FoxM1通过促进肿瘤干细胞化参与骨肉瘤细胞对顺铂的耐药

目的探讨FoxM1是否通过促进肿瘤干细胞化参与骨肉瘤细胞对顺铂的耐药。方法利用骨肉瘤亲本细胞MG-63,采用递增药物浓度筛选建立顺铂耐药细胞MG-63R;运用慢病毒转染FoxM1建立稳定过表达MG-63F细胞及空载体对照MG-63V细胞。MTT法检测细胞对顺铂药物的敏感性。Western blot法检测FoxM1及肿瘤干细胞相关标志物Sox-2、Oct-4、Nanog蛋白水平表达。无血清培养悬浮克隆球实验检测微球形成能力。检测FoxM1抑制剂Thiostrepton处理后对肿瘤干细胞相关标志物表达水平、微球形成能力和对顺铂药物敏感性的影响。结果在2μg/mL顺铂浓度下稳定生长和传代的耐药细胞MG-63R的半数有效抑制浓度IC_(50)由亲本细胞中1.27上升为7.36,FoxM1蛋白水平在MG-63R中表达较MG-63明显增高;MG-63R中肿瘤干细胞相关标志物Sox-2、Oct-4、Nanog蛋白水平表达明显升高,同时平均悬浮克隆球数量明显增多。成功构建FoxM1过表达细胞MG-63F,其FoxM1蛋白表达水平较空载体对照MG-63V明显增高,肿瘤干细胞相关标志物也明显升高,平均悬浮克隆球数量由14增加至25,差异有统计学意义。MG-63F细胞对顺铂耐药性明显升高,IC_(50)由对照组0.96升高为31.23;MG-63F细胞经4μmol/L Thiostrepton处理后,FoxM1蛋白表达明显降低,对顺铂的敏感性明显增加,同时肿瘤干细胞相关标志物表达明显降低,平均悬浮克隆球数目也明显减少。结论 FoxM1过表达可能通过促进肿瘤干细胞化参与骨肉瘤细胞对顺铂的耐药,FoxM1抑制剂可能通过逆转肿瘤干细胞化而增强骨肉瘤耐药细胞对顺铂的敏感性。     

BMP4沉默对骨肉瘤细胞系MG-63上皮间质转换及侵袭转移能力的影响

目的探讨沉默骨形成蛋白-4(BMP4)对骨肉瘤细胞系MG-63上皮间质转换(EMT)和侵袭迁移能力的影响。方法脂质体法转染MG-63细胞BMP4 shRNA表达质粒,将MG-63细胞分为MG-63对照组(正常培养对照)、空白对照组(转染空白质粒)和BMP4沉默组(转染BMP4 shRNA质粒)。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot检测细胞E-cadherin、vimentin、twist和snail的mRNA及蛋白水平。Transwell侵袭实验和伤口愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果沉默BMP4后MG-63细胞的间质细胞标志物vimentin、twist1和snail水平降低,上皮细胞标志物E-cadherin表达增高(P0.05)。BMP4沉默组细胞穿膜细胞数和迁移距离显著少于MG-63对照组和空白对照组(P0.05)。结论沉默BMP4基因可以使间质型MG-63骨肉瘤细胞向上皮细胞表型转变,从而有效地降低肿瘤细胞的侵袭迁移能力。     

miRNA-10b靶向调控Twist促进骨肉瘤细胞增殖与侵袭的研究

目的探讨microRNA-10b对骨肉瘤细胞MG-63增殖与侵袭能力的影响及潜在作用机制。方法应用实时荧光定量PCR检测人骨肉瘤组织和癌旁正常骨组织中miR-10b的表达差异。将miR-10b mimic和Twist特异性的siRNA (Twist siRNA)分别通过脂质体转染法转染入骨肉瘤细胞系MG-63,应用RT-PCR检测细胞中miR-10b和Twist mRNA的表达,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Twist及内参β-actin蛋白表达水平,采用MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63增殖能力的影响;采用Transwell侵袭实验检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭能力的影响。结果与正常癌旁骨组织相比,miR-10b在骨肉瘤组织中呈现明显高表达,差异具有极显著性统计学意义(P0.01); miR-10b mimic可使Twist mRNA和蛋白表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05),同时可显著增强MG-63细胞的增殖与侵袭能力(P0.05),而转染miR-10b mimic和Twist siRNA的MG-63细胞的增殖与侵袭能力较仅转染miR-10b mimic的MG-63细胞显著减弱(P0.05)。结论人骨肉瘤细胞系MG-63中miR-10b的表达上调,可能通过靶向激活Twist信号通路促进骨肉瘤细胞的异常增殖与远处侵袭。     

人骨肉瘤细胞株MG-63中肿瘤干细胞的生物学特性

背景：骨肉瘤干细胞在骨肉瘤的发生、复发及对化疗药物的耐药性中发挥关键作用,而目前关于骨肉瘤干细胞体外分离培养及生物学特性研究的报道甚少。 目的：从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出具有干细胞特征的高致瘤性细胞亚群,检测肿瘤干细胞特异性标志物CD105的表达。 方法：无血清悬浮培养法从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出骨肉瘤细胞球,应用流式细胞术检测细胞球中CD73、CD90、CD105的表达,免疫荧光法检测骨肉瘤细胞株及骨肉瘤细胞球中CD105的阳性率,免疫磁珠法分选出CD105⁺和CD105^-的细胞,传代后分别接种于NOD/SCID小鼠评估其致瘤性。 结果与结论：CD105在球体细胞中高表达,此类肿瘤细胞具有高侵袭性和高致瘤性,在NOD-SCID小鼠中仅需移植1 000个细胞即可形成肿瘤,这些细胞具有自主生长特性,能够在无血清条件下长期培养,CD105⁺骨肉瘤细胞显示了干细胞的生物学特性,CD105可能成为骨肉瘤干细胞的表面标志之一。     

HIF-3α在骨肉瘤组织中的表达及低氧状态对MG-63细胞侵袭能力的影响

目的 探讨HIF-3α在骨肉瘤侵袭转移中的作用,观察低氧对骨肉瘤MG-63细胞侵袭能力的影响.方法 收集15例骨肉瘤组织和15例骨软骨瘤组织,用免疫组织化学染色方法检测骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织中HIF-3α的表达情况;MG-63细胞低氧刺激,用定量RT-PCR和Western Blot方法检测MG-63细胞中HIF-3...     

miR-124靶向调节STAT3基因对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124及STAT3在骨肉瘤组织中的表达,以及miR-124对骨肉瘤MG-63细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测67例患者骨肉瘤组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,免疫组织化学方法检测STAT3蛋白的表达。使用脂质体将miR-124抑制剂及miR-124模拟物转染至骨肉瘤MG-63细胞株,以无关序列作为阴性对照。Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化,采用MTT方法与Transwell实验检测转染后MG-63细胞的增殖侵袭能力变化。结果 miR-124在骨肉瘤组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.01);STAT3蛋白在骨肉瘤组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.01);转染miR-124抑制剂的MG-63细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高;转染miR-124模拟物后则得到相反的结果(P0.01)。结论 miR-124抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关。     

长链非编码RNA TTTY15在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞活力和侵袭的影响

目的:观察长链非编码RNA TTTY15在骨肉瘤组织及细胞株中的表达,并探讨其对骨肉瘤细胞活力和侵袭的影响。方法:应用qPCR法检测11例骨肉瘤组织及其瘤旁组织中TTTY15的水平,同时检测TTTY15在骨肉瘤细胞株(143B、Saos2、MG-63、U2OS和HOS)和人成骨细胞株hFOB1.19中的表达。在表达量最高的细胞株(MG-63)中通过转染小干扰RNA敲减TTTY15的表达,CCK-8法检测TTTY15低表达对细胞活力的影响,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,Transwell检测其对细胞侵袭能力的影响,qPCR检测miR-216b-5p和FOXM1 mRNA的表达,Western blot法检测相关蛋白的变化。结果 :与瘤旁正常组织相比,TTTY15在骨肉瘤组织中表达升高(P0.01);与人成骨细胞相比,TTTY15在骨肉瘤细胞株中表达升高(P0.05),其中在MG-63细胞中表达水平最高(P0.01)。敲减TTTY15在MG-63细胞的表达后,细胞活力降低(P0.05),细胞周期被抑制在G_0/G_1期(P0.01),细胞的侵袭能力降低(P0.01),miR-216b-5p mRNA表达水平升高(P0.01),FOXM1的mRNA表达降低(P0.01),同时FOXM1、CDK4、cyclin D1、MMP-2和N-cadherin的蛋白表达降低,而E-cadherin的蛋白表达升高(P0.05)。结论:TTTY15在骨肉瘤组织和细胞株中表达增高,敲减TTTY15的表达可抑制骨肉瘤细胞的活力和侵袭能力,其机制可能与TTTY15低表达导致miR-216b-5p的表达升高,引起FOXM1基因表达下调有关。     

沉默基因CD147对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的观察RNA干扰技术沉默CD147基因对骨肉瘤MG-63细胞生物学行为的影响。方法实验分为正常细胞组(mock)、阴性对照组(Ad-si Control)及RNA干扰组(Ad-CD147-si RNA)。应用MTT法实验检测骨肉瘤MG-63细胞的增殖率变化,应用Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力变化,应用ELISA方法检测MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白变化。结果 Ad-CD147-si RNA抑制MG-63细胞增殖;RNA干扰CD147基因表达后MG-63细胞的运动侵袭能力下降,穿过人工基底膜细胞数量明显减少,MG-63细胞分泌VEGF、MMP-2、MMP-9能力显著降低,结论 AdCD147-si RNA抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖和侵袭可能与下调MMP-2、MMP-9、VEGF表达相关。     

异甘草素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖及侵袭的影响

目的探讨异甘草素(ISL)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖及侵袭的影响及可能机制。方法采用不同浓度异甘草素(0,5,10,20μg/ml)作用于MG-63细胞后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察ISL对MG-63细胞生长的抑制作用。单一浓度的异甘草素(20μg/ml)处理MG-63细胞48h后,Transwell实验检测MG-63细胞侵袭能力变化,Western blot方法检测Bcl-2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达,实时PCR方法检测Bcl-2mRNA与Bax mRNA的表达水平。结果 ISL以浓度依赖性抑制MG-63细胞增殖。经20μg/ml异甘草素处理后,MG-63细胞侵袭能力显著降低,Bcl-2蛋白的表达下调,Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3蛋白的表达上调,Bcl-2 mRNA的表达水平下调,Bax mRNA的表达水平上调。结论异甘草素在体外能够抑制MG-63细胞增殖与侵袭,与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。     

Runx3和c-Myc蛋白在TGF-β抑制MG-63细胞增殖中作用

目的探讨Runx3和c-Myc蛋白在骨肉瘤组织中的表达及其在MG-63细胞增殖过程中的作用。方法采用Western blot技术检测骨肉瘤组织和骨良性病变组织中Runx3和c-Myc蛋白表达水平;MTS方法检测TGF-β对骨肉瘤细胞系MG-63细胞增殖能力的影响。结果肉瘤组织中Runx3蛋白的表达水平明显低于骨良性病变组织,而c-Myc则明显高于骨良性病变组织(P0.05),二者呈负相关(R=-0.797,P0.05)。TGF-β抑制MG-63细胞增殖活性,并呈剂量依赖关系,TGF-β可显著增强MG-63细胞Runx3蛋白表达并抑制c-Myc蛋白表达;高表达Runx3蛋白可减弱TGF-β对MG-63细胞增殖的抑制作用(P0.05)。结论TGF-β抑制MG-63细胞增殖可能与上调Runx3蛋白表达进一步抑制c-Myc蛋白的表达相关。     

莪术醇抑制人骨肉瘤细胞系的增殖和促凋亡

目的 探究莪术醇对人骨肉瘤细胞系MG-63和U2OS体外增殖、凋亡的影响和作用机制。方法 将MG-63细胞和U2OS细胞分为对照组、莪术醇20、40、80和160μmol/L干预组;MTT法检测MG-63、U2OS细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞测量细胞凋亡;RT-qPCR和Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、caspase和β-catenin的mRNA和蛋白表达。结果 莪术醇呈浓度依赖性地抑制MG-63和U2OS细胞增殖,IC₅₀值分别为128.03μmol/L、117.95μmol/L。与对照组相比,莪术醇显著抑制MG-63、U2OS细胞的体外迁移和侵袭(P<0.05),并诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,莪术醇组促进Bax、caspase 3表达,抑制Bcl2表达(P<0.05),MG-63、U2OS细胞内β-catenin的mRNA表达水平和蛋白表达均被显著抑制(P<0.05)。结论 莪术醇显著抑制人骨肉瘤细胞系MG-63、U2OS增殖,诱导细胞凋亡。     

LncRNA MEG3在骨肉瘤组织中的表达及对MG-63细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA母系印记基因3(lncRNA MEG3)在骨肉瘤组织中的表达及对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、凋亡与侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测5例骨肉瘤组织及癌旁对应正常组织中lncRNA MEG3的表达水平。构建pcDNA3.1-MEG3重组质粒,MEG3过表达后,MTT方法检测MG63细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测MG63细胞的凋亡率;Transwell实验检测MG63细胞侵袭能力的变化;Western blot方法检测MG63细胞增殖细胞核抗原(PCNA)与Racl蛋白的表达变化。结果 lncRNA MEG3在骨肉瘤组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P0.01)。lncRNA MEG3过表达后,MG63细胞的增殖与侵袭能力显著降低,凋亡率显著上升,PCNA与Racl蛋白的表达显著降低(P0.01)。结论 lncRNA MEG3在骨肉瘤组织中低表达,过表达lncRNA MEG3能够抑制人骨肉瘤细胞MG-63的增殖与侵袭,并促进凋亡。     

人骨髓间充质干细胞促进乳腺癌细胞系MCF7上皮间质转化

目的探讨在人骨髓间充质干细胞(h BMSCs)与乳腺癌细胞系MCF-7共培养后,MCF-7细胞上皮间质转化(MET)能力是否受到影响,并检测共培养条件下上皮间质转化是否是通过旁分泌因素影响MCF-7细胞的增殖及迁移能力的。方法体外成功分离h BMSCs,利用Transwell小室共培养h BMSCs与乳腺癌细胞系MCF-7,光镜观察MCF-7细胞的形态结构,是否发生上皮间质转化的特征性改变。利用实时定量PCR、Western blot、免疫荧光检测上皮间质转化标志蛋白E-cadherin、vimentin、α-SMA及β-catenin的表达。收集共培养体系中的条件培养液,作用MCF-7细胞,Western blot鉴定MCF-7细胞上皮间质转化的分子标志物的水平;CCK8法检测MCF-7细胞的增殖活力;流式细胞计量术检测细胞增殖周期的变化;Transwell小室法检测MCF-7细胞侵袭及转移能力。结果与对照组相比,与h BMSCs共培养之后的MCF-7细胞表现出明显增强的上皮间质转化能力(P0.05)。培养体系中的条件培养液刺激MCF-7细胞,其上皮间质转化特征及增殖和迁移能力增强(P0.01)。结论人骨髓间充质干细胞可诱导乳腺癌细胞系发生上皮间质转化。骨髓间充质干细胞与乳腺癌细胞系可以通过旁分泌信号促进乳腺癌上皮间质转化,进一步增强其增殖及转移能力。     

左旋含羞草碱诱导骨肉瘤细胞凋亡作用及机制的体外实验研究

目的体外实验研究左旋含羞草碱诱导骨肉瘤细胞的凋亡作用,并初步探讨其中的分子机制。方法体外培养骨肉瘤细胞系MG-63及U2-OS,给予0 M,100 M,200 M和400 M的左旋含羞草碱处理,同时在400 M的左旋含羞草碱中加入100 mg/m L柠檬酸铁胺(FAC)处理。CCK-8法检测骨肉瘤细胞系增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Hoechst染色法检测细胞核固缩比例,蛋白印迹检测左旋含羞草碱及FAC处理后骨肉瘤细胞DNA损伤修复相关蛋白表达。结果 CCK-8法检测细胞增殖,当左旋含羞草碱浓度为400 M时,MG-63及U2-OS的细胞抑制率可分别达到81.1%±1.6%和76.7%±2.1%;流式细胞术检测发现左旋含羞草碱处理48 h后,MG-63及U2-OS的细胞凋亡率分别为54.1%±12.6%和46.2%±14.7%;Hoechst染色法显示,MG-63及U2-OS的细胞核固缩比例分别为53.8%±10.6%和49.2%±8.3%,而加入FAC后,则可以减弱左旋含羞草碱对骨肉瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡的作用;同时,蛋白印迹检测表明DNA损伤修复的关键蛋白表达水平在左旋含羞草碱及FAC处理后均发生显著改变。结论左旋含羞草碱可以有效抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导骨肉瘤细胞凋亡,其分子机制与左旋含羞草碱的铁螯合作用有关。     

白藜芦醇调控miR-34a表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响

目的:探讨白藜芦醇通过调控微小RNA-34a(miR-34a)表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响。方法:将骨肉瘤MG-63细胞分为对照组及10、20、40、60和80μmol/L白藜芦醇处理组。采用MTT法、Transwell小室和Western blot实验检测各组骨肉瘤细胞的活力、侵袭能力及自噬蛋白表达;RT-q PCR检测各组骨肉瘤细胞中miR-34a的表达。转染miR-34a模拟物(miR-34a mimic)及阴性对照(miR-34a NC)至骨肉瘤细胞,检测miR-34a mimic和miR-34a NC在白藜芦醇处理后对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的影响,Western blot检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和beclin-1的蛋白表达。结果:与对照组相比,不同浓度的白藜芦醇可抑制肿瘤细胞的活力和侵袭能力,促进自噬(P0.05)。白藜芦醇可上调肿瘤细胞中miR-34a的表达,并具有剂量依赖性(P0.05),同时促使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,beclin-1蛋白表达量上调(P0.05)。miR-34a mimic可增加白藜芦醇对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的抑制,并进一步促进自噬。结论:白藜芦醇可能通过上调miR-34a表达抑制骨肉瘤MG-63细胞生长并促进其自噬。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导caspase-8依赖的骨肉瘤细胞凋亡机制研究

目的：探讨蛋白酶体抑制剂Z-LLL-CHO(MG132)对人骨肉瘤细胞MG-63的作用以及可能作用机制。方法:将不同浓度的MG132作用于骨肉瘤细胞MG-63，采用显微镜观察形态改变、电镜观察细胞超微结构、MTT检测细胞增殖活力、琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及细胞周期改变、RT-PCR检测基因转录、Western blotting检测蛋白表达水平。 结果:MG132能有效诱导人骨肉瘤细胞系MG-63细胞周期在G₂-M期的停滞，并引起MG-63的凋亡，出现凋亡的典型形态学改变，同时出现p27kip1蛋白的积累，caspase-8活化蛋白表达增加，Bax∶Bcl-2蛋白含量比例的增高，而对正常的人二倍体成纤维细胞，MG132并未表现诱导其凋亡的活性。结论:MG132引起的人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡也许是与caspase-8、p27kip1和Bcl-2蛋白相关的。     

敲低干细胞关键转录因子FoxD3对胃癌细胞SGC-7901的影响

目的 探究shRNA Fox D3对胃癌细胞SGC-7901生长、运动及上皮间质转化的影响。方法 将shRNA Fox D3载体和空质粒载体转染至SGC-7901细胞,根据处理方式不同,将细胞分为Control组、shRNA-NC组和Fox D3-shRNA2组。克隆形成实验检测细胞克隆形成率; Transwell检测侵袭细胞数;划痕实验检测细胞划痕愈合率;显微镜观察上皮间质转化形态学变化; Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平。结果 与Control组比较,Fox D3-shRNA2组克隆形成率降低(P 0. 05),Ki67、PCNA蛋白表达降低(P 0. 05),侵袭细胞数减少(P 0. 05),划痕愈合率降低(P 0. 05),上皮间质转化受到抑制,E-cadherin蛋白表达升高(P 0. 05),N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低(P 0. 05)。结论 shRNA Fox D3可抑制SGC-7901细胞的增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化。     

白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响及可能机制。方法采用不同浓度白杨素(0,2.5,5,10,20,40 mg/L)作用于MG-63细胞后,MTT法和流式细胞仪分别检测白杨素对细胞增殖与凋亡的影响。蛋白免疫印迹检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin蛋白表达的影响。Real-time PCR方法检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA、Survivin mRNA表达水平的影响。结果白杨素抑制MG-63细胞增殖、促进MG-63细胞凋亡,并呈浓度依赖性。经20 mg/L白杨素处理后,MG-63细胞Bax与Caspase-3蛋白与mRNA表达水平显著升高,而Bcl-2与Survivin蛋白与mRNA表达水平显著降低。结论白杨素在体外抑制MG-63细胞增殖,促进MG-63细胞凋亡,与调控凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达相关。     

辣椒素诱导人骨肉瘤细胞MG-63发生免疫原性细胞死亡

目的探讨辣椒素与顺铂能否抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖并诱导其免疫原性死亡(ICD)。方法 MTT检测细胞的增殖;线粒体膜电位分析细胞凋亡;流式细胞计量术检测细胞膜上钙网蛋白(CRT)表达量;荧光素酶法检测细胞外ATP的释放;ELISA检测细胞上清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的分泌。结果辣椒素及顺铂作用均能抑制细胞MG-63增殖(P0.01),且呈剂量依赖性;辣椒素和顺铂均可诱导MG-63细胞凋亡(P0.01),但只有辣椒素能诱导MG-63细胞内质网中CRT转移到细胞膜表面,且促进ATP及HMGB1的释放(P0.01)。结论辣椒素可诱导人骨肉瘤细胞凋亡及免疫原性死亡。     

反义c-myc对增强顺铂引起骨肉瘤细胞凋亡作用的实验研究

目的：通过反义基因治疗降低人骨肉瘤MG-63细胞c-myc的表达，并探讨顺铂对c-myc低表达的人骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用的影响。 方法： 以腺病毒为载体，构建表达反义c-myc的重组腺病毒（Ad-Asc-myc），并在体外转染骨肉瘤MG-63细胞，降低MG-63细胞c-myc的表达，与不同浓度的顺铂作用后，采用MTT、蛋白免疫印迹（Western blot）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、流式细胞仪（FCM）、透射电镜等检测顺铂对骨肉瘤MG-63细胞体外增殖抑制、凋亡相关基因的表达和凋亡作用。 结果： 构建的Ad-Asc-myc体外转染MG-63细胞48 h后，可明显降低c-Myc蛋白表达，并与浓度为2.0 mg/L的顺铂作用2 h后 ，对MG-63细胞的体外增殖抑制率可达38.0%；转染的细胞Bcl-2表达降低，Bax表达增加，而E2F-1的表达无变化；FCM、电镜等显示Ad-Asc-myc转染后可诱导骨肉瘤细胞凋亡，并增加顺铂对骨肉瘤细胞的凋亡作用。 结论： 降低c-myc表达能诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡并增加顺铂对MG-63细胞的促凋亡作用。