灯盏花素对平滑肌细胞增殖的抵制作用研究

目的：通过观察灯盏花素对体外培养的人胎儿脐动脉平滑肌细胞（Human umbilical artery smooth muscle cells）增殖的影响及球囊损伤动物模型血管内膜增殖的抵制作用，以探讨灯盏花素在再狭窄及埃及粥样硬化防治中的作用。方法：MTT法观察灯盏花素对人脐动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用；血清生化指标检测评估灯盏花素组对血脂、肝、肾功能及脂质氧化水平等的影响；组织形态学观察球囊损伤后血管增殖。结果：MTT结果显示灯盏花素组细胞活性比率显著降低（P〈0.05）；血清生化指标测定结果各组间无显著性差异；组织形态学结果显示低灯盏花素组和高灯盏花素组管腔面积均显著增加（P〈0.01）,内膜面积显著减少（P〈0.01）高、低剂量组之间无显著差异（P〉0.05）。结论：灯盏花素能抑制培养的人脐动脉平滑肌细胞的增殖；灯盏花素对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖有一定的抑制作用。     

灯盏花素对腹膜间皮细胞生长和增殖的影响

目的：本研究旨在通过观察体外培养时灯盏花素对大鼠腹膜间皮细胞生长和增殖的影响,探讨灯盏花素对于间皮细胞的保护机制。方法：对SD大鼠腹膜间皮细胞进行分离培养,第三代用于实验,以1×103细胞接种于96孔培养皿,分成8组,每组9孔,分别加入不同浓度的灯盏花素和LPS。培养48小时和72小时后通过细胞计数了解间皮细胞生长情况;培养72小时后加入MTT5mg/孔,用酶标仪490nm比色,了解间皮细胞增殖情况。结果：1. 细胞数量影响：在未加LPS组中,25ul灯盏花素组和12. 5ul灯盏花素组间皮细胞生长良好,与单纯培养基组相比无显著性差异(P=0.086,1.000);50ul灯盏花素组与单纯培养基组相比有显著性差异（P=0.004)。而加LPS组间皮细胞生长情况差于未加组,在LPS组中,加入灯盏花素各组拮抗LPS对间皮细胞生长抑制作用 (P=0.000)。2. 细胞增殖的影响：未加LPS组中单纯培养基组、25ul灯盏花素组和12. 5ul灯盏花素组的间皮细胞增殖无显著差异（P=0.64,0.929）,50ul灯盏花素组的间皮细胞增殖与单纯培养基组比较存在显著性差异（P =0.039）。加有LPS组中50ul灯盏花素组、25ul灯盏花素组组间无统计学差异（P=0.771）,其余各组间存在统计学差异（P =0.000）,其中LPS组间皮细胞增殖最差,12. 5ul灯盏花素组次之。结论：1. 灯盏花素对于间皮细胞的生长和增殖具有保护作用。2. 灯盏花素能够减轻LPS引起的免疫炎症造成的间皮细胞的损伤,且在一定浓度范围内存在量效正相关关系。     

Captopril对家兔动脉损伤后内膜增生的影响

在家兔颈总动脉球囊损伤模型上,观察卡托普利（Captopril）对术后2周血浆内皮素（ET1）、血管内膜增殖细胞核抗原（PCNA）阳性表达率、血管内膜厚度的影响。结果表明：Captopril能显著降低球囊损伤后家兔血浆ET1水平及血管内膜PCNA阳性表达率（P＜0.01);与剥脱对照组相比,Captopril组血管内膜厚度及管腔狭窄明显降低（P＜0.01)。提示：Captopril能抑制血管损伤后内膜的增生,可能是通过降低ET1水平及抑制平滑肌细胞增殖实现的,为Captopril应用于动脉粥样硬化及经皮冠装动脉成形术后再狭窄的治疗提供一定的依据。     

转录因子FoxO3a磷酸化对血管平滑肌细胞增殖能力的影响

目的观察转录因子FoxO3a磷酸化对颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖能力的影响。方法 30只雄性SD大鼠分成对照组(C组)和球囊损伤组(S组),其中球囊损伤组又分为损伤后6、12、24、72 h组(S1、S2、S3、S4组,n=6)。S组大鼠均行左侧颈总动脉球囊损伤术,取损伤处血管组织培养平滑肌细胞,采用RT-PCR技术检测FoxO3a mRNA表达,Western blotting法检测FoxO3a蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖能力。结果颈动脉损伤后S1组血管平滑肌细胞的FoxO3a磷酸化蛋白表达明显增强,与C组和其他S组比较差异均有统计学意义(P<0.01);培养后第2、3、4、5天,S1组血管平滑肌细胞的增殖能力显著高于C组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论血管损伤后,FoxO3a快速发生磷酸化,持续时间短,可能与伴随的血管平滑肌细胞增殖能力显著升高相关联,提示FoxO3a的磷酸化可能在血管损伤后的修复中发挥重要作用。     

转录因子FoxO3a磷酸化对血管平滑肌细胞增殖能力的影响

目的 观察转录因子FoxO3a磷酸化对颈总动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖能力的影响.方法 30只雄性SD大鼠分成对照组(C组)和球囊损伤组(S组),其中球囊损伤组又分为损伤后6、12、24、72 h组(S1、S2、S3、S4组,n=6).S组大鼠均行左侧颈总动脉球囊损伤术,取损伤处血管组织培养平滑肌细胞,采用RT-PCR技术检测FoxO3a mRNA表达,Western blotting法检测FoxPO3a蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖能力.结果 颈动脉损伤后S1组血管平滑肌细胞的FoxP3a磷酸化蛋白表达明显增强,与C组和其他S组比较差异均有统计学意义(P<0.01);培养后第2、3、4、5天,S1组血管平滑肌细胞的增殖能力显著高于C组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 血管损伤后,FoxO3a快速发生磷酸化,持续时间短,可能与伴随的血管平滑肌细胞增殖能力显著升高相关联,提示FoxO3a的磷酸化可能在血管损伤后的修复中发挥重要作用.     

大鼠颈动脉球囊损伤后体外培养内膜增生的形态学研究

目的观察大鼠颈动脉经球囊损伤后在体外培养2周后内膜是否发生增生.方法选取10只健康的Wistar大鼠,颈动脉球囊损伤后体外培养14d,苏木素伊红染色后进行光镜、透射电镜观察以及抗α-肌动蛋白免疫组织化学染色,与正常组血管培养后进行形态学比较.结果光镜结果可见正常组动脉血管的内膜、中膜、外膜结构完整,培养14d后内膜无明显增生,而损伤组动脉血管有新内膜形成,与正常组相比差别有显著性意义(P＜0.01),新内膜细胞α-SM-actin免疫组织化学染色结果为阳性.电镜结果可见细胞轮廓清晰,细胞核无碎裂、溶解等现象;细胞内线粒体形态、结构正常.结论大鼠颈动脉经球囊损伤后在体外培养2周后有新内膜形成,内膜增生是由于中膜平滑肌细胞的向内膜层的迁移和增殖.     

32P球囊内放射治疗预防动脉损伤后新生内膜过度增生

目的：选用家兔颈动脉球囊损伤模型观察放射性^32P液体球囊血管内放射治疗对损伤后新生内膜过度增生的抑制作用。方法：健康家兔40只制作颈动脉球囊损伤模型，随机分成4组：10、20和40GY放射剂量治疗组和对照组。分别于术后3、7、14、28和56天处死动物，取颈动脉标本HE染色、原位标记凋亡细胞（TUNEL）和增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组化染色，应用光学显微镜和计算机图像分析系统对切片进行图像分析．计算动脉中膜血管平滑肌细胞凋亡率、PCNA阳性率、内膜和中膜厚度及面积、残余管腔面积。结果：球囊损伤后动脉中膜平滑肌细胞开始增殖．并向内膜下迁移，其凋亡率和PCNA细胞阳性率均在伤后7天达到高峰。各治疗组各时间段血管平滑肌细胞凋亡率高于对照组（P〈0．01）．PCNA细胞阳性率低于对照组（P〈0．01），20GY和40GY组相似，但都优于10GY组（P〈0．01）；伤后28天始血管内膜和中膜增厚．面积增加，残余管腔面积缩小，各治疗组伤后28天始血管内膜、中膜增厚面积增加和残余管腔面积缩小明显改善（P〈0．01），20GY和40GY组相似，但都优于10GY组（P〈0．01）。结论：放射性^32P液体球囊血管内放射治疗可以明显抑制球囊损伤后动脉血管壁平滑肌细胞的增殖和迁移．减少新生内膜过度增生．预防管腔狭窄。     

PDGF-β mRNA反义寡核苷酸抑制兔血管内膜损伤后血管平滑肌细胞增生

目的 以PDGF-β的反义寡核苷酸作为药物抑制血管平滑肌细胞表达PDGF-βmRNA和增生,为反义药物预防经皮血管内膜成形术后再狭窄提供实验依据.方法 用球囊导管损伤兔髂动脉内膜建立再狭窄模型,于内膜损伤后1周观察血管平滑肌细胞表达PDGF-β mRNA和增殖细胞核抗原的情况.结果 计数200个内膜细胞中的PCNA阳性反应的细胞数,与对照组相比,反义药物显著抑制内膜平滑肌细胞表达PCNA,抑制率为93.44%(P＜0.001).显微镜高倍视野下(400X)计数血管内膜每平方毫米中的PDGF-βmRNA阳性细胞的平均数,与对照组相比,反义药物显著抑制内膜平滑肌细胞表达PDGF-β mKNA,抑制率为88.40%(P＜0.001).结论 根据不同种属PDGF-β的同源性设计的反义药物显著下调血管内膜表述PDGF-β mRNA并可抑制血管内膜增生,这为临床应用反义寡核苷酸防治经皮血管内膜成形术后再狭窄提供实验依据.     

雷红冲剂对兔动脉球囊损伤术后狭窄影响的实验研究

目的探讨雷红冲剂对兔动脉球囊损伤术后狭窄的干预作用。方法健康新西兰大白兔40只,随机分为假手术组、模型组、雷红冲剂低剂量组、雷红冲剂高剂量组,每组10只。运用球囊原位扩张、拉伤致兔髂动脉损伤建立经皮冠状动脉腔内血管成形术(PTCA)后内皮损伤模型。观察雷红冲剂对损伤血管内膜及管腔内径的影响。结果球囊损伤侧血管均显示弥漫性内膜增厚,光镜下形态学观察增生内膜以增殖的梭形平滑肌细胞为主。与假手术组比较,模型组管腔面积明显缩小(P<0.001),内膜、中膜显著增生(P<0.001);与模型组比较,雷红冲剂低、高剂量组管腔面积及内膜增生程度均明显改善(P<0.001),两组比较高剂量组优于低剂量组。与模型组比较雷红方对增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)表达有减少的趋势(P<0.01),对细胞周期调控蛋白(p21cip1)表达有升高趋势(P<0.01)。结论雷红冲剂可抑制损伤血管的内膜增生,对兔髂动脉球囊损伤术后狭窄有不同程度的抑制作用。     

藏花素对膀胱移行细胞癌的增殖抑制作用

目的:研究藏花素(Crocin)对膀胱移行细胞癌是否具有增殖抑制作用.方法:MTT法检测藏花素对T24细胞增殖的影响;应用形态学手段观察细胞形态学的改变;流式细胞术检测肿瘤细胞周期动力学.荷瘤小鼠模型建立,测定藏花素处理后荷瘤小鼠体内抑瘤率.结果:藏花素能明显抑制T24细胞的增殖.并可导致其形态学的改变;藏花素作用后G0/G1期细胞比例逐渐增加,S期和G/M期细胞比例逐渐减少;对照组裸鼠肿瘤的平均体积明显大于藏花素处理组裸鼠肿瘤的平均体积,其差异具有显著性(P<0.05).裸鼠生长抑制率为27.8%.结论:体内外实验证明,藏花素对膀胱移行细胞癌的增殖有抑制作用.