取该家系所有患者、疑似患者、正常成员和150个无血缘关系健康人的血样本基因组DNA.选择与NF2基因连锁的短串联重复(short tandem repeat,STR)位点(D22S1150、D22S268)对家系成员进行多态性分析,并计算2点连锁的LOD值.对先证者NF2基因的启动子、17个外显子和外显子内含子剪接处进行 PCR,对其产物进行测序.对家系另外3例患者,1例疑似患者和有血缘关系的9名健康者及150名无血缘的健康对照者进行第3外显子-第3内含子剪接处PCR和测序.结果 两点连锁分析显示NF2基因为疾病的候选基因(Zmax=2.109,θ=0.00,D22S1150位点).PCR产物测序发现先证者NF2基因IVS3+3A＞C,呈杂合突变.3例患者和1例疑似患者均带有与先证者相同的突变,但9名健康成员和150名无血缘关系的健康对照者均无此改变.结论 NF2基因的INS3+3A＞C突变是该家系疾病的分子原因.     

应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活的相关基因

目前丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)与肝细胞之间相互作用的分子生物学机制尚不清楚 ,病毒编码的蛋白能够影响多种细胞信号转导途径 ,从而影响肝细胞某些基因的表达、调控 ,可能是病毒感染导致肝细胞损伤和肝细胞癌发生、发展的重要原因。本实验应用抑制性消减杂交(ＳＳＨ) ,构建ＨＣＶＮＳ3反式激活的相关基因ｃＤＮＡ消减文库 ,通过对所得片段进行序列同源性分析 ,筛选相关的靶基因 ,为研究ＨＣＶ致病机制提供资料。应用ＰＣＲ扩增ＨＣＶＮＳ3基因 ,并将其克隆至真核表达载体ｐｃＤＮＡ3.1(- )中 ,构建成含有 1893ｂｐ目的基因的质粒ｐｃＤＮＡ3.1…     

HCVNS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶（RdRp）,作为核心酶在HCV复制中起关键作用。NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础。     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

丙型肝炎病毒非结构基因5b变异与干扰素治疗的相？…

目的 研究ＨＣＶ基因组的变异与干扰素治疗应作的关系以及干扰素治疗后患者体内病毒株的发迹和变异。方法 ８例慢性丙型肝炎患者给予干扰素治疗，于治疗前及治疗后采集口才血清，扩增其血清中ＨＣＶ非结构基因５ｂ（ＮＳ５ｂ）区ｃＤＮＡ，克隆后，每例患者换取６个克隆，测定重组子中ＮＳ５ｂｃＤＮＡ序列。结果 ４例患者在治疗后血清中ＨＣＶ阴性，为干扰素反应组，另４例于治疗中、治疗后血清中ＨＣＶ ＲＮＡ持续阳性，为非的     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.