IL-6调控miR-204及Notch1促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

为探讨IL-6在人乳腺癌组织中的表达水平及其对人乳腺癌细胞MCF-7 Notch信号通路、增殖、迁移和侵袭的影响,采用免疫组化法检测IL-6在人乳腺癌组织中的表达水平,并以50 ng/mL外源性IL-6干预MCF-7细胞,采用MTT、Transwell和qRT-PCR检测细胞增殖、迁移、侵袭能力及细胞中miR-204和Notch1的表达。在MCF-7细胞中过表达miR-204后检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。用TargetScan在线预测、双荧光素酶报告基因试验和Western blotting验证miR-204与Notch1的靶向关系。将miR-204 mimics转染至MCF-7细胞并联合外源性IL-6干预后检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果显示,与癌旁正常组织比较,IL-6在人乳腺癌组织中高表达(P0.05)。以50 ng/mL外源性IL-6干预MCF-7细胞对细胞的增殖、迁移和侵袭具有促进作用(P0.05),同时能够下调miR-204 mRNA(P0.05)、上调Notch1 mRNA表达(P0.05)。而过表达miR-204能够抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P0.05)。miR-204能够靶向调控Notch1表达(P0.05)。过表达miR-204能够减弱外源性IL-6对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用(P0.05)。该研究提示,IL-6可通过调控miR-204和Notch信号通路促进MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭。     

乳腺癌中HCCR-1的表达及干扰HCCR-1对MCF-7细胞生物学行为的影响

目的 探讨HCCR-1在乳腺浸润性导管癌中的表达及其对乳腺癌细胞体外增殖、凋亡、迁移的影响。方法 采用免疫组化法检测HCCR-1在乳腺浸润性导管癌中的表达，分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。应用siRNA干扰乳腺癌细胞株MCF-7中HCCR-1表达，采用qRT-PCR和Western blot法验证siRNA的干扰效率。应用CCK-8实验检测细胞增殖；细胞凋亡实验检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞迁移能力。结果 HCCR-1在乳腺浸润性导管癌中高表达(66.9%,107/160)。HCCR-1表达与临床分期、组织学分级、淋巴结转移、ER表达、PR表达相关(P<0.05)。HCCR-1-siRNA可显著下调MCF-7中HCCR-1的表达(P<0.001)。CCK8实验显示：干扰HCCR-1表达可抑制MCF-7的增殖(P<0.05)。细胞凋亡实验显示：干扰HCCR-1表达可促进MCF-7的凋亡(P<0.05)。Transwell实验显示：干扰HCCR-1表达可抑制MCF-7的迁移(P<0.05)。结论 HCCR-1在乳腺浸润性导管癌中高表达，HCCR...     

泛素特异性加工酶2—69对乳腺癌细胞增殖的影响北大核心CSCD

目的探讨泛素特异性加工酶2—69（USP2—69）在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义。方法收集2013至2015年复旦大学附属华山医院24例人乳腺浸润性导管癌组织,分别应用分子杂交技术、Western blot及免疫组织化学法检测其USP2-69mRNA和蛋白水平表达。采用体外人乳腺癌细胞株MCF-7瞬时转染USP2-69质粒,使其过表达USP2-69,检测细胞增殖能力。结果乳腺浸润性导管癌的肿瘤组织中,USP2—69在mRNA及蛋白水平均高表达,与癌旁组织相比差异有统计学意义（P〈0．01）。USP2—69蛋白高表达的组织其Ki-67的蛋白表达也升高,Western blot免疫印迹法检测发现人乳腺浸润性导管癌组织中USP2-69的蛋白表达显著高于癌旁组织。细胞实验中转染USP2-69质粒的MCF-7细胞中cyclin D1较空载组表达增高,p27表达下降。细胞增殖速度明显加快,S期比例明显增高,平板阳性克隆明显增加（P〈0．01）。结论乳腺浸润性导管癌组织中USP2-69表达升高,与促进肿瘤细胞增殖能力密切有关。实验结果为进一步研究调节乳腺癌增殖的分子机制提供重要的实验基础。     

长链非编码RNA GASL1在乳腺癌组织及细胞系中的表达及作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) GASL1在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌癌细胞增殖和凋亡的影响。方法RT-qPCR检测癌组织、癌旁组织、多个乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468和SK-BR-3)及正常乳腺细胞HBL-100中lncRNA GASL1的表达水平。MCF-7细胞经pc DNA3. 1质粒过表达lncRNA GASL1,或siRNA干扰lncRNA GASL1表达后,运用MTT法检测细胞增殖; caspase-3活力检测试剂盒检测caspase-3活力; Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果 LncRNA GASL1在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中表达水平降低(P 0. 05);过表达lncRNA GASL1可抑制MCF-7的增殖,促进其凋亡(P0. 05);干扰lncRNA GASL1表达可促进MCF-7的增殖,抑制其凋亡(P0. 05)。结论 lncRNA GASL1在乳腺癌中表达水平降低,通过调节乳腺癌细胞增殖和凋亡参与乳腺癌的发生发展。     

CTCF在乳腺癌中的表达及其对细胞增殖的影响

目的观察抑癌基因CTCF在乳腺癌细胞系、乳腺癌患者肿瘤组织及血清中的表达水平,并初步探讨其对乳腺癌细胞MCF7增殖的影响。方法 Western blot检测人乳腺癌细胞系MCF7、SKBR3和MDA-MB-231及正常乳腺细胞MCF-10A中CTCF蛋白的表达。实时荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测乳腺浸润性导管癌(n=23)、癌旁组织(n=10)及乳腺纤维腺瘤(n=10)中CTCF mRNA和蛋白水平的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中CTCF的水平。进一步构建包装含CTCF的反转录病毒,感染MCF7细胞,筛选出稳定表达CTCF的细胞系,MTT法检测细胞的增殖。结果 CTCF在MCF-10A中表达最高,MCF7、SKBR3和MDA-MB-231中逐渐降低。乳腺癌组织中CTCF表达显著低于癌旁组织及乳腺纤维腺瘤组织(P0.01),CTCF在乳腺癌患者血清中表达量也显著低于健康对照(P0.01)。CTCF过表达能抑制MCF7细胞的增殖。结论 CTCF在乳腺癌细胞系、乳腺癌患者肿瘤组织及血清中表达降低。CTCF可抑制乳腺癌细胞的增殖。     

乳腺癌和癌旁乳腺组织中Notch1基因mRNA及蛋白的表达

目的 检测Notch1基因mRNA及Notch1蛋白在人乳腺癌和癌旁乳腺组织中的表达,分析其临床病理学意义.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法榆测60例乳腺浸润性导管癌和60例癌旁乳腺组织中Notch1基因mRNA,应用免疫组织化学SP法检测60例乳腺浸润性导管癌、30例导管原位癌及60例癌旁乳腺组织Notch1蛋白的表达,分析Notch1表达水平与乳腺癌临床病理特征的相关性.结果 Notch1基因mRNA在人乳腺浸润性导管癌及癌旁乳腺组织中均有表达.Notch1蛋白在癌旁乳腺组织和导管原位癌中的阳性牢分别为55%(33/60)、70%(21/30),二者差异无统计学意义(P>0.05),在乳腺浸润性导管癌中的阳性率为90%(54/60),明显高于癌旁乳腺组织和导管原位癌的阳性率(P<0.05).乳腺浸润性导管癌Notch1蛋白的高表达与肿瘤的淋巴结转移(P=0.006)、病理学分级(P=0.001)和TNM分期(P=0.022)均呈显著正相关.结论 乳腺浸润性导管癌存在Notch1蛋白的高表达.Notch1蛋白高表达与乳腺癌的恶变演进有关.Notch1基因的表达可能影响乳腺癌的发生、发展.     

miR-181b通过下调CYLD蛋白影响甲状腺乳头状癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-181b通过下调CYLD蛋白影响甲状腺乳头状癌细胞的增殖和凋亡行为及其机制。方法 q PCR检测miR-181b在甲状腺乳头状癌组织和正常甲状腺组织中的表达情况及差异;Western blotting实验检测miR-181b与CYLD蛋白之间的调控作用;克隆形成实验检测抑制miR-181b后甲状腺癌细胞增殖能力的变化情况;流式细胞术实验检测抑制miR-181b后甲状腺癌细胞凋亡行为的变化情况。结果与正常甲状腺组织相比,甲状腺乳头状癌组织中miR-181b的表达水平相对上调,差异具有统计学意义(P0.05);在FTC-133细胞株中miR-181b的表达水平相对较高;Western blotting实验证实miR-181b能直接调控CYLD蛋白的表达水平;抑制miR-181b的表达后可以抑制甲状腺癌细胞的增殖行为,并在一定程度上促进其凋亡。结论 miR-181b可以调控CLYD的表达影响甲状腺癌细胞的增殖和凋亡行为。     

TRIM11靶向调控miR-24-3p促进乳腺癌细胞系MCF7增殖和侵袭

目的探讨TRIM11靶向调控miR-24-3p对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响,明确TRIM11高表达与乳腺癌预后的相关性。方法免疫组化法检测TRIM11在31例乳腺癌和31例癌旁正常组织中的表达。用siRNA TRIM11和miR-24-3p慢病毒转染人乳腺癌MCF7细胞,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western bolt检测TRIM11、miR-24-3p mRNA和蛋白表达变化及相关性分析;荧光素酶报告实验验证miR-24-3p为TRIM11的潜在靶点;MTT法和Transwell检测细胞增殖数量、增殖活力和侵袭。结果 TRIM11在乳腺癌组织及MCF7细胞中表达显著增高(P0.05)。TRIM11高表达患者生存率显著降低(P0.05)。siRNA TRIM11转染显著抑制MCF7细胞中TRIM11表达,而且抑制MCF7细胞增殖数量、增殖活力和侵袭能力(P0.05)。miR-24-3p显著降低野生型3'-UTR TRIM11荧光素酶活性(P0.05),但对突变型没有作用。miR-24-3p mRNA在MCF7细胞下调,miR-24-3p抑制MCF7细胞TRIM11蛋白和mRNA表达,miR-24-3p mRNA与TRIM11 mRNA在MCF7细胞中表达显著负相关(P0.05),miR-24-3p抑制MCF7细胞增殖数量、增殖活力和侵袭能力(P0.05)。结论 TRIM11在乳腺癌组织及MCF7细胞中表达上调,并可能通过靶向调控miR-24-3p促进乳腺癌细胞增殖和侵袭,进而影响乳腺癌预后,TRIM11/miR-24-3p轴有望成为治疗乳腺癌的新靶点。     

miR-3619-5p对乳腺癌细胞MCF-7和T47D增殖、凋亡的影响及分子机制

目的探讨miR-3619-5p转染对乳腺癌细胞系MCF-7和T47D增殖和凋亡的影响及可能的分子机制。方法乳腺癌培养至对数生长期,根据对其不同处理分为2组:对照组(转染ds Control)和实验组(转染miR-3619-5p)。5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)增殖实验和集落形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力变化;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测乳腺癌细胞周期分布和凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p21、CDK6和Cyclin D1 mRNA的表达;Western blot法检测p21、CDK6和Cyclin D1蛋白的表达变化。结果与dsControl组相比,转染miR-3619-5p的乳腺癌细胞增殖能力显著降低(P0.05)。转染miR-3619-5p后,位于G_0/G_1期的细胞比例明显升高,位于S期和G_2/M期的细胞比例明显降低,细胞凋亡率显著上升。与ds Control组相比,转染miR-3619-5p后两种细胞系中p21 mRNA均明显上调(P0.01),而CDK6和Cyclin D1 mRNA的表达均明显下调(P0.01)。Western blot检测结果与qRT-PCR结果一致。结论 miR-3619-5p可显著抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡,其分子机制可能是通过激活乳腺癌细胞中抑癌基因p21的表达。     

盐霉素通过下调miR-221抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的实验观察

目的探讨盐霉素抑制乳腺癌细胞和乳腺癌干细胞增殖与microRNA-221(miR-221)及其调控的PTEN/PI3K/Akt信号通路的关系。方法脂质体转染miR-221模拟物至乳腺癌MCF-7细胞,盐霉素(1μmol/L)处理后检测细胞增殖能力和乳腺球形成能力。筛选miR-221稳转MCF-7细胞,构建裸鼠荷瘤模型,给予盐霉素腹腔注射治疗。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测细胞和皮下瘤组织中miR-221和PTEN mRNA水平,Western blot法检测PTEN、p-Akt以及ALDH1蛋白表达。结果 RT-qPCR结果显示盐霉素(1μmol/L)可明显降低MCF-7细胞中内源性miR-221表达水平(P 0. 05)。与miR-221组相比,Sal-miR-221组乳腺球体积明显变小,数量明显减少(117±9. 4 vs 180±15. 6,P 0. 05);RT-qPCR显示miR-221表达水平明显降低(P 0. 05),PTEN mRNA水平则显著升高(P 0. 05);Western blot结果显示PTEN蛋白表达增高,p-Akt和ALDH1蛋白表达降低。Sal-miR-221组裸鼠异体移植瘤体积呈明显减小趋势;瘤组织内miR-221表达明显低于对照组(P 0. 05),而PTEN mRNA表达明显高于对照组(P 0. 05);PTEN蛋白表达亦明显升高,p-Akt和ALDH1蛋白则降低。结论体内外实验结果表明盐霉素抑制乳腺癌细胞和乳腺癌干细胞增殖,可能是通过下调miR-221促进PTEN表达,抑制PI3K/Akt信号通路实现的。     

乳腺癌中Livin基因及蛋白表达与细胞凋亡、增殖的关系

目的探讨Livin在乳腺癌表达及其与caspase-3蛋白表达和细胞增殖的相互关系。方法采用SP法免疫组化和原位杂交技术检测Livin在正常乳腺组织（14例）、乳腺增生性病变（14例）、乳腺非浸润性癌（20例）和乳腺浸润性癌组织（52例）中Livin mRNA和其蛋白的表达以及caspase-3、Ki-67在乳腺癌组织中的表达。结果Livin蛋白和mRNA在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌组织中阳性率分别为（7．1％、7．1％）、（28．6％、28．6％）、（65．0％、70．0％）、（73．1％、75．0％）,差异有统计学意义（P〈0．01）。Livin蛋白与mRNA表达之间差异无统计学意义（P〉0．05）。Livin表达与临床分期、淋巴结转移和年龄有关（P〈0．05）,与肿瘤大小和组织学分级无关。Livin蛋白与caspase-3的在乳腺癌表达呈负相关（P〈0．01）。Livin蛋白表达阳性的乳腺癌Ki-67增殖指数（47．32％±22．34％）明显高于Livin蛋白表达阴性的乳腺癌Ki．67增殖指数（18．01％±23．34％）（P〈0．01）。结论Livin基因及蛋白在乳腺癌中表达上调,提示在乳腺癌发生、发展中起重要作用,可作为乳腺癌新的分子标记物,可能成为乳腺癌诱导凋亡治疗的新靶点。Livin蛋白通过与执行型caspase-3结合,抑制其活性,从而阻止细胞凋亡。Livin不仅参与细胞凋亡的调控,还促进了细胞增殖及肿瘤的发生、发展。     

乳腺癌组织及细胞系中CCDC34的表达及其生物学功能

目的 探索乳腺癌组织及细胞系中CCDC34的表达情况及其对乳腺癌细胞增殖能力的影响。方法免疫组织化学染色方法检测34例乳腺癌组织及15例癌旁正常乳腺组织中CCDC34的表达和定位情况;利用Kaplan-Meier Plotter和The Human Protein Atlas数据库分析CCDC34与乳腺癌患者预后的相关性;Western blot检测人正常乳腺细胞MCF-10A及乳腺癌细胞SKBR-3、MCF-7、MDA-MB-453和MDA-MB-231中CCDC34的表达情况;在MCF-7和MDA-MB-231细胞中瞬时转染CCDC34,使用MTT的方法检测CCDC34对乳腺癌细胞增殖能力的影响。结果 CCDC34在乳腺癌组织的表达显著低于癌旁正常乳腺组织（P<0.01）;CCDC34在乳腺癌中的表达水平与患者的不良预后显著负相关（P<0.01）;CCDC34在乳腺癌细胞中的表达普遍低于人正常乳腺细胞MCF-10A(P<0.01);MTT检测结果显示,转染CCDC34显著抑制了乳腺癌细胞MCF-7(Luminal A)和MDA-MB-231(basal)细胞的增殖能力（P<0.05）。结论 乳腺癌组织及细胞系中CCDC34的表达普遍降低,CCDC34能够抑制乳腺癌细胞的增殖能力,并与乳腺癌患者的良好预后相关。     

cyclin G2在乳腺病变组织中表达及其对MCF-7细胞的作用

目的 研究细胞周期蛋白G2(cyclin G2)在乳腺病变中的表达及意义,探讨cyclin G2对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法 用免疫组化SP法检测cyclin G2在人乳腺不同病变中的蛋白表达,并进行显微图像分析;利用阳离子介导的脂质体法转染pDsRed2-cyclin G2融合基因至人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中,流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率.结果 (1)cyclin G2在乳腺增生症中的阳性表达率及表达强度与正常乳腺组织相当,而在导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)以及浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中表达逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05).(2)转染了重组质粒pDsRed2-cyclin G2的MCF-7细胞凋亡率明显增高(P<0.01).结论 cyclin G2蛋白表达随着乳腺疾病恶性程度增加而降低,外源性转染cyclin G2至MCF-7细胞中可促进其凋亡,抑制细胞增殖.     

乳腺癌组织中血管内皮生长因子与转录因子共活化物PGC-1α的表达

目的探讨乳腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和转录因子共活化物过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)的表达情况及其与癌组织生长、浸润及转移的关系。方法应用免疫组织化学和RT-PCR技术检测26例乳腺浸润性导管癌和9例正常乳腺组织中VEGF、线粒体DNA(mtDNA)水平及转录因子共活化物PGC-1α的表达。结果乳腺癌组织中VEGF蛋白及mRNA表达水平明显高于正常乳腺组织,而线粒体及转录因子共活化物PGC-1α的mRNA的表达水平则低于正常乳腺组织。结论乳腺癌组织中VEGF蛋白及mRNA表达显著上调,而PGC-1α mRNA表达显著下调。乳腺浸润性导管癌组织生长、浸润及转移可能与VEGF表达上调及PGC-1α表达降低有关。     

乳腺癌组织中血管内皮生长因子与转录因子共活化物PGC-1α的表达

目的 探讨乳腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和转录因子共活化物过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)的表达情况及其与癌组织生长、浸润及转移的关系.方法 应用免疫组织化学和RT-PCR技术检测26例乳腺浸润性导管癌和9例正常乳腺组织中VEGF、线粒体DNA(mtDNA)水平及转录因子共活化物PGC-1α的表达.结果 乳腺癌组织中VEGF蛋白及mRNA表达水平明显高于正常乳腺组织,而线粒体及转录因子共活化物PGC-1α的mRNA的表达水平则低于正常乳腺组织.结论 乳腺癌组织中VEGF蛋白及mRNA表达显著上调,而PGC-1αmRNA表达显著下调.乳腺浸润性导管癌组织生长、浸润及转移可能与VEGF表达上调及PGC-1α表达降低有关.     

MicroRNA-940在乳腺癌中的表达变化及作用机制

目的 探讨microRNA-940(miR-940)在乳腺癌组织和细胞中的表达以及对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及其相关分子机制。 方法 实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测2016年1月~2017年1月我院手术切除的78例患者的乳腺癌组织、癌旁组织和人乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231、BT-549及人正常乳腺细胞系MCF-10 A中miR-940的表达情况。在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中利用脂质体LipofectaminsTM 2000转染miR-940模拟物上调miR-940的表达,CCK-8实验检测细胞增殖活性的改变,小室侵袭及迁移实验（transwell）检测细胞侵袭、迁移能力的改变。生物学信息法预测miR-940的可能作用靶基因,双荧光素酶报告实验检测miR-940与CXC趋化因子受体2 (CXCR2)的3’UTR区结合情况,Western blotting检测miR-940对CXCR2 蛋白表达的影响。 结果 miR-940在乳腺癌组织和细胞中表达明显降低（P<0.01）,并且miR-940的表达与TNM分期和淋巴结转移密切相关（P<0.01）。上调MDA-MB-231细胞miR-940表达后,细胞的增殖活性明显下降（P<0.01）,侵袭及迁移能力明显下降（P<0.01）。双荧光素酶报告显示,miR-940可与CXCR2 的3’UTR区特定序列结合显著抑制荧光素酶活性(P<0.01),上调miR-940后细胞中CXCR2 蛋白的表达均明显下降(P<0.01)。 结论 miR-940在乳腺癌中的表达降低,miR-940可以通过靶向CXCR2抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。     

miR-124a靶向TGFBR1基因对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124a对乳腺癌MDA-MB231细胞株增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测24例患者乳腺癌组织及邻近的癌旁正常组织中miR-124a的表达,用Western bolt法检测TGFBR1的表达。利用脂质体将pre-miR-124a或anti-miR-124a瞬时转染至乳腺癌MDA-MB231细胞,real-time PCR分析miR-124a与其调控的靶基因TGFBR1的表达调控关系。Western blot法检测转染后细胞中TGFBR1的表达水平,同时采用CCK-8和克隆形成实验检测转染后MDA-MB231细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-124a在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.01),TGFBR1在乳腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P0.01)。过表达和抑制表达miR-124a能反向调控其靶基因TGFBR1及蛋白的表达;CCK-8和克隆形成实验结果显示,过表达miR-124a能明显抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和侵袭(P0.01)。结论 miR-124a可以通过下调TGFBR1的表达抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和侵袭。     

沉默Bmi-1表达可促进MCF-7乳腺癌细胞凋亡并抑制其侵袭

目的探讨B细胞特异的Moloney鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)基因沉默对细胞增殖与侵袭的影响及可能的分子机制。方法收集经病理确诊的乳腺癌及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR检测Bmi-1的表达差异;采用LipofectamineRNAi MAX转染试剂将靶向Bmi-1基因的小干扰RNA(siRNA)转染MCF-7细胞,流式细胞术检测Bmi-1沉默后细胞周期和凋亡的改变,Western blot法检测凋亡相关基因P21、Bax、Bcl-2的表达变化。TranswellTM侵袭实验检测MCF-7细胞侵袭力变化,Western blot法检测上皮钙黏素(E-cadherin),神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达水平。结果乳腺癌组织Bmi-1 mRNA表达量高于癌旁组织,沉默Bmi-1基因可使MCF-7细胞周期阻滞于G1期,凋亡细胞增多;与空白对照组、阴性对照siRNA转染组相比,Bmi-1-siRNA组中P21与Bax的表达水平明显上调,Bcl-2明显下调。沉默Bmi-1基因表达可抑制MCF-7细胞的侵袭力,与对照组相比,下调Bmi-1可增强E-cadherin的表达,减少N-cadherin、vimentin的表达。结论下调Bmi-1的表达可引起MCF-7细胞G1期阻滞,促进细胞凋亡,与P21表达上调,Bax/Bcl-2比率升高有关;下调Bmi-1水平可抑制MCF-7细胞侵袭性,与抑制肿瘤细胞上皮间质转化有关。     

MicroRNA-200a通过抑制上皮-间充质转化影响乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探讨微小RNA-200a(miR-200a)表达改变对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其调节机制。方法:RT-qPCR法检测人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-468和MCF-7中miR-200a的表达水平与正常人乳腺上皮细胞株MCF-10A的差异。CCK-8法检测转染miR-200a mimic和miR-inhibitor后MDA-MB-231细胞活力的变化。采用流式细胞术及Transwell实验检测转染后MDA-MB-231细胞凋亡及侵袭能力的变化。采用RT-qPCR和Western blot检测上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、SIP1、Snail、Twist、ZEB1和ZEB2 mRNA及蛋白表达的变化。结果:与MCF-10A细胞相比,miR-200a在MDA-MB-231细胞中表达显著降低(P0.05)。过表达miR-200a使MDA-MB-231细胞活力降低(P0.05),凋亡率升高(P0.05),侵袭能力下降(P0.05), SIP1、N-cadherin、Snail、Twist、ZEB1和ZEB2的mRNA及蛋白表达显著下调(P0.05),而E-cadherin的mRNA及蛋白表达显著增加(P0.05);抑制miR-200a的表达使上述结果逆转(P0.05)。结论:上调miR-200a能够抑制MDA-MB-231细胞的活力和侵袭,促进MDA-MB-231细胞的凋亡。miR-200a可能通过抑制上皮-间充质转化调控乳腺癌的恶性生物学行为。     

乳腺浸润性导管癌中Livin和MMP-7的表达及临床意义

目的检测凋亡抑制蛋白家族新成员Livin和基质金属蛋白酶-7(matrix metallo proteinase 7,MMP-7)在乳腺浸润性导管癌组织中的表达,探讨两者表达的相关性及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测Livin和MMP-7在乳腺浸润性导管癌和癌旁乳腺组织中的表达,并分析两者表达的相关性及其与乳腺浸润性导管癌患者临床病理特征的关系。进一步应用Western blot法检测乳腺浸润性导管癌及其相应的癌旁乳腺组织中Livin和MMP-7蛋白的表达水平。结果 Livin和MMP-7在乳腺浸润性导管癌和癌旁乳腺组织中的阳性率分别为65%vs 10%和73.3%vs 25%,且两者在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性率均高于癌旁乳腺组织(P0.05)。统计学分析显示,Livin表达与乳腺浸润性导管癌患者的淋巴结转移和TNM分期具有正相关性(P0.05),MMP-7表达与乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移、组织学分级均具有正相关性(P0.05)。Livin与MMP-7表达具有正相关性(r=0.322,P=0.007)。Western blot结果也表明,Livin与MMP-7蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达水平均高于癌旁乳腺组织。结论 Livin和MMP-7表达与乳腺浸润性导管癌的转移有关,两者可能具有协同作用促进乳腺浸润性导管癌的发展演进。