缺锌下调3周龄小鼠肾脏凋亡相关因子BCL-2表达

 目的 观察生长期小鼠锌缺乏条件下肾脏细胞凋亡相关因子Bcl-2表达的变化,进而探讨锌离子对肾细胞凋亡的影响。 方法 根据小鼠精神状况、摄食量、体质量增长及血清锌含量变化确定模型构建是否成功。用免疫荧光和蛋白印迹技术检测肾组织中Bcl-2的表达。结果 缺锌小鼠出现典型缺锌症状,体质量下降,摄食量减少,血清锌含量明显降低（P<0.05）。在肾脏Bcl-2定位表达于肾小管和集合管上皮细胞胞质内,锌缺乏小鼠肾脏Bcl-2的表达量明显低于对照组（P<0.05）。结论 生长期锌缺乏可使肾组织中Bcl-2 蛋白表达下调,有可能促进肾细胞凋亡的发生。     

肾脏AQP2表达及穿梭调节的分子机制

水通道蛋白是位于细胞膜或细胞内囊泡能够通透水的蛋白质分子 ,其中水通道蛋白 2 (AQP2 )主要分布于肾脏集合管主细胞的管腔侧膜及近管腔侧的胞浆囊泡内 ,是抗利尿激素敏感型水通道。抗利尿激素可调节肾脏集合管AQP2的表达及穿梭 ,在肾脏水平衡调节中起重要作用     

小鼠肾集合管发育中主细胞的形态学变化及水通道蛋白-2和-3的表达

目的 观察小鼠肾集合管发育过程中主细胞的形态学变化及水通道蛋白(AQP)-2、-3的表达,探讨AQP-2、-3与小鼠肾集合管主细胞发育的关系及作用.方法 应用透射电镜、免疫组织化学、免疫印迹技术并结合体视学方法,观察并检测胚龄16、18 d 胎鼠及生后1、3、7、14、21 d仔鼠肾集合管发育过程中主细胞的形态学变化及...     

人白细胞介素1β通过线粒体途径激活caspase-3诱导A375-S2细胞凋亡

目的研究人白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)体外诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制。方法通过Hoechst33258荧光染色,观察A375-S2细胞在IL-1β作用下的形态学变化。使用琼脂糖凝胶电泳法检测IL-1β对细胞DNA降解的影响。应用caspase活力测定法检测IL-1β对caspase-3活力的影响。利用Westernblot方法检测IL-1β对caspase-3底物的降解以及对细胞内Bcl-2家族和AIF蛋白表达的调节作用。结果IL-1β(1nmol/L)能够诱导A375-S2细胞凋亡,72h时细胞体变小,细胞核呈现固缩、断裂,并出现因凋亡引起的DNA梯状条带。IL-1β诱导细胞凋亡过程中,caspase-3的活力升高,其两种底物PARP和ICAD均发生降解,线粒体中抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表达减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加。凋亡诱导因子AIF蛋白的表达也有所增加。结论IL-1β通过激活caspase-3降解其底物,激活AIF,并上调线粒体内Bax/Bcl-2和Bax/Bcl-xL的表达比例诱导A375-S2细胞凋亡。     

水通道蛋白-2、4在小鼠肾发育过程中的表达

目的观察水通道蛋白-2（AQP-2）和水通道蛋白-4（AQP-4）在小鼠肾脏发育过程中的表达位置,探讨其与肾脏发生发育的关系及作用。方法免疫组织化学SABC法染色和体视学半定量检测AQP-2、AQP-4的表达。结果AQP-2在胚龄17d的胎鼠可以明确检测到,其表达部位为集合管主细胞的管腔膜和胞浆内。体视学测量发现,从胚龄17d开始表达到生后1d的小鼠其管腔膜的面密度值逐渐增加,此后面密度值基本上没有变化。AQP-4在胚龄14d的胎鼠可见到微弱的表达,随着胚龄的增长其表达逐渐增加,到生后1d达到最大水平,以后随着13龄的增加表达量无明显变化,并且在每一个时期的表达量都远远小于AQP-2的表达量。AQP-4的表达部位为集合管的侧基底细胞膜。结论推测AQP-2对小鼠出生后肾脏水平衡的调节作用比较重要,而AQP-4对出生前水平衡的调节作用比较重要。     

姜黄素对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞caspase-3、caspase-8和caspase-9表达的影响

目的:探讨姜黄素对β淀粉样蛋白25-35(Aβ_(25-35))诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)释放率及凋亡的影响。方法:以Aβ_(25-35)作用于PC12细胞,分别采用MTT法和LDH试剂盒检测细胞的存活率和LDH释放率;实验随机分为空白对照组、模型组、姜黄素10μmol/L组和姜黄素20μmol/L组,采用流式细胞术及Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡情况,采用比色法和Western blot法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-8和caspase-9的活性和表达。结果:与模型组比较,姜黄素可显著升高Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞存活率,降低LDH释放率和凋亡率(P0.01);同时可显著降低caspase-3、caspase-8和caspase-9的活性和表达(P0.05或P0.01)。结论:姜黄素可显著抑制caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达,从而抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡。     

胰岛素对滋养层细胞凋亡的调节作用及机制

目的 :探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制。方法 :将培养的妊娠早期滋养层细胞 ,分为正常对照组(细胞 +培养液 )、H2 O2 组 (细胞 +培养液 +H2 O2 )和胰岛素 +H2 O2 组 (细胞 +H2 O2 +胰岛素 )。采用透射电镜观察及流式细胞术 ,观察H2 O2 诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2 O2 诱导的细胞凋亡的抑制作用。并检测胰岛素对滋养细胞caspase 3的活性及Bcl 2蛋白表达的影响。结果 :H2 O2 可诱导培养的滋养细胞凋亡 ,透射电镜下可见特征性的细胞核改变。胰岛素可显著抑制H2 O2 诱导的细胞凋亡 ,流式细胞仪检测其凋亡率较H2 O2 组显著下降 (P <0 .0 1)。H2 O2 组滋养细胞中caspase 3的活性较对照组显著增高 (P <0 .0 1) ,而Bcl 2蛋白的表达则较对照组显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :胰岛素可明显抑制H2 O2诱导的滋养细胞凋亡 ,其机制可能与降低caspase 3的活性和促进Bcl 2蛋白的表达有关     

小鼠出生后肾脏发育过程中的细胞增殖与凋亡

目的：观察小鼠出生后肾脏发育过程中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及细胞凋亡的特征,探讨出生后小鼠肾脏发育过程中细胞增殖与凋亡的规律及其关系。方法：应用免疫组织化学技术和原位末端标记法(TUNEL法)分别检测小鼠出生后1～70d肾脏中PCNA阳性的细胞和凋亡细胞。结果：小鼠出生后1～70d,皮质中的肾小体、肾小管、髓放线以及髓质中的肾小管和集合管的细胞,早期增殖活跃,随着肾脏发育成熟而表达逐渐减弱。同时,也存在着细胞凋亡现象,且凋亡高峰一般出现在增殖高峰之后。结论：细胞增殖与凋亡在小鼠生后肾脏发育的整个过程中普遍存在,生后1～7d细胞增殖旺盛,增殖高峰之后出现凋亡高峰,生后28～70d两者活动均减弱。     

miR-29a调控水通道蛋白4抑制过氧化氢诱导的星形胶质细胞凋亡

背景：一些研究已经证实了miR-29a、水通道蛋白4在星形胶质细胞损伤过程中的作用,但其是否存在相互作用以及分子机制尚未见报道。目的：研究miR-29a调控水通道蛋白4表达对过氧化氢诱导星形胶质细胞损伤的影响。方法：(1)以小鼠原代培养的星形胶质细胞为研究对象,用不同浓度的过氧化氢诱导小鼠星形胶质细胞损伤反应,细胞分为对照组、过氧化氢组、过氧化氢+空载体组、过氧化氢+miR-29a过表达组。采用MTT法检测小鼠星形胶质细胞存活率;Western blot法检测小鼠星形胶质细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3)、水通道蛋白4和胶质纤维酸性蛋白的蛋白表达水平;实时定量PCR检测小鼠星形胶质细胞中miR-29a的表达水平;流式细胞仪检测小鼠星形胶质细胞凋亡水平。(2)将12只雌性BALB/c小鼠随机分为空载体组、过表达miR-29a组,每组6只。制备小鼠T₁₀脊髓撞击损伤动物模型,建模后分别注射以下重组慢病毒(空载体、miR-29a过表达载体)。术后第7天,采用免疫组织荧光染色检测小鼠脊髓损伤部位水通道蛋白4和胶质纤维酸性蛋白表达水平...     

水通道蛋白与多囊肾病的研究进展

多囊肾病(Polycystic kidney disease,PKD)是一种常见的严重危害人类健康的遗传疾病,以双侧肾脏肾小管形成多个进行性增大的囊肿为主要特征。高选择性运输水的跨膜通道蛋白—水通道蛋白,通过调节细胞体积和内部渗透压,在多囊肾病的发生发展中起着重要作用,其中AQP1~4的影响尤为重要。AQP位于肾脏近曲小管及亨利袢降支细段的顶质膜与侧膜上,AQP2和AQP3共同表达于集合管,约30%的肾囊肿来自于集合管,所以可以通过水通道蛋白的表达,大致定位肾囊肿的起源。肾囊泡的形成和增大主要是3个病理过程共同作用的结果即:(1)肾小管上皮细胞过度增殖;(2)囊泡内液体积聚;(3)细胞外基质改变。AQP11在多囊肾的发生过程中的意义可能更大。。     

苦参碱通过 MAPK/mTOR 信号通路诱导 IMCD3 细胞自噬及机制研究

目的:通过观察苦参碱对小鼠肾脏内髓集合管上皮细胞(IMCD3)自噬的影响,探讨苦参碱诱导细胞自噬可能的分子机制。方法:在小鼠IMCD3中加入不同浓度的苦参碱(0.2、0.4、0.8、1.6 mg/ml),检测苦参碱对细胞活性、细胞的凋亡以及细胞自噬的影响;采用Western blot检测自噬相关的蛋白LC3、ERK、p-ERK、p53、Beclin-1、p70S6K、p-p70S6K、AKT、p-AKT表达水平的变化。结果:当苦参碱浓度为0、0.2、0.4、0.8 mg/ml时,IMCD3活性以及凋亡坏死没有明显变化,当苦参碱浓度为1.6 mg/ml时,细胞凋亡坏死明显增加;苦参碱处理后,细胞中自噬小体的数量明显增加;随着苦参碱处理浓度的增加,细胞中LC3蛋白表达明显升高,p-ERK、p-p70S6K表达明显减弱,ERK、p70S6K、p53、Beclin-1、AKT和p-AKT等蛋白表达无明显变化。结论:苦参碱可通过抑制MAPK/mTOR信号通路的活化促进小鼠IMCD3的自噬。     

β-榄香烯对卵巢癌细胞凋亡的影响及机制

目的研究β-榄香烯对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响及机制的探索,从而为β-榄香烯在卵巢癌中的应用提供实验基础。方法常规培养人卵巢癌SKOV-3细胞,传代,分组。应用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪以及TUNEL方法检测人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡率,并采用Westen blot方法检测caspase 3、caspase 8、caspase 9、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Cyto-c及p-Akt蛋白表达。结果与对照组相比,β-榄香烯处理组凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9及Cyto-c蛋白表达水平明显升高。与对照组相比,P-Akt及HIF-1α蛋白表达水平明显升高,而加入LY294002(PI3K/Akt/m TOR抑制剂),p-Akt及HIF-1α蛋白的表达水平明显降低。结论β-榄香烯抑制宫颈癌细胞增殖和诱导细胞凋亡可能与上调凋亡蛋白及Cyto-c蛋白表达及活化PI-3K信号通路进而诱导HIF-1α高表达相关。     

交联抗人DR5单抗-YM366EC诱导Jurkat细胞凋亡机制研究

目的：探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的死亡受体5（DR5）单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法：光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-AnnexinV及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化。结果：DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论：交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9。     

具有自发活性的重组caspase-3对裸鼠SKBr-3肿瘤生长的抑制

目的 :探讨具有自发活性的caspase 3分子对乳腺癌肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法 :重构型caspase 3转染SKBr 3细胞后 ,以观察细胞的形态、进行细胞计数和及流式细胞仪分析等方法 ,验证caspase 3大、小亚基顺序颠倒的重构型caspase 3分子的促凋亡活性。将重组真核表达载体 pcDNA3 revcas pase 3直接注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤生长的抑制作用 ,间接免疫荧光染色法检测肿瘤组织中重构型caspase 3基因表达情况 ,用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡。结果 :重构型cas pase 3基因转染后 ,可诱导SKBr 3细胞凋亡 ,将 pcDNA3 revcaspase 3重组质粒直接注射荷SKBr 3瘤裸小鼠后 ,肿瘤的生长明显受到抑制 ,免疫组化染色可检出重构型caspase 3蛋白的表达 ;TUNEL法检测证实肿瘤细胞发生凋亡。结论 :重构型caspase 3基因的体内表达可诱导SKBr 3细胞凋亡     

尿NAG活性测定在泌尿系结石中的应用

目的 探讨尿NAG活性测定在泌尿系结石患者肾功能早期损伤方面应用价值.方法 检测32例泌尿系结石血、尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性及尿β2-微球蛋白(β2-MG)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)等指标,并与50例正常人群组作对照比较.结果 泌尿系结石患者血NAG水平与对照组比较基本无变化(p>0.05),BUN、Cr无异常,尿NAG活性(37.70±21.58U/gcr)、β2-MG水平(531±426μg/L),明显高于健康对照组(p<0.01),且两者呈显著正相关(r=0.6966,p<0.01),泌尿系结石合并肾积水患者5例尿NAG及β2-MG水平全部大幅度升高,与未伴肾积水组比较有显著性差异(p<0.01).结论 泌尿系结石患者肾功能是受损伤的,血NAG及BUN、Cr不能反应映患者肾功能早期损伤,考虑测定条件等因素,尿NAG活性比β2-MG是一种更为理想肾功能早期损伤的监测指标.     

1α,25-二羟基维生素D3抑制人结肠癌细胞系SW480中β-catenin转录活性

目的探讨1α,25-二羟基维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]对人结肠癌细胞系SW480中β-catenin转录活性的影响及作用机制。方法 1,25(OH)_2D_3(100 nmol/L)干预和溶剂对照处理SW480细胞48 h;用双荧光素酶报告系统检测β-catenin的转录活性;Western blot检测1,25(OH)_2D_3干预后β-catenin在细胞核/质内的定位变化;用RT-qPCR和Western blot检测β-catenin和FOXM1 mRNA及蛋白水平。采用siRNA敲降SW480细胞中FOXM1后,检测1,25(OH)_2D_3干预后β-catenin转录活性的变化。结果 1)在SW480细胞中,1,25(OH)_2D_3能显著降低β-catenin的转录活性(P0.05),但不影响β-catenin mRNA和蛋白表达水平; 2)1,25(OH)_2D_3上调SW480细胞中FOXM1蛋白水平的表达(P0.05); 3)敲降SW480细胞中FOXM1降低1,25(OH)_2D_3对β-catenin转录活性的抑制作用(P0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3通过上调FOXM1的表达,发挥抑制β-catenin转录活性的作用。     

BARF1表达下调通过活化caspase依赖的线粒体通路诱导EBV阳性胃癌细胞凋亡

目的:研究BARF1表达下调对EBV阳性胃癌细胞凋亡的影响,以及BARF1基因沉默介导细胞凋亡的分子机制。方法:siRNA和NCsiRNA分别转染NUGC3和SNU719细胞,运用Western blot测定细胞中BARF1、Bcl-2、Bax、细胞色素C、caspase 3和caspase 9的蛋白表达;RT-PCR测定BARF1、Bcl-2和Bax mRNA的表达;台盼蓝染色法测定细胞存活率;Annexin V-FITC/PI染色法和流式细胞仪测定细胞凋亡;细胞凋亡因子抗体芯片分析细胞中凋亡相关蛋白的表达;线粒体膜电位检测试剂盒测定线粒体膜电位;免疫共沉淀检测细胞中Apaf-1和caspase 9的相互作用。结果:与空白对照组和阴性对照组相比,BARF1基因沉默显著诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡,而线粒体膜电位显著降低。BARF1沉默基因能促进促凋亡蛋白的表达并抑制抗凋亡蛋白的表达,Bcl-2/Bax比例显著降低;而caspase抑制剂能抑制由BARF1基因沉默介导的细胞凋亡。在siRNA转染的细胞中,caspase 3和caspase 9蛋白发生裂解,细胞色素C的浓度显著高于阴性对照组,Apaf-1蛋白与caspase 9蛋白在细胞质中能够发生相互作用。结论:BARF1基因沉默通过线粒体途径调节Bcl-2和Bax蛋白的表达进而诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡,并呈caspase通路依赖关系。     

MG132对SH-SY5Y细胞Aβ水平的影响

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132诱导SH-SY5Y细胞凋亡及调节β-淀粉样蛋白(beta-amyloid protein,Aβ)生成的作用,并对其机制进行探讨。方法:培养SH-SY5Y细胞,MG132对细胞进行处理,浓度分别为2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L,24 h后检测各项指标。MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)水平;Western blot检测淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、β-分泌酶(BACE1)、早老蛋白1(presenilins 1,PS1)、早老蛋白2(presenilins 2,PS2)、nicastrin(NCT)和α-分泌酶(ADAM10)蛋白表达。结果:经MG132处理后,细胞活力明显下降,诱导细胞凋亡,随剂量增加凋亡率分别为36.97%、46.20%、50.50%;细胞Aβ_(1-42)和Aβ_(1-40)蛋白水平明显上升;APP及Aβ代谢相关蛋白PS1、PS2和BACE1表达均出现剂量依赖性的增加,而ADAM10表达呈剂量依赖性降低;NCT水平变化不明显。结论:MG132能诱导神经细胞凋亡,通过影响Aβ生成途径关键蛋白而促进Aβ的产生,说明蛋白酶体活性下降可通过调节Aβ途径参与阿尔茨海默病的发生。     

高血压病患者尿蛋白早期肾损害指标联合检测结果分析

目的探讨高血压病患者早期肾脏损害尿蛋白指标的变化及对高血压肾病的诊断价值。方法采用速率散射比浊法检测尿微量白蛋白（mALB）、β2-微球蛋白（β2-MG）,全定量酶免疫法测定尿视黄醇结合蛋白（RBP）。速率法检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）,Jaffe速率法测定肌酐。结果高血压病患者尿RBP、mALB、β2-MG、NAG均较对照组显著增高（P〈0．01）,并随病期的延长有逐渐增高的趋势。单项及二项检测RBP、mALB、β2-MG、NAG阳性率较低,联合其中三项检测阳性率较高,联合四项检测阳性率可达91．67％,RBP与β2-MG、NAG呈显著正相关（P〈0．05）。mALB与RBP、β2-MG、NAG无相关性（P〉0．05）。结论检测尿RBP、mALB、β2-MG、NAG是诊断高血压病早期肾损害的敏感指标,联合三至四项指标有较高的检出率,对于高血压肾病的早期诊断,肾功能损害程度及部位的判断具有一定的价值。