miR-203a-3p抑制人肝癌细胞系增殖

目的 探索miR-203a-3p对人肝癌细胞系增殖和凋亡的分子调节机制。方法 RT-qPCR检测临床肝癌(HCC)组织及肝癌细胞系中miR-203a-3p的表达;建立miR-203a-3p过表达的HepG2细胞模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;平板集落形成实验检测集落形成;细胞划痕实验检测细胞迁移;表达谱芯片检测mRNA水平;ELISA检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;Western blot检测TGF-β1表达。结果 miR-203a-3p在HCC组织中低表达(P<0.05),与肿瘤分期呈负相关(P<0.05);HepG2细胞中过表达miR-203a-3p可显著降低细胞增殖速率(P<0.05)、迁移能力(P<0.05)、克隆形成能力(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);TGF-β1表达降低(P<0.05),而TGFβR1表达升高(P<0.05);细胞培养上清中TGF-β1含量降低(P<0.05);细胞内TGF-β1的蛋白降低(P<0.05);加入TGF-β1重组蛋白可减轻miR-2...     

miR-196a-5p抑制小鼠胚胎干细胞的自我更新

目的 研究miR-196a-5p在小鼠胚胎干细胞(mESC)自我更新中的功能.方法 定量PCR法确定miR-196a-5p在mESC早期分化过程中的表达.在胚胎干细胞中过表达miR-196a-5p类似物,通过集落形成实验、细胞周期分析、碱性磷酸酶染色和Oct4染色确定miR-196a-5p过表达对mESC自我更新及增殖的影响.结果 miR-196a-5p在mESC早期分化过程中表达上升(P＜0.05),在mESC中过表达miR-196a-5p类似物后,ESC的集落形成及增殖能力被明显抑制(P＜0.01),碱性磷酸酶活性下降,Oct4蛋白水平也出现明显下降.结论 miR-196a-5p具有抑制mESC自我更新的能力,在mESC早期分化过程中可能发挥重要作用.     

miR-216a-5p通过抑制HMGB1降低胃癌细胞系MGC-803的增殖和迁移

目的探讨miR-216a-5p对胃癌细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法用Western blot检测胃癌和癌旁组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达,RT-qPCR检测miR-216a-5p的表达。用人工合成的miR-216a-5p模拟物和其抑制物转染胃癌细胞系MGC-803。MTT检测细胞增殖,划痕法检测细胞迁移。双荧光素酶报告实验和Western blot检测miR-216a-5p和HMGB1之间的靶向关系。结果与癌旁组织相比,HMGB1在胃癌组织中高表达,miR-216a-5p在胃癌组织中低表达(P0.05)。miR-216a-5p模拟物上调胃癌细胞miR-216a-5p的表达水平,抑制细胞的增殖和迁移;miR-216a-5p抑制物下调miR-216a-5p的表达水平,促进胃癌细胞的增殖和迁移(P0.05)。miR-216a-5p可作用于HMGB1的3′UTR并抑制其表达。结论 miR-216a-5p通过靶向抑制HMGB1的表达降低胃癌细胞系MGC-803的增殖和迁移。     

miR-377-5p靶向IRAK1通过抑制JNK信号通路改善脑缺血再灌注大鼠神经损伤和炎性反应

目的 探究miR-377-5p对脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)大鼠神经损伤和炎性反应的作用及机制.方法 通过生物信息学预测到miR-377-5p与白介素1受体相关激酶(interleukin-1 receptor-associated kinases,IRAK1)靶向关系.SD大鼠随机...     

lncRNA MALAT1通过上调miR-30a-5p促进乳腺癌细胞增殖

目的 探讨lncRNA MALAT1靶向miR-30a-5p对乳腺癌细胞增殖的影响。方法 CCK-8实验检测lncRNA MALAT1对乳腺癌细胞MCF7增殖的影响。建立MCF7荷瘤小鼠模型检测lncRNA MALAT1对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。通过生物信息学网站预测miR-30a-5p是否与lncRNA MALAT1结合,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证。Real time-qPCR检测lncRNA MALAT1过表达对miR-30a-5p表达的影响。CCK-8实验检测lncRNA MALAT1过表达载体和miR-30a-5pmimics共转染到MCF7细胞对细胞增殖的影响。结果过表达lncRNA MALAT1促进MCF7细胞的体外增殖及MCF7细胞荷瘤小鼠肿瘤生长。lncRNA MALAT1与miR-30a-5p结合,且过表达lncRNA MALAT1下调miR-30a-5p的表达。结论 lncRNA MALAT1通过下调miR-30a-5p表达促进乳腺癌细胞增殖。     

miR-99a-5p通过靶向mTOR抑制前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长

目的 探讨miR-99a-5p靶向mTOR对前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。方法 CCK-8法检测miR-99a-5p对DU-145细胞增殖的影响;miR-99a-5p mimics转染前列腺癌DU-145细胞,通过实时定量PCR检测miR-99a-5p和mTOR mRNA表达,Western blot检测miR-99a-5p过表达后DU-145细胞mTOR蛋白的表达;通过生物信息学网站预测mTOR是否为miR-99a-5p潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证,CCK-8和肿瘤异种移植裸鼠模型验证miR-99a-5p通过靶向mTOR对前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。结果 转染miR-99a-5p mimics抑制DU-145细胞体外增殖活性,降低mTOR mRNA和蛋白的表达,miR-99a-5p结合mTOR mRNA 3’UTR区域,且miR-99a-5p通过靶向mTOR抑制前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长。结论 miR-99a-5p通过靶向调控mTOR抑制前列腺癌细胞的增殖及肿瘤生长。     

miR-20a-3p、miR-449b-5p在妊娠糖尿病中的表达及临床意义

目的 通过基于基因表达数据库（GEO）的基因表达数据，描述miR-20a-3p、miR-449b-5p与妊娠糖尿病之间的关系。方法 本研究选择了GEO数据库中的GSE182737及GSE98403两个数据集，将妊娠糖尿病组（GDM）和正常组（normal）的外周血标本分别作为实验组和对照组，分别筛选表达差异cicrRNA及miRNA，通过cicrRNA数据库筛选靶向miRNA，取交集miRNA。利用mirPATH软件对交集的差异miRNA行京都基因与基因组百科全书（KEGG）、基因本体（GO）功能分析。收集2019年1月至2020年12月在常熟市第二人民医院产科就诊的GDM的患者60例，同期正常妊娠的产妇60例，对采集的血液标本进行qPCR验证miR-20a-3p、miR-449b-5p的表达。结果 GSE182737的差异cicrRNA为10个，GSE98403的差异miRNA为73个，两个数据集表达差异miRNA交集为7个。通过miPATH软件对交集的差异miRNA行KEGG富集，结果显示在脂肪酸代谢及合成等通路上显著富集。GO富集分析显示在应激反应及细胞死亡等通路上显著富集。通过...     

miR-106a-5p靶向GAB1影响人心肌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的 探究心力衰竭患者血浆中miR-106a-5p的表达水平及其影响人心肌细胞增殖和凋亡的潜在机制.方法 利用RT-qPCR检测45例心力衰竭患者和健康志愿者血浆中miR-106a-5p的表达水平;利用Lipofectamine 2000转染miR-106a-5p模拟物及模拟物对照至人心肌细胞系,RT-qPCR验证转染...     

lncRNA FGD5-AS1靶向miR-15a-5p调控LPS诱导的脓毒症细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对LPS诱导的脓毒症细胞损伤的影响及分子机制。方法:500 ng/ml脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞损伤。THP-1细胞分为对照组、LPS组、pcDNA组、pcDNA-FGD5-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-15a-5p组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-NC组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-15a-5p组。RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平。双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p的靶向关系。结果:与对照组相比,经LPS诱导的THP-1细胞中,lncRNA FGD5-AS1表达降低,miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。过表达lncRNA FGD5-AS1和下调miR-15a-5p均能够显著降低细胞凋亡以及炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达(P<...     

miR-15a-5p抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖与迁移

目的:观察高表达的miR-15a-5p对人肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响。方法:化学合成加入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的miR-15a-5p寡聚核苷酸,并进行测序确认;利用pcDNA6.2-GW/EmGFP质粒构建miR-15a-5p真核表达载体,瞬时转染SMMC-7721细胞,实时荧光定量PCR检测miR-15a-5p的表达;CCK-8法和台盼蓝染色活细胞计数检测SMMC-7721细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力的变化。结果:设计的miR-15a-5p序列与寡核苷酸测序结果匹配达100%;真核表达质粒瞬转后人肝癌SMMC-7721细胞miR-15a-5p的表达量与对照组相比显著增加(P0.05);miR-15a-5p高表达SMMC-7721细胞的增殖能力与对照组相比均显著下降(P0.05);miR-15a-5p高表达组细胞迁移速度低于对照组。结论:高表达的miR-15a-5p可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖和迁移能力。     

多囊卵巢综合征患者血清miR-143-5p及miR-34a-5p表达水平及其临床意义

目的 探讨血清中miR-143-5p和miR-34a-5p在多囊卵巢综合征患者中的表达水平及与PCOS患者临床病理特征的关系，评估miR-143-5p和miR-34a-5p作为诊断PCOS的生物标志物潜能。方法 选取2019年1月至2021年6月在南京市第一医院收治确诊为PCOS的患者40例（PCOS组）和同期50例体检正常的非PCOS女性（对照组），分析两组研究对象的生殖激素及胰岛素相关指标，采用qRT-PCR检测miR-143-5p及miR-34a-5p表达水平，ROC曲线分析miR-143-5p及miR-34a-5p对PCOS的诊断价值。结果 血清中基础LH值PCOS组为（7.88±1.21）mIU/mL，对照组为（5.46±1.21）mIU/mL，两组相比差异具有统计学意义（P<0.001）；空腹胰岛素PCOS组为（9.37±2.88）mIU/L，对照组为（8.04±1.98）mIU/L，组间相比差异具有统计学意义（P=0.036）;PCOS组胰岛素抵抗指数和睾酮显著高于对照组，两组间均有统计学差异（P<0.05）。PCOS组血清中miR-143-5p及miR-34...     

miR-130a-3p 通过调控 PDK1 影响肝癌细胞糖代谢的研究

目的 探讨 miR-130a-3p 通过靶向糖代谢关键酶 PDK1 对肝癌细胞糖代谢以及增殖迁移的影响, 为肝癌的诊断及治疗提供新的方向。 方法 qRT-PCR 技术检测肝癌的临床组织和细胞中 miR-130a-3p 的表 达, 克隆形成、 CCK-8、 Transwell 和细胞划痕实验检测细胞的增殖和迁移; Western 印迹检测相关蛋白的表 达; 乳酸检测试剂盒, ATP 检测试剂盒和 PDH 活性检测试剂盒分别检测细胞中乳酸的生成、 ATP 的生成和 PDH 的活性; 双荧光素酶报告基因实验验证 miR-130a-3p 与 PDK1 3′UTR 靶向结合。 结果 在肝癌组织和 细胞中 miR-130a-3p 呈低表达, 并与患者肿瘤组织的大小和 TNM 分期有关; 过表达 miR-130a-3p 能够增强 肝癌细胞中 PDH 活性, 抑制乳酸和 ATP 的生成, 从而抑制肝癌细胞的增殖和迁移; miR-130a-3p 可以靶向 调控 PDK1; 抑制 PDK1 的表达, 能够逆转 miR-130a-3p 过表达对细胞增殖和迁移能力的增强, 此外对 PDH 活 性、 乳酸和 ATP 的影响也被逆转。 结论 miR-130a-3p 通过靶向调控 PDK1 影响肝癌细胞糖酵解及恶性进展。     

miR-767-5p通过调控TBL1XR1蛋白表达抑制人卵巢癌细胞系侵袭

目的 探索miR-767-5p和转导素β1X连锁受体蛋白1(TBL1XR1)对卵巢癌进展的影响以及作用机制。方法 数据库分析：使用GEO、miRPATH数据库和RStudio对miR-767-5p进行KEGG(京都百科全书)富集分析，并在GEO数据集低表达和高表达microRNA中各选择差异表达倍数TOP5的microRNAs,按照差异倍数由低到高排列；miRDB等数据库预测miR-767-5p可结合的靶基因并取交集，结合Open Target Platform、GEPIA等数据库筛选出目的基因；GEPIA、THPA数据库分析TBL1XR1在人体各器官表达量分析、免疫组化分析以及生存曲线分析。实验验证：双荧光素酶报告基因实验验证miR-767-5p和TBL1XR1存在结合靶点；Western blot检测卵巢癌细胞系(OC3、SKOV-3、HO-8910)和正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中TBL1XR1的表达；在SKOV-3细胞中转入miR-767-5p过表达质粒与TBL1XR1过表达质粒后，Western blot检测TBL1XR1表达量，Tanswell小室法检测细胞侵袭。结果...     

miR-34a-5p抑制K562细胞红系分化

目的探索miR-34a-5p对K562细胞红系分化的影响。方法分别用miR-34a-5p模拟物和反义抑制寡核苷酸转染K562细胞,用real-time PCR法检测过表达或干扰效率,并进一步用流式细胞术和联苯胺染色法检测K562细胞向红系的分化情况;通过Western blot方法检测miR-34a-5p的靶基因。结果 miR-34a-5p在K562细胞红系分化过程中呈现表达下降趋势;在K562细胞中过表达miR-34a-5p可抑制hemin诱导的红系分化(P0.05);反之,干扰K562内源的miR-34a-5p表达会对K562红系分化产生促进作用(P0.01);另一方面,miR-34a-5p通过靶向抑制c-MYB的表达抑制细胞向红系分化。结论 miR-34a-5p通过抑制c-MYB在K562细胞早期红系分化过程中发挥促进作用。     

LncRNA SLC16A1-AS1 通过靶向 miR-15a-5p 负向调控子宫颈癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨LncRNA SLC16A1-AS1通过靶向miR-15a-5p调控子宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用机制.方法 采用qRT-PCR法检测SLC16A1-AS1在子宫颈癌组织、癌旁组织、人正常子宫颈上皮细胞(H8)及子宫颈癌细胞株(HeLa、HCC94、SiHa、C33A)中的表达水平.选择SLC16A1-AS1表...     

丝裂原活化蛋白激酶激酶1在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶激酶1（MAP2K1）在胃癌中的表达及其临床意义。 方法 免疫组织化学及Western blotting检测MAP2K1在胃癌组织和细胞中蛋白水平的表达;免疫荧光染色观察细胞形态及MAP2K1的表达位置;StarBase及Oncomine 数据库对MAP2K1进行数据挖掘,分析MAP2K1 mRNA在胃癌组织中的表达情况;UALCAN数据库分析MAP2K1 mRNA的表达与临床病理特征的相关性;Kaplan Meier-Plotter 在线分析工具进行生存分析; GEPIA2数据库挖掘MAP2K1与胃癌干细胞相关因子和耐药相关因子的关系。 结果 免疫组织化学、免疫荧光和Western blotting结果表明,在胃癌组织和细胞中MAP2K1蛋白为高表达,且MAP2K1表达在胃癌细胞质中。由多种数据库分析得出,MAP2K1 mRNA在胃癌组织的表达量高于正常胃组织,其表达量与胃癌分期、分级、淋巴结转移和患者性别密切相关,MAP2K1高表达组的胃癌患者总体生存率明显低于低表达组,其原因可能与胃癌干细胞特性和耐药性相关。 结论 MAP2K1在胃癌中高表达,其表达水平可能通过调控干细胞相关因子与耐药相关因子影响患者不良预后。MAP2K1或可成为判断胃癌患者预后的新型诊断标志物。     

miR-146a-5p通过调控Notch2表达对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌损伤的影响

目的:探究miR-146a-5p调控Notch2表达对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响及作用机制。方法:将大鼠分为Control组、MI/R组、MI/R+mimic mock组、MI/R+mimic组,构建MI/R大鼠模型并使用相应的慢病毒处理,检测各组大鼠心脏LVEDD、LVESD和心肌梗死面积,RT-PCR检测miR-146a-5p基因表达水平,ELISA检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组化检测Ki67阳性细胞率,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Notch2、Hes1蛋白水平。将细胞分为Control组、OGD/R组、OGD/R+mimic mock组、OGD/R+mimic组、OGD/R+pc-Notch2组、OGD/R+mimic+pc-Notch2组,缺糖缺氧复糖复氧诱导心肌细胞损伤并...     

miR-26a-5p调控MCL-1在孕产妇子痫前期中表达的临床意义

目的:探讨microRNA-26a-5p(miR-26a-5p)调控髓细胞白血病因子1(myeloid cell leukemia-1,MCL-1)表达在孕产妇子痫前期发生发展中的临床意义。方法:收集正常妊娠21例、妊娠期高血压孕产妇13例、轻度子痫前期15例和重度子痫前期26例共4组孕产妇血浆及胎盘组织,用real-time PCR分析其血浆及胎盘组织中miR-26a-5p及胎盘组织中MCL-1 mRNA的表达,Western blotting分析胎盘组织中MCL-1蛋白的表达,并分析其表达的临床意义。结果:随着病情进展,miR-26a-5p在孕产妇血浆和胎盘中表达逐步增高(P0.01),而其胎盘组织中MCL-1 mRNA的表达明显降低(P0.01),二者呈明显负相关(P0.01);胎盘组织中miR-26a-5p与MCL-1蛋白表达呈明显负相关(P0.01)。孕产妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达上调与孕龄、孕妇血浆白蛋白水平及胎儿体重呈明显负相关,而与孕产妇血压和尿蛋白水平呈明显正相关(P0.01),胎盘组织中MCL-1表达下调与此相反。结论:miR-26a-5p高表达通过下调MCL-1的表达参与子痫前期的发生与发展。     

高血脂对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的:检测高血脂对脑缺血再灌注损伤后缺血侧大脑皮质p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法:喂食高脂饲料建立高血脂动物模型,随后线栓法建立脑缺血再灌注模型。Zea-Longa神经行为学评分法记录大鼠神经行为改变,TTC染色检测脑梗死灶体积,免疫组织化学及免疫印迹检测大脑皮质p38MAPK表达水平。结果:高血脂脑缺血再灌注后神经行为损伤加重,且梗死灶体积较单纯脑缺血再灌注明显扩大。与假手术组比较,单纯脑缺血再灌注组和高血脂脑缺血再灌注组大脑皮质p38MAPK表达明显增加,再灌注2 h时其表达量即开始增高,再灌注24 h时达高峰,而后又降低。相同再灌注时间点,与单纯脑缺血再灌注组比较,高血脂脑缺血再灌注组p38MAPK表达增高。结论:高血脂脑缺血再灌注损伤中,高血脂可上调大脑皮质p38MAPK表达,促进细胞凋亡的发生及加重炎症反应,进而加重缺血再灌注损伤。     

miR-199a-3p 通过靶向 CABLES-1 调控流体剪切力介导的成骨细胞增殖

目的 探讨miR-199a-3p在流体剪切力(fluid shear stress, FSS)诱导成骨细胞增殖中的作用及其可能的分子机制。方法 对成骨细胞MC3T3-E1加载1.2 Pa FSS,时间分别为0、15、30、45、60、75、90 min。使用miR-199a-3p模拟物或miR-199a-3p抑制物转染MC3T3-E1细胞。使用将过表达的miR-199a-3p以及其阴性对照分别转染MC3T3-E1细胞,并以1.2 Pa FSS处理45 min。将pcDNA NC、pcDNA-CABLES-1、si RNA NC、si RNA CABLES-1转染至MC3T3-E1细胞中。分别共转染pc DNA-CABLES-1与miR-199a-3p mimic以及si RNA-CABLES-1与miR-199a-3p inhibitor。CCK-8实验检测细胞活性;RT-qPCR检测CABLES-1、 miR-199a-3p、CDK 6、Cyclin D1、PCNA表达水平;荧光素酶报告实验检测CABLES-1和miR-199a-3p的靶向关系。免疫荧光检测CABLES-1蛋白表达。...