异甘草素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖及侵袭的影响

目的探讨异甘草素(ISL)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖及侵袭的影响及可能机制。方法采用不同浓度异甘草素(0,5,10,20μg/ml)作用于MG-63细胞后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察ISL对MG-63细胞生长的抑制作用。单一浓度的异甘草素(20μg/ml)处理MG-63细胞48h后,Transwell实验检测MG-63细胞侵袭能力变化,Western blot方法检测Bcl-2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达,实时PCR方法检测Bcl-2mRNA与Bax mRNA的表达水平。结果 ISL以浓度依赖性抑制MG-63细胞增殖。经20μg/ml异甘草素处理后,MG-63细胞侵袭能力显著降低,Bcl-2蛋白的表达下调,Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3蛋白的表达上调,Bcl-2 mRNA的表达水平下调,Bax mRNA的表达水平上调。结论异甘草素在体外能够抑制MG-63细胞增殖与侵袭,与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。     

辣椒素诱导人骨肉瘤细胞MG-63发生免疫原性细胞死亡

目的探讨辣椒素与顺铂能否抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖并诱导其免疫原性死亡(ICD)。方法 MTT检测细胞的增殖;线粒体膜电位分析细胞凋亡;流式细胞计量术检测细胞膜上钙网蛋白(CRT)表达量;荧光素酶法检测细胞外ATP的释放;ELISA检测细胞上清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的分泌。结果辣椒素及顺铂作用均能抑制细胞MG-63增殖(P0.01),且呈剂量依赖性;辣椒素和顺铂均可诱导MG-63细胞凋亡(P0.01),但只有辣椒素能诱导MG-63细胞内质网中CRT转移到细胞膜表面,且促进ATP及HMGB1的释放(P0.01)。结论辣椒素可诱导人骨肉瘤细胞凋亡及免疫原性死亡。     

人参皂苷Rh2对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的影响,并初步探讨可能的分子机制。方法:采用流式细胞术Annexin V-PI双染法和MTT法检测MG-63细胞的凋亡变化;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、Cyt C和激活型caspase-3的蛋白水平。结果:流式细胞术和MTT法结果显示人参皂苷Rh2呈浓度依赖性促进MG-63细胞的凋亡。免疫印迹法结果表明,与空白对照组相比,给药组细胞Bax的蛋白表达显著增加,Bcl-2的蛋白表达显著减少,Bcl-2/Bax比值减少;线粒体中Cyt C蛋白表达显著减少,而胞浆中表达显著增加;激活型caspase-3蛋白水平显著增加(P0.05)。结论:人参皂苷Rh2呈浓度依赖性促进MG-63细胞的凋亡,其凋亡过程可能与调控线粒体凋亡通路相关蛋白有关。     

白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响及可能机制。方法采用不同浓度白杨素(0,2.5,5,10,20,40 mg/L)作用于MG-63细胞后,MTT法和流式细胞仪分别检测白杨素对细胞增殖与凋亡的影响。蛋白免疫印迹检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin蛋白表达的影响。Real-time PCR方法检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA、Survivin mRNA表达水平的影响。结果白杨素抑制MG-63细胞增殖、促进MG-63细胞凋亡,并呈浓度依赖性。经20 mg/L白杨素处理后,MG-63细胞Bax与Caspase-3蛋白与mRNA表达水平显著升高,而Bcl-2与Survivin蛋白与mRNA表达水平显著降低。结论白杨素在体外抑制MG-63细胞增殖,促进MG-63细胞凋亡,与调控凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达相关。     

HIF-3α在骨肉瘤组织中的表达及低氧状态对MG-63细胞侵袭能力的影响

目的 探讨HIF-3α在骨肉瘤侵袭转移中的作用,观察低氧对骨肉瘤MG-63细胞侵袭能力的影响.方法 收集15例骨肉瘤组织和15例骨软骨瘤组织,用免疫组织化学染色方法检测骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织中HIF-3α的表达情况;MG-63细胞低氧刺激,用定量RT-PCR和Western Blot方法检测MG-63细胞中HIF-3...     

蝎毒多肽对人骨肉瘤细胞株MG-63活性的影响

目的探讨蝎毒多肽对人骨肉瘤MG-63细胞增殖凋亡的影响。方法利用0、4、8、12μg/mL浓度蝎毒多肽处理MG-63细胞12、24、48 h,CCK-8法检测细胞活性、镜下观察细胞形态变化、吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡,8μg/mL蝎毒多肽处理MG-63细胞24、48 h,Hoechst-33258荧光染色观察细胞核染色质形态。结果 4、8、12μg/mL的蝎毒多肽可抑制MG-63细胞活性,抑制其增殖,呈剂量-时间依赖性。8μg/mL处理24 h细胞存活率为0.5506±0.0502,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。吖啶橙荧光染色,细胞染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒,随着浓度增大、时间延长,坏死细胞逐渐增多。呈现凋亡核碎裂典型变化,随剂量增加更趋明显。呈剂量依赖性抑制其增殖能力。Hoechst-33258染色观察可见凋亡细胞染色质呈固缩或碎裂状染色质,染色质着色不均,核形态各异。随作用时间增加而更趋明显。结论蝎毒多肽可以抑制骨肉瘤细胞活性,抑制其体外增殖,诱导其发生凋亡,该作用呈剂量依赖和时间依赖。     

腺病毒载体介导的ING4基因对MG-63人骨肉瘤细胞的抑制作用

目的:用人源化改造的鼠肿瘤生长抑制因子(mING4)基因构建的腺病毒表达载体(Ad-ING4)研究对MG-63人骨肉瘤细胞的抑制作用.方法:以pcDNA3.0-mING-4重组质粒为模板,通过基因定点突变技术对mING4基因进行人源化改造,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人ING-4氨基酸序列相同的重组腺病毒子(Ad-ING4),感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测ING4在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法和流式细胞技术检测ING4基因表达对MG-63细胞的生长抑制和凋亡效应;荧光共聚焦显微镜观察MG-63细胞凋亡的形态学变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因表达对MG-63细胞巾的Bax、Bcl-2基闪表达的影响.结果:基因测序和PCR分析结果显示,人源化改造的小鼠ING4分子氨基酸序列与人ING4分子完全相同,成功构建了Ad-ING4腺病毒表达载体,在MG-63细胞中ING4基因的表达对MG-63细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,出现典型细胞凋亡形态学变化,ING4基因表达可通过上调细胞中Bax和下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡.结论:转染ING4基因可明显抑制MG-63人骨肉瘤细胞的生长,诱导细胞凋亡,该现象可能是通过改变Bax,Bcl-2表达水平来发挥抗肿瘤作用的.     

BMP4沉默对骨肉瘤细胞系MG-63上皮间质转换及侵袭转移能力的影响

目的探讨沉默骨形成蛋白-4(BMP4)对骨肉瘤细胞系MG-63上皮间质转换(EMT)和侵袭迁移能力的影响。方法脂质体法转染MG-63细胞BMP4 shRNA表达质粒,将MG-63细胞分为MG-63对照组(正常培养对照)、空白对照组(转染空白质粒)和BMP4沉默组(转染BMP4 shRNA质粒)。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot检测细胞E-cadherin、vimentin、twist和snail的mRNA及蛋白水平。Transwell侵袭实验和伤口愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果沉默BMP4后MG-63细胞的间质细胞标志物vimentin、twist1和snail水平降低,上皮细胞标志物E-cadherin表达增高(P0.05)。BMP4沉默组细胞穿膜细胞数和迁移距离显著少于MG-63对照组和空白对照组(P0.05)。结论沉默BMP4基因可以使间质型MG-63骨肉瘤细胞向上皮细胞表型转变,从而有效地降低肿瘤细胞的侵袭迁移能力。     

反义c-myc寡核苷酸诱导骨肉瘤细胞MG-63凋亡的实验研究

目的： 研究反义c-myc寡核苷酸诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用。方法： 设计反义c-myc寡核苷酸片段,转染入人骨肉瘤MG-63细胞，通过MTT法、流式细胞仪、HE染色及透射电镜方法，观察和分析其对人骨肉瘤MG-63细胞作用的效果。结果： MTT法示反义c-myc寡核苷酸可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖，10.0 μmol/L、作用48 h效果最明显；流式细胞仪检测证实反义c-myc寡核苷酸（终浓度10.0 μmol/L）诱导瘤细胞的凋亡率达37.92%，出现明显的凋亡峰，并可抑制c-myc基因蛋白的表达；细胞呈典型凋亡特征。结论： 反义c-myc寡核苷酸能有效诱导人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡。     

人骨肉瘤细胞MG-63抗失巢凋亡的机制研究

目的: 观察人骨肉瘤细胞(MG-63)是否存在抗失巢凋亡(anoikis)的特性,并进一步研究其分子机制。方法: 将MG-63细胞分别在普通6孔板和事先用聚甲基丙烯酸2-羧乙基酯(poly-HEMA)处理过的6孔板中培育24 h、48 h、72 h和7 d,人正常成骨细胞hFOB 1.19和人正常肾上皮细胞293T作对照,在光镜、电镜下观察细胞的形态以及细胞间连接,用流式细胞术检测细胞的凋亡率。通过RT-PCR方法检测不同时期、不同生长状态下,细胞中β-catenin和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)的转录水平,并用Western blotting方法检测细胞内β-catenin、PI3K、Bcl-2和caspase-3、8、9的蛋白表达。结果: MG-63细胞在悬浮状态下培养,细胞相互之间聚集成比较致密的团块,没有发生明显的细胞凋亡(凋亡比例最高为30.29%)。在贴壁生长和悬浮生长情况下,caspase-3和caspase-9的活化水平均无显著差异,而在悬浮状态下caspase-8在48 h时活化最多,然后活性减低,β-catenin和磷脂酰肌醇激酶的转录水平比对照组高,但蛋白表达水平对照组与实验组无显著差异。在悬浮状态下,Bcl-2的蛋白表达水平呈时间依赖性增长,在72 h达到最高。 结论: MG-63细胞具有抗失巢凋亡的特性。细胞从细胞外基质中脱离后,早期可能激活caspase-8,从而启动并执行anoikis;Bcl-2的活化可能在后期抑制anoikis的发生。     

miR-21靶向FasL对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的调控

目的探讨miR-21是否能够通过靶向抑制FasL基因调控人骨肉瘤MG-63细胞的增殖。方法利用荧光素酶报告基因实验验证FasL基因是否为miR-21的靶基因,应用阳离子脂质体Lipofectamine~(TM)2000将miR-21 mimics或inhibitor转染至MG-63细胞,利用real-time PCR和Western blotting分析转染后MG-63细胞FasL m RNA和蛋白表达的变化,通过MTT法分析转染后MG-63细胞增殖水平变化。结果荧光素酶报告基因实验证实FasL基因为miR-21的靶基因。与对照组相比,转染miR-21 mimics后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著降低,增殖能力明显升高(P0.01);与对照组相比,转染miR-21 inhibitor后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著升高,增殖能力明显降低,P0.01。结论 miR-21可能通过靶向FasL基因促进人骨肉瘤MG-63细胞增殖。     

Prohibitin在姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的调控机制

目的 探讨姜黄素（curcumin）诱导成骨肉瘤细胞凋亡前后,Prohibitin（PHB）蛋白的定位与表达变化,及PHB与凋亡相关基因产物的共定位关系。
方法 选择性抽提经姜黄素诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白,以蛋白质组学、免疫印迹法和激光扫描共焦显微技术对PHB在核基质中存在、分布及其与凋亡相关基因产物在MG-63细胞中的共定位关系进行了研究。结果 双向凝胶电泳、质谱鉴定和免疫印迹法结果显示,PHB存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,细胞凋亡后在细胞核基质蛋白中表达下调。免疫荧光显微镜观察显示,PHB定位于MG-63细胞核基质纤维上,经姜黄素处理后出现分布位置与表达水平的变化。激光扫描共焦显微镜观察结果显示,PHB在MG-63细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2、Fas、P53、c-Myc和Rb等基因产物具有共定位关系,且共定位区域发生了变化。 结论 PHB是一种核基质结合蛋白;PHB在MG-63细胞凋亡过程中的表达与分布变化,及其与细胞凋亡相关基因的共定位关系,对MG-63细胞凋亡具有重要影响。     

miR-124靶向Sp1对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的调控

目的探讨miR-124是否能够通过靶向抑制Sp1基因调控人骨肉瘤MG-63细胞的增殖。方法利用荧光素酶报告基因实验验证Sp1基因是否为miR-124的靶基因,应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-124 mimics或inhibitor转染至MG-63细胞,利用real-time PCR和Western blotting分析转染后MG-63细胞Sp1 mRNA和蛋白表达的变化,通过MTT法分析转染后MG-63细胞增殖水平变化。结果荧光素酶报告基因实验证实Sp1基因为miR-124的靶基因。与对照组相比,转染miR-124 mimics后,MG-63细胞Sp1 mRNA与蛋白的表达均显著降低,增殖能力明显下降(P<0.01);与对照组相比,转染miR-124 inhibitor后,MG-63细胞Sp1mRNA与蛋白的表达均显著升高,增殖能力明显升高(P<0.01)。结论 miR-124抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖可能与靶向Sp1基因相关。     

流体剪切力通过Piezo1调控MG-63骨肉瘤细胞的凋亡

目的:探讨流体剪切力（FSS）对Piezo1的影响以及调控MG-63细胞凋亡的机制。方法:首先分两组Control和FSS组,FSS组施加FSS,Control组不干预,使用Western Blot检测两组caspase3和Piezo1的表达。再将细胞分为Control组、FSS组、GsMTx4组和FSS+GsMTx4组,FSS组加载FSS,GsMTx4组给予GsMTx4处理,FSS+GsMTx4组先给予GsMTx4处理后再加载FSS,检测各组凋亡相关蛋白caspase3、caspase9、BAD和Bax的表达水平。结果:60 min 12 dyn/cm2的FSS可上调MG-63细胞caspase3和Piezo1的表达,此外,FSS可通过上调Piezo1的水平从而促进caspase3、caspase9、BAD和Bax的表达水平。结论:FSS可通过Piezo1机械敏感离子通道促进MG-63人骨肉瘤细胞的凋亡,Piezo1可能是一种治疗骨肉瘤的新型分子靶点。     

人骨肉瘤MG-63细胞自分泌可溶性纤连蛋白参与细胞形态维持

目的:探讨MG-63细胞自分泌可溶性纤连蛋白(FN)在细胞形态维持中的作用。方法:将培养24 h MG-63细胞随机分成对照组、更换新鲜培养基组(不含自分泌可溶性FN)、更换培养MG-63细胞24 h的条件培养基组(含自分泌可溶性FN)和更换添加FN的新鲜培养基组(添加FN),在0.5 h、1 h和2 h观察细胞形态;采用ELISA法检测新鲜和条件培养基中可溶性FN含量;采用免疫荧光方法观察细胞微丝骨架和不溶性FN的分布变化。结果:检测新鲜和条件培养基可溶性FN浓度结果表明,条件培养基中可溶性FN含量明显高于新鲜培养基(P0.01);与对照组相比,不含自分泌可溶性FN组细胞0.5 h时回缩明显,由梭形变成圆形,1 h时开始重新铺展,2 h时形态恢复明显;含自分泌可溶性FN组和添加FN组细胞形态没有明显变化;观察细胞微丝骨架和不溶性FN分布发现,与对照组相比,不含自分泌可溶性FN组细胞0.5 h时应力纤维解聚,细胞外纤丝状FN明显减少。结论:细胞自分泌可溶性FN可能通过参与调节不溶性FN和微丝骨架的重构,参与细胞形态调节。     

重组人IFN-α联合顺铂对MG-63细胞凋亡及侵袭转移潜能的影响

能力(P＜0.05).结论 rhIFN-α对MG-63细胞的增殖抑制效应具有剂量依赖性特点,且不同剂量rhIFN-α均能促进MG-63细胞对顺铂的敏感性并可抑制MG-63细胞的侵袭转移.     

白藜芦醇调控miR-34a表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响

目的:探讨白藜芦醇通过调控微小RNA-34a(miR-34a)表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响。方法:将骨肉瘤MG-63细胞分为对照组及10、20、40、60和80μmol/L白藜芦醇处理组。采用MTT法、Transwell小室和Western blot实验检测各组骨肉瘤细胞的活力、侵袭能力及自噬蛋白表达;RT-q PCR检测各组骨肉瘤细胞中miR-34a的表达。转染miR-34a模拟物(miR-34a mimic)及阴性对照(miR-34a NC)至骨肉瘤细胞,检测miR-34a mimic和miR-34a NC在白藜芦醇处理后对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的影响,Western blot检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和beclin-1的蛋白表达。结果:与对照组相比,不同浓度的白藜芦醇可抑制肿瘤细胞的活力和侵袭能力,促进自噬(P0.05)。白藜芦醇可上调肿瘤细胞中miR-34a的表达,并具有剂量依赖性(P0.05),同时促使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,beclin-1蛋白表达量上调(P0.05)。miR-34a mimic可增加白藜芦醇对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的抑制,并进一步促进自噬。结论:白藜芦醇可能通过上调miR-34a表达抑制骨肉瘤MG-63细胞生长并促进其自噬。     

乳酸链球菌素诱导氧化应激促进人骨肉瘤MG63细胞凋亡

目的:探讨乳酸链球菌素(nisin)对人骨肉瘤MG63细胞凋亡及其相关的氧化应激机制.方法:乳酸链球菌素单独或联合抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)处理MG63细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡;2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(...     

LncRNA MEG3在骨肉瘤组织中的表达及对MG-63细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA母系印记基因3(lncRNA MEG3)在骨肉瘤组织中的表达及对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、凋亡与侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测5例骨肉瘤组织及癌旁对应正常组织中lncRNA MEG3的表达水平。构建pcDNA3.1-MEG3重组质粒,MEG3过表达后,MTT方法检测MG63细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测MG63细胞的凋亡率;Transwell实验检测MG63细胞侵袭能力的变化;Western blot方法检测MG63细胞增殖细胞核抗原(PCNA)与Racl蛋白的表达变化。结果 lncRNA MEG3在骨肉瘤组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P0.01)。lncRNA MEG3过表达后,MG63细胞的增殖与侵袭能力显著降低,凋亡率显著上升,PCNA与Racl蛋白的表达显著降低(P0.01)。结论 lncRNA MEG3在骨肉瘤组织中低表达,过表达lncRNA MEG3能够抑制人骨肉瘤细胞MG-63的增殖与侵袭,并促进凋亡。