电针治疗对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠体内产生细胞因子的影响

目的 观察电针刺激足三里穴位对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠体内分泌的细胞因子的影响.方法 将免疫大鼠随机分为四组:用完全弗氏佐剂免疫组(CFA组);用MBPB68-86B多肽与完全弗氏佐剂免疫组(EAE组);用MBPB68-86B多肽免疫后的大鼠电针刺激足三里穴位组和用MBPB68-86B多肽免疫后的大鼠电针刺激非穴位组.分别于免疫后第7天、14天和21天采用ELISA方法检测大鼠血浆中IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-6和TGF-β细胞因子水平.结果 EA组与EAE组大鼠血浆中IL-4水平有所升高(第14天P=0.027,第21天P=0.36);IFN-γ表达量在第14天EA组明显低于EAE组(P=0.00021);IL-6在三个时间点EA组均明显低于EAE组(P=0.0078,P=0.00047,P=0.00093);IL-17免疫21天,EA组明显低于EAE组(P=0.0012);TGF-β在第7天和第14天EA组明显高于EAE组(P=0.020,P=0.041)结论 电针刺激足三里穴位对EAE大鼠的治疗作用,通过降低炎症细胞因子的产生,促进抑炎细胞因子的产生而发挥作用.     

细胞因子在实验性自身免疫性脑脊髓炎耐受中的作用

细胞因子(CK)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的免疫机制中起着重要作用。Th细胞的不同转化决定EAE的发生、发展或抑制。由多种CK构成的免疫调节网络操纵着Th细胞的免疫应答。通过作用Th细胞使之向抑制EAE方向转化,从而寻找对EAE耐受的途径,是目前EAE研究的一个重要方面。以下就与EAE耐受相关的CK研究进行综述,探讨EAE免疫病理机制。     

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型性别差异研究

目的:分别建立雌性和雄性Wistar大鼠的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并研究两者的差别。方法:应用非灌注法制备的豚鼠全脊髓匀浆分别免疫雌性和雄性两组Wistar大鼠,诱导建立EAE模型,观察30天,取脊髓组织石蜡包埋,病理切片,HE染色,光镜观察。观察两组大鼠在发病时间、发病率、神经功能评分及病程等方面的区别。结果:雌性Wistar大鼠的平均发病时间(13.67±3.50)天,发病率为60%,病程有复发-缓解的特点,神经功能高峰期评分(2.20±1.96)分;雄性Wistar大鼠的平均发病时间(12.18±1.55)天,发病率为85%,呈一过性发病,神经功能高峰期评分(3.46±1.61)分。结论:雄性Wistar大鼠的EAE模型较雌性Wistar大鼠具有发病率高、单相急性病程等特点,为研究多发性硬化发病机制及其发病的性别差异奠定了一定的基础。     

胸腺五肽治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

目的 应用胸腺五肽(thymopentin,TP-5)干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(experiment autoimmue encephalomyelitis,EAE)大鼠,探讨该药物对EAE的治疗作用及其机制.方法 以豚鼠全脊髓匀浆(guinea pig spinal cord homogenate,GPSCH)与完全弗氏佐剂(CFA)为抗原免疫Wistar大鼠建立EAE模型.Wistar大鼠随机分为正常对照组、EAE组、地塞米松(dexamethasone,DXM)组、TP-5小剂量组、TP-5大剂量组.采用双抗体夹心ELISA法检测Wistar大鼠免疫后7、14、21 d不同时间点血清中IL-12、IL-10的含量.结果 与EAE组和TP-5大剂量组比较,TP-5小剂量组和DXM组大鼠的发病率和临床评分显著性降低(P＜0.01);DXM组大鼠的发病率和临床评分低于TP-5小剂量组(P＜0.01).各个时间点EAE组、DXM组、TP-5小剂量组、TP-5大剂量组IL-12含量均较正常对照组明显升高(P＜0.01),免疫后14、21 d DXM组和TP-5小剂量组IL-12水平比EAE组低(P＜0.01);免疫后14、21 dDXM组、TP-5小剂量组IL-10水平与其余3组比较明显升高(P＜0.01).结论 TP-5对EAE有保护作用,其作用机制可能与上调IL-10水平以及下调IL-12水平有关,通过双向调节作用逆转TH1/TH2失衡.     

甲基维生素B12对大鼠自身免疫性脑脊髓炎的治疗及溶血磷脂酸水平的影响

研究实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)及甲基维生素B12治疗中溶血磷脂酸 (LPA)水平的变化。通过注射豚鼠脊髓匀浆和完全弗氏佐剂诱导大鼠发生EAE。用有机溶剂提取、并进一步分离 ,最终用定磷方法测定甲基维生素B12治疗的EAE大鼠血浆及脑溶血磷脂水平 ,未经治疗的EAE大鼠为对照组。发现甲基维生素B12治疗组EAE大鼠与未经治疗EAE大鼠比较 ,恢复期脑与血浆LPA水平增高 ,分别为 30 2 3± 11 5 9μmol L血浆、2 45 4 5±144 89nmol g脑和 9 2 7± 3 2 5 μmol L血浆、5 6 33± 5 6 6nmol g脑 (P <0 0 5 ) ;急性期血浆的LPA增高 ,分别为 10 0 5± 1 70 μmol L血浆和 1 87± 0 5 9μmol L血浆 (P <0 0 5 )。溶血磷脂酸可能参与自身免疫性脑脊髓炎髓鞘的恢复过程。     

在实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中探讨MS？…

多发性硬化是一种较常见的中枢神经系统脱髓鞘疾病，Ｔ细胞介导免疫在其发病机制中起一定作用。该病的免疫耐受治疗是目前的研究热点之一，本文综述了近几年在其动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎中进行的研究工作的某些方法和进展。     

神经生长因子干预实验性自身免疫性脑脊髓炎幼年大鼠脑神经干细胞的变化

BACKGROUND:Nerve growth factor is a neurotrophic factor that is involved in the cell regulation and promotes the proliferation of neural stem cells. OBJECTIVE:To observe the effect of nerve growth factor on neural stem cells of experimental autoimmune encephalomyelitis rats. METHODS:Wistar rats, 3 weeks of age, were randomly divided into control group, encephalomyelitis model group, nerve growth factor treatment group. Rat models of experimental autoimmune encephalomyelitis were made in the latter two groups. On the day of onset, rats in the nerve growth factor treatment group were given intraperitoneal injection of 1 000 U/kg nerve growth factor for 7 continuous days, and rats in the other two groups given no treatment. Effects of nerve growth factor on clinical symptoms of model rats were observed. Expression of Brdu in the subependymal zone and Brdu⁺/GFAP⁺ expression in the cortex were detected. RESULTS AND CONCLUSION:Rat models of experimental autoimmune encephalomyelitis appeared to have encephalomyelitis symptoms successively at the beginning of 10-day immunization, while rats in the control group had no symptoms of encephalomyelitis. In the model group, glial cell hyperplasia, inflammatory cell infiltration, damage to vascular endothelial cell proliferation, and perivascular aggregation of inflammatory cells in the rat brain were found, while no abnormal changes in the rat brain were found in the control group. Compared with the model group, the expression of Brdu in the subependymal zone and Brdu⁺/GFAP⁺ expression in the cortex were both higher in the model group (P < 0.05), and these expressions were also higher in the nerve growth factor treatment group than the model group at 7 and 21 days after onset (P < 0.05). To conclude, these findings suggest that the rat model of autoimmune encephalomyelitis can be successfully established, and nerve growth factor treatment can improve clinical symptoms of experimental autoimmune encephalomyelitis rats by promoting the proliferation and differentiation of neural stem cells into astrocytes.     

间充质干细胞改善自身免疫性脑脊髓炎的作用研究

目的 探讨间充质干细胞(MSC)治疗自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的机制.方法 用MOG35-55肽和弗氏完全佐剂乳化剂诱导建立C57BL/6小鼠的EAE模型;分离纯化培养骨髓来源MSC细胞;临床评分和脊髓组织切片评估小鼠的发病情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测EAE组,MSC治疗组和对照组小鼠外周血细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-4和TGF-β的含量;流式细胞术分析3组小鼠脾脏细胞中CD4+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)的比例变化.结果 分离纯化C57BL/6小鼠MSC成功;MSC治疗组小鼠的临床评分明显降低,且脊髓组织切片显示T细胞浸润显著减少;外周血中细胞因子IL-4,TGF-β显著高于对照组(t=7.719、17.17,P均＜0.01)和EAE组(t=54.45、48.36,P均＜0.01),IFN-γ,TNF-α低于对照组(t=104.90、1.998,P均＜0.01)和EAE组(t=270.1、13.58,P均＜0.01);脾脏细胞中CD4+ Foxp3+ Treg细胞的比例明显高于对照组(t=15.91,P＜0.01)和EAE组(t=33.39,P＜0.01).结论 MSC能够有效改善EAE小鼠的症状;其对EAE小鼠的治疗作用是通过上调抗炎细胞因子(IL-4,TGF-β)和Treg细胞并下调促炎因子(IFN-γ,TNF-α)的水平,来发挥免疫调节作用.     

小胶质细胞的活化在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用

多发性硬化( multiple sclerosis,MS)是一种常见的以中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎性脱髓鞘病变为特征的自身免疫性疾病.MS的病因和发病机制非常复杂,由于病理取材的困难性,在体外建立了该病的动物模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE).人MS及其动物模型EAE发病过程中大量炎性细胞入侵CNS并产生多种致炎因子,脑内微环境受到影响.诸多研究表明在EAE或MS发病中静息态小胶质细胞在浸润的T细胞及释放的细胞因子刺激下发生活化,但它们在EAE中的作用目前尚无统一意见.兹将小胶质细胞在EAE中的活化机制及其在炎症/免疫反应中的作用作一综述.     

银杏提取物对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的影响

目的:探讨银杏提取物(GBE)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠炎症脱髓鞘病变的影响。方法:应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白33-55(MOG33-55)配以完全弗氏佐剂(CFA)免疫小鼠,诱发EAE模型。将小鼠分为CFA对照组、EAE模型组和GBE治疗组(每日腹腔注射GBE70mg/kg)。通过神经功能评分、行为学实验以及免疫荧光染色,观察GBE对EAE小鼠的影响。结果:GBE组小鼠各时间段神经功能评分均低于EAE组(P0.05),行为学检测显示发病高峰期falling latency时间较EAE组延长10s;GBE组较EAE组视神经髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平增高,可见MBP阳性髓鞘结构包绕轴突;海马伞矢状切片免疫荧光染色证实GBE组CD11b阳性小胶质细胞较EAE组明显减少,但是GFAP阳性星形胶质细胞数量与EAE组无明显差别。结论:GBE可能通过抑制小胶质细胞激活从而延缓EAE小鼠脱髓鞘进程,提示GBE对多发性硬化具有一定的治疗作用。     

骨髓间充质干细胞异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法全骨髓贴壁培养法获得大鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞免疫表型,并诱导成骨方向分化。取雌性C57BL/6小鼠,随机分为3组:正常对照组、PBS组和大鼠BMSCs组,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35~55联合完全弗氏佐剂诱导建立EAE模型。小鼠免疫后38d和48d腹腔注射PBS或大鼠BMSCs进行治疗,神经功能评分观察各组小鼠神经功能变化。二次治疗12d后取各组小鼠脊髓、脾脏和外周血。HE染色及Luxol fast blue染色观察脊髓炎性细胞浸润及髓鞘脱失情况;脾脏制成单细胞悬液,细胞CFSE标记后10mg/L刀豆球蛋白(Con A)和MOG_(35~55)刺激培养3d,观察脾细胞增殖情况。ELISA检测大鼠BMSCs移植后外周血细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)含量。结果流式细胞术显示,大鼠BMSCs第3代(P3)细胞表达抗原CD29、CD90、CD106,不表达CD45。体外诱导其能向成骨分化。小鼠发病后,大鼠BMSCs组小鼠神经功能缺损症状较PBS组减轻,评分降低。HE染色和Luxol fast blue染色结果显示,大鼠BMSCs组脊髓炎细胞浸润和脱髓鞘比同时间点PBS组减轻(P0.05)。Con A和MOG_(35~55)刺激培养后,PBS组和大鼠BMSCs组脾细胞增殖增加,而大鼠BMSCs组又较PBS组降低。与PBS组相比,大鼠BMSCs组血浆细胞因子IFN-γ、IL-17含量降低(P0.05)。结论全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化BMSCs,大鼠BMSCs异体移植对小鼠EAE模型有治疗作用。     

在实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中探讨MS的免疫耐受治疗

多发性硬化是一种较常见的中枢神经系统脱髓鞘疾病 ,T细胞介导免疫在其发病机制中起一定作用。该病的免疫耐受治疗是目前的研究热点之一 ,本文综述了近几年在其动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎中进行的研究工作的某些方法和进展。     

降纤药治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的机制

目的:研究降纤药巴曲酶对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的预防及治疗作用,初步探讨纤维蛋白沉积在多发性硬化(MS)中的作用机制。方法:采用MOG35-55免疫的C57雌性小鼠,诱发EAE动物模型,分别在免疫后立即(预防组)及免疫后出现症状(治疗组)隔日连续给予降纤药巴曲酶注射至实验结束,观察发病情况并进行临床症状评分。于免疫后30天、40天及60天分别将预防组、治疗组及EAE对照组小鼠脊髓与小脑组织取材后进行组织病理学与免疫组化染色分析,Western blot及实时荧光定量PCR技术观察药物干预对炎性浸润、脱髓鞘、纤维蛋白沉积及胶质细胞活化的影响。结果:降纤预防组及治疗组均可明显减轻EAE小鼠的发病症状、降低临床评分。预防组和治疗组较EAE未用药对照组小鼠炎性细胞浸润明显减少、髓鞘脱失及胶质细胞活化减轻,但轴索损害的改善作用不明显。免疫组化及免疫荧光显示,预防组和治疗组较EAE未用药对照组的髓鞘碱性蛋白(MBP)表达升高而胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达降低,Western blot结果示MBP蛋白表达升高而p-Akt表达降低。实时荧光定量PCR技术也证实了预防及治疗组MBP的mRNA表达升高,组织型纤溶酶原激活物(-tPA)的mRNA表达也升高。结论:在EAE的发病过程中纤维蛋白沉积发挥了重要作用,巴曲酶通过有效降低EAE小鼠体内的纤维蛋白从多个方面改善临床症状和发病过程。     

实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠模型的建立

目的：介绍一种新的简便可靠的实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠模型制备方法。方法：用自制完全福氏佐剂＋豚鼠脊髓生理盐水匀浆制备成免疫抗原,给Wistar大鼠四足垫内注射。结果：在接种后12－18天,大鼠出现双后肢瘫,脊髓横切片HE染色可见血管周围袖套样炎性细胞浸润和前角运动神经元肿胀变性。结论：本方法操作简单,可重复性强,适于广泛推广。     

T细胞定向迁移诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠胸腺萎缩

目的 初步探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠胸腺萎缩的机制.方法 髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)免疫C57BL/6小鼠诱导EAE,卵清白蛋白(OVA)免疫的小鼠作为对照;不同时间点计数胸腺、脾脏、淋巴结细胞总数,检测脾脏中胸腺来源细胞及中枢神经系统(CNS)浸润细胞.结果 MOG肽成功诱导EAE动物模型,小鼠出现典型的肢体运动功能障碍,脊髓可见大量炎性细胞浸润;MOG和OVA免疫均诱导胸腺细胞增加,第5天达到高峰,随后逐渐下降;EAE发病后胸腺细胞迅速减少,发病高峰期几乎完全消失,胸腺严重萎缩;MOG和OVA免疫后脾脏和淋巴结细胞总数持续升高,新近胸腺来源的T细胞增加尤其明显;EAE发病后脾脏T细胞总数减少,CNS浸润淋巴细胞总数增加.结论 大量T细胞在胸腺发育成熟并释放到外周,进而定向迁移至CNS诱导EAE是胸腺萎缩的主要原因.     

经消化道诱导昆明鼠耐受实验性自身免疫性脑脊髓炎

诱导特异性免疫耐受是多发性硬化治疗学的一个重要研究方向。实验性自身免疫性脑脊髓炎是研究多发性硬化常用的动物模型，在此介绍我们使用同源脊髓匀浆诱导昆明鼠耐受实验性自身免疫性脑脊髓炎的一些实验工作结果及体会。     

Irgm1基因敲除对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠CD4~+ T细胞亚群的影响

目的:探讨免疫相关GTP酶1(Irgm1)基因敲除对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠CD4+T细胞的影响。方法:C57BL/6纯系小鼠与Irgm1基因敲除杂合小鼠(Irgm1+/-)回交十代繁殖C57BL/6背景下Irgm1+/-小鼠,用C57BL/6 Irgm1+/-小鼠杂交获取Irgm1-/-、Irgm1+/-、Irgm1+/+三种基因型小鼠,PCR扩增DNA检测基因型。用髓鞘少突胶质糖蛋白(Myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG33-55)多肽与弗氏完全佐剂等量混合制成乳剂,免疫C57BL/6野生型(Wt.)和Irgm1基因敲除(Irgm1-/-)小鼠,建立EAE模型,并进行临床评分。MTT法测定MOG33-55免疫后7 d的EAE小鼠淋巴结细胞中MOG33-55特异性T细胞增殖分化水平。取MOG33-55免疫后14 d EAE小鼠脊髓切片,HE染色检测炎细胞浸润情况。取MOG33-55免疫后16 d的EAE-小鼠淋巴结、脊髓和脑组织,提取单个核细胞,用MOG33-55(20μg/ml)体外刺激培养7 d,收集细胞,用流式细胞仪分析EAE小鼠淋巴结、中枢神经系统浸润细胞中Th1、Th17的改变。结果:成功诱导了EAE小鼠模型;HE染色结果显示Wt.小鼠脊髓周围出现明显炎细胞浸润,而Irgm1-/-小鼠则无明显变化;MTT实验表明Irgm1-/-小鼠与Wt.小鼠相比,淋巴结中T细胞对MOG33-55特异性增殖能力降低;流式细胞分析表明相对于Wt.小鼠,Irgm1-/-小鼠EAE模型在淋巴结及中枢神经系统浸润细胞中Th1细胞亚群比例明显增高而Th17细胞亚群比例下降。结论:Irgm1基因敲除可部分保护EAE小鼠的脊髓功能及临床症状。在EAE发病早期,Irgm1可能起到了关键性的作用,因此Irgm1有可能成为EAE治疗的重要分子靶点。     

Th17细胞和调节性T细胞失衡参与实验性自身免疫性脑脊髓炎的发病

目的探讨Th17细胞和调节性T细胞(Treg)失衡在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病过程中的作用。方法建立EAE小鼠模型,在EAE发病的不同时期运用流式细胞术检测小鼠脾脏Treg比例变化,用实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测小鼠脾淋巴细胞Foxp3、视黄酸相关的孤儿受体γt(RoR-γt)以及脑组织IL-17 mRNA表达,ELISA检测小鼠外周血IL-6、转化生长因子β(TGF-β)及IL-17A含量变化。结果与佐剂对照组比较,CD4+CD25+Foxp3+Treg比例和Foxp3 mRNA的表达,在EAE发病初期及高峰期明显下降,而在慢性期明显升高(P0.05);RoR-γt mRNA表达量在发病初期与佐剂对照组比较显著增加(P0.05),而高峰期及慢性期与佐剂对照组比较则无显著差异(P0.05)。EAE组小鼠外周血中TGF-β、IL-6浓度在发病初期和高峰期明显升高(P0.05);随病情发展,IL-6浓度逐渐降低,在发病慢性期与佐剂对照组比较无明显差异(P0.05),而TGF-β浓度在发病慢性期仍较高,与佐剂对照组比较明显升高(P0.05)。EAE组小鼠外周血中IL-17A含量在EAE不同时期均有明显升高,且高峰期升高最明显(P0.05)。结论 Th17细胞/Treg失衡参与了EAE发病过程。