慢性重型肝炎患者泛耐铜绿假单胞菌40种耐药相关基因的研究

目的研究慢性重型肝炎患者泛耐铜绿假单胞菌40种耐药相关基因。方法应用法国梅里埃公司的API鉴定条／PSE5．0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC／ID-109鉴定／药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测1株泛耐铜绿假单胞菌临床分离株29种β-内酰胺酶相关基因、外膜蛋白D2基因（oprD2）、6种氨基糖甙类修饰酶基因（AMEs）、消毒剂／磺胺耐药基因（qacE△1-sull）、3种整合子基因（intI1、2、3）等40种耐药相关基因,分析其分布情况。结果在本株菌,6种耐药相关基因阳性（二种β-内酰胺酶基因（blaTEM、blaOXA10）、二种氨基糖甙类修饰酶基因（aac（6′）-Ⅱ、aac（3）-Ⅱ）、qacE△1-sull和Ⅰ类整合子基因（intI1））,同时oprD2缺失;其它27种β-内酰胺酶基因、4种氨基糖甙类修饰酶基因（aac（6′）-Ⅰb、aac（3）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ）和2种整合子基因（intI2、intI3）均为阴性。结论本株泛耐菌耐药机制为多重机制,主要与7种耐药相关基因（blaTEM、blaOXA10、oprD2缺失、aac（6′）-Ⅱ、aac（3）-Ⅱ、qacE△1-sul1和Ⅰ类整合子）有关。经检索中文生物医学期刊文献数据库（CMCC）和medline数据库,本研究是泛耐铜绿假单胞菌检测耐药相关基因最多的报道。     

泛耐恶臭假单胞菌40种耐药基因的研究

目的研究泛耐恶臭假单胞菌40种耐药机制。方法应用法国梅里埃公司的API鉴定条／PSE5．0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC／ID-109鉴定／药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测1株泛耐恶臭假单胞菌临床分离株30种β-内酰胺酶基因、6种氨基糖苷类修饰酶基因（AMEs）、消毒剂／磺胺耐药基（qacE△1-sul1）、整合子（int）1、2、3等40种耐药基因,分析其分布情况。结果在本株菌,8种耐药基因阳性（二种β-内酰胺酶基（b1aCARB、b1aVIM）、4种氨基糖苷类修饰酶基因（aac（6′）-Ⅰb、aac（3）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ）和二种整合子基因（qacE△1-sul1、intⅠ1）,其它28种β-内酰胺酶基因、2种氨基糖苷类修饰酶基因（aac（6′）-Ⅱ、aac（3）-Ⅰ）和二种整合子基因（intⅠ2、intⅠ3）均为阴性。结论本株泛耐菌耐药机制为多重机制,主要与b1aCARB、b1aVIM、AMEs和Ⅰ类整合子有关。经检索中文生物医学期刊文献数据库（CMCC）和medline数据库,本研究是泛耐恶臭假单胞菌检测耐药基因最多的报道,也是第一篇从恶臭假单胞菌检出β-内酰胺酶b1aCARB和aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ）耐药基因的报道。     

多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因及耐消毒剂基因的检测

目的了解我院多重耐药铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶编码基因及耐消毒剂基因的存在状况。方法聚合酶链反应（PCR）法对多重耐药的铜绿假单胞菌进行氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、qacE△1-sul1耐消毒剂基因的检测。结果本组7株多重耐药的Pa菌分别检出aac（6’）-Ⅰ、aac（6’）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ和ant（2″）-Ⅰ等4种氨基糖苷类修饰酶基因和qacE△1-sul1型耐消毒剂基因。结论多重耐药铜绿假单胞菌存在多重耐药基因。     

一株携带多种耐药基因的铜绿假单胞菌研究

目的了解铜绿假单胞菌的多重耐药情况和有关机理。方法聚合酶链反应（PCR）法对多重耐药的铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、耐消毒剂和磺胺基因（qacE△1—sul1）的检测。并对CARB基因进行了测序。结果PCR显示CARB、TEM型β-内酰胺酶基因，aac（6’）-Ⅰ、aac（6’）-Ⅱ、ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ AMEs基因、qacE△1-sul1耐消毒剂基因和耐磺胺基因扩增阳性，oprD2基因扩增检测呈缺失型。CARB基因扩增产物测序，经BLAST程序分析（WWW．ncbi．nlm．nih．gov）为CARB-3型。结论铜绿假单胞菌存在多重耐药基因，管壁涂有季胺类、双胍类消毒剂和磺胺的Ⅱ代导管的抑菌效果需重新评价。     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物产酶耐药机制研究

目的了解我院临床分离的30株多重耐药铜绿假单胞菌中16SrRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因存在状况。方法收集山东和江苏两地医院临床分离的铜绿假单胞菌共50株（山东烟台多重耐药30株,江苏泛耐株20株）,采用聚合酶链反应（PCR）及序列分析的方法分析6种16SrRNA甲基化酶（armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA）和6种AMEs基因aac（3）．Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅰb、aac（6’）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ和ant（2″）-Ⅰ。结果山东烟台30株多重耐药铜绿假单胞菌中4种基因aac（3）-Ⅱ、aac（6＇）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ和ant（2″）-Ⅰ的阳性株数分别为6株（20％）、14株（46．7％）、11株（36．7％）和1株（3.3％）,其余8株基因均为阴性;AMEs基因总阳性率为50％（15／30）。江苏20株泛耐株中6种基因rmtB、aac（3）-Ⅱ、aac（6＇）-Ⅰb、aac（6’）-Ⅱ、ant（3’r）-Ⅰ和ant（2″）-Ⅰ的阳性株数分别为11株（55％）、12株（60％）、7株（35％）、12株（60％）、10株（50％）和9株（45％）,其余6株基因均为阴性;AMEs基因总阳性率为95％（19／20）。结论铜绿假单胞菌存在16SrRNA甲基化酶基因为国内首次报道;铜绿假单胞菌AMEs基因携带率很高;二家医院检出酶基因种类有差别。     

携带blaKPC-2基因泛耐药肺炎克雷伯菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的 了解临床分离的携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌中16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因的分布。方法 在2008年11月～2009年7月从笔者医院住院患者中分离19株携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌,采用PCR及序列分析的方法分析6种16S rRNA甲基化酶基因（armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA）和14种AMEs基因[ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ、ant（4′）-Ⅰ a/b、aadA4/5、aadA6/16、aac（3）-Ⅰ、aac （3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅲ、aac（3）-Ⅳ、aac（6′）-Ⅰb、aac（6′）-Ⅱ、aph（3′）-Ⅰ、aph（3′）-Ⅱb和aph（3＇）-Ⅵa].结果 19株中,5种基因aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ和aph（3′）-Ⅰ的阳性株数[阳性率（％）]分别为2（10.5％）、1（5.3％）、19（100.0％）、19（100.0％）和2（10.5％）,其余15种基因均阴性;AMEs基因总阳性率为100.0％ （19/19）.对1株（6号菌株）aac（6′）-Ⅰb基因PCR阳性产物进行测序,证实为aac（6＇）-Ⅰb-cr双功能酶基因.结论 氨基糖苷类修饰酶基因aac（6′）-Ⅱ和ant（3″）-Ⅰ在携带blaKPc-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌中广泛分布。     

ICU泛耐药鲍曼不动杆菌分离株相关耐药基因检测

目的了解重症监护病房（ICU）分离的泛耐药鲍曼不动杆菌（PDR-AB）耐药基因特点。方法应用K-B法进行抗菌药物敏感性试验,应用PCR技术对12株PDR-AB菌进行耐药基因测定。结果12株PDR-Ab中TEM、DHA、OXA-23、qacE1-sul1和intll扩增阳性株为12（100%）株;而PER、VEB、VIM、IMP、GES扩增阴性。12株PDR-Ab中均检出氨基糖苷类修饰酶基因,其中aac（3）-I、aac（6’）-I、ant（3＂）-I阳性率均为100%。aac（6′）-Ⅱ、aac（3）-Ⅱ、ant（2″）-Ⅰ未发现阳性结果。12株DR-Ab中基因组合方式为TEM＋OXA-23＋ADC＋qacE1-sul1＋intll＋aac（3）-I＋aac（6’）-I＋ant（3＂）-I。结论ICU分离的PDR-AB菌TEM、DHA、OXA-23、qacE1-sul1、intll、aac（3）-I、aac（6’）-I、ant（3＂）-I等耐药基因携带率高。     

株多重耐药肺炎克雷伯菌耐药基因和整合子、转座子遗传标记研究

目的了解多重耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因存在状况和遗传学背景。方法聚合酶链反应法对多重耐药的肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、质粒AmpC酶基因、qacE△1-sull耐消毒剂和磺胺基因、整合子遗传标记（整合酶基因）、Tn21／Tn501转座子遗传标记（汞离子还原酶基因）检测。结果TEM、SHV型β-内酰胺酶基因，DHA型质粒AmpC酶基因，aac（6’）-I型氨基糖苷类修饰酶基因，qacE△1-sull耐消毒剂和磺胺基因，整合子遗传标记（intIl整合酶基因），Tn21／Tn501转座子遗传标记（merA汞离子还原酶基因）检测阳性。结论多重耐药肺炎克雷伯菌存在多种耐药基因和I类整合子、Tn21／Tn501转座子。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药基因谱及遗传学特征

目的:了解产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药基因谱及其遗传学特征。方法:对35株产ESBLs肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测aac(3)-Ⅰ,aac(3)-Ⅱ,aac(6′)-Ⅱ,ant(3″)-Ⅰ,ant(2″)-Ⅰ,aac(6′)-Ⅰ,aac(6′)-Ⅰb等7种氨基糖苷类修饰酶基因,TEM,SHV,LEN,OKP,CTXM-1,CTXM-2,CTXM-9,GES,PER,VEB,OXA-10,OXA-1,OXA-2,DHA,ACT-1等15种β-内酰胺酶基因,intI1,intI2,intI3等3种整合子基因,tnpA(TnA转座子标记),merA(Tn21/Tn501转座子标记),qacEΔ1-sul1消毒剂耐药基因,qnr喹诺酮类耐药基因,共检测29种耐药基因并对部分产物进行测序。结果:35株肺炎克雷伯菌中检出β-内酰胺酶基因22株,阳性率62.9%。整合子基因阳性22株,阳性率62.9%。氨基糖苷类修饰酶基因阳性26株,阳性率74.3%。tnpA全部阴性。merA阳性2株,阳性率5.7%。qacEΔ1-sul1阳性13株,阳性率37.1%。qnr全部阴性。在测序中发现一种新的基因型,并以aac(6′)-Ⅰb-Suzhou型命名,登录于美国NCBI(登录号:EF375621)。结论:产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药基因及耐消毒剂基因的携带率非常高,耐药基因谱及其遗传学特征非常复杂。     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因型研究

目的了解中国5个地区亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌部分氨基糖苷类修饰酶分布情况。方法从成都、杭州、北京、上海和广州收集对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌,使用PCR法扩增16种氨基糖苷类修饰酶基因。结果共收集了146株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌。16种氨基糖苷类修饰酶基因中有6种基因型获得阳性的PCR结果,氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为65.06%,各种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为aac（3）-Ⅱ33.6%、aac（6＇）-Ⅰ15.8%、aac（6＇）-Ⅱ19.9%、ant（2″）-Ⅰ28.8%、ant（3″）-Ⅰ14.4%和aph（3＇）-Ⅵ4.8%。氨基糖苷类修饰酶基因的分布存在地区差异,其中杭州和上海6种AMEs基因均被检测出,成都和北京检测出4种AMEs基因,广州的IRPA中仅检测出3种AMEs基因。结论亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因携带率高;氨基糖苷类修饰酶基因型在中国5个地区间分布存在差异。     

多重耐药鲍曼不动杆菌抗菌药物、消毒剂耐药基因研究

目的了解多重耐药的鲍曼不动杆菌（ABA）11簇β-内酰胺酶、3簇金属β-内酰胺酶、4簇OXA类碳青烯酶、2簇AmpC酶、6簇氨基糖苷类修饰酶基因和消毒剂耐药基因携带状况。方法采用PCR检测203株多重耐药的ABA菌耐药基因。结果203株中ADC阳性186株（91．6％）、TEM阳性124株（61．1％）、OXA-23cluster阳性66株（32．5％）、SHV阳性18株（8．9％）、PER阳性6株（3．0％）、DHA阳性1株t（0．5％）；ant（3”）-I阳性189株（93．1％）、aac（6’）一Ib阳性118株（58_3％）、aac（3）-I阳性114株（56．2％）、aac（6’）-II阳性13株（6．4％）、ant（2”）-I阳性13株（6．4％）、aac（3）-II阳性10株（4．9％）；qacE△1阳性164株（80．8％）。结论多重耐药的ABA菌β-内酰胺酶、OXA类碳青烯酶、AmpC酶、氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。     

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的：对临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因进行研究,以指导临床合理应用抗生素。方法：K-B琼脂纸片扩散法进行药敏试验,PCR法检测8种氨基糖苷类修饰酶基因,并对PCR产物进行测序。结果：70株ABA对13种药物的耐药率均在65％以上,仅对头孢哌酮／舒巴坦、亚胺培南、美洛培南的敏感率较高。氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为64．29％（45／70）,其中aac（6’）-Ⅰ检出率最高为41．40％,其次为基因aae（3）-Ⅱ,aac（3）-Ⅰ和ant（3’）-Ⅰ,检出率分别为34．29％,31．435％和25．71％;未检出aac（6’）-Ⅱ,ant（2’）-Ⅰ,aph（3’）-Ⅰ及aph（3’）-Ⅱ基因。结论：氨基糖苷类修饰酶基因aac（6’）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅰ及ant（3’）-Ⅰ为本地区鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因。     

阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类抗生素耐药基因分析

目的调查临床分离的阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类抗菌药物耐药基因的携带状况。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法,对33株临床分离的阴沟肠杆菌进行抗菌药物敏感性试验,聚合酶链反应（PCR）法检测aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅲ、aac（3）-Ⅳ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ、aph（3′）Ⅵ9种氨基糖苷类修饰酶基因。结果 33株阴沟肠杆菌株呈现多重耐药,亚胺培南和厄它培南均敏感,对头孢唑啉全部耐药,氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢替坦耐药率均在90%以上。对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素3类氨基糖苷类抗生素的耐药率分别为33.3%、63.6%、81.8%。氨基糖苷类修饰酶基因的阳性率分别为aac（6′）-Ⅰ87.8%（29/33）、ant（3″）-Ⅰ63.6%（21/33）、aac（3-）II 54.5%（18/33）、ant（2″）-Ⅰ45.4%（15/33）及aph（3′）-Ⅵ24.2%（8/33）。aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅲ、aac（3-）IV、aac（6′-）II未检出。携带1种或1种以上基因的菌株有32株（97%）。结论临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重,氨基糖苷类修饰酶基因携带率非常高。     

阴沟肠杆菌耐药性与AMEs及BLa基因研究

目的了解分离的阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶、β-内酰胺酶相关基因存在状况，给防治提供参考。方法采用MicroScan微生物鉴定系统Neg Combo Panel Type 21阴性复合板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应方法分析氨基糖苷类修饰酶及β-内酰胺酶编码基因。结果20株菌均呈严重多重耐药，仅对亚胺培南高度敏感（耐药率5.0％），哌拉西林／他唑巴坦耐药率50．0％，对包括3、4代头孢在内的其他β-内酰胺类及氨基糖苷类抗生素耐药率90．0％～100．0％，对复方新诺明耐药率100％；20株菌均检出氨基糖苷类修饰酶基因，未检出aac（3）-Ⅲ和aac（3）-Ⅳ基因；19株（95．0％）菌检出β-内酰胺酶相关基因，TEM和DHA基因阳性率均为70％，9株菌（45．0％）同时检出TEM和DHA基因，未检出SHV、OXA、PER、VEB和GES基因。结论广州地区医院感染阴沟肠杆菌多重耐药严重，氨基糖苷类修饰酶基因、DHA型质粒AmpC酶基因和TEM型β-内酰胺酶基因携带率高，在介导细菌耐药方面起重要作用。     

泛耐药鲍曼不动杆菌相关耐药基因检测及分析

【目的】了解泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR-AB)10簇β-内酰胺酶(bla)基因、2簇碳青霉烯酶基因(OXA)、2簇氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因、3种整合子酶基因和消毒剂-磺胺类耐药基因携带情况。【方法】用聚合酶链反应(PCR)及序列分析方法对30株从我院分离的PDR-AB进行各种耐药基因的检测和分析。【结果】在30株PDR-AB中blaADC阳性30株(100%),blaSHV阳性29株(97%),blaVIM阳性26株(87%),blaIMP阳性24株(80%),blaPER阳性14株(47%),blaTEM阳性14株(47%),blaDHA阳性12株(40%),blaGES阳性8株(27%)b,laGIM阳性6株(20%);OXA-23阳性27株(90%);Ant(3’’)-I阳性30株(100%)I;ntI1阳性30株(100%)I,ntI2阳性8株(27%)I,ntI3阳性2株(7%);QacE△1-sull阳性30株(100%);没有检测到blaVEB、OXA-24和Aac(6’)-II基因。【结论】泛耐药鲍曼不动杆菌同时携带多种耐药基因是导致其对所有常用药物均耐药的重要原因,临床应加强有效的监测和隔离工作来控制其传播。     

铜绿假单胞菌氨基糖甙类药物产酶耐药机制的研究

目的了解我院临床分离的30株多重耐药铜绿假单胞菌中16SrRNA甲基化酶基因及氨基糖甙类修饰酶（AMEs）基因存在状况。方法收集山东和江苏两地医院临床分离的铜绿假单胞菌共50株（山东烟台多重耐药30株,江苏泛耐株20株）,采用聚合酶链反应（PCR）及序列分析的方法分析6种16SrRNA甲基化酶（armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA）和6种AMEs基因aac（3）-I、aac（3）-II、aac（6’）-Ib、aac（6’）-II、ant（3”）-I和ant（2”）-I。结果山东烟台30株多重耐药铜绿假单胞菌中4种基因aac（3）-II、aac（C）-II、ant（3”）-I和ant（2”）-I的阳性株数分别为6株（20％）、14株（46．7％）、11株（36．7％）和1株（3．3％）,其余8株基因均为阴性;AMEs基因总阳性率为50％（15／30）。江苏20株泛耐株中6种基因rmtB、aac（3）-II、aac（6’）-Ib、aac（6’）-II、ant（3”）-I和ant（2”）-I的阳性株数分别为ll株（55％）、12株（60％）、7株（35％）、12株（60％）、10株（50％）和9株（45％）,其余6株基因均为阴性;AMEs基因总阳性率为95％（19／20）。结论铜绿假单胞菌存在16SrRNA甲基化酶基因为国内首次报道;铜绿假单胞菌AMEs基因携带率很高;两家医院检出酶基因种类有差别。     

广泛耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类耐药机制

目的 调查广泛耐药鲍曼不动杆菌（Extensively drug Resistant Acinetobacter Baumannii,XDR-ABA）临床分离菌株中氨基糖苷类修饰酶基因、16SrRNA甲基化酶基因和外排泵基因的存在情况.方法 收集2011年1-12月临床标本中分离的XDR-ABA菌20株,采用微量肉汤稀释法进行抗菌药物敏感性试验,聚合酶链反应（PCR）方法分析9种氨基糖苷类修饰酶基因、6种16SrRNA甲基化酶基因和外排泵基因adeB.结果 20株XDR-ABA菌均检出aac（6＇）-Ⅰb、ant（2＂）-Ⅰ、ant（3＂）-Ⅰ、aphA1和adeB外排泵基因,其余5种氨基糖苷类修饰酶基因和6种16SrRNA甲基化酶基因和均未检出.结论该组20株XDR-ABA菌耐多种氨基糖苷类药物与细菌产aac（6＇）-Ⅰb、ant（2＂）-Ⅰ、ant（3＂）-Ⅰ、aphA1 4种氨基糖苷类修饰酶和存在adeABC外排泵系统相关.