熊果酸对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响

【目的】探讨熊果酸对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响。【方法】常规培养前列腺癌细胞系DU145,采用不同浓度熊果酸干预48 h ,细胞增殖与毒性分析（CCK‐8）法检测DU145细胞增殖;流式细胞术检测DU145细胞的凋亡率;Western blot检测DU145细胞p‐Akt及bcl‐2蛋白表达;实时定量聚合酶链式反应（qRT‐PCR）检测 PTEN mRNA 表达。【结果】细胞增殖抑制试验显示熊果酸呈浓度依赖性抑制DU145细胞生长;0、10、20μmol／L药物处理细胞48 h后其早期凋亡率分别为（2．15±0．24）％、（13．52±1．83）％及（16．69±2．56）％,晚期凋亡率分别为（3．28±0．53）％、（18．47±2．64）％及（23．70±1．99）％,差异均有统计学意义（ P ＜0．05）;与空白对照组相比,熊果酸作用的DU145细胞p‐Akt及bcl‐2蛋白表达水平均降低（均 P ＜0．05）,PTEN mRNA表达水平上升（ P ＜0．05）。【结论】熊果酸能够浓度依赖地抑制DU145细胞增殖,其机制可能是通过抑制PT EN／P13K／Akt信号转导通路来实现的。     

拉帕替尼对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤的影响

【目的】探讨新型靶向治疗药物拉帕替尼对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤生长的影响。【方法】将人SKVO3细胞株接种于裸小鼠胸壁皮下建立卵巢癌裸小鼠移植瘤模型。随机将其分为空白对照组（A组）和实验组（B组）,实验组根据拉帕替尼药物浓度的不同分为两个亚组：100 mg/kg （B1）和200 mg/kg （B2）,检测各组拉帕替尼用药前后荷瘤体积及裸鼠体质量的变化。【结果】拉帕替尼可显著抑制SKOV3裸小鼠移植瘤的生长,呈剂量依赖性,B2组抑瘤率显著高于B1组,其差异有统计学意义（P＜0．05）,但小鼠体质量用药前后比较无显著性差异（P＞0．05）。【结论】拉帕替尼可显著缩小人卵巢癌细胞株SKVO3裸鼠移植瘤的体积,为卵巢癌新型靶向治疗提供了理论基础。     

地西他滨联合去甲氧柔红霉素对DNMT3A突变阳性AML细胞的增殖和凋亡的影响

[目的]探讨地西他滨(DAC)联合去甲氧柔红霉素(IDA)对伴DNA甲基转移酶3A基因(DNMT3A)突变阳性急性髓系白血病(AML)细胞株OCI-AML3的增殖抑制和促凋亡作用.[方法]使用不同浓度IDA单药或联合低浓度DAC(2 μmol/L)干预OCI-AML3细胞48 h后,采用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.[结果]相对低浓度的IDA(≤40 nmol/L)对OCI-AML3细胞无显著增殖抑制效应;2 μmol/L DAC联合IDA对OCI-AML3细胞的增殖抑制率显著高于IDA单药(P<0.01);DAC联合IDA能显著提高OCI-AML3细胞的凋亡率(P<0.001).[结论]伴DNMT3A突变的AML细胞对相对低浓度的IDA原发耐药,而DAC可提高其对IDA的敏感性.     

冬凌草甲素对人膀胱癌T24和5637细胞杀伤作用的研究

[目的]探讨冬凌草甲素对不同恶性程度人膀胱癌细胞的抑制作用.[方法]以丝裂霉素为对照,用不同浓度的冬凌草甲素处理人膀胱癌细胞株T24(浸润性,G3)和5637(非浸润性,G2)后,通过MTT法检测细胞增殖抑制率并计算IC50值,应用倒置显微镜观察细胞形态及其抑制情况,采用荧光染色法观察细胞核及细胞凋亡情况.[结果]冬凌草甲素和丝裂霉素对T24和5637细胞均有抑制增殖和杀伤作用,并呈现时间-效应和浓度-效应关系.分别作用T24、5637细胞株12 h和24 h 后,64 μmol/L冬凌草甲素的抑制增殖和杀伤效果均要显著优于150 μmol/L丝裂霉素的效果.低恶性细胞5637较高恶性T24对冬凌草甲素和丝裂霉素处理更敏感.[结论]冬凌草甲素能通过诱导T24和5637细胞凋亡,起到杀伤和抑制增殖的效果,且较丝裂霉素起效快,有进一步研究的价值.     

IL-24对卵巢癌SKOV3细胞侵袭和迁移影响的研究

[目的]探讨IL-24对人卵巢癌细胞株SKOV3侵袭和迁移的影响.[方法]将pcDNA3.1(-)-IL-24真核表达载体用脂质体转染法转染SKOV3细胞,用RT-PCR检测IL-24 mRNA表达情况,用24孔的膜滤器来测定侵袭和迁移细胞数,同时为了排除IL-24的抑制侵袭和迁移能力是由于其介导凋亡的结果,采用台盼蓝排除法测定细胞成活力.[结果]RT-PCT检测表明,IL-24于mRNA水平在SKOV3细胞中获得稳定表达,IL-24能抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移,其抑制作用并不是其介导凋亡的结果.[结论]IL-24能抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移.     

Gli1表达抑制对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的 抑制Glioma-associated oncogene homoglog（GLI）基因在卵巢癌SKOV3细胞中的表达,探讨GLI1表达抑制对SKOV3细胞增殖的影响.方法 构建并筛选GLI1基因的RNAi表达质粒,转染SKOV3细胞,CCK-8法比较转染前后卵巢癌细胞增殖变化,流式细胞仪检测紫杉醇诱导转染前后细胞凋亡比例,流式细胞仪检测转染前后SKOV3的细胞周期情况.Westem blot检测cyclinD、Bcl-2及Capase3蛋白表达的影响.结果 转染48 h后,在SKOV3细胞中Control组、N-Control组、GLI1 shRNA-1组、GLI1 shRNA-2组、GLI1shRNA-3组、GLI1 shRNA-4组的GLI1 mRNA水平分别为1.00±0.00、1.03 ±0.02、0.73±0.07、0.98 ±0.08、0.53±0.08、0.68±0.04,与Control组相比,GLI1 shRNA-1、GLI1 shRNA-3、GLI1 shRNA-4组GLI1 mRNA表达量均下降（P＜0.05）,转染GLI1 shRNA-3的SKOV3细胞中GLI1蛋白表达水平低于GLI1 shRNA-1、GLI1shRNA-2、GLI1 shRNA-4组（P＜0.05）,具有显著的干扰效果.转染GLI1 shRNA-3的SKOV3细胞增殖受到明显抑制（P＜0.05）,在紫杉醇的诱导下细胞凋亡比例明显增加,细胞周期主要阻滞在G1/S期.Western blot检测发现Bcl-2蛋白表达下降（P＜0.05）,Capase3蛋白表达升高（P＜0.05）,细胞周期蛋白CyclinD1蛋白表达下降（P＜0.05）.结论 GLI1 shRNh对SKOV3细胞增殖抑制作用明显,促进细胞凋亡,GLI1信号可通过抑制cyclinD1活化抑制细胞恶性增殖.     

中药癌痛克对人肝癌细胞HepG2增殖、凋亡及Rb基因表达的影响

目的:通过观察不同浓度癌痛克对肝癌细胞株HepG2增殖及凋亡的作用,以及在相应状态下细胞内Rb基因表达量的改变,探讨中药癌痛克抗肝癌的可能作用机制。方法:实验于2005-09/2006-03在广州医学院中心实验室完成。取对数生长期的HepG2细胞,使细胞静止于G0/G1期。随机分为癌痛克2,10,50mg/L组和对照组,癌痛克2,10,50mg/L组分别加入对应浓度癌痛克(购自河南省肿瘤研究所,由金蝎、土元、九香虫、大黄、人参、灵芝、黄芪等纯中药组成的粉状制剂,功能:消癌肿、消癌痛、消积水、升白排毒),对照组不加药物,每组设4个复孔。MTT法检测各组细胞24,48,72h增殖率,细胞增殖率=[(A570癌痛克组-A570对照组)/A570对照组]×100%;以流式细胞术检测各组细胞24,48,72h凋亡率;RT-PCR方法检测各组细胞24,48,72h细胞内Rb基因mRNA表达量。结果:①2～50mg/L癌痛克具有明显的增殖抑制作用,癌痛克2,10,50mg/L组在24,48,72h与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05);3组各时点两两之间比较差异有显著性意义(P<0.05);同组各时点之间比较差异有显著性意义(P<0.05)。②2～50mg/L癌痛克组可诱导HepG2细胞凋亡,相同作用时间癌痛克2,10,50mg/L组与对照组比较差异有显著性意义(P<0.001);同一时点各组比较差异有显著性意义(P<0.05);同组不同作用时间点比较差异有显著性意义(P<0.001)。③2～50mg/L癌痛克可上调Rb基因的表达,各浓度组在各时点与对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.05);24,48,72h癌痛克2,10,50mg/L组之间比较差异无显著性意义(P>0.05);3组各时点比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:中药癌痛克可通过抑制HepG2细胞增殖或诱导其凋亡,而发挥抗肝癌作用;且其诱导细胞凋亡的机制之一可能为通过增加Rb基因的表达而实现。     

小檗碱对鼻咽癌细胞株 CEN-2凋亡和放射敏感性的影响

【目的】探讨小檗碱对鼻咽癌细胞凋亡和放疗敏感性的影响。【方法】收集鼻咽癌细胞株CEN‐2培养,根据处理方法不同分为6组。A组：空白对照,不做处理;B组：仅单纯2 Gy剂量射线照射,培养24 h;C组：20μg／mL （C1）、40μg／mL （C2）小檗碱药物干预,作用48 h;D组：药物＋射线照射干预,根据药物浓度不同分为20μg／mL小檗碱组（D1）,40μg／mL小檗碱组（D2）,用法同前。采用流式细胞仪检测各组细胞周期分布及细胞凋亡指数并比较。【结果】D1组、D2组G1期细胞比例少于B组,其差异有显著性（ P＜0．05）;D组G2、S期细胞比例增加,药物浓度增加后上述变化更明显,与B组、C组比较差异均有显著性（ P ＜0．05）;浓度高小檗碱作用细胞凋亡指数高（P＜0．05）,且D组凋亡指数显著高于C组（P＜0．05）,但B组与C1组比较无显著性差异（P＞0．05）。【结论】小檗碱联合射线照射干预,可促进鼻咽癌细胞CNE‐2的凋亡,增强放射敏感性。     

细胞色素C对阿糖胞苷诱导白血病细胞凋亡的影响

【目的】探讨细胞色素C（CytC）对小剂量阿糖胞苷（LD-Ara—C）诱导白血病细胞凋亡的影响。【方法】用HL-60白血病细胞株进行传代培养,MTT试验检测Ara—c和Cyt C不同药物浓度对白血病细胞增殖的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。【结果】12μg／ml浓度以下的CytC具有促进HL-60细胞增殖的作用,不同浓度的CytC干预后HL-60细胞凋亡率均低于干预前（P〈0．01）。联合应用CytC和LD-Ara—C,HL-60细胞凋亡率明显高于单用LD-Ara—C组（P〈0．01）。【结论】外源性CytC在12μg／ml浓度以下时仅能促进白血病细胞增殖,联合应用CytC和LD-Ara—C可增强LD-Ara—C诱导白血病细胞凋亡的作用。     

全反式维甲酸对人基底细胞癌细胞株A-431增殖和凋亡的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对人基底细胞癌株A-431增殖及凋亡的影响,为其临床应用提供理论依据。方法 ATRA与A-431共同孵育后,通过MTT方法观察ATRA对A-431增殖的影响并计算抑制率,流式细胞仪评估其凋亡情况并比较凋亡率,同时采用Western blot方法检测ATRA对Caspase-3及Caspase-9表达水平的影响。所有数据比较采用t检验,P<0.01为差异有统计学意义。结果 ATRA处理组A-431细胞生长明显受抑并存在显著凋亡,Western免疫印迹提示Caspase-3及Caspase-9表达量远大于对照组。结论 ARTA可显著抑制基底细胞癌细胞株A-431增殖,这种变化与其促进凋亡相关基因Caspase-3和Caspase-9过度表达并导致凋亡增加有关。     

莪术醇对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移的影响

【目的】探讨莪术醇对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移的影响。【方法】10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养小鼠黑色素瘤B16细胞。不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,检测细胞增殖、迁移和miR-7-5p含量;miR-7-5p inhibitor预处理后,再用莪术醇100μmol/L处理B16细胞,检测细胞增殖和迁移。【结果】不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,细胞490nm吸光度值均低于对照组,且随着莪术醇浓度的增加,细胞490 n m吸光度值降低显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,穿膜细胞数均低于对照组,且随着莪术醇浓度的增加,穿膜细胞数降低显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过real-time PCR验证miR-7-5p inhibitor转染B16细胞后的抑制效果,NC-inhibitor和miR-7-5p inhibitor转染后细胞miR-7-5p表达分别为(1.02±0.10)和(0.41±0.14),差异有统计学意义(P<0.05)。抑制B16细胞miR-7-5p表达后,观察莪术醇对细胞增殖的调控,与NC inhibitor相比(1.413±0.108),miR-7-5p inhibitor升高莪术醇处理B16细胞490nm吸光度值(1.697±0.089),差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】莪术醇能够抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移,其机制可能与增加miR-7-5p表达有关。     

厚朴酚抑制体外乳腺癌细胞株生物活性的实验研究

[目的]探讨中药厚朴提取物厚朴酚(Magnolol,Mag)抑制不同乳腺癌细胞株生物活性的作用.[方法]选取不同乳腺癌高转移细胞株(MCF-7、MDA-MB-231),在培养液中分别加入不同浓度的Mag溶液,观察处理后细胞的凋亡、侵袭、转移和黏附能力,判断Mag对乳腺癌细胞株生物活性的影响.[结果]Mag可以抑制细胞的抗凋亡、侵袭、转移和黏附能力(P<0.05),随着Mag浓度的增大,抑制生物活性的作用逐渐增强(P<0.05).[结论]Mag可以通过抑制不同受体状态乳腺癌细胞株的抗凋亡率、侵袭能力、黏附能力和迁移能力,从而抑制其生物活性,在乳腺癌的治疗及预防乳腺癌复发、转移中具有重要的临床应用价值.     

低分子肝素对胃癌原代细胞增殖及SDF-1表达的影响

[目的]探讨低分子肝素对胃癌原代培养细胞增殖及基质细胞衍生因子1 (stromal cell derived factor-1,SDF-1)表达的影响.[方法]将胃低分化腺癌组织和正常胃黏膜组织制成原代细胞后分为:①胃癌细胞组(A组),②胃癌细胞+低分子肝素(LMWH)组(B组),③胃黏膜细胞组(C组),④胃黏膜细胞+LMWH组(D组).MTT法检测各组细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡状况,RT-PCR检测各组细胞SDF-1 mRNA的表达量并比较.[结果]B组细胞增殖显著低于A组,同时细胞凋亡率增加,G0和G1期细胞比例显著增高,而S期比例则显著减低,G2和M期无显著差异;D组细胞数量和细胞凋亡率、G0和G1期、S和G2和M期的比例与C组比较差异无统计学意义.B组与A组相比,SDF-1mRNA表达水平下降,而D组SDF-1mRNA表达水平与C组无明显差异.[结论]LMWH可显著抑制胃癌原代细胞的增殖和增加细胞的凋亡率,影响细胞周期,同时可降低细胞SDF-1表达.     

5,7-二甲氧基黄酮抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌干细胞特性的体外研究

[目的]探讨5,7-二甲氧基黄酮(DMF)对人胰腺癌干细胞特性的影响.[方法]体外培养人胰腺癌PANC-1细胞系得到微球细胞,流式细胞仪检测;划痕法分析不同浓度DMF对胰腺癌干细胞自我更新、体外细胞迁移和运动能力影响;Western Blot分析不同浓度DMF干预后PANC-1细胞系胰腺癌干细胞表面标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmil、E-cad、N-cad蛋白表达变化.[结果]DMF以浓度依赖方式抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌干细胞肿瘤球形成能力及抑制细胞体外迁移能力;DMF以浓度依赖方式使胰腺癌干细胞标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmi1、N-cad蛋白表达水平降低,而E-cad蛋白水平升高.[结论]DMF以浓度依赖方式显著抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌样干细胞自我更新、分化后细胞迁移、细胞标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmi1、N-cadherin蛋白表达,而增强E-cadherin蛋白表达.     

沉默Caveolin-1基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默 Caveolin-1（Cav-1）基因对人膀胱癌细胞株5637增殖和凋亡的影响。方法通过siRNA转染人膀胱癌细胞株5637（沉默组）,以转染 FAM-siRNA为阴性对照组,未转染细胞为正常对照组。Re-al-time PCR法检测Cav-1基因沉默的效率,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各种细胞的凋亡情况。结果 siRNA转染可显著降低人膀胱癌细胞株5637中 Cav-1 mRNA 的表达水平。沉默组细胞的增强能力明显减低,而细胞凋亡率明显升高（均P＜ 0.05）。结论沉默Cav-1基因可抑制人膀胱癌细胞株5637的细胞增殖并促进细胞凋亡。     

5-Aza诱导胃癌细胞株GC-7901凋亡及自噬的相关性研究

目的研究5‐氮‐2‐脱氧胞苷（5‐aza‐2‐deoxycytidine ,5‐Aza）对胃癌细胞株GC‐7901自噬、凋亡及胰岛素相关信号通路轴的影响。方法选择不同浓度（5μmol／L、10μmol／L、20μmol／L ）的5‐Aza干预胃癌细胞株GC‐7901,72 h后用免疫印记检测自噬相关蛋白LC3‐Ⅱ和LC3‐Ⅰ的表达。选择5‐Aza最佳浓度10μmol／L干预GC‐7901,免疫印记检测空白组和对照组中胰岛素样生长因子‐1受体（IGF‐1R）、磷酸化胰岛素样生长因子‐1受体（p‐IGF‐1R）及下游信号通路相关蛋白磷脂酰肌醇3‐激酶（PI3K ）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,磷酸化磷脂酰肌醇3‐激酶（p‐PI3K）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p‐mTOR）的表达;流式细胞技术检测细胞凋亡情况。结果不同浓度的5‐Aza均可增加胃癌细胞的自噬表达,并呈计量依赖性,10μmol／L 5‐Aza干预后胃癌细胞的状态最佳。10μmol／L 5‐Aza可诱导胃癌细胞株GC‐7901凋亡增加,5‐Aza组与空白对照组相比较差异具有显著性（ P ＜0．01）;10μmol／L 5‐Aza可抑制p‐IGF‐1R、p‐PI3K、p‐mTOR的表达,空白组与5‐Aza组相比较差异具有显著性（ P ＜0．01）。但对总蛋白IGF‐1R、PI3K、mTOR无影响（ P＞0．05）。结论5‐Aza可以诱导胃癌细胞凋亡,增加细胞自噬,可能与抑制IGF‐1R磷酸化表达有关。