晚期非小细胞肺癌中ALK的表达及检测方法的比较

目的探讨晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中ALK蛋白表达及与临床病理特征的关系,旨在开展易普及的筛查方法。方法采用Ventana全自动免疫组化技术检测421例晚期NSCLC患者中ALK的表达,并采用FISH法验证免疫组化检测的准确性,分析ALK表达与NSCLC临床病理特征的关系。结果免疫组化检测421例NSCLC中Ventana ALK表达,阳性率为7.6%(32/421)。免疫组化检测阳性病例经FISH验证,ALK的阳性率为7.36%(31/421)。Ventana ALK的免疫组化检测与FISH检测结果吻合率达96.88%,两者具有较高的一致性(P0.05)。ALK表达在女性及腺癌中阳性率明显升高(PO.05);与患者年龄、取材部位、吸烟情况无关(P0.05)。结论 Ventana ALK全自动免疫组化检测准确性较高,实际操作流程更简便、易判读,可作为可靠的ALK筛查手段。     

ALK阳性非小细胞肺癌72例临床病理分析

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)伴间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)蛋白阳性患者的临床病理学特征。方法应用Ventana抗ALK试剂和全自动免疫组化染色检测1 047例NSCLC组织中ALK的表达,并对其中142例进行RT-PCR检测。结果 1 047例NSCLC中,共筛出72例ALK阳性,占(6.88%);其中腺癌70例,腺鳞癌2例,男性40例,女性32例,中位年龄56岁,平均年龄55.60岁,37例有吸烟史,35例无吸烟史。组织形态学方面,43例以实性为主型,16例以腺泡样为主型,13例以乳头状为主型,无以附壁样为主型病例。结论 ALK基因融合肺癌是NSCLC中的一种新的分子亚型,具有独特的临床表现和病理形态;Ventana抗ALK试剂和免疫组化染色是检测ALK阳性NSCLC的首选方法,对提高该类型肺癌的检出率及个体化治疗具有重要意义。     

手工免疫组化检测非小细胞肺癌ALK蛋白表达的对比分析

目的探讨手工免疫组化(immunohistochemistry,IHC)法检测不同克隆号ALK抗体在间变性淋巴瘤激酶(anaplastie lymphoma kinase,ALK)融合的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中ALK蛋白表达,并与全自动免疫组化染色法进行比较。方法选取60例NSCLC石蜡样本,运用4种抗体D5F3(Ventana)、D5F3(Cell Signaling)、1A4/1H7(Ori Gene)、5A4(Abcam)联合常规手工IHC分别检测NSCLC中ALK蛋白水平,与抗体D5F3(Ventana)采用全自动IHC(Bench Mark)结果进行对比分析。结果 D5F3(Ventana+Bench Mark)检测发现ALK融合阳性NSCLC者32例,ALK融合阴性NSCLC者28例,经FISH法验证结果一致。采用手工IHC法检测4种抗体D5F3(Ventana)、D5F3(Cell Signaling)、1A4/1H7、5A4染色灵敏性分别为93.8%、84.4%、93.8%、56.3%,特异性均为100%,与D5F3(Ventana+Bench Mark)染色结果的一致性分别为96.7%、91.7%、96.7%、76.7%。手术切除大标本的ALK表达优于活检小标本。结论手工IHC法简便经济、易于普及,选择高灵敏性、特异性的抗体,可用于中小医院临床筛查ALK融合NSCLC,染色阳性病例再行抗体D5F3(Ventana)全自动IHC或FISH法检测。     

LOX与HIF-1α在非小细胞肺癌中表达增强

目的 研究赖氨酰氧化酶(LOX)与低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达情况及其临床意义.方法 收集临床NSCLC组织标本41例,用免疫组织化学染色法(IHC)检测NSCLC组织中LOX和HIF-1α蛋白表达;蛋白印迹法(Western blot)检测NSCLC组织及相应的癌旁组织、正常肺组织中LOX与HIF-1 α蛋白表达.结果 IHC结果显示LOX蛋白表达主要在细胞质,HIF-1α蛋白表达主要在细胞核.LOX与HIF-1 α在NSCLC组织中阳性表达率均明显高于正常肺组织(P ＜0.05);LOX蛋白的高表达与肿瘤的病理类型、分化程度、淋巴转移和临床分期之间存在显著相关(P ＜0.05);HIF-1α蛋白的高表达与肿瘤的病理类型、大小、淋巴转移和临床分期之间存在显著相关(P ＜0.05);LOX与HIF-1α蛋白在NSCLC组织中表达呈正相关性(P＜0.05).Western blot结果显示NSCLC组织中LOX与HIF-1α蛋白的表达显著高于相应的癌旁组织及正常肺组织(P＜0.05).结论 LOX与HIF-1α的异常表达可能与NSCLC发生、发展有关,并且LOX与HIF-1α的高表达可能协同促进了NSCLC的侵袭转移.     

非小细胞肺癌中Ventana ALK免疫组化异质性分析

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中Ventana间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)免疫组化异质性的分子变异特点和临床病理特征。方法收集2 228例NSCLC进行Ventana ALK(D5F3)免疫组化染色,并采用双盲法进行评价。对其中的Ventana ALK异质性病例行FISH和下一代测序(next generation sequencing, NGS)检测。结果 Ventana ALK阳性201例(9.0%),异质性10例(0.4%),阴性2 017例(90.5%)。Ventana ALK异质性病例包括2例大细胞神经内分泌癌、1例淋巴上皮瘤样癌和7例鳞状细胞癌。Ventana ALK异质性病例中强阳性肿瘤细胞占1%～30%。FISH检测ALK分离信号为0～12%,均为FISH阴性。9例ALK异质性病例成功经NGS检测,均未见ALK基因变异(包括基因融合、拷贝数变异、插入/缺失或单核苷酸变异)。结论 Ventana ALK异质性NSCLC应行其他分子病理学检测以进一步确认其ALK基因状态。     

HBsAg阳性肝癌患者预后及病理因素与ALK基因表达的相关性研究

 目的:检测ALK基因在HBsAg阳性肝细胞癌患者中的表达,并分析其与临床特征及预后的相关性。方法:收集我院2005~2010年261例术后经病理确诊的HBsAg阳性肝癌患者肿瘤组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学法和FISH法对标本石蜡切片进行分析,检测ALK表达情况,并探讨其对HBsAg阳性肝癌患者临床病理因素和预后的影响。结果:在肿瘤组织中,免疫组织化学法和FISH法分别检测到ALK阳性表达率为44.8%和32.6%。免疫组化结果进一步显示ALK蛋白表达与患者性别、肿瘤数目和微转移密切相关(P<0.05),而与患者的年龄、AFP水平、肿瘤大小、临床分期等无关;ALK阳性患者总生存期和无进展生存期均明显低于阴性患者(P<0.01);多因素分析显示,ALK表达和微转移是对患者无进展生存期具有统计学显著性的预后因素。结论:ALK在HBsAg阳性肝癌组织表达状态与肝癌的生长和转移关系密切,可以作为反映肝癌生物学行为和判断预后的有效指标。     

非小细胞肺癌组织中TRIM59、p53表达与临床病理特征及预后的相关性分析

目的 分析非小细胞肺癌(NSCLC)组织中三重基序蛋白(TRIM)59、p53表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法 选取我院73例NSCLC患者的癌组织及癌旁组织,免疫组织化学法检测患者NSCLC组织及癌旁组织中TRIM59及p53蛋白的表达;qRT-PCR检测TRIM59及p53 mRNA表达。Pearson检验分析NSCLC组织中TRIM59 mRNA与p53 mRNA表达的相关性;采用TCGA数据库分析TRIM59及p53蛋白与NSCLC患者预后的关系;Kaplan-Meier法分析TRIM59、p53蛋白与NSCLC患者预后的关系;COX回归分析影响NSCLC患者预后的危险因素。结果 NSCLC组织中TRIM59及p53蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(74.0%vs.9.6%,65.8%vs.5.5%,P<0.05),TRIM59 mRNA、p53 mRNA表达水平显著高于癌旁组织[(2.17±0.62)vs.(1.00±0.24)、(1.85±0.49)vs.(1.00±0.26),P<0.05]。NSCLC组织中TRIM59及p53蛋白阳性表达与患者TNM分...     

GATA6和TPM1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的检测转录因子GATA6和原肌球蛋白1(TPM1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,探讨两者在NSCLC中的临床意义。方法选取在本院治疗的NSCLC患者60例,采用PCR技术检测NSCLC患者癌组织及对应癌旁组织中GATA6和TPM1基因表达情况,免疫组织化学法检测GATA6和TPM1蛋白表达,并分析GATA6和TPM1表达水平与各临床病理参数的关系。Cox回归模型分析GATA6和TPM1表达与NSCLC患者预后影响。结果 60例NSCLC患者癌组织中GATA6基因表达水平及阳性表达率均明显高于癌旁组织,而TPM1基因表达水平及阳性表达率均明显低于癌旁组织(P 0.05)。GATA6和TPM1蛋白表达情况与患者年龄、分化等级、肿瘤分期、TNM分期均无关系(P 0.05);GATA6蛋白表达情况与淋巴结是否出现转移密切相关(P 0.05),TPM1的蛋白表达情况与患者病理分类密切相关(P 0.05)。GATA6和TPM1以及是否出现淋巴结转移是影响NSCLC患者预后的主要危险因素(P 0.05)。结论 GATA6和TPM1在NSCLC组织中呈异常表达,且是影响NSCLC预后的危险因素,两者均在NSCLC发生发展及预后评估中具有重要的意义,可为靶向治疗提供参考依据。     

IHC、FISH和RT-PCR检测对EML4-ALK重排的一致性

棘皮动物微管结合蛋白-间变性淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule-associated protein-like4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)在肺癌中已成为第二个最重的驱动致癌基因,在4%~6%的肺腺癌中EML4-ALK已经成为第一个可以靶向治疗的融合基因位点.伴随着ALK分离探针荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)试剂盒的上市,克唑替尼已经被批准治疗ALK阳性的进展期非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC).然而,一种靶向药物的成功主取决于一种敏感且特异的筛选实验方法来检测分子药物作用的靶点.以作者的经验看,用RT-PCR来检测EML4-ALK,比用FISH和免疫组化(immunohistochemistry,IHC)方法更敏感,结果更可靠.尽管通过FISH检测ALK已经经过大量的临床实验验证,然而该方法在技术层面仍存在许多具有挑战性的问题,而通过IHC和RT-PCR方法检测ALK仍需临床进一步的探索.     

ALK阳性晚期非小细胞肺癌临床病理分析

目的 探讨间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,及其与临床特征、鉴别诊断、预后的关系.方法 采用免疫组化法检测253例晚期NSCLC中ALK的表达,并对其中132例进行荧光PCR法验证.结果 采用免疫组化法检测晚期NSCLC中ALK阳性率为20.95％(53/253).ALK阳性组中未吸烟者、腺癌的比例高于ALK阴性组(P＜0.05).132例进行荧光PCR验证,免疫组化与荧光PCR符合率随免疫组化阳性程度的增加而递增.结论 免疫组化可作为ALK的筛查手段,提高ALK的检出率.荧光PCR检测对ALK阳性NSCLC的确诊具有重要意义.     

免疫组织化学和荧光原位杂交检测肺腺癌ROS1表达的对比

目的比较免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和荧光原位杂交(fluorescent in situhybridization,FISH)技术在检测肺腺癌中ROS1蛋白表达和融合基因的差异性和一致性,评估IHC在临床上的应用价值。方法应用IHC和FISH技术对332例肺腺癌中ROS1蛋白表达和融合基因进行检测,比较两者检测的结果和相关性,并探讨ROS1融合基因与临床病理特征之间的关系。结果 332例肺腺癌中FISH阳性者13例,阴性者319例,ROS1融合基因阳性率为3.9%;ROS1蛋白表达结果:0者312例,1+者2例,2+者5例,3+者13例,ROS1蛋白过表达率为6.0%;经FISH检测312例ROS1蛋白表达为0的标本无ROS1融合基因,2例1+的标本中也无ROS1融合基因;5例2+的标本中有2例ROS1融合基因,13例3+的标本中11例有ROS1融合基因;IHC检测0和1+、2+、3+标本FISH检测阳性符合率分别为0(0/314)、40%(2/5)和84.6%(11/13);IHC检测ROS1蛋白为2+~3+的标本中72.2%(13/18)显示ROS1融合基因,0~1+患者中无1例有ROS1融合基因(Kappa系数=0.831,P0.01);IHC检测ROS1蛋白表达的敏感性和特异性分别100%和98.4%。结论 IHC检测ROS1蛋白表达和FISH检测ROS1融合基因,两种方法有较高的符合率,一致性较好,IHC有较高的敏感性和特异性,可作为临床检测肺腺癌ROS1融合基因的简单而有效的方法。     

肺癌组织中钙粘附蛋白-E和S100A2表达与临床病理学的关系

目的研究及探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中粘附蛋白-E(E-cadherin)和S100A2表达与临床生物学行为的关系。方法采用RT-PCR方法及免疫组织化学(IHC)法,检测95例NSCLC组织标本、配对癌旁组织及正常肺组织E-cadherin和S100A2表达情况,分析它们与肿瘤临床特征的相关性及其在非小细胞肺癌进展中的作用。结果 RT-PCR结果表明E-cadherin在正常肺组织中高表达,在肺癌组织中表达下调,S100A2在正常肺组织中低表达,在肺癌组织中表达上调。免疫组化结果表明E-cadherin在正常肺组织中阳性率为100%,随着NSCLC组织分化的降低阳性率下降,S100A2表达上调。结论 E-cadherin在NSCLC的低表达和S100A2在NSCLC组织过表达可能与NSCLC发病相关。     

Stathmin在非小细胞肺癌中表达增强

目的探讨stathmin在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中和正常肺组织中的表达,了解其与NSCLC临床病理特征之间的关系。方法用免疫组化与RT-PCR方法,检测43例NSCLC术后癌组织及正常肺组织标本中stathmin蛋白与基因的表达。结果 Stathmin蛋白和基因在NSCLC中阳性表达率分别为62.79%和67.44%,显著高于正常肺组织的16.28%和20.93%(P<0.01),其表达与肿瘤细胞分化程度和有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 Stathmin在NSCLC的发生发展过程中起了重要作用,可能成为预测NSCLC恶性程度的新的生物学及个体化治疗的敏感指标。     

δ-catenin和Ki67在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨δ-catenin、Ki-67在非小细胞肺癌中的表达状况及其与临床病理学参数间的关系。方法利用免疫组织化学(ElivisionTM plus法),检测肺癌组织芯片中155例非小细胞肺癌患者δ-catenin、Ki-67的表达情况。结果肺癌组织的δ-catenin蛋白阳性表达率为61.30%(95/155),相应癌旁组织δ-catenin阳性表达率为35.6%(16/45),差别有显著意义(<0.05)。δ-catenin在TNM III/IV期的NSCLC组织中阳性表达率为73.2%(41/56),明显高于在Ⅰ/II期NSCLC组织中阳性表达率54.5%(54/99,=0.022);δ-catenin在出现淋巴结转移的表达率为72.3%(60/83),显著高于没有淋巴结转移的阳性表达率48.6%(35/72,=0.003);非小细胞肺癌中δ-catenin高表达同Ki-67高表达呈显著正相关关系(χ2=12.685,r=0.282,<0.01)。结论δ-catenin的高表达与非小细胞肺癌的分期,淋巴结转移及增殖有关。     

磷酸化STAT3在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨磷酸化信号转导与转录激活因子3(pSTAT3)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与NSCLC各临床病理因素的关系。方法:采用免疫组织化学染色法检测59例NSCLC及其癌旁组织中pSTAT3的表达。结果:(1)NSCLC组织中,pSTAT3的表达明显高于癌旁组织(P<0.01);(2)pSTAT3的阳性表达与肿瘤组织的大小及NSCLC患者的吸烟状况有关,与性别、年龄、淋巴结转移、临床分期及组织分化程度无关。pSTAT3在腺癌中的阳性表达率较鳞癌高,但无统计学意义。结论:pSTAT3可能在肺癌的发生发展及指导靶向治疗中发挥重要作用。     

非小细胞肺癌中LASS2/TMSG1的表达及其临床意义

目的探讨LASS2/TMSG1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及与临床病理特征、预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测NSCLC和癌旁正常组织中LASS2/TMSG1蛋白的表达,分析其表达与NSCLC临床病理特征的关系,并进行术后随访。结果LASS2/TMSG1蛋白在NSCLC组织中的表达(21/87,24.13%)明显低于正常肺组织(15/25,60.00%)。LASS2/TMSG1在NSCLC组织中的表达与肿瘤分化、淋巴结转移呈负相关(P<0.05),且LASS2/TMSG1阳性患者的总生存期及无瘤生存期均明显高于LASS2/TMSG1阴性患者(P<0.05)。多因素Cox分析显示,LASS2/TMSG1是NSCLC患者的独立预后因素。结论LASS2/TMSG1可能抑制肺癌的发生、分化及转移,有望成为肺癌患者的预后指标之一。     

SS18阳性滑膜肉瘤中ALK及C-met的表达及其临床意义

目的观察ALK及C-met在滑膜肉瘤中的表达,探讨两者表达与临床病理特征的关系及意义。方法对82例经形态学及免疫表型诊断为滑膜肉瘤的组织微阵列行SS18 FISH检测,并采用免疫组化法检测ALK(D5F3)、ALK(5A4)及C-met的表达,对ALK/C-met蛋白高表达者行相应ALK/C-met FISH及EML4-ALK RT-PCR检测。结果SS18阳性滑膜肉瘤有38例,其中ALK(D5F3)阳性率为18.4%(7/38),高表达率为2.6%(1/38),但ALK(5A4)均阴性。唯一ALK(D5F3)蛋白高表达者ALK FISH阳性,但EML4-ALK RT-PCR阴性,并发生肺转移。C-met阳性率为18.4%(7/38),高表达率为10.5%(4/38),阳性组和阴性组间在组织学分型及组织学分级上差异有统计学意义(P<0.05),且高表达者的病死率或转移率达75%(3/4);但4例C-met FISH均阴性。结论对滑膜肉瘤ALK蛋白初筛,选用克隆号D5F3更为合适。ALK/C-met高表达者预后欠佳,滑膜肉瘤中ALK及C-met有一定阳性率,提示ALK/C-met可能是该亚型的潜在治疗靶点。     

实性低分化肺癌167例的病理分型及其表皮生长因子受体基因突变和间变性淋巴瘤激酶检测北大核心CSCD

目的探讨实性低分化肺癌通过免疫组织化学和特殊染色进一步病理分型,及其表皮生长因子受体（EGFR）基因突变和间变性淋巴瘤激酶（ALK）检测情况。方法回顾分析北京医院2014年4月至2017年4月非小细胞肺癌827例,对于其中的167例实性低分化肺癌,通过黏液特殊染色（淀粉酶处理的过碘酸雪夫染色）和免疫组织化学10种抗体[细胞角蛋白（CK）7、波形蛋白、Ki-67、CK5/6、p40、甲状腺转录因子1、Napsin A、CD56、嗜铬粒素A、突触素]进一步病理分型;采用扩增阻滞突变系统（ARMS）法对EGFR基因第18、19、20、21号外显子进行基因突变检测;用免疫组织化学Ventana ALK（D5F3）检测ALK的突变并用荧光原位杂交（FISH）验证。结果167例患者中女性79例,男性88例;年龄35～77岁,中位年龄62岁。镜下〉10%的癌组织排列呈巢片状,缺乏腺癌、鳞状细胞癌（简称鳞癌）和神经内分泌癌典型的形态学排列的病例,通过免疫组织化学和特殊染色分型为腺癌64例（38.32%）、鳞癌34例（20.35%）、大细胞神经内分泌癌21例（12.57%）、复合型大细胞神经内分泌癌5例（2.99%）、腺鳞癌2例（1.20%）、大细胞癌41例（24.55%）;Ki-67阳性指数5%～65%。5例（2.99%,5/167）腺癌成分中可见EGFR突变（19del 3例、L858R 2例）,2例（1.20%,2/167）腺癌免疫组织化学Ventana ALK（D5F3）阳性,经FISH验证有基因重排。结论缺乏形态分化特征的实性低分化肺癌可以通过免疫组织化学和特殊染色进一步分型和进行分子病理学检测,从而寻找分子靶点为患者提供更为精准的治疗,改善预后。     

非小细胞肺癌EGFR、ALK、ROS1基因突变和临床病理特征分析

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)驱动基因突变与临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR法检测NSCLC中EGFR、ALK、ROS1基因突变,并分析其与临床病理特征的关系。结果 347例NSCLC中EGFR基因突变率为49.3%(171/347),突变易发生于女性、腺癌、年龄(≤62岁)及不吸烟患者(P 0.05),与有无淋巴结转移及肿瘤分期无关(P 0.05);突变类型以19-del和L858R为主(占87.1%)。ALK基因突变率为4.3%(15/347),ROS1基因突变率为1.7%(6/347),两基因突变均与患者性别、年龄、吸烟史、组织学类型、有无淋巴结转移及肿瘤分期无关(P 0.05),但ALK基因突变和ROS1基因突变者均为腺癌。另外,EGFR和ROS1基因突变共存者占0.3%(1/347)。结论 NSCLC患者中EGFR基因突变率明显高于ALK及ROS1基因突变率。EGFR突变易发生于女性、腺癌、年龄≤62岁、不吸烟者,ALK和ROS1基因突变可能更易发生于腺癌患者。EGFR基因突变和ROS1基因突变可以共存。     

IL-33在人非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织和癌旁组织中IL-33的表达情况。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测61例NSCLC患者的肿瘤组织和癌旁组织中IL-33 mRNA的表达水平,再用免疫组织化学染色进一步检测12例不同组织学类型的NSCLC石蜡标本中IL-33的蛋白定位与表达,分析其与肺癌患者临床病理参数、总生存(OS)之间的关系。结果 IL-33 mRNA在肺癌组织中的表达量明显低于癌旁组织,免疫组织化学染色结果表明IL-33蛋白定位于细胞核,并在肺癌组织中低表达。此外,IL-33在肺癌组织中的表达与肺癌病理类型有关,与患者临床病理特征年龄、性别、吸烟史、病理分级和临床分期等均无关;Kaplan-Meier生存曲线分析表明,IL-33 mRNA表达水平与术后生存时间显著正相关。结论 IL-33可能在肺癌的发生发展以及靶向治疗中发挥重要作用。